肉种鸡肿瘤病料中MDV、REV和CAV共感染的检测

从山东省东营、日照、潍坊、聊城等地区肉种鸡群采集102份有肿瘤病变的病、死鸡肝脏样品,用特异性核酸探针对样品进行马立克氏病病毒(Mareks disease virus,MDV)、网状内皮组织增生症病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)、鸡传染性贫血病病毒(chicken anemia virus,CAV)检测.结果显示,MDV、REV、CAV的检出率分别为88.24%、79.41%、47.06%,且存在严重的共感染现象,三重感染检出率达30.39%;二重感染检出率为59.80%,以MDV和REV共感染检出率最高,为44.12%;单一感染和阴性个体仅占3.92%和1.96%.结果表明,多种免疫抑制性病毒的共感染已普遍存在,是目前肿瘤性疾病发病率日趋上升的重要流行病学因素之一.     

商品肉鸡群中MDV、REV、CAV和ARV多重感染的检测

从山东省东营、日照、潍坊、聊城等地区自然发病和临床健康AA商品肉鸡群中分别采集脏器样品,用特异性核酸探针对样品进行马立克氏病病毒（Marek’s disease virus,MDV）、网状内皮组织增生症病毒（Reticuloendotheliosis virus,REV）、鸡传染性贫血病病毒（Chicken anemia virus,CAV）和禽呼肠孤病毒（Avian reoviruses,ARV）检测。结果显示,自然发病AA商品肉鸡群中MDV、REV、CAV和ARV的检出率均较高,分别为69．30％、57．46％、63．60％和67．11％;临床健康AA商品肉鸡群中MDV、REV、CAV的检出率分别为36．96％、43．48％和30．42％,且自然发病和健康鸡群中均存在不同病毒组合的多重感染,感染率分别为85．96％和43．46％。用x2检验进行分析发现,自然发病商品肉鸡群与临床健康商品肉鸡群中MDV、CAV、MDV＋REV、REV＋CAV的检出率和未检出的比例差异极显著（P〈0．01）;REV、MDV＋CAV检出率差异显著（P〈0．05）。对自然发病商品肉鸡的肝脏、脾脏、法氏囊中4种病毒检出率进行X2检验分析发现,MDV在脾脏中检出率显著高于肝脏和法氏囊;REV在法氏囊中检出率显著高于肝脏和脾脏,而CAV和ARV分别在脾脏和肝脏中检出率较高。结果表明,多种免疫抑制性病毒的共感染已普遍存在,是目前AA商品肉鸡易发病且生长缓慢的重要流行病学因素之一。     

我国自然发病鸡中MDV、REV和CAV共感染的检测

从山东、河南、河北、北京、江苏、广东、广西、四川、吉林、辽宁、台湾11省42个不同鸡群收集临床有发病表现的828只病、死鸡的病理组织样品，用点杂交方法检测各个样品中马立克氏病病（Marek’s disease virus，MDV）、网状内皮细胞增生病病毒（Reticuloendotheliosis virus，KEV）、鸡传染性贫血病病毒（Chicken anemia virus，CAV）的感染情况。结果表明：828只病鸡中这3种病毒的检出率均相当高，分别为83．94％（MDV）、61．0％（CAV）和57．25％（REV），并且存在非常严重的双重感染（31．16％）和三重感染（44．69％），     

江苏地区发病鸡4种免疫抑制性病原混合感染的检测

为了解鸡免疫抑制性病原混合感染的流行情况及其感染间相互作用的关系,本研究应用PCR方法对来自江苏地区不同鸡群的376只病鸡进行鸡贫血病毒(chicken anemia virus,CAV)、马立克氏病病毒(Marek’s disease virus,MDV)、网状内皮组织增生症病毒(reticuloendotheliosis virus,REV)和禽白血病病毒(avian leukosis virus,ALV)的检测。结果显示CIAV、MDV、REV和ALV的检出率分别为37.50%、25.00%、12.77%和33.51%,CIAV、MDV、REV和ALV的单一感染检出率分别为15.16%、9.04%、1.60%和12.50%,被检鸡混合感染的总检出率为30.59%,二重感染以CIAV+ALV最为常见,检出率为7.45%,三重感染以CIAV+MDV+ALV最为常见,检出率为3.46%,四重感染检出率为1.06%。4种免疫抑制性病原感染间相互作用的比较经统计学分析表明,CIAV和REV感染间存在相互促进的趋势(P0.01)。结果表明,鸡群免疫抑制性病原的混合感染普遍存在,与临床上鸡群发病率高、多种病原感染、疫苗免疫效果不佳、生长缓慢等密切相关。     

我国部分地区蛋鸡群ALV-J及与REV、MDV、CAV混合感染检测

为了解J亚群禽白血病病毒(ALV-J)及其与禽网状内皮细胞增生症病毒(REV)、马立克氏病病毒(MDV)和鸡传染性贫血病病毒(CAV)的混合感染现象,本研究从宁夏、湖北、广东、山东、辽宁、吉林、黑龙江7个省的39个蛋鸡群收集临床表现和剖检病理变化疑似禽白血病的病料样品184份,采用PCR、病毒分离和IFA检测样品中ALV-J、REV、MDV和CAV。结果表明,7个省蛋鸡场均存在ALV-J感染,病料样品阳性率为60.9%,检测鸡群阳性率为82.1%,与REV、MDV、CAV的混合感染率分别为13.6%、24.5%、22.8%,其中存在较为严重的双重感染(29.0%)和3重感染(18.8%),甚至4重感染(1.7%)。研究结果表明,我国蛋鸡群中普遍存在ALV-J感染,而且与REV、MDV、CAV混合感染严重;提示ALV-J已经可以引起蛋鸡群发病,在临床诊断和致病性研究中,应考虑到多重感染的影响。     

鸡传染性贫血病毒与马立克氏病病毒共感染SPF鸡群免疫抑制协同作用的研究

将鸡传染性贫血病毒（Chicken infectious anemia virus,CIAV or CAV）和马立克氏病病毒（Marek s dis-ease virus,MDV）人工单一和共同感染1日龄的SPF鸡,感染后分别于14、21、28、35日龄检测鸡体红细胞压积的变化,并检测鸡群疫苗免疫3周后的抗体反应,以探讨CAV与MDV共感染对鸡体的免疫抑制是否有协同作用。结果表明,在血液分析方面,CAV与MDV共感染组较病毒单一感染组与对照组差异极显著,共感染不仅加重了鸡群贫血现象,而且延长了贫血的病理症状;而在禽流感病毒（Avian influenza virus,AIV）H5/H9疫苗、新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）疫苗和传染性法氏囊病毒（Infectious bursal disease virus,IBDV）疫苗免疫后3周的抗体检测中,CAV与MDV共感染组较其它各实验组差异极显著,抗体滴度大大低于其它实验组;此外,CAV与MDV共感染组,鸡体生长状况明显差于实验各组,有6只鸡只死亡（6/25）,比病毒单一感染时的死亡率大大增加。综上研究证明,CAV与MDV共感染在免疫抑制作用上有协同作用。     

传染性法氏囊病病料中MDV、CAV、REV的共感染检测

从江苏、山东、浙江、河南、上海、广西、云南等地收集根据临床表现及病理变化诊断为传染性法氏囊病（IBD）的病鸡法氏囊样品66份，用相应的核酸探针及斑点杂交法分别检测样品中鸡传染性贫血病病毒（CAV）、马立克氏病病毒（MDV）、网状内皮细胞增生病病毒（REV）的感染；用抗IBD血清做琼扩检测IBDV。结果显示，部分地区病料中这些病毒有不同程度的二重感染、三重感染甚至四重感染。提示在研究特定毒株IBDV的毒力时，应考虑多重感染对致病性的影响。     

我国白羽肉用型鸡群中CAV、REV和REOV感染状况的血清学调查

为了解鸡传染性贫血病毒（CAV）、禽网状内皮增生病病毒（REV）和呼肠孤病毒（REOV）在我国白羽肉用型鸡中的感染状态，在2003—2004年，检测了来自5省市8个公司不同年龄鸡群血清样品中3种病毒抗体的存在状况。结果表明，在送检的75个鸡群中，对CAV、REV和REOV呈现抗体阳性的鸡群分别有64个（85．3％）、36个（48％）和74个（96％）。在总共检测的1764份血清样品中，对这3种病毒的平均抗体阳性率分别为51．4％、9．8％和75．1％。在1日龄雏鸡，对CAV和REOV的平均母源抗体阳性率可达100％和81．1％，但对REV只有7．4％。抗体阳性率随年龄变化的动态分析表明，对REV和REOV的母源抗体在出壳后2～3周内消失，而对CAV的母源抗体则可持续3～4周。对CAV和REOV的抗体从5周龄起再次出现，到20周龄时，所有送检鸡群全部阳性，平均阳性率在90％以上。有近一半送检鸡群对REV呈现抗体阳性，抗体阳性率普遍较低，即使在达到开产年龄后，仍还有很高比例鸡为抗体阴性，即对REV仍为易感鸡。研究表明，我国多数鸡群中都同时存在着这3种病毒的感染，但它们在感染的程度和动态等流行病学特点上显著不同，应根据鸡群中抗体的阳性率分别采取不同的措施。     

免疫抑制鸡群鸡传染性贫血病毒和网状内皮增生症病毒共感染检测

分别用digoxigenin标记的鸡传染性贫血病毒（CAV)和禽网状内皮增生症病毒（REV）核酸探针以及PCR技术对某种鸡场进行检测，检测结果表明，在20个样品中，CAV和REV感染的阳性率分别为10％和5％，这一结果显示，CAV和REV感染是导致该鸡场发生免疫抑制的主要病因之一。     

山东省白羽肉鸡中MDV、REV、CAV和ARV感染状况的病原学调查

为了解鸡马立克氏病病毒(MDV)、鸡传染性贫血病毒(CAV)、禽网状内皮增生病病毒(REV)和禽呼肠孤病毒(ARV)在山东省白羽肉用型鸡中的流行情况,试验采用地高辛标记的核酸探针-斑点杂交法对淘汰的商品肉鸡、病死商品肉鸡及淘汰肉种鸡进行了上述4种病毒病原的检测。结果表明:ARV主要以单一形式感染,在病死商品肉鸡中感染率最高(30.07%),在3种类型鸡中ARV感染率高于MDV,REV,CAV。MDV在淘汰肉种鸡中感染率(12.82%)高于其他2种鸡群,而REV,CAV,ARV感染率在病死商品肉鸡中最高。混合感染亦相当普遍,以淘汰肉种鸡最高(混合感染率达10.25%),高于任一病毒单独感染率,其次为病死商品肉鸡。     

用斑点杂交法同时检测鸡群中的CAV MDV和REV

为研究鸡传染性贫血病毒(CAV)在鸡群中的感染状况以及马立克氏病病毒(MDV)和网状内皮细胞增生病病毒(REV)在鸡群中的发病率，用斑点杂交法对山东省4个肉鸡场和2个肉种鸡场进行CAV、MDV和REV的检测，结果表明除一个肉种鸡场没有检测出REV以外，其他鸡场均同时检测出CAV、MDV和REV，并且发现直接从病科中检测CAV的阳性率(20％)远远低于将病科接种SPF鸡胚后的检出率(80％)。     

禽网状内皮组织增生病病毒感染和鸡群的免疫抑制

近几年来，我国鸡群中一些免疫抑制性综合症候，越来越常见。不久前，我们分别在江苏和山东的二个种鸡场遇到了典型的例。虽然二个鸡群对网状的内皮增生病病毒（ＲＥＶ）和鸡贫血病毒都有较高的感染率。但在对鸡群的系统病史、病理剖解变化实验室检查结果做综合分析判断的基础上，确定这二个鸡群的免疫抑制主要是由于整个鸡群在早期感染了网状内皮增生病病毒所致。本文还讨论了造成这种早期感染的可能原因。     

肉种禽网状内皮增生症、鸡传染性贫血和禽白血病血清学调查

对不同种鸡场不同周龄肉种鸡进行REV、CAV和ALV（A、B亚群）抗体检测。在572份血清样品中,除了一个8．1周龄和15周龄鸡群CAV抗体阳性率分别为13．3％和75％外,其它鸡群无论是否进行CAV疫苗免疫,抗体阳性率均为100％。在212份血清样品中,REV抗体阳性率在16．7％～62．5％之间;ALV（A、B亚群）抗体阳性率在0％～75％之间。本研究结果表明,所检测种鸡群中存在3种免疫抑制性病毒的感染或混合感染。     

AA肉鸡群中免疫抑制性病毒分子流行病学调查及对疫苗免疫效果影响分析

为了解AA肉种鸡群中免疫抑制性病毒的存在状况及其对NDV疫苗免疫效果和对商品鸡生长的影响,采用多重PCR、RT-PCR和血清学方法对山东某规模化大型AA父母代肉种鸡场的28日龄、180日龄左右种鸡及其所生产的1日龄、30日龄左右商品鸡进行IBDV、MDV、ALV、REV、CIAV及REOV感染状况的调查,并同时对鸡群NDV免疫后抗体水平进行跟踪监测.结果表明种鸡和商品鸡均存在CIAV的感染,并不同程度地存在CIAV与MDV、IBDV等的共感染;发病鸡群NDV抗体水平明显偏低的原因是由于鸡群感染免疫抑制性病毒所致;种鸡群感染CIAV并垂直传播给商品鸡,间接引起商品鸡发生免疫抑制性病毒的共感染,导致商品鸡群30日龄左右生长受阻、免疫能力降低、疾病爆发.     

山东省肉种鸡群三种家禽肿瘤性疾病流行病学调查

为调查山东省家禽肿瘤性疾病的流行情况,本研究以血清学、病理组织学、免疫组织化学、病原学等检测手段,在山东省境内17家AA种鸡场进行检测.血清学试验结果显示:马立克氏病病毒(MDV)平均抗原阳性率为1.87%;禽白血病病毒J亚群(ALV-J)和网状内皮组织增生症病毒(REV)平均抗体阳性率分别为9.52%和39.78%;双重及三重感染,MDV+ALV-J、MDV+REV、ALV-J+REV及MDV+ALV-J+REV感染率分别为1.12%、1.21%、3.92%和0.65%.对57羽疑似肿瘤病的病鸡检测显示:MDV、ALV-J和REV的抗体阳性率分别为19.3%、47.37%和57.89%;MDV+ALV-J、MDV+REV和ALV-J+REV的双阳性率分别为1.75%、3.5%和19.3%;无三重感染.病理组织学观察显示:病鸡体内既有各病毒引起的单纯肿瘤,也有双重肿瘤共存的现象.免疫组织化学检测显示,MDV、ALV-J和REV抗原阳性信号在病鸡中的比例分别为38.6%、54.39%和28.07%.PCR检测结果表明:MDV、ALV-J和REV的阳性率分别为43.86%、64.91%和33.33%;MDV+ALV-J、MDV+REV、ALV-J+REV和MDV+ALV-J+REV阳性率分别为15.79%、10.53%、12.28%和7.02%.本研究结果表明,山东省境内AA肉鸡群中仍存在较高的肿瘤性病毒感染率.     

禽网状内皮组织增生症流行现状及检测技术研究进展

禽网状内皮组织增生症(RE)是禽类一种重要的致瘤性和免疫抑制性疾病。近年来,国内外鸡群中网状内皮组织增生症病毒(REV)流行比较严重;REV与马立克病病毒(MDV)、鸡贫血病病毒(CAV)和J亚群禽白血病病毒(Avianleukosis virus subgroup J,ALV-J)几种免疫抑制性病毒的混合感染在我国部分养鸡场中均普遍存在,使得鸡群处于免疫力低下的状态,导致禽流感、新城疫等重要疫苗免疫失败,并容易造成继发感染,使疫病的诊断和防控难度加大。另外,REV可以整合到MDV和鸡痘病毒(Fowlpox virus,FPV)基因组中,从而导致商品化疫苗受到污染,并可用做将外源基因插入到鸡和哺乳动物细胞内的表达载体;基于REV传统检测方法的基础上,新型的分子生物学检测技术如PCR、实时荧光PCR、LAMP提高了诊断REV的敏感性和特异性。     

In vivo events of retroviral long terminal repeat integration into Marek's disease virus in commercial poultry: detection of chimeric molecules as a marker

The present study demonstrated, for the first time, that not only in vitro, but also in vivo, coinfections with Marek's disease virus (MDV) and each of the three avian retroviruses (reticuloendotheliosis virus [REV], avian lymphoid leukosis virus [ALV], and ALV-J) lead to retroviral long terminal repeat (LTR) integration into MDV. A total of 306 chicken and 59 turkey commercial flocks, submitted for differential avian oncogenic virus diagnosis, served to evaluate the flock mixed virus infection rate, the rate of birds with a multiple virus infection, and the issue of retroviral LTR integration into MDV in vivo. About a quarter of the tumor-bearing commercial flocks carried a mixed MDV and retrovirus infection. A total of 2926 DNA samples were analyzed, including 2428 chicken and 498 turkey DNA samples. Of these, 991 DNAs originated from flocks with a multiple virus infection. In 103 DNA preparations from that group (103/991, 10.4%), including 38 and 56 from chicken blood and tumor tissues, respectively, and nine samples from turkey blood, multiple virus sequences were detected by polymerase chain reaction (PCR). Fifty-six of the 103 samples were further analyzed by the previously developed hot spot-combined (HS-cPCR assay, of which 48% (27/56) contained chimeric MDV and retroviral LTR molecules. When extrapolated to the total samples derived from the flocks with multiple virus infection, that rate implies that about 5% of the DNA samples would carry MDV-retrovirus integration events. Several birds held a variety of chimeric molecules, indicating that several recombination events occurred simultaneously. The validation of the MDV and retroviral LTR chimeric constitution of these molecules was derived by the MDV and retroviral heterologous primers used for their creation by the HS-cPCR assay, Southern blotting and their detection by retroviral LTR probes, and LTR amplification from the gel-purified chimeric molecules. From several molecules, the LTR was sequenced, and a 161-bp retroviral LTR sequence was demonstrated. Our biochemical data imply that a recent integration occurred in the birds. The viability of recombinant viruses represented by the chimeric molecules will be further approached.