苯乙醇胺A单克隆抗体的研制及ELISA检测方法的建立

为制备苯乙醇胺A(phenylethanolamine A,PA)单克隆抗体,建立一种针对苯乙醇胺A的快速、简便、灵敏度高的检测方法,本试验采用重氮化法将制备的苯乙醇胺A衍生物分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)进行偶联作为免疫原和包被原。利用弗氏佐剂充分乳化免疫原(PA-BSA),按常规免疫程序免疫6～8周龄的雌性BALB/c小鼠,选择血清抗体效价较高的小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞以PEG法进行细胞融合。结果显示,经3次细胞亚克隆筛选后,最终筛选出一株可稳定分泌抗苯乙醇胺A单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为D6H8,利用此细胞以小鼠体内诱生法制备抗体。经鉴定,D6H8腹水抗体亚型为IgG1,轻链为κ链;纯化后的抗体与沙丁胺醇、盐酸克伦特罗、盐酸异丙肾上腺素和盐酸去氧肾上腺素均无明显的交叉反应(CR0.18%),表明该抗体特异性良好。利用此抗体建立针对苯乙醇胺A药物残留检测的间接竞争ELISA方法,结果表明,腹水抗体效价为1∶12 800,猪肉中苯乙醇胺A添加浓度在5～1 000 ng/mL时线性关系良好,标准工作曲线为y=0.3861x-0.1845 (R~2=0.990),其IC_(50)为58.88 ng/mL,LOD为3.83 ng/mL,回收率在85.96%～104.32%之间。综上所述,本试验成功建立了检测苯乙醇胺A药物残留的间接竞争ELISA方法,该方法灵敏度高、稳定性较好。     

玉米赤霉烯酮对小鼠T淋巴细胞共刺激分子调节功能的影响

在原代培养的小鼠T淋巴细胞中加入刀豆蛋白A(Con A)作为活化刺激剂,研究不同浓度玉米赤霉烯酮(ZEA)对T淋巴细胞共刺激信号分子CD28和CD152,及PI3K-Akt-mTOR信号通路关键蛋白表达的影响。结果表明:染毒48h后,Con A组与细胞空白组相比,CD28和CD152均显著升高;染毒组与Con A组相比,10和20μmol·L-1ZEA组CD28表达量呈下降趋势但差异不显著,CD152表达量显著或极显著降低,40μmol·L-1 ZEA组CD28表达量显著降低,CD152表达量无显著差异。染毒24h后,Con A组与细胞空白组相比,PI3K等蛋白表达量显著或极显著升高;各染毒组与Con A组相比,PI3K等蛋白表达量均显著或极显著下降,且呈剂量依赖性。这一研究说明ZEA可通过干扰CD28/CD152表达及抑制PI3K-Akt-mTOR信号通路来干扰T淋巴细胞的活化过程。     

玉米赤霉烯酮对大鼠睾丸支持细胞凋亡蛋白释放的影响及NAC的保护效应

为探讨玉米赤霉烯酮(ZEA)对大鼠睾丸支持细胞凋亡蛋白释放的影响及乙酰半胱氨酸(NAC)的保护效应,用20μmol/L ZEA与100μmol/L NAC单独或联合处理睾丸支持细胞24 h,用Annexin V-FITC/PI双染法检测凋亡率,用Western Blot法检测调控凋亡蛋白表达量。结果显示,与对照组相比,ZEA染毒组的线粒体中Cyt C与AIF表达量显著下降,胞浆中Cyt C与AIF表达量显著上升。与单独染毒组相比,100μmol/L NAC与20μmol/L ZEA联合处理组睾丸支持细胞凋亡率,Bax、cleaved-Caspase-9和cleaved-Caspase-3表达量均极显著降低,Bcl-2表达量极显著增高。结果表明,caspase依赖性和caspase非依赖性的线粒体途径均参与了ZEA致睾丸支持细胞凋亡的发生,NAC对ZEA诱导的睾丸支持细胞凋亡发生起抑制作用。     

紫云乡猕猴桃产业发展现状与对策

<正>四川省广元市紫云乡辖6村33个社,耕地面积4 365亩,农业人口为4 737人,农业劳动力3 315个。紫云乡发展猕猴桃起始时间为1992年,当时种植的"川猕",1995年改种海沃德,后因市场需求不足,销售不畅,使主要分布于紫云村三社的果农心灰意冷。1998年根据市场发展前景并结合本地独特的小环境优势,通过多方协商引进了苍溪"红心果"猕猴桃,到2004年全乡共种植红心果猕猴桃327亩,由于当时技术未成型、水利设施、管理水平未跟上,销售渠道不畅,产品不为人们所知,仅     

醋酸铅对母鼠生殖与胚胎发育影响

将420只体质量为(15.32±2.01)g的雌性昆明系小鼠随机分为5个处理组和1个对照组,每组设7个重复,每个重复10只。各处理组分别腹腔按体质量注射10、15、20、25、30mg/kg的醋酸铅溶液,对照组注射等体积的灭菌生理盐水,每隔2d注射并称重1次,共注射10次,期间记录小鼠体质量及临床表现。当小鼠体质量达到25g以上时,分批对各试验组和对照组进行超排处理,腹腔注射10IU马绒毛膜促性腺激素(PMSG),47h后注射10IU人绒毛膜促性腺激素(hCG),并与公鼠合笼。合笼后87~96h内颈椎脱臼处死小鼠,观察卵巢、子宫形态,并统计胚胎数,同时制作卵巢、子宫石蜡切片,观察其病理组织学变化,研究醋酸铅对雌性小鼠卵巢、子宫组织结构及早期胚胎发育的影响。结果显示:(1)当醋酸铅染毒剂量≥20mg/kg时,可明显抑制小鼠体质量的增长,随着染毒剂量的增加,作用时间的延长,小鼠体质量增加明显趋缓,与对照组相比,差异显著或极显著(P0.05,P0.01);(2)染铅组母鼠早期胚胎发育受到显著影响,主要表现为回收胚胎总数以及受精卵发育到桑椹胚和囊胚的总数均显著低于对照组(P0.05),而各染铅组退化胚、延迟胚数和未受精卵总数显著高于对照组(P0.05);(3)染铅组卵巢中的初级卵泡、次级卵泡、成熟卵泡数量明显低于对照组,而原始卵泡、闭锁卵泡数量明显高于对照组。(4)染铅组小鼠卵巢和子宫形态发生明显畸形,当醋酸铅染毒剂量≥20mg/kg时,与对照组相比,差异显著或极显著(P0.05,P0.01)。且上述变化均呈明显的剂量一时间效应。研究结果表明,当醋酸铅暴露剂量≥20mg/kg时,可对小鼠生长发育具有明显抑制作用,同时使母鼠生殖器官卵巢和子宫的结构造成严重损害,并影响其生殖功能与早期胚胎发育。     

铅和（或）镉对体外培养肾细胞的毒性损伤

在培养液中加入不同浓度的Cd（10、20、40μmol／L）、Pb（10、20、40μmol／L）和Pb-Cd联合（分别为5、10、20μmol／L），来探讨铅镉对肾细胞的作用及可能机制。在显微镜下观察细胞形态、测定细胞凋亡率和细胞周期及上清液脂质过氧化指标。结果表明：20μmol／L以上染毒组细胞皱缩、体积变小，表面有细胞碎片，甚至呈泡沫状或树枝状；铅、镉单独和联合染毒组GSH—Px、SOD活性随染毒剂量的增加，呈逐渐下降趋势（P〈0．05）．而MDA含量和凋亡率则呈升高趋势（P〈0．05），并存在剂量和时间效应。镉和铅也能使细胞周期停滞。Pb、Cd联合可加剧细胞损伤。     

乐果对大鼠原代培养肝细胞的毒性试验

通过给大鼠肝细胞培养液中加入乐果(染毒终浓度分别为0,3,30和300μmol/L)染毒,MTT法测定乐果对肝细胞增殖的影响,同时测定肝细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)及细胞内谷胱甘肽(GSH)的含量,研究了乐果对原代培养大鼠肝细胞的毒性作用。结果显示,与对照组相比,乐果对原代培养肝细胞增殖有明显的抑制作用,且呈剂量-时间效应关系。染毒后48 h细胞生长达高峰时,细胞活率分别为对照组的97%、82%和75%;300μmol/L染毒组细胞染毒后24 h、36 h、48 h、60 h和72 h细胞活率分别为对照组的67%、82%、75%、71%和63%。同时,乐果染毒12 h和24 h后各染毒组培养液上清中LDH含量均极显著升高(P<0.01),尤其是300μmol/L染毒组12 h和24 h培养液上清中LDH含量分别为对照组的7.35倍和8.75倍;同一剂量组随着染毒时间延长,LDH含量呈上升趋势。染毒12 h和24 h后30μmol/L及300μmol/L组细胞内GSH含量均存在极显著差异(P<0.01);同一剂量组随着染毒时间延长,GSH含量呈下降趋势。表明乐果对肝细胞有直接的毒性作用,能够抑制其增殖,引起细胞膜脂质过氧化损伤。     

奶牛硒和维生素E营养状况与围产期健康的关系

围产期是奶牛生产疾病的高发期,分娩与开始泌乳对奶牛造成巨大的代谢应激,导致用于维持免疫系统功能的营养物质缺乏,使动物处于氧化应激状态,机体表现免疫抑制。硒和维生素E均参与机体的抗氧化防御系统,它们之间具有协同作用,在抗氧化,提高机体的免疫反应,降低围产期乳房炎、胎衣不下等疾病的发生方面发挥重要作用。本文对奶牛硒和维生素E营养状况与围产期健康的关系进行了综述。     

不同剂量氟苯尼考对猪血液生化指标及猪瘟抗体的影响

40头70日龄健康猪随机分为高、中、低剂量组和对照组,每组10头,各试验组注射猪瘟弱毒疫苗(2头份/猪),同时高、中、低剂量组分别按每千克体质量于饲料中加入120、60、30 mg氟苯尼考,连续给药7 d,停药后1、8、15、22、29 d,对相关的血液生化指标以及猪瘟抗体水平进行检测分析.结果表明,停药后1、8 d,所有氟苯尼考添加组的猪瘟抗体滴度下降,仅120 mg/kg组差异显著(P<0.05),停药15 d后抗体水平恢复至正常水平;60和120mg/kg给药组TP含量在停药后1、8 d均显著下降(P<0.05);所有给药组的ALT活性在所有检测时间内均显著上升(P<0.05或P<0.01);所有给药组的γGT活性在停药后1 d均显著上升(P<0.05),而60和120 mg/kg组γGT在第8天仍显著上升(P<0.05);所有给药组的BUN含量在停药后1 d均显著升高(P<0.05或P<0.01);AST、LDH、CHE活性和ALB、CRE含量与对照组相比无显著差异(P>0.05);表明每千克体质量60 mg以上氟苯尼考在饲料中饲喂7 d后,对部分生化指标有一定的影响,应引起重视.     

钙结合蛋白(CaBP)对牛黄成核时间与核生长的影响

为了解钙结合蛋白(CaBP)在牛黄形成中的作用,将正常牛胆汁分为6组,Ⅰ组为对照组,不加入CaBP,其余5组为试验组,均加入CaBP(CaBP提自健康牛胆汁);试验组额外加入CaBP的浓度分别为5%、10%、15%、20%、25%.然后,进行成黄试验,观察不同浓度的CaBP对牛黄核形成时间、形成数量及其可视表面积的变化.与此同时,检测胆汁中主要成黄物质的含量变化.结果表明,CaBP对牛黄成核时间有较明显的促进作用,而对牛黄核的数量和可视表面积无明显影响;当添加CaBP浓度大于10%时,使胆汁中总蛋白和Ca~(2+)浓度降低,但对总胆红素含量无明显影响.