红霉素与四环素耐药基因在猪链球菌临床分离株中的检测

为了解临床分离的48株猪链球菌对大环内酯类药物及四环素耐药基因的分布,用微量稀释法测定48株临床分离的猪链球菌对大环内酯类、四环素、β-内酰胺类及头孢类9种抗生素的药物敏感性,建立PCR方法对耐药菌株大环内酯类耐药基因ermA/B/C、mefA/E、msrD、mphB、23S rRNA,L4,L22和四环素耐药基因tetM、tetO、tetL、tetK及与Tn916转座子相关的int和xis基因进行检测。结果表明,31株2型猪链球菌中大环内酯类药物耐药率为3.23%,17株9型猪链球菌红霉素耐药率为88.24%,泰乐菌素、磷酸替米考星、阿奇霉素的耐药率均为70.59%。48株猪链球菌对四环素均耐药,但对青霉素、阿莫西林、头孢曲松钠、氨苄西林均敏感。大环内酯类耐药基因主要以ermB为主,占75%(12/16),mefA/E、msrD占25%(4/16),16株红霉素耐药菌株中,tetM、tetO、int、xis的检出率分别为25%(4/16)、62.5%(10/16)、31.25%(5/16)和31.25%(5/16),没有检测到ermA、ermC、mphB、tetL、tetK。所有红霉素耐药菌株均未检测到23S rRNA、L4和L22突变。     

动物源粪肠球菌对7种抗生素耐药表型及耐药基因检测

为查明动物源(牛、羊、猪、鸡)粪肠球菌分离株对7种常见抗生素的耐药情况(包括耐药表型及相关的耐药基因),采用药敏纸片法、浓度稀释法和VITEK-AMS全自动药敏法3种不同的方法,根据CLSI(2007)判定标准,检测40株分离株的耐药表型;采用聚合酶链反应(PCR)方法,检测分离株中β-内酰胺类抗生素耐药相关基因(TEM)、氨基糖苷类抗生素耐药相关基因(aac(6’)/aph2’’,aph(3’)-Ⅲ,ant(6)-I)、四环素耐药相关基因(tetM)、红霉素耐药相关基因(ermB,mefA)和万古霉素耐药相关基因(vanA,vanB,vanC)。结果表明,分离株对庆大霉素、链霉素、四环素、红霉素、青霉素、阿莫西林表型耐药率分别为:60.0%(24/40),57.5%(23/40),52.5%(21/40),67.5%(27/40),60.0%(24/40),55.0%(22/40),本试验中未发现耐万古霉素粪肠球菌。耐药基因aac(6’)/aph2’’,ant(6)-Ⅰ,aph(3’)-Ⅲ,tetM,ermB,TEM的检出率分别为:55%(22/40),55%(22/40),25.0%(10/40),42.5%(17/40),50.0%(20/40),45.0%(18/40);未检测到mefA,vanA,vanB,vanC基因的菌株。动物源性粪肠球菌多重耐药现象严重,携带抗生素相关耐药基因是导致分离株对抗生素产生耐药的主要原因,从耐药表型和基因型的角度均可证实分离株粪肠球菌具有多重耐药性。     

东北地区猪链球菌对大环内酯类药物耐药机制的研究

采用微量稀释法及双纸片扩散法测定了28株猪链球菌（S．suis）对大环内酯类药物的耐药性和耐药表型，红霉素、阿奇霉素和泰乐菌素耐药率分别为92．8％、92.8％和89.3％，耐药表型以内在型（cMLSB）为主。利用聚合酶链反应（PCR）检测红霉素耐药基因erm和mef,对ermA／B／C分型扩增、克隆、测序，26株菌扩增到ermB基因，16株菌扩增到ermA基因，其中15株同时扩增到ermB和ermA基因，1株未扩增到这两种基因的任一种；28株猪链球菌中均未扩增到ermC和mef基因。16株菌的c17nA基因核苷酸序列与GenBank中同源序列同源性为83％～100％，氨基酸序列与参照序列（X03216，1）相比突变点较多，有11株菌在34个位点处同时发生了改变；26株菌的ermB基因核苷酸序列与GenBank中同源序列相似性为98％～100％，氨基酸序列与参照序列（AY183117．1）相比突变点较少，与参照序列完全一致的有7株，其余株仅1～3个氨基酸不同。说明本地区猪链球菌对大环内酯类药物耐药情况很严重，耐药基因为甲基化酶ermA和／或ermB，ermA基因突变点较多，ermB基因相对稳定。     

猪源链球菌对大环内酯类主要耐药基因的检测

为了解猪源链球菌对红霉素相关耐药基因ermB、ermA和mefA的分布,对河北省及辽宁部分地区的64株猪源链球菌分离株,用PCR方法检测51株红霉素耐药株和13株红霉素敏感株中ermB、ermA和mefA基因。结果显示,耐药菌株中ermB基因的检出率为98.04%(50/51),ermA的检出率为25.49%(13/51),没有检出mefA基因。初步表明河北省及辽宁部分地区的猪源链球菌对红霉素的耐药机制以ermB基因介导为主。20株菌的ermB基因核苷酸序列与GenBank中同源序列相似性为99%～100%。与参照序列AJ972604.1相比,20株菌的ermB氨基酸序列的突变位点较少,主要有Thr 75→Ser、Ser 100→Asn、Arg 118→His、Leu 175→Ile,以100和118位突变为主,进一步说明ermB基因是相对稳定的。     

猪链球菌2型湖南分离株多重耐药性及相关耐药基因研究

基因突变和基因转移是细菌耐药性产生和存在的重要内因,检测与抗生素耐药性相关的基因具有重要的意义.试验选取25份猪链球菌2型湖南分离株对16种抗生素进行药敏试验,检测菌株耐药性;选出了23株有红霉素抗性的菌株,用PCR检测其erm(B)基因.结果显示,猪链球菌湖南分离株对红霉素、四环素、万古霉素和克林霉素具有高耐药性,在23株红霉素抗性菌株中有18株存在erm(B)基因,由erm(B)基因产生的红霉素耐药菌株占到其中的78.3%.因此,erm(B)基因是链球菌2型湖南分离株对红霉素耐药的主要抗性决定基因.     

鲫鱼弗氏柠檬酸杆菌的耐药表型及耐药基因检测

为了检测鲫鱼费氏柠檬酸杆菌的耐药表型及耐药基因,试验采用标准Kirby-Bauer纸片扩散法检测鲫鱼弗氏柠檬酸杆菌对13种抗生素的耐药表型,并用PCR法检测弗氏柠檬酸杆菌对四环素类和磺胺类抗生素的6种耐药基因(tetA、tetC、tetM、Sul1、Sul2和Sul3)。结果表明:鲫鱼弗氏柠檬酸杆菌对四环素、氨苄西林、强力霉素、红霉素、头孢拉定和阿莫西林耐药;仅检测出四环素类的tetA和tetM基因,而其他未检测出。     

猪链球菌临床分离株对四环素类抗生素的耐药性和耐药基因分析

【目的】了解广东地区猪链球菌（Streptococcus suis，S.suis）临床分离株对四环素类抗生素的耐药性及耐药基因携带情况。【方法】采用药敏纸片扩散法对2016－2020年分离自广东地区的34株猪链球菌进行四环素类抗生素耐药分析，并通过PCR方法检测四环素耐药基因tetA、tetC、tetD、tetM、tetO和tetX携带情况。【结果】34株猪链球菌对四环素的耐药率高达100%（34/34），其次为米诺环素82.4%（28/34）、多西环素47.1%（16/34）。34株猪链球菌中3重耐药菌株有15株，占比44.1%（15/34），2重耐药菌株有14株，占比41.1%（14/34），耐1种药物的菌株5株，占比14.7%（5/34）。耐药基因检测结果显示，tetA、tetC、tetD、tetM、tetO和tetX基因携带率分别为0、0、0、14.7%（5/34）、100%（34/34）和0。【结论】广东地区猪链球菌临床分离株四环素类抗生素的耐药率较高，主要携带的四环素耐药基因为tetO和tetM基因。     

新疆北疆地区猪源粪肠球菌的耐药性分析

为了解新疆北疆地区猪源粪肠球菌的耐药性及相关耐药基因型的分布情况,本试验采用K-B（Kirby-Baller）琼脂扩散法检测了49株猪源粪肠球菌对8种抗菌药物的敏感性,并采用PCR法对9种相关耐药基因进行检测并测序,测序结果与GenBank中的相应基因序列比对。药敏试验结果显示,分离菌对链霉素耐药率最高,其次为青霉素和红霉素,对呋喃妥因、氨苄西林高度敏感。PCR检测结果显示,β-内酰胺类耐药基因tem的检出率最高,为93.88%,其次是四环素类耐药基因tetM,为85.71%,喹诺酮类基因gyrA和parC检出率均为42.86%,氨基糖苷类耐药基因aph（3'）-Ⅲ、aac（6'）/aph2″和ant（6'）-Ⅰ的检出率分别为36.73%、16.33%和16.33%,未检出mefA和ermB基因。本试验从表型与基因型分析发现,北疆地区猪源粪肠球菌的多重耐药现象非常严重,且其耐药表型与基因型并不完全一致。     

兽医临床凝固酶阴性葡萄球菌分离株的耐药性及耐药基因检测

采用微量肉汤稀释法和D-试验法检测64株凝固酶阴性葡萄球菌（CNs）对10种抗菌药物的耐药性,并用PCR方法分别检测头孢西丁耐药菌株和红霉素耐药菌株中mecA基因以及erinA、ermB、ermC和msrA基因的携带情况。结果表明,所有菌株均对万古霉素和甲氧苄啶／磺胺甲恶唑敏感;泰妙菌素为耐药率（65．6％）最高的抗菌药物,其次是红霉素、氧氟沙星和β-内酰胺类药物。28株（43．8％）CNS对青霉素耐药,其中26株对头孢西丁耐药（MRS）并且均携带mecA基因。30株（46．9％）CNS对红霉素耐药,其中24株为MLSB耐药表型,主要由ermB基因介导。总之,兽医临床CNs分离株对常用抗菌药物的耐药性不同,mecA基因和ermB基因的携带分别是兽医临床MRS和MLSB表型产生的主要原因。     

鸡源性多重耐药沙门氏菌 类整合子与耐药基因研究

本试验旨在了解鸡源性沙门氏菌分离株多重耐药与Ⅰ类整合子及耐药基因的携带关系。采用K-B纸片法对29株鸡源性沙门氏菌分离菌株进行10种抗菌药物敏感试验;应用PCR技术对分离菌株进行Ⅰ类整合子及耐药基因检测。29株分离株中有13株对2种以上抗菌药物耐药,属于多重耐药株,氨苄西林-四环素-头孢唑啉-复合磺胺是主要多重耐药谱;13株多重耐药菌中有8株携带Ⅰ类整合子,blatem-1、tetA和tetB基因检出最高。结果表明沙门氏菌多重耐药性与整合子的携带之间关系密切,耐药表型测定结果与耐药基因检测结果基本一致。     

Prevalence and mechanism of resistance against macrolides and lincosamides in Streptococcus suis isolates

Eighty-seven Streptococcus suis isolates recovered in 1999-2000 from diseased pigs, all from different farms, were screened for resistance against macrolide and lincosamide antibiotics by the disk diffusion and agar dilution test and a PCR assay, amplifying the ermB gene and the mefA/E gene. Seventy-one percent of the isolates showed constitutive resistance to macrolide and lincosamide antibiotics (MLS(B)-phenotype). All these isolates were positive for the ermB gene in the PCR, but negative for the mefA/E gene. For all strains minimum inhibitory concentrations (MIC) against five other antimicrobial agents were determined. All strains were susceptible to penicillin. Ninety-nine percent of the isolates were susceptible to enrofloxacin and tiamulin. Eighty-five percent of the strains were resistant to doxycycline. A 540bp fragment of the ermB genes of eight S. suis strains was sequenced and compared with ermB genes of five S. pneumoniae and five S. pyogenes strains of human origin. A 100% homology was found between these fragments in seven S. suis, one S. pneumoniae and three of the S. pyogenes isolates. This study demonstrates that resistance against macrolides, lincosamides and streptogramin B is widespread in S. suis and mediated by ribosome methylation, encoded by the ermB gene.     

红霉素体外诱导猪链球菌耐药机制研究

2004年在病猪体内分离到一株猪链球菌,通过平板扩散法和微量稀释法药敏试验表明这株链球菌对红霉素敏感。采用这株猪链球菌进行体外诱导试验,在低浓度药物组第165代和高浓度药物组第180代的菌液对红霉素M IC值均达到中介水平。它们的耐药表型均为内在型,而且都扩增到了ermB耐药基因。其中180代菌的23S rRNA碱基1387位A突变成G;它们的核糖体蛋白L4,165代菌碱基104位、585位和633位,分别T突变成C、A突变成G和A突变成G,180代菌碱基283位和651位,分别A突变成G和T突变成G;核糖体蛋白L22,165代和180代菌碱基109位和468位,分别C突变成A和T突变成A,并且165代菌碱基还在426位G突变成A。这些碱基的突变可能是引起猪链球菌对红霉素耐药的原因之一。     

猪链球菌1型临床分离株的鉴定和基因组学分析

从罹患肺炎型猪链球菌病的仔猪气管中分离出1株猪链球菌强毒株,命名为SS2011GZ,经PCR鉴定为血清1型。斑马鱼攻毒试验测得该菌株的半数致死量(LD50)为4.09×10⁴ CFU/mL,有较强毒力;全基因组测序分析显示,毒力基因型为mrp⁺gdh⁺epf⁺sly⁺fbps^-sao^-,存在19个基因岛,24种耐药基因,共线性分析发现该菌株基因有大量重排、倒位、插入、缺失,基因发生树中处于独立的分支。结果表明本研究分离的猪链球菌1型为强毒力株,基因共线性较差,存在大量特殊基因和耐药基因,有重要的公共卫生学意义,需引起足够重视。     

猪附红细胞体50S核糖体基因PCR检测方法的建立及应用

根据GenBank上最新发布的猪附红细胞体基因组序列(NC-015155)设计一对引物,并以吉林省延边地区猪附红细胞体基因组DNA为模板,建立猪附红细胞体50 S核糖体基因PCR诊断方法,通过特异性、敏感性及临床应用试验验证,快速准确的检测出猪附红细胞体.试验结果显示,建立的猪附红细胞体PCR诊断方法扩增片段大小为10...     

一株猪链球菌8型菌株的分离鉴定及其生物学特性研究

为明确天津市某猪场保育猪疑似发生猪链球菌病的病原菌及其致病力等生物学特性,将猪场一头发病猪扑杀,无菌采集病料于哥伦比亚血琼脂平板上划线培养,对分离的疑似菌株进行形态学观察、生化试验、16S rDNA序列分析和血清型鉴定,确定分离菌株为猪链球菌8型,命名为TJS31。药敏试验结果显示,TJS31株对8种受试药物耐药,4种受试药物中介,1种受试药物敏感。致病性试验结果显示,TJS31株经腹腔接种昆明小鼠,24 h内可以引起小鼠出现精神萎靡、扎堆、呼吸急促、发抖、运动迟缓、死亡等,LD50为1.8×10⁸ CFU/mL。毒力基因检测发现TJS31的毒力基因型为sly⁺/gdh⁺/orf2⁺/gapdh⁺,不携带mrp、epf和fbps基因。研究结果丰富了我国猪链球菌病病原的生物学资料,为猪链球菌8型的防控提供了依据,也为深入开展猪链球菌8型的致病机制和耐药机理奠定了基础。     

天津地区2型猪链球菌的分离鉴定及耐药性分析

为了解天津地区2型猪链球菌的流行及耐药情况,本研究收集该地区部分规模化养猪场疑似猪链球菌病病料317份,通过病原分离培养、染色特性观察、生化试验、PCR扩增等方法进行鉴定,并对分离菌进行致病性及药敏试验。结果从样品中分离鉴定出11株2型猪链球菌。对小鼠的致病力试验结果显示,应用0.5×10⁸ CFU/mL的细菌攻击小鼠,11株2型猪链球菌分离株中有6株具有致死性,其中1株致死率较强,5株致死率较弱。药敏试验结果表明,11株分离菌对9种临床常见药物均表现出很强的耐药性,其中对阿米卡星、四环素和强力霉素耐药性最强,耐药率达到100.00%;且所有分离株均呈多重耐药,其中4个分离株为9重耐药,占36.36%（4/11）。本试验结果表明,天津地区存在2型猪链球菌感染情况,且对多种抗菌药均产生了耐药性,应引起养殖户的高度重视,在防制猪链球菌病时,应有针对性地合理、科学、规范用药和交替用药。     

广东地区猪链球菌的耐药性特点及四环素耐药基因携带情况

猪链球菌(Streptococcus suis,SS)是危害世界养猪业的重要细菌性病原菌之一,本研究旨在了解猪链球菌临床分离株的耐药性特点和四环素耐药基因的携带情况,为临床上该病的防控提供科学依据。本试验采用K-B法和CLSI推荐的肉汤微量稀释法检测猪链球菌广东分离株对18种抗菌药物的耐药性。结果显示,被检菌株对四环素类、磺胺类和氨基糖苷类抗菌药物表现较强的耐药性,尤其对四环素类药物的耐药率高达98.2%;对头孢菌素类药物比较敏感;菌株都耐受6种或6种以上的抗菌药物,其中以6和14重耐药菌株的数量最多,分别占20%和17%。本试验设计了4对引物检测四环素耐药基因携带情况,结果发现56株菌中以携带tetM基因为最多(85.71%)。结果表明tetM很可能是介导广东SS分离株对四环素产生极高耐药率的主要原因之一。     

Evaluation of an enzyme-linked immunosorbent assay for detection of Eperythrozoon suis antibodies in swine.

An ELISA was developed and tested to detect antibodies to Eperythrozoon suis in swine. Results were compared with those of the indirect hemagglutination (IHA) test. Antigen isolated from swine heavily infected with E suis was used for both tests. Comparison of the ELISA with the IHA test revealed a significant (P less than 0.001) correlation between results. Of 114 samples obtained from 9 swine infected with E suis, 87.7% were seropositive (titer greater than or equal to 200) via the ELISA, and 80.7% were seropositive (titer greater than or equal to 20) via the IHA test. The sensitivity of the ELISA was greater than that of the IHA test. All blood samples obtained from specific-pathogen-free swine tested negative for E suis antibody. Cross-reactions were not observed between E suis antigen and antisera against various swine and cattle disease agents using ELISA. We concluded that the ELISA may be used for rapid and effective diagnosis of infection with E suis in swine.