斑点免疫金银染色法检测鸡传染性支气管炎病毒抗原的研究

用建立的斑点免疫金银染色（Ｄｏｔ－ＩＧＳＳ）法检测鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）抗原,确定兔抗ＩＢＶ血清工作浓度为１：４００,ＳＰＡ－胶体金探针的工作浓度为１：８０,该法对纯化ＩＢＶ抗原的最低检出量为０．４３１４ｎｇ／点,用Ｄｏｔ－ＩＧＳＳ与斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）同时检测１５只人工感染ＩＢＶ鸡的气管,肺,肾病科,ＩＢＶ阳性检出率均为１００％,对３２份疑似ＩＢＶ感染鸡病料检测,Ｉ     

以包涵体形式表达的猪带绦虫六钩蚴重组原的复性与纯化

应用比浊法,可溶必蛋白百分比,夹心ＥＬＩＳＡ及变性与非变性ＳＤＳ－ＰＡＧＥ等方法来评价猪带绦虫六钩蚴重组抗原的不同复性条件。透析法复性,透析液为含２ｍｏｌ／Ｌ尿素,１６０℃ｍｏｌ／ＬＰＥＧ４０００,１．０ｍｍｏｌ／Ｌ－０．１ｍｍｏｌ／ＬＧＳＨ－ＧＳＳＧ的ＰＨ９．０的Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ缓冲液,蛋白浓度为２－５ｍｇ＝ｍＬ,以静置缓慢透年为佳,上述条件任意缺一或快速透析,则免疫活性下降,二聚体,多聚体明显     

鸡肝脏β—羟—β—甲戊二酸单酰辅酶A还原酶的提纯和性质

采用超速离心、热变性处理、硫酸铵沉淀和亲和层析方法，从鸡肝脏中分离提纯了β－羟－β－甲戊二酸单酰辅酶Ａ（ＨＭＧ－ＣｏＡ）还原酶。提纯倍数为２０９倍，比活力１８８．５Ｕ／ｍｇ，Ｋｍ值１．８×１０－４ｍｏｌ／Ｌ。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得分子量为３．２×１０４。温度对该酶活性影响较大，３７℃时活性最高。最适反应ｐＨ为７．２。甘氨酸在１０ｍｍｏｌ／Ｌ浓度以上时对该酶呈现明显抑制作用，ｌ－组氨酸、ｌ－精氨酸则无明显抑制作用。Ｚｎ２＋、Ｍｇ２＋、Ｃｕ２＋离子对该酶有明显抑制作用，Ｚｎ２＋在１．５ｍｍｏｌ／Ｌ、Ｃｕ２＋和Ｍｇ２＋在２．０ｍｍｏｌ／Ｌ浓度以上时抑制作用明显。中药山楂（ＣＨＳ）和决明子（ＣＨＺ）的水煎液对酶的抑制作用明显     

青海本地黄牛的遗传变异性及基因分化

通过对柴达木黄牛和青海东部黄牛ＨＢ,ＫＥ,ＴＦ,ＰＴＦ,ＰＡ,ＡＭＹ１,ＡＬＰＡ,ＡＬＰＢ,ＲＢＣ－ＬＤＨ１,Ｓ－ＬＤＨ１,α－ＬＡ,β－ＬＧ,αｓ１－ＣＮ和β－ＣＮ１４个生化遗传基因座多态性的分的,研究青海本地黄牛的遗传变异性及两个群体间的基因分化。结果发现：（１）青海本地黄牛１４个生化遗传基因座的Ｐｐｏｌｙ为８５．７％,Ｈ为０．２６６２,Ｎｅ为１．４８６１个,Ｈ．Ｉ．为０．５７９８;（２）柴达木黄牛与青海东部黄牛两群体之间的遗传距离为０．００５８,基因分化系数为０．００７１,表明青海本地黄牛两群体间的基因分化程度极小。     

鸡传染性法氏囊病诊断试剂盒的研制

采用鸡传染性法氏囊病（ＩＢＤ）病毒（ＩＢＤＶ－２５１２）研制了检测ＩＢＯＶ抗体的ＥＬＩＳＡ试剂盒。抗原最佳包被浓度为５．１２μｇ／ｍｌ，被检血清最佳稀释度为１：２００，酶标结合物最佳工作浓度１：１０００．本试剂盒与美国ＫＰＩＩＢＤ－ＥＬＩＳＡ试剂盒比较，结果敏感性、特异性、重复性均达到美国同类产品水平，且易于操作．在４℃可稳定保存６个月、对北京地区４个非免疫鸡群的１０３只鸡测得其阳性率为５４％，对４５只ＳＰＦ鸡的阳性率为０％。     

BWEL-SPF鸡群对鸡传染性法氏囊病强毒的敏感性试验

用三种不同鸡传染性法氏囊病强毒株,对ＢＷＥＬ－ＳＰＦ鸡群１－１０个家系３周龄鸡进行敏感性试验,观察比较鸡群各家系对不同敏感性,测定不同毒株的毒价。广西强毒株（ＩＢＤＶ－ＧＸ株）〈ＬＤ５０为１０＾５．０／０．２ｍｌ;湖南强毒株,ＬＤ５０为１０＾５．２／０．２ｍｌ;吉林强毒株（ＩＢＤＶ－ＪＬ株）,ＬＤ５０为１０＾５．５／０．２ｍｍｌ,以１００ＬＤ５０攻毒剂量,对ＢＷＥＬ－ＳＰＦ鸡１￣１０家系的致死率为     

青海细毛羊生化遗传多态性的研究

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳和火焰光度法对５０９只青海细毛羊细血液和乳汁中ＨＢ，ＥＰ－１，ＥＰ－２，ＫＥ，ＴＦ，ＡＭＹ１，ＡＭＹ２，ＥＳ，ＡＬＰ，ＲＢＣ－ＬＤＨ，Ｈｐα－ＬＡ和β－ＬＧ总共１３个位点的多态性进行了研究。结果为：（１）在青海细毛羊的ＨＢ，ＫＥ，ＴＦ，ＡＭＹ２，ＥＳ，ＡＬＰ，ＲＢＣ－ＬＤＨ１，Ｈｐ，β－ＬＧ总共９个位点上发现多态性，多态性位点的比例为６９．２３％；（２）每个位点实有的平均等位     

日粮类型和羊草细度对肉牛瘤胃挥发性脂肪酸比例及能量转化效率的影响

用装有瘤胃瘘管和真胃瘘管的肥育阉牛,按完全拉丁方设计,连续定点消化道食糜采样,用ＫＢ－１型自控大型呼吸测热室测定能量平衡和氮平衡。结果表明,４种不同加工细度羊草,在维持饲养水平（１Ｍ）下的ＤＥ／ＧＥ,ＭＥ／ＤＥ,ＨＰ／ＭＥ,Ｋｍ,ＶＦＡ总量,乙酸：丙酸比例等的组间差异均不显著（Ｐ＞０．０５）,代谢能转化为维持净能效率（Ｋｍ）平均为６５．６９％（Ｃ．Ｖ＝０．８８％）;１．３Ｍ饲养水平的各种能量参数,４组间的差异亦均不显著（Ｐ＞０．０５）,代谢能转化为增重净能效率（Ｋｆ）平均３３．９２％（Ｃ．Ｖ＝１．８６％）。４种不同精料：羊草比例的日粮,在维持饲养水平下,ＣＨ４（ＫＪ）／ＤＥ（ＫＪ）＝０．０７３８＋０．０６１５（ＮＤＦ／ＯＭ）,ｒ＝０．８９２８,Ｋｍ＝６０．８６５１＋０．３３０４（丙酸ｍｏｌ／１００ｍｏｌＶＦＡ）,ｒ＝０．９９５５;在１．５Ｍ下,ＨＰ／ＭＥ＝１４．３８３８＋０．７８０５（乙酸ｍｏｌ／１００ｍｏｌＶＦＡ）,ｒ＝０．９９０３,Ｋｆ＝２２．９６９７＋０．６０２２（丙酸ｍｏｌ／１００ｍｏｌＶＦＡ）,ｒ＝０．９９８１,或Ｋｆ＝５７．２２６５－０．３８１７（ＮＤＦ／ＯＭ）,ｒ＝－０．９９８７。     

鸡传染性支气管炎病毒S1基因在昆虫细胞中的高效表达

将鸡传染性支气管炎病毒（ Ｉ Ｂ Ｖ） Ｓ１ 基因 ｃ Ｄ Ｎ Ａ 克隆至含有起始密码 Ａ Ｔ Ｇ 的转移载体 ｐ Ｓ Ｘ Ｉ Ｖ Ｖ Ｉ＋ Ｘ３／４,构建成重组转移质粒 ｐ Ｓ Ｘ Ｉ Ｖ Ｖ Ｉ＋ Ｘ３／４ Ｓ１． Ｈｏｌｔｅ,再与粉纹夜蛾核型多角体病毒 Ｔｎ Ｎ Ｐ Ｖ Ｓ Ｖ Ｉ－ Ｇ Ｄ Ｎ Ａ（ Ｏ Ｃ Ｃ－ , ｇａｌ＋ ）共转染 草地夜蛾（ Ｓｆ９） 细胞, 经空斑纯化得 到已插入 Ｓ１ 基 因并能形成多角体 的重组病毒 Ｔｎ Ｎ Ｐ Ｖ（ Ｘ３／４） Ｓ１． Ｈｏｌｔｅ Ｏ Ｃ Ｃ＋ 。以重组毒株感染 Ｔｎ５ Ｂ１ 细胞,在不同时间收取感染了病毒的细胞进行 Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ 与 Ｗ ｅｓｔｅｒｎ 印迹检测。 Ｔｎ Ｎ Ｐ Ｖ（ Ｘ３／４） Ｓ１． Ｈｏｌｔｅ Ｏ Ｃ Ｃ＋ 在感染的细胞中高效表达了 Ｓ１ 基因,表达产物为约 １００ ０００ 的融合蛋白,与预计的表达修饰后的产物大小相符,推测此蛋白已糖基化。 Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ凝胶薄层色谱分析结果显示,感染病毒后 ４８、７２、９６ ｈ, Ｓ１ 蛋白分别占细胞内总蛋白量的 ２８７％ 、３５８％ 、３７１％ 。     

鸡腺胃型传染性支气管炎的诊断及病毒分离鉴定

天津市部分鸡场发生一种以病鸡极度消瘦、拉稀和死亡为主要特征的传染病,经鉴定确诊为鸡腺胃型传染性支气管炎（ＧＩＢ）,并分离出ＩＢＶ ＪＢ９７０２株,ＨＡ效价为２＾１２,ＥＩＤ５０为１０＾－６．８１／０．２ｍＬ。病毒干扰试验中,ＩＢＶ ＪＢ９７０２＋ＮＤＶ ＬｓＡｏｔａ接种鸡胚ＨＡ效价为２＾４～６,ＬａＳｏｔａ接种鸡胚ＨＡ效价为２＾１０～１１;用ＩＢＶ ＪＢ９７０２病毒液１：１０稀释后感染经ＩＢＶ Ｈ     

氯霉素间接竞争ELISA(ciELISA)检测方法的建立

以人工合成的氯霉素－牛血清白蛋白（ＣＡＰ－ＢＳＡ）为包被抗原,氯霉素（Ｃｈｌｏｒａｍｐｈｅｎｉｃｏｌ,ＣＡＰ）为竞争的半抗原,两者与一定量的抗ＣＡＰ单抗（ＣＡＰ－ＭｃＡｂ）反应。实验结果表明,理想的包被抗原浓度为１．２５μｇ／ｍｌ,抗ＣＡＰ－ＭｃＡｂ工作浓度为１：１２０００,酶标二抗工作浓度为 １： ５０００,可测最适范围为 １ｎｇ／ｍｌ－１００ｎｇ／ｍｌ,最小检测量为０．１ｎｇ／ｍｌ,批内和批间变异系数分别为３． ６２％和 ５． １９％。得到回归方程 ｙ ＝１．２７３０－ ０．６７４５ｘ（ｒ２＝ ０． ９７７９）和标准曲线,从而建立了快速定量测定 ＣＡＰ含量的间接竞争酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）。整个测定时间为６小时。     

抗鸡传染性法氏囊病病毒单克隆抗体中和株的建立

将纯化的鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）组织毒免疫的ＢＡＬＢ／ｃ鼠脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合，用ＥＬＩＳＡ，病毒中和试验检测分泌抗体，获得了６株稳定分泌抗ＩＢＤＶ单隆抗体的杂交瘤细胞，命名为ＮＩＢ－１，ＮＩＢ－２，ＮＩＢ－３，ＮＩＢ－４，ＮＩＢ－５，ＮＩＢ－６；６株ＭＣＡｂ均具ＥＬＩＳＡ特性和免疫沉淀特性，亚类鉴定表明，前４株属于ＩｇＧ２ａ，后２株属于ＩｇＧ１。杂交瘤细胞冻存６个月后复苏，均     

牦牛卵泡液LDH同工酶及外源性激素对其表达模式的影响

采用比色法和不连续缓冲系统的聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）技术对未孕和怀孕初期牦牛卵泡液乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）活性及同工酶进行了测定，并分析了促卵泡素３号（ＬＲＨ－Ａ３）、人绒毛膜促性腺激素（ｈＣＧ）和孕马血清促性腺激素（ＰＭＳＧ）对其表达模式的影响。结果表明，未孕和怀孕初期牦牛卵泡液ＬＤＨ活性分别为２００．４±３１．１，２１５．３±８６．６μｍｏｌ·ｓ－１·Ｌ－１，同工酶有５条谱带。３种外源性激素均使牦牛卵泡液ＬＤＨ活性显著升高（Ｐ＜０．０１），ＬＤＨ同工酶带型分布发生变化，降低了ＬＤＨ２／ＬＤＨ１比值，改变了同工酶中Ａ和Ｂ亚基所占比例     

猪核移植重组胚胎的发育能力

以ＭｃＧｒａｔｈ－Ｓｏｌｔｅｒ（１９８３）提供的去（注）核方法，将猪胚胎的单个卵裂球细胞注入去核的次级成熟卵母细胞，借助电融合的方法（ＡＣ；５Ｖ，１．５ＭＨｚ，１２－１５ｓ；ＤＣ：２ｋＶ／ｃｍ，４０μｓ。电激活／融合液：０．３ｍｏｌ／Ｌ甘露醇＋－．１ｍｍｏｌ／ＬＭｇＳＯ４＋０．１ｍｍｏｌＣａｃＬ２＋７．５ｍｇ／ｍｌＣＣＢ）融入受体胞质构成重级胚，体外培养（培养液为改衣ＴＣＭ－１９９；培养条件为５％     

日粮烟酸水平对肉鸭后期生产性能和脂肪代谢的影响

７２只２１日龄樱桃谷鸭平均分成４组,分别添加０、３０、６０、９０ｍｇ／ｋｇ烟酸进行３周饲养试验。测定平均日采食量（ＡＤＦＩ）、平均日增重（ＡＤＧ）、料重比（Ｆ／Ｇ）、血清总胆固醇（ＴＣＨ）、血清总甘油三酯（ＴＧ）、低密度脂蛋白胆固醇（ＬＤＬ－Ｃ）、高密度脂蛋白胆固醇（ＨＤＬ－Ｃ）。结果表明：①日粮烟酸水平不影响ＡＤＦＩ、ＡＤＧ、Ｆ／Ｇ（Ｐ＞０．０５）,但与ＡＤＦＩ、ＡＤＧ、Ｆ／Ｇ存在显著（Ｐ＜０．０５）或极显著二次曲线关系（Ｐ＜０．０１）。②日粮烟酸水平可能影响ＴＣＨ、ＴＧ、ＬＤＬ－Ｃ、ＨＤＬ－Ｃ,但差异不显著（Ｐ＞０．０５）。当基础日粮烟酸和色氨酸水平分别为３５ｍｇ／ｋｇ和０．１６％时,建议肉鸭后期烟酸添加水平为６０ｍｇ／ｋｇ。     

应用葡萄球菌A蛋白协同凝集试验快速检测鸭肝炎病毒的研究

用提纯的鸭肝炎病毒（ＤＨＶ）免疫家兔制备高免血清，常规方法提取ＩｇＧ，与１％葡萄球菌Ａ蛋白（ＳＰＡ）阳性菌悬液混合，以ＰＨ７．２０．２ｍｏｌ／ＬＰＢＳ作缓冲液，制成鸭病毒性肝炎（ＤＶＨ）ＳＰＡ协同凝集试验（ＳＰＡ－ＣｏＡ）诊断试剂，同时制备阴性对照试剂。用ＳＰＡ－ＣｏＡ检测人工感染致死的雏鸭肝脏、含ＤＨＶ强毒的鸭胚液、适应鸡胚的疫苗毒鸡胚尿囊毒的检出率均为１００％。用ＳＰＡ－ＣｏＡ检测强毒时，样品     

超排山羊卵巢卵母细胞体外成熟和体外受精的研究

以ＴＣＭ１９９＋１０ｍｍｏｌ／ＬＨＥＰＥＳ＋青霉素（６ｍｇ／Ｌ）＋链霉素（５ｍｇ／Ｌ）为基础培养液（ＢＭ），再分别加入不同成分，配成５种卵母细胞成熟液：（Ａ）ＢＭ＋１０％ＥＧＳ；（Ｂ）ＢＭ＋１０％ＥＧＳ＋ＨＣＧ（２．５ｍｇ／Ｌ）；（Ｃ）ＢＭ＋１０％ＥＧＳ＋ＨＣＧ＋Ｅ２（１ｍｇ／Ｌ）；（Ｄ）ＢＭ＋１０％ＦＣＳ＋ＨＣＧ＋Ｅ２；（Ｅ）ＢＭ＋１０％ＥＧＳ＋ＨＣＧ＋Ｅ２＋颗粒细胞（１．５×１０６～３．０×１０６个／ｍＬ）。在３８．５℃、５％ＣＯ２下培养２６ｈ，排卵后第１天卵巢卵母细胞体外成熟率分别为６７．６７％（２０／３０），６０．４２％（２９／４８），８３．６７％（４１／４９）和８０．８２％（５９／７３），排卵后第５天卵巢卵母细胞，在培液Ｄ中体外成熟率为７１．４３％（４５／６３）。排卵后第１天的９８枚卵巢卵母细胞，体外成熟体外受精卵裂率为２１．４３％，２１枚２细胞胚移植５头受体获２头羔羊。研究表明，超排山羊卵巢卵母细胞经体外成熟可获得大量廉价的成熟卵母细胞，并可通过体外受精获得试管山羊     

含绿脓杆菌外毒素A受体结合区重组蛋白的纯化

将表达含绿脓杆菌外毒素（ＰＥＡ）受体结合区基因的质粒ｐＥＴ－ＥＡＢ转化到大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中,经ＩＰＴＧ诱导表达了含ＰＥＡ受体结合区的重组蛋白（称ＰＥ３４）。ＰＥ３４主要以包涵体形式存在于大肠杆菌中,用溶菌酶－脱氧胆酸钠法结合超声波裂解法破碎细菌,离心制备包涵体。用２ｍｏｌ／Ｌ脲洗涤包涵体后,包涵体纯度可达７５％,在８ｍｏｌ／Ｌ脲存在条件下,ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－２００凝胶滤过,ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦａｓｔＦｌｏｗ离子交换层析纯化,获得ＳＤＳ－ＰＡＧＥ１条带的ＰＥ３４,纯度达９５．８％,得率为２４．５％。     

鸡传染性法氏囊病双抗体夹心Dot—ELISA诊断法的建立及应用

以醋酸纤维素膜作为固相载体，辣根过氧化物酶标记鸡抗传染性法氏囊病病毒抗体，饱和二氨基联苯胺为底物显色，建立了鸡传染性法氏囊病双抗体夹心Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ诊断法，经方阵实验确定最佳反应条件为：ＩｇＧ的包被液为０．０５ｍｏｌ／Ｌ（ＰＨ９．６）碳酸盐缓冲液，包被浓度为１、５０；酶标抗体的工作浓度为１；１００；洗涤液为含０．０５％吐温－８０的０．０２ｍｏｌ／Ｌ（ＰＨ７．４）磷酸盐缓冲液；封闭液为含０．２％     

禽流感抗体斑点—ELISA诊断技术的研究

以混合纤维素酯微孔滤膜为固相载体,用自制的禽流感全病毒抗原和酶标抗体,建立了禽流感抗体斑点 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 检测法,其抗原最适包被量为 ０．０６μｇ／点;血清抗体最佳稀释度为 １１００;酶标抗体作 １２００ 稀释;出现明显清晰的斑点者判为禽流感抗体阳性。该方法对 Ｓ Ｐ Ｆ鸡血清及新城疫、传染性法氏囊病等其它 １１ 种鸡疫病阳性血清均为阴性,对不同亚型特异性的禽流感病毒（ Ａ Ｉ Ｖ）分型血清、琼扩（ Ａ Ｇ Ｐ）阳性血清及血凝抑制（ Ｈ Ｉ）阳性而 Ａ Ｇ Ｐ疑似的血清样品均呈阳性;对人工接种 Ａ Ｉ Ｖ 的 Ｓ Ｐ Ｆ鸡第 ３ 天即能检出抗体阳性,第 ５～１１７ 天可全部检出。与间接 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 法比较,不仅其特异性、敏感性、重复性相一致,而且结果可用肉眼判定,更适合现地禽流感抗体监测及流行病学调查。