蝙蝠流感病毒与H9N2亚型禽流感病毒M蛋白的免疫原性比较研究

为比较新发蝙蝠流感病毒H17N10亚型与禽流感病毒H9N2亚型的M蛋白(包括M1和M2蛋白)的免疫原性,分别构建两种亚型流感病毒M1、M2的原核表达载体和真核表达载体,利用前期反向遗传学技术拯救获得两种重组病毒感染MDCK细胞,并分别与相应的单抗或多抗进行免疫印迹和免疫荧光鉴定。结果显示,两种亚型病毒的M1蛋白的原核表达产物均与M1多抗反应,均不与2株M1单抗反应;拯救的两种重组病毒感染细胞后及其M1蛋白的真核表达产物均与M1的单抗5F2反应,不与单抗3G8及M1的多抗反应,两种亚型的结果一致;而两种亚型的M2蛋白通过与单抗和多抗反应,出现了不一致的结果,M2的单抗仅与蝙蝠流感病毒M2的原核表达产物反应,不与H9N2禽流感病毒M2的原核表达产物反应,M2的多抗则反之;且M2的多抗仅与H9N2禽流感M2的真核表达产物以及拯救病毒反应,均不与蝙蝠流感病毒M2的真核表达产物及拯救病毒反应。本研究证实这两种亚型流感病毒的M2蛋白之间确实存在免疫原性的差异,并且筛选到了可以区分蝙蝠流感病毒和禽流感病毒的M2抗体,为进一步研究流感病毒M蛋白相关的生物学机制提供了基础。     

泰乐菌素的电化学测定方法

泰乐菌素是由弗氏链霉菌分泌的一种十六元大环内酯类抗生素,为动物专用抗生素[1].酒石酸泰乐菌素(tylosin tartrate, TT)为TLS的酒石酸盐.考虑其在畜禽及水产品中的残留有可能对消费者造成影响,因而对其在动物性食品、动物代谢物中的检测显得尤为重要.文献中已报道研究TT检测方法主要有微生物法[1]、高效液相色谱法[2]、光谱法[3]等,迄今为止有关TT电化学测定方法尚未见文献报道.在前期工作基础[4-7]上本文研究了TT在多壁碳纳米管修饰玻碳电极(MWCNT/GCE)上的电化学行为及电化学定量测定方法, 并在牛尿液中对TT进行了定量测定.与其他方法相比,本方法无需对样品进行预处理,测定设备简单,操作简便快捷.     

表达Renilla Luciferase重组流感病毒的构建及生物学特性研究

本研究构建了表达Renilla Luciferase的重组流感病毒,并运用Luciferase报告基因检测系统对该病毒的生物学特性进行了研究。研究发现该病毒复制时能稳定表达Renilla Luciferase,添加磷酸奥斯他韦抑制病毒复制后Luciferase表达量明显低,而且表达量与磷酸奥司他韦浓度成反比。结果表明检测Luciferase表达量可以直接反应病毒的复制,将该重组病毒与Luciferase报告基因系统运用到抗流感药物的大规模筛选中,可为抗流感药物的筛选提供一种快速且灵敏的检测方法。     

利用反向遗传技术构建细胞高适应性的H9N2流感病毒

H9N2亚型禽流感病毒通常在鸡胚上增值性能高,但在细胞上增值能力差。为了获得在细胞上高效表达H9N2亚型禽流感HA和NA抗原的疫苗株,通过反向遗传操作技术将A/Chicken/Shanghai/441/2009(H9N2,SH441)的HA和NA基因与A/Puerto Rico/8/34(H1N1,PR8)的6个内部基因进行人工重组,拯救并获得了1株禽流感重组病毒441-PR8,并对它的生物学特性进行了研究。结果表明,重组病毒441-PR8株在细胞上的增殖能力明显高于野生毒株SH441,该重组病毒有望成为H9N2亚型禽流感疫苗研制的候选毒株。     

两株H1N1亚型猪流感病毒NS1蛋白抑制Ⅰ型IFN功能比较

本研究分离得到两株猪源H1N1流感病毒,通过进化树分析发现分别是欧亚类禽H1N1猪流感病毒和类鸭源H1N1猪流感病毒,为了研究两株毒株的NS1蛋白对Ⅰ型IFN产生的抑制能力,分别构建了2个毒株的NS1基因的真核表达载体,将NS1真核表达质粒、Ⅰ型IFN报告质粒与干扰素刺激质粒RIG-I共转染293T细胞,利用双荧光素酶报告基因检测Ⅰ型IFN激活水平。结果显示:欧亚类禽H1N1猪流感病毒NS1蛋白对人源细胞干扰素的拮抗作用明显强于类鸭源H1N1猪流感病毒;2种NS1蛋白对RIG-I与TBK-1激活的IFN-I抑制能力存在显著的差别,但是对IRF-3激活的IFN-I抑制能力没有显著差别。本研究结果初步揭示了欧亚类禽与类鸭源H1N1猪流感病毒抑制IFN-I能力的差异,及H1N1禽流感适应猪群的潜在分子机制。     

对虚拟财产继承问题的探究

虚拟财产是用户通过网络服务运营商签订相关协议并且支付相应现实货币而获得的某种特定网络服务,同时这种服务并不是专属于用户自身的非物质性财产,由于在虚拟财产继承方面相关法律法规的缺失致使我国在虚拟财产继承方面的纠纷不断增加,因此我国应加快建立健全虚拟财产继承相关法律法规,建立虚拟财产继承保护机制,完善网络运营服务商的责任和义务。