蝙蝠流感病毒与H9N2亚型禽流感病毒M蛋白的免疫原性比较研究

为比较新发蝙蝠流感病毒H17N10亚型与禽流感病毒H9N2亚型的M蛋白(包括M1和M2蛋白)的免疫原性,分别构建两种亚型流感病毒M1、M2的原核表达载体和真核表达载体,利用前期反向遗传学技术拯救获得两种重组病毒感染MDCK细胞,并分别与相应的单抗或多抗进行免疫印迹和免疫荧光鉴定。结果显示,两种亚型病毒的M1蛋白的原核表达产物均与M1多抗反应,均不与2株M1单抗反应;拯救的两种重组病毒感染细胞后及其M1蛋白的真核表达产物均与M1的单抗5F2反应,不与单抗3G8及M1的多抗反应,两种亚型的结果一致;而两种亚型的M2蛋白通过与单抗和多抗反应,出现了不一致的结果,M2的单抗仅与蝙蝠流感病毒M2的原核表达产物反应,不与H9N2禽流感病毒M2的原核表达产物反应,M2的多抗则反之;且M2的多抗仅与H9N2禽流感M2的真核表达产物以及拯救病毒反应,均不与蝙蝠流感病毒M2的真核表达产物及拯救病毒反应。本研究证实这两种亚型流感病毒的M2蛋白之间确实存在免疫原性的差异,并且筛选到了可以区分蝙蝠流感病毒和禽流感病毒的M2抗体,为进一步研究流感病毒M蛋白相关的生物学机制提供了基础。     

含有WSN病毒基因的重组H9N2亚型流感病毒的复制能力研究

禽流感病毒不仅严重危害养禽业,而且给公共卫生造成巨大威胁。禽流感病毒与哺乳动物流感病毒发生重组是造成数次流感大流行的重要前提。本研究利用H9N2亚型禽流感病毒(A2093株)和WSN的反向遗传操作系统,用A2093株的膜蛋白基因(HA基因和NA基因)与某个聚合酶或NP基因替换WSN的相应基因,获得了r2093HANAPB2/WSN、r2093HANAPB1/WSN、r2093HANAPA/WSN、r2093HANANP/WSN四种重组病毒,在MDCK、DF1、A549三种细胞系进行了病毒生长曲线的测定,并研究了这些病毒在小鼠体内的复制能力。结果显示,0.001 MOI的剂量感染不同细胞后,病毒滴度均在感染后24 h达到峰值;在3种细胞上r2093HANAPB1/WSN和r2093HANAPA/WSN均表现出较强的复制能力。在小鼠体内,4株重组病毒的复制能力均介于亲本毒A2093和WSN之间,在肺脏中4株重组病毒的复制能力相似,但在鼻腔中r2093HANAPB1/WSN和r2093HANAPA/WSN的复制能力明显高于r2093HANAPB2/WSN和r2093HANANP/WSN。研究结果表明,与禽流感病毒的不同聚合酶或NP基因重组产生的新病毒,其复制能力具有明显差别,造成这种差异的分子机制值得进一步研究。