鸡源抗体制备技术

<正>现在用于研究、诊断以及治疗的抗体主要是来源于哺乳动物的单克隆抗体或多克隆抗体,但多抗和单抗的制备技术技术都有优点及不足。在单抗制备的过程中存在的主要问题是有一些抗原对小鼠是弱免疫原或根本没有免疫原性。在多抗生产和纯化的过程中,多数情况下从哺乳动物血液中制备抗体的产量很低,而且步骤繁琐。另外制备过程中有一些步     

鸡源抗体制备技术

现在用于研究、诊断以及治疗的抗体主要是来源于哺乳动物的单克隆抗体或多克隆抗体,但多抗和单抗的制备技术技术都有优点及不足。在单抗制备的过程中存在的主要问题是有一些抗原对小鼠是弱免疫原或根本没有免疫原性。在多抗生产和纯化的过程中,多数情况下从哺乳动物血液中制备抗体的产量很低,而且步骤繁琐。     

鸟类抗体的特点及其应用前景

鸟类抗体的特点及其应用前景凌育编译（广东省家禽研究所广州５１０４３０）目前，商品性抗体主要可以分为三类：哺乳动物单克隆抗体、哺乳动物多克隆抗体和鸟类多克隆抗体。在鸟类中，最容易用来制备多克隆抗体的品种是鸡。然而，迄今用于制备抗本的动物主要是哺乳动物，...     

鲤吉陶单极虫免疫原性的研究

以鲤吉陶单极虫孢子的可溶性抗原 ,采用 B淋巴细胞杂交瘤融合技术制备了 4A8、6 B8、7B93株杂交瘤细胞 ,并用该抗原免疫新西兰白兔制备了高免血清。通过对虫体进行抗原检测、定位和 Western- blot试验 ,结果发现 :4A8、6 B8、7B9和多抗经间接 EL ISA可检出抗原的最低质量浓度分别为 0 .14、0 .2 0、0 .32和 0 .86 mg/ L;IFA定位显示 ,单、多抗检出的抗原都定位于虫壁 ,其中 4A8的抗原主要位于虫体后部 (胚核附近 ) ,6 B8和 7B9的抗原主要位于虫体前部 (极囊附近 )和极丝 ;Western- blot试验表明 ,4A8结合的抗原相对分子质量为 72 0 0 0 ,多抗结合的抗原相对分子质量分别为 5 80 0 0、70 0 0 0、880 0 0 ,3株单抗和多抗均为抗 T.kitauei的抗体 ,4A8具有明显的种、期特异性 ;自然感染该虫的鲤鱼血清中查不到循环抗体。     

应用ELISA检测特异性循环免疫复合物诊断弓形体病的研究

应用单克隆抗体酶联免疫吸附试验(McAb-ELI-SA)的单抗第二抗体夹心法(单抗二抗法),检测人工感染弓形体病兔血清特异性免疫复合物(CIC),并与多抗(PcAb)第二抗体夹心法(多抗二抗法)及间接法进行比较.其结果显示:1.应用单抗二抗法检测感染弓形体后第4天,兔血清 CIC 阳性率为38%,至第6天阳性率达95.2%.显示了高度敏感性。2.单抗二抗法与多抗二抗法相比.在1～60天 CIC 的累积阳性率、OD 均值,前者均高于后者(P<0.01).有显著差异.3.交叉反应:与血吸虫病,本法为4.8%,间接法为21.4%;球虫病,本法为0%,间接法为12.1%.     

单克隆抗体研究进展

抗体分子是生物及医学领域中用途最为广泛的蛋白质分子.本世纪30～60年代对抗体的理化性质以及对免疫球蛋白分子结构与功能的研究取得了突破性进展.1976年德国学者Kohler和英国学者Milstein创建杂交瘤技术,首次成功地制备了小鼠单克隆抗体(McAb)即第二代抗体.80年代早期开始了基因工程抗体即第三代抗体的研究.基因工程抗体指通过基因工程方法改造和制备抗体,它兴起于对鼠单抗的人源化改造,至90年代初产生的抗体库技术将基因工程抗体的发展推向了高潮,使抗体制备技术进入了一个全新的时代.     

对虾白斑综合症病毒双抗体夹心ELISA方法的建立

用将纯化的对虾白斑综合症病毒VP28蛋白免疫BALB/c小鼠,分离免疫鼠脾细胞,与SP2/0细胞融合,经间接ELISA筛选,得到了2株（2G9,3E5）可以稳定分泌抗对虾白斑综合症病毒特异性单抗的杂交瘤细胞株。用纯化的VP28蛋白免疫家兔,按常规方法制备多抗。选用单抗（3E5）包被ELISA板,用兔多抗作为捕获抗体,建立了对虾白斑综合症病毒的双抗体夹心ELISA检测方法。该方法具有良好的特异性和敏感性,为对虾白斑综合症病毒的检测提供了有效工具。     

鸡败血支原体GapA高变区在大肠杆菌中高效表达

本研究通过对鸡败血支原体(Mycoplasma gallisepticum,MG)强毒株黏附素GapA的N端(98aa～322aa)和C端(820aa～1 115aa)2个高变区进行克隆,并进行原核表达,制备获得抗GapA多抗,结果显示,GapAN获得高效表达,制备获得的抗体对MG黏附真核细胞有一定的抑制作用,这说明GapA对MG的黏附有着非常重要的影响.这一抗原成分的成功表达和抗体的制备为研制特异性单抗和筛选GapA缺失型突变株奠定了坚实的基础;并且利用不同毒株在GapA N端功能区的基因序列的明显差异,使基于该抗体建立新型快速的免疫学方法以鉴别MG强弱毒株亦将成为可能.     

磺胺类药物在动物性食品中的残留与检测

磺胺类药物是一类广谱抗茵药,临床上主要用于预防和治疗细菌感染性疾病,还常作为饲料添加剂在动物生产中长期应用.然而,磺胺药会引起人过敏性反应,且可能有致癌性.因此,磺胺类药物的不合理使用,使其在动物性食品中残留引起生态环境污染和人类健康危害的潜在威胁已倍受关注.因此,研究出一种操作简便、快速、灵敏的磺胺类药物残留检测方法,对于畜产品的安全具有实际意义.酶联免疫吸附法(ELISA)作为一种免疫学检测技术不仅具有上述优点,而且准确性好、特异性强、检测成本低,还可用于大批量样品的检测.而单抗在试剂的标准化及抗体的大量供应上明显优于多抗,所以单克隆抗体技术的应用在药残检测上是主要的发展方向.     

H5亚型高致病性禽流感病毒抗原捕捉ELISA诊断方法的建立

本研究在已有H5亚型禽流感病毒特异性单抗基础上,建立了以多抗作为包被抗体、单抗作为检测抗体的抗原捕捉ELISA方法。通过对各个反应条件进行优化,获得的最佳工作条件为：羊血清1：1600倍稀释;单抗1：10000稀释;酶标抗体最适工作浓度为1：5000倍稀释;单抗反应时间1．5h;酶标抗体作用时间1．5h。特异性试验和敏感性试验结果表明：该方法具有良好的特异性和敏感性,可用于H5亚型高致病性禽流感病毒的检测。     

单克隆抗体研究进展

杂交瘤技术使鼠源单克隆抗体被广泛用于人类疾病的诊断和研究,建立了治疗性抗体的第一个里程碑。随着生物学技术的发展和抗体基因结构的阐明,应用DNA重组技术和抗体库技术对鼠单抗进行人源化改造,先后出现了嵌合抗体、人源化抗体和全人抗体,它们从不同角度克服了鼠单抗临床应用的不足,使抗体制备技术进入了一个全新的时代。     

蝙蝠流感病毒与H9N2亚型禽流感病毒M蛋白的免疫原性比较研究

为比较新发蝙蝠流感病毒H17N10亚型与禽流感病毒H9N2亚型的M蛋白(包括M1和M2蛋白)的免疫原性,分别构建两种亚型流感病毒M1、M2的原核表达载体和真核表达载体,利用前期反向遗传学技术拯救获得两种重组病毒感染MDCK细胞,并分别与相应的单抗或多抗进行免疫印迹和免疫荧光鉴定。结果显示,两种亚型病毒的M1蛋白的原核表达产物均与M1多抗反应,均不与2株M1单抗反应;拯救的两种重组病毒感染细胞后及其M1蛋白的真核表达产物均与M1的单抗5F2反应,不与单抗3G8及M1的多抗反应,两种亚型的结果一致;而两种亚型的M2蛋白通过与单抗和多抗反应,出现了不一致的结果,M2的单抗仅与蝙蝠流感病毒M2的原核表达产物反应,不与H9N2禽流感病毒M2的原核表达产物反应,M2的多抗则反之;且M2的多抗仅与H9N2禽流感M2的真核表达产物以及拯救病毒反应,均不与蝙蝠流感病毒M2的真核表达产物及拯救病毒反应。本研究证实这两种亚型流感病毒的M2蛋白之间确实存在免疫原性的差异,并且筛选到了可以区分蝙蝠流感病毒和禽流感病毒的M2抗体,为进一步研究流感病毒M蛋白相关的生物学机制提供了基础。     

免疫乳研究及开发进展

一、免疫乳及乳抗体的特异性免疫乳（Immune Milk）是指给哺乳动物（主要是指奶牛）选择性地接种一些能够引起人和动物疾病（主要是肠道疾病）的细菌（如致病性大肠杆菌、沙门氏菌、志贺氏菌等），病毒（如轮状病毒）或其它一些外来抗原（如隐性孢子虫等）刺激机体发生免疫应答以分泌特异性的抗体（Specific antibody）进入乳中，这种含有特异性乳抗体的乳称为免疫乳。在机体免疫应答过程中，除了产生特异性的抗体之外，机体还会产生一些淋巴因子，其中的一些也会随泌乳进行而进入乳中，如在免疫乳中发现的抗炎因子（Anti－hypertension F…     

基因工程抗体研究进展

抗体技术的发展经历了3个阶段，第1代抗体为血清多克隆抗体，1975年Kohler和Milstein创立了单克隆杂交瘤技术使第1代抗体发展到了第2代抗体即单克隆抗体，但由于鼠单抗对人体具有免疫原性，不能重复使用，影响疗效，而且生产单抗的成本较高，难以普及使用，1984年国外首次报道人－鼠嵌合体在骨髓瘤细胞中成功表达，开创了基因工程抗体技术，标志着第3代抗体－基因工程抗体的诞生，随后1985年人源化抗体构建和表达成功，1988年第首次证明抗体的Fab和Fv片段可以在大肠杆菌中正确地装配成保持抗原特异性的小分子抗体，1991年报道了用附着型载体构建成功抗体库，利用抗体库技术获得全人源化的抗体，因此基因工程抗体技术可以通过基因操作改造已知的抗体，也可以不经细胞融合及免疫动物直接从基因水平制备抗体是继杂交瘤技术之后抗体产生技术的又一次革命，随着这项技术的发展和完善，人们可以在更大程度上根据需要改造和制备抗体。     

鸡抗体应用的进展

产蛋母鸡产生的抗体与哺乳动物抗体相比是高效的。由于鸡与哺乳动物系统发育的差异，鸡抗体的生化特性也优于哺乳动物抗体，在免疫学测定中敏感性强，背景色淡。与哺乳动物抗体相反，鸡抗体不能活化人补体系统，也不与类风湿因子、人抗鼠ＩｇＧ抗体或细菌和人的Ｆｃ受体起反应。因此，鸡抗体在许多方面优于哺乳动物抗体，并可能今后会取代哺乳动物抗体。     

免疫乳研究开发进展

前言 哺乳动物乳汁是机体免疫协凋作用的分泌物之一。免疫乳(Immune milk)是指给哺乳动物(主要指牛、山羊)选择性地接种一些能够引起人或动物疾病的细菌、病毒或其它一些外来抗原,刺激机体产生免疫应答以分泌特异性的抗体(Antibody)或称为免疫球蛋白(Immunoglobulin)进入乳中,这种乳称为免疫乳。抗原(Antigen)是指存在于环境中能够刺激机     

免疫乳的研究现状和最新进展

哺乳动物的乳汁含有多种生物化学活性物质，在调节人体功能和代谢等方面起着重要作用。免疫乳（Immmune milk）是指运用基因工程技术经免疫化学处理给哺乳动物有选择性的接种一些能够引起人或动物疾病的细菌和病毒或其他外来抗原刺激机体引发免疫应答而分泌特异性抗体的乳汁，即为免疫乳。哺乳动物通过高度免疫之后，所分泌的乳汁中除保留有普通乳汁的全部营养成分外，     

单克隆抗休研究进展

抗体分子是生物及医学领域中用途最为广泛的蛋白质分子。本世纪30～60年代对抗体的理化性质以及对免疫球蛋白分子结构与功能的研究取得了突破性进展。1976年德国学者Kohler和英国学者Milstein创建杂交瘤技术,首次成功地制备了小鼠单克隆抗体（McAb）即第二代抗体。80年代早期开始了基因工程抗体即第三代抗体的研究。基因工程抗体指通过基因工程方法改造和制备抗体,它兴起于对鼠单抗的人源化改造,至90年代初产生的抗体库技术将基因工程抗体的发展推向了高潮,使抗体制备技术进入了一个全新的时代。     

单克隆抗体的研究进展

抗体分子是生物及医学领域中用途最为广泛的蛋白质分子。上世纪30～60年代对抗体的理化性质以及对免疫球蛋白分子结构与功能的研究取得了突破性进展。1976年德国学者Kohler和英国学者Milstein创建杂交瘤技术,首次成功地制备了小鼠单克隆抗体(McAb)即第二代抗体。80年代早期开始了基因工程抗体即第三代抗体的研究。基因工程抗体指通过基因工程方法改造和制备抗体,它兴起于对鼠单抗的人源化改造,至90年代初产生的抗体库技术将基因工程抗体的发展推向了高潮,使抗体制备技术进入了一个全新的时代。     

猪带绦虫TSOL18特异性单克隆抗体的制备及其体外杀虫作用的研究

本研究目的在于制备抗猪带绦虫TSOL18单克隆抗体,并分析单抗对六钩蚴的杀伤作用。采用SephadexG-100纯化在毕赤酵母中表达的猪带绦虫六钩蚴TSOL18蛋白;纯化的蛋白免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术建立能分泌抗TSOL18单克隆抗体的细胞株;通过ELISA叠加试验进行mAb的抗原表位分析;采用间接ELISA法测定TSOL18单克隆抗体特异性及腹水效价;采用抗TSOL18单克隆抗体对激活的猪带绦虫六钩蚴进行体外六钩蚴杀伤试验,观察单抗对猪带绦虫六钩蚴活力的影响。结果成功获得12株稳定分泌抗TSOL18单克隆抗体的杂交瘤细胞株,识别2个不同抗原表位,不同抗原表位的2株单克隆抗体腹水效价分别为1×102、1×106。抗体体外六钩蚴杀伤试验结果证明,在有补体的情况下,多抗和单抗作用6 d后,六钩蚴结构模糊,边缘不清晰。表明单抗对六钩蚴有一定的杀伤作用。