猪源多杀性巴氏杆菌C44—48（A型）的鉴定

对猪巴氏杆菌二价灭活疫苗生产菌株之一的Ｃ４４－４８菌株进行了鉴定，结果菌体形态，生化特性，菌落特征，血清学特性均符合多杀性巴氏杆菌的特性。菌种毒力为皮下３ＣＦＵ活菌可致死家兔，皮下３３０ＣＦＵ可致死仔猪。以５批Ｃ４４－４８疫苗用家兔和仔猪效检，结果均合格，表明免疫原性良好。保存期试验结果表明浆干菌种在０－８℃保存至少可达６年。用家兔进行交互免疫试验，结果表明，相同血清群菌株保护７５－１００％；不同     

鸡IL-18对禽多杀性巴氏杆菌DNA疫苗的免疫佐剂作用

为了探索鸡IL-18在禽多杀性巴氏杆菌H基因DNA疫苗中的免疫佐剂作用，分别用共表达鸡IL-18基因和禽多杀性巴氏杆菌C48-1H基因的DNA疫苗、鸡IL-18真核表达质粒pcDNA3／cIL-18与禽多杀性巴氏杆菌C48-1H基因的DNA疫苗混合物、禽多杀性巴氏杆菌C48-1H基因的DNA疫苗肌肉注射5周龄鸡，首免后每周采取外周血及外周抗凝血，应用ELISA和MTT法分别检测免疫鸡的体液免疫及细胞免疫水平。二免后第2周用10 LD50禽多杀性巴氏杆菌强毒菌株C48-1进行攻击。结果鸡IL-18能够明显增强禽多杀性巴氏杆菌H基因DNA疫苗的免疫原性，显著提高免疫鸡的体液免疫和细胞免疫水平，并且鸡IL-18与禽多杀性巴氏杆菌H基因共表达时的免疫佐剂作用最强，能强有力地抵抗强毒菌株C48-1的致死性攻击。结果表明，鸡IL-18可作为DNA疫苗的一种理想的免疫佐剂。     

猪牛巴氏杆菌病灭活疫苗的研究Ⅰ．制苗用菌种选择、制苗工艺、疫苗安全性及效力和保存期试验

通过猪源、牛（黄牛、水牛、牦牛）源巴氏杆菌交互免疫试验，选出一株免疫原性良好的荚膜Ｂ型多杀性巴氏杆菌，用其培养菌液，经灭活后加氢氧化铝胶，再进行适当浓缩后，制成猪牛巴氏杆菌病灭活疫苗（简称Ｂ型苗）。疫苗以２倍使用剂量注射奶牛和猪均无异常反应，证明安全。试制的１４批疫苗用兔作效力检验，总保护率达８３．９２％，比原《规程》猪肺疫苗或牛出败苗的总保护率提高２０％左右；４批Ｂ型苗用猪效检，符合规程标准，表明效力良好。疫苗在０－８℃保存，有效期可达一年以上。     

猪链球菌、巴氏杆菌二联四价灭活疫苗的研制

采用链球菌C群、猪链球菌2型、巴氏杆菌荚膜A群、巴氏杆菌荚膜B群等强毒株,经培养后灭活,加氢氧化铝胶制成猪链球菌、巴氏杆菌二联四价灭活疫苗,将制备的疫苗进行安全性及效力试验。结果显示,制备的疫苗对猪、兔安全,对小鼠8/10或以上保护,对猪4/5或以上保护。表明制备的疫苗安全有效,能够抵抗猪链球菌、巴氏杆菌强毒的攻击。     

鸡传染性鼻炎和新城疫二联油佐剂灭活疫苗的研究（Ⅰ）

以副鸡嗜血杆菌血清型Ａ的菌株Ｈｐｇ－８，血清型Ｃ菌株Ｈｐｇ－６６８和鸡新城疫ＬａＳｏｔａ制成一种鸡传染性鼻炎和新城疫灭活油佐剂二联苗，２．０ｍｌ接种鸡（相当于８个剂量）安全无异状，０．０２ｍｌ和０．２ｍｌ接种可以保护鸡分别抵抗新城疫病毒和副鸡嗜血杆菌的攻击。接种２次可保护鸡度过整个产卵期。疫苗在４－８℃中保存一年或在２５℃下保存３００天效力不减。根据７批疫苗的结果，对新城疫疫苗的半数保护剂量皆大于５０。     

禽霍乱基因缺陷菌株双型联合免疫的研究

将禽源多杀性巴氏杆菌Ｃ４８－１株（血清型为５∶Ａ）用化学诱变剂亚硝基胍（ＮＴＧ）处理，从３０００多个克隆中筛选出９株链霉素依赖性基因缺陷型菌株（Ｃｓｔｄ株），经２０代连续回复突变测定，除１株外，其余８株表型稳定。将８株Ｃｓｔｄ株用小鼠做毒力比较试验，其中５株加注链霉素表现毒力，不加注链霉素则不表现毒力；用小鼠做免疫力测定，其中Ｃｓｔｄ－１和Ｃｓｔｄ－７能保护１０个最小致死量（ＭＬＤ）同型强毒菌的攻击。将Ｃｓｔｄ－１株与另一禽源多杀性巴氏杆菌Ｐ１０５９株（血清型为８∶Ａ）的链霉素依赖型菌株Ｐｓｔｄ－６混合，用小鼠做双型联合免疫试验，结果小鼠能抵抗Ｃ４８－１和Ｐ１０５９两株强毒菌混合培养物１０个ＭＬＤ的攻击，保护率达１００％。     

猪巴氏杆菌二价（A、B群）灭活疫苗的研究Ⅲ、中试生产、检验方法、免疫持续期测定及野外试验

在前两报的试验基础上，按原定工艺在工厂中生产了１５批猪巴氏杆菌二价（Ａ、Ｂ群）灭活疫苗的中试产品。鼠、兔安全检验均安全合格；用兔效检结果为：Ａ群菌保护７５％（４５／６０）、Ｂ群菌保护８７％（５２／６０）；猪、兔效力对比试验验证了效力试验中猪兔的平行关系，为用兔作该疫苗效力检验进一步提供依据；猪的免疫持续期测定表明在免疫后７个月，猪对Ａ、Ｂ群强毒菌的攻击可获得１００％保护；１０８２０头猪的野外试验，经６个月的观察结果表明，此苗在实际防疫中的安全性和可靠性。     

禽多杀性巴氏杆菌C48—1成熟外膜蛋白H重组亚单位疫苗免疫效果的研究

将融合表达禽多杀性巴氏杆菌成熟外膜蛋白H（OmpmH）的重组菌pGEX—ompmH／BL21大量培养，在最佳诱导条件下诱导表达，表达产物经蛋白酶剪切及亲和层析纯化，得到OmpmH基因的原核表达产物，将其与弗氏完全佐剂混合制成油乳剂亚单位疫苗，用该疫苗肌肉注射接种5周龄鸡，首免后每周采血检测抗体，二免后第2周用10LD50禽多杀性巴氏杆菌强毒菌株C48-1进行攻击。结果显示，OmpmH具有良好的免疫原性，能诱导鸡体产生特异性抗体，可抵抗强毒菌株C48-1的致死性攻击，免疫效果优于禽多杀性巴氏杆菌弱毒疫苗。     

兔病毒性出血症、多杀性巴氏杆菌病二联蜂胶灭活疫苗的研制

试研制5批兔病毒性出血症、多杀性巴氏杆菌病二联蜂胶灭活疫苗,共计16.3万头份。疫苗安检、菌检均合格,效力检验试验对兔病毒性出血症总保护率为100%,对兔多杀性巴氏杆菌病的总保护率为84%,疫苗分派山东多家养兔单位应用,反馈信息表明,疫苗安全、有效,能有效预防兔病毒性出血症和兔多杀性巴氏杆菌病。     

鸭瘟、鸭霍乱紧急防治措施研究

对鸭瘟、鸭霍乱紧急防治措施作了系列研究，结果表明：鸭瘟、鸭霍乱多价卵黄抗体对１００个ＬＤ５０鸭瘟强毒和８．３个Ｃ４８－１强毒菌的攻击具有１００％（８／８只）中和能力，对鸭瘟强毒（１００个ＬＤ５０）和Ｃ４８－１（８．３个）攻毒后５～６小时注射４倍稀释卵黄抗体２．０ｍｌ／只，具有１００％（６／６只）保护（口服有８３．３％保护）；分别以正常量和５倍量的鸭瘟弱毒苗免疫２月龄鸭，５～６小时后攻鸭瘟强毒，结果无一存活，鸭瘟弱毒苗和鸭瘟－禽霍乱二联活苗免疫后３天，对１００个ＬＤ５０鸭瘟强毒攻击获５０％（３／６）保护，７天获８３．３％（５／６）保护。Ａ群菌苗免疫后６天对Ｃ４８－１攻击获６６．７％（４／６只）保护，１２天获１００％保护。鸭瘟－禽霍乱二联活苗免疫后３天对Ｃ４８－１攻击获３３．３％（２／６）保护，７天获８３．３％保护；巴氏杆菌卵黄抗体和血清抗体能明显抑制巴氏杆菌生长并有溶菌现象出现；复方痢菌净、喹乙醇、庆大霉素、链霉素和四环素对多杀巴氏杆菌高度敏感（１７～４１ｍｍ）。     

禽多杀性巴氏杆菌G190E40弱毒菌种两种菌落制造疫苗的安全性及免疫效力比较试验

用禽多杀性巴氏杆菌抗体阴性健康鸡测定G190D40弱毒菌种两种菌落所制造疫苗的安全性及免疫效力。结果表明，用中菌落制造的疫苗安全检验4／4健话，符合规定；用大菌落制造的疫苗2／4—3／4健活，不符合规定。用大、中菌落制造的疫苗效力检验，均4／4健活，符合规定。     

禽多杀性巴氏杆菌ptfA基因壳聚糖纳米DNA疫苗的免疫效果

为评价禽多杀性巴氏杆菌ptfA基因壳聚糖纳米DNA疫苗的免疫效果,本实验以壳聚糖为佐剂制备ptfA基因的壳聚糖纳米DNA疫苗,检测其形态及抗DNA酶降解的能力,随后进行动物免疫实验,检测免疫后小鼠血清特异性抗体水平、免疫小鼠脾淋巴细胞增殖、IFN-γ分泌情况和抵抗强毒菌株攻击和免疫保护率。实验结果显示,ptfA基因壳聚糖纳米DNA在透射电镜下呈现较为规则的圆球型,粒径约为200 nm,可以有效抵抗DNAaseⅠ的降解。间接ELISA检测结果显示,壳聚糖纳米DNA疫苗组和裸DNA组的血清抗体水平均呈现上升趋势,明显高于空载体对照组和PBS对照组,且壳聚糖纳米DNA疫苗组的抗体水平稍高于裸DNA疫苗组。淋巴细胞增殖试验和IFN-γ分泌试验结果也显示,壳聚糖纳米DNA疫苗组和裸DNA疫苗组的SI值与IFN-γ分泌水平极显著高于两对照组(p0.01),但两种DNA疫苗组之间差异并不显著(p0.05)。强毒菌株攻击后壳聚糖纳米DNA疫苗组的保护率优于裸DNA疫苗组,在一定程度上增强了禽多杀性巴氏杆菌ptfA基因裸DNA疫苗的免疫效果。从而为禽多杀性巴氏杆菌新型DNA疫苗的研究奠定了基础。     

内蒙古呼伦贝尔地区羊源多杀性巴氏杆菌荚膜血清群分子流行病学调查

近年来,羊多杀性巴氏杆菌病在内蒙古自治区呼伦贝尔市时有发生。为了解呼伦贝尔市羊源多杀性巴氏杆菌荚膜血清型流行状况,通过建立多杀性巴氏杆菌分子生物学诊断方法,以羊病变组织为研究对象,对呼伦贝尔市羊源多杀性巴氏杆菌,进行荚膜血清群分子流行病学调查,同时应用K-B纸片琼脂扩散法,对分离菌株进行药物敏感性试验,以找到针对本地区流行株的敏感药物。结果显示:从采集的35份病羊肺组织病料中,分离出12株B群、9株D群多杀性巴氏杆菌,未分离出其他血清群;分离菌株对青霉素、链霉素耐药率最高,对氯霉素、四环素、诺氟沙星、环丙沙星敏感。结果表明,呼伦贝尔市流行的羊源多杀性巴氏杆菌以B群、D群为主,且分离菌株对青霉素、链霉素产生了较高的耐药性,需指导和监管抗菌药物的合理使用。本研究查清了本地区流行的优势多杀性巴氏杆菌血清群,找到了针对性敏感药物,这为该市羊巴氏杆菌病防控提供了有效的技术支撑,也对多杀性巴氏杆菌病流行病学监测和基因多样性研究奠定了基础。     

兔多杀性巴氏杆菌C51-17株在疫苗效力检验中保存方法的研究

通过将兔多杀性巴氏杆菌C51—17株菌液分装后置-80℃冻存的方法对菌液浓度进行预数,并与传统方法采用的将菌液置4℃保存过夜计算菌存率或通过测定菌液吸光值推算攻毒菌液浓度相比较。结果表明。用-80℃冻存保存方法估算的菌液浓度与实际浓度更接近,采用这种方法进行疫苗的效力检验,能确保对照成立,在兔多杀性巴氏杆菌病灭活疫苗效力检验中可以采用-80℃冻存的方法进行攻毒菌液的预数。     

限铁培养禽巴氏杆菌制备灭活疫苗及其免疫效果分析

为控制禽多杀性巴氏杆菌病的流行,通过对禽巴氏杆菌标准菌种A群NCTC1502进行限铁培养,制备稳定性和安全性较好的甲醛油乳剂灭活疫苗,免疫江汉鸡,监测其抗体消长规律和免疫效力。结果:禽巴氏杆菌限铁培养制备的灭活疫苗稳定性和安全性好,对江汉鸡可产生高效的免疫保护力,免疫保护率达100%,显著高于非限铁培养制备的灭活疫苗(80%)。试验表明利用禽巴氏杆菌标准菌种进行限铁培养所制备的疫苗可有效防控禽霍乱。     

野生草食动物源多杀性巴氏杆菌荚膜分型的研究

采用Carter荚膜群鉴定法对分离于我国黑鹿、白唇鹿、斑马和赤大袋鼠的56株多杀巴氏杆菌进行荚膜血清型鉴定,结果表明：B型占78．6％（44／56）,h型占14．3％（8／56）,D型占3．6％（2／56）,另有2株未能确定型,占3．6％（2／56）。其中荚膜B型是斑马、黑鹿和白唇鹿源多杀性巴氏杆菌的主要血清群,荚膜A型是赤大袋鼠源多杀性巴氏杆菌的主要血清群。黑鹿和白唇鹿源多杀性巴氏杆菌均存在2个血清群。     

禽霍乱组织灭活油佐剂苗的研制

选用分离自急性禽霍乱病鸭的多杀巴氏杆菌，通过鸡（鸭）胚培养，制备组织灭活油佐剂苗。免疫接种后７－９天可产生免疫力，用同型或异型强毒禽多杀巴氏杆菌攻击，其保护率均在８０％以上，保护期不少于４个月，疫苗保存期为半年。     

用冻干菌液进行猪丹毒、多杀性巴氏杆菌病二联灭活疫苗效力检验的研究

在猪丹毒、多杀性巴氏杆菌病二联灭活疫苗的效力检验中,需要进行动物攻毒保护试验。传统方法使用的是2~8 ℃保存的新鲜菌液对试验动物进行攻毒。本研究中使用的是低温保存的冻干菌液,并对冻干保存的菌数进行了测定和优化。结果表明,冻干保存的菌液能达到新鲜菌液同等的检验结果。同时,对冻干菌液保存期进行试验验证,发现细菌存活状态稳定。因此,在猪丹毒、多杀性巴氏杆菌病二联灭活疫苗效力检验中,可将新鲜的攻毒菌液冻干保存,用于攻毒保护试验,以避免每次繁重的新鲜菌液前期准备工作,并克服活菌数衰减所造成的检验结果不准确等问题。     

禽霍乱鸡胚组织灭活油乳苗的研究

选择禽多杀性巴氏杆菌Ｃ４８－１强毒株（血清１型），接种鸡胚，收集死胚制备组织灭活油乳苗，分别免疫鸡和鸭，设肉汤培养的Ｃ４８－１菌株灭活乳化苗作免疫对照。免疫后４周用异源血清型禽多杀性巴氏杆菌Ｐ１０５９（血清３型）攻击。经组织灭活油乳苗免疫的鸡保护率达９３．３％，鸭保护率达１００％，而经肉汤培养的灭活苗对鸡和鸭均无保护作用，说明鸡胚培养的多杀性巴氏杆菌具有交叉保护作用。     

猪伪狂犬病基因缺失疫苗的制备、安全性、免疫原性、保存期测定及区域试验

为了提供有效的伪狂犬病疫苗，用鸡胚成纤维细胞扩大培养了PrV HB-98突变株（TK^-/gG^-/LacZ^＋），研制了伪狂犬病基因缺失疫苗，并对该疫苗经肌肉接种、经口等免疫途径的最小免疫剂量进行了测定，同时也对4批疫苗的安全性、效力、免疫期和保存期进行了检测；同时将4批疫苗用于免疫23个猪场的母猪、新生仔猪和育肥猪进行区域试验。测定结果表明，疫苗经上述两种途径接种对不同阶段猪的最小免疫剂量均为10^5.0 TCID50；10倍免疫剂量的疫苗对初生仔猪、15日龄仔猪和妊娠母猪是安全的，免疫猪能抵抗强毒的攻击；疫苗在4℃和-20℃下分别可保存6个月和12个月。对伪狂犬病毒抗体阴性的70日龄商品猪和种猪的免疫期为6个月。田间试验表明，4批猪伪狂犬病基因缺失疫苗安全有效，并可用于仔猪发病时的紧急接种。为猪伪狂犬病基因工程疫苗的制备与应用提供了有力的依据。