天津地区奶牛乳腺炎金葡菌黏附素Fnbp A基因检测

金黄色葡萄球菌黏附素FnbpA是引起奶牛乳腺炎的关键因素之一,对金黄色葡萄球菌的黏附环节进行阻断,进而减少或阻止金葡菌相关毒素和荚膜的表达,以黏附素蛋白为靶抗原的亚单位疫苗是预防奶牛金葡菌乳房炎的发展方向之一。对天津及周边地区奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌临床分离株的黏附素FnbpA基因检测研究,结果表明96%的临床分离株携带此基因,为进一步研究天津地区奶牛乳房炎金葡菌亚单位疫苗提供理论依据。     

天津地区猪链球菌3型菌株的致病性及耐药特性研究

试验旨在对分离自天津地区发病猪场的7株猪链球菌3型菌株（Streptococcus suis type 3,SS 3）进行致病性和耐药特性研究。应用剂量为1.0×10⁷、1.0×10⁸和1.0×10⁹ CFU/只的细菌对小鼠进行致病力研究,用PCR方法检测7株SS 3型菌株的毒力基因mrp、ef、sly、gdh、gapdh、fbps和orf2,并对这7株SS 3型菌株进行药物敏感试验。致病力试验结果显示,接种剂量为1.0×10⁹和1.0×10⁸ CFU/只时分别有6和3株SS 3型菌株可使小鼠100.0%（5/5）发病死亡,接种剂量1.0×10⁷ CFU时仍有1株SS 3型菌株可使80.0%（4/5）小鼠发病死亡,这7株SS 3型菌株对小鼠的致病力依次为R15056 > R15042=S15030 > Y12024=Y09011 > Y13125 > Y13164。毒力基因检测结果表明,共有3种毒力基因型,R12024、Y13164、R15042和S15030株为gdh、gapdh、fbps和orf2毒力基因阳性,Y13125和R15056株为sly、gdh、gapdh、fbps和orf2毒力基因阳性,Y09011株为gdh、fbps和orf2毒力基因阳性。药物敏感性试验结果显示,7株SS 3型对头孢喹肟相对最敏感,其次为阿莫西林、环丙沙星和磺胺间甲氧嘧啶钠,但对强力霉素100.0%耐药,且所有菌株均呈现3重以上的耐药性。本研究为进一步开展天津地区SS 3型流行特点及致病机理研究奠定了基础,可为天津地区SS 3型菌株的综合防控提供理论指导。     

猪葡萄球菌临床分离株感染仔猪渗出性皮炎模型的建立

为建立研究仔猪渗出性皮炎发病机制及治疗制剂的动物模型,本研究采用PCR及BLAST序列比对方法对猪葡萄球菌437-2株毒素基因型进行鉴定,采用纸片扩散法检测其耐药性,通过不同浓度菌液人工感染仔猪试验分析该菌株的临床致病力、最小致病浓度、发病周期及组织病理学变化。结果显示,该分离菌株为ExhD毒素基因型,其毒素基因与德国分离株(GenBank登录号:AM94662.1)和俄罗斯分离株(GenBank登录号:AM950188.1)的ExhD基因同源性达99%;药敏试验结果显示,该菌株为多重耐药菌株,对青霉素、磺胺异噁唑、链霉素、阿奇霉素、红霉素、四环素、杆菌肽及诺氟沙星耐药;仔猪致病性试验结果显示,低剂量组在整个试验周期内仅注射部位表现出皮炎症状,而中、高剂量组在耳后皮下注射2 d后均出现显著的渗出性皮炎症状,病猪表现为耳后出现油皮,全身被毛粗糙,皮肤呈深褐色厚皮痂,有大片蜕皮和黄色液体渗出;感染仔猪的脏器和皮肤病理切片结果显示,低剂量组仔猪脏器无异常,耳部皮肤角质层角化过度,炎性细胞浸润,无棘皮层细胞分离,而中、高剂量组感染仔猪脏器具有一定程度的损伤,皮肤表皮棘细胞层出现明显的细胞分离。上述试验结果说明,利用猪葡萄球菌437-2株可成功建立仔猪渗出性皮炎模型,所需的最小攻菌浓度为1×10~9 CFU/mL。     

天津部分猪场副猪嗜血杆菌的分离鉴定

为了解天津部分地区2014年副猪嗜血杆菌病的发病情况及菌株的致病力,收集本地区45个规模化养猪场疑似副猪嗜血杆菌病猪的病料53份,通过病原分离培养、培养特性及染色特性观察、生化试验及PCR扩增等方法进行鉴定,最终分离到阳性样品15例,阳性率28.3%;挑选2株(TJ-0121A,TJ-0134A)分离于临床症状典型病猪,且生物学特性典型的分离株进行豚鼠副猪嗜血杆菌的人工感染试验,每只豚鼠腹腔注射2.0×109 CFU/mL菌液。TJ-0121A分离株接种豚鼠后,豚鼠全部死亡;TJ-0134A分离株感染7d后未出现死亡。对所有豚鼠的肝、肺、脾、淋巴结、肾、心肌进行副猪嗜血杆菌分离和PCR检测,TJ-0121A组死亡豚鼠的所有组织均可分离并检测到副猪嗜血杆菌;TJ-0134A组豚鼠仅肺脏分离检测到副猪嗜血杆菌,说明不同菌株间的致病力存在差异。     

成膜性中药乳头药浴液对奶牛隐性乳房炎的影响

奶牛乳头药浴是预防隐性乳房炎的有效措施之一。天津市畜牧兽医研究所研制的成膜性中药乳头药浴液主要成分为抗茵中药和成膜材料,用于奶牛挤奶后乳头药浴,对奶牛乳房炎常见病原菌金黄色葡萄球菌、链球菌、酵母类真菌等具有良好的抑制和杀灭作用,同时兼有薄膜的屏障作用,可阻止病原微生物从乳头侵入乳腺组织。分别采用LMT检测和乳汁体细胞数作为隐性乳房炎诊断指标,探讨成膜性中药乳头药浴液对奶牛隐性乳房炎的影响.结果表明,成膜性中乳头药浴液可减少隐性乳房炎阳性率和阳性强度,降低乳汁体细胞数,提高产奶量．、试验组比对照组隐性乳房炎发病率降低32．4％（P〈0．001）,产奶量提高6．72kg／（d·头）（35．1％,P〈0．05）。     

猪伪狂犬病病毒天津变异株R13139对猪的致病性研究

为了解猪伪狂犬病病毒（PRV）变异株R13139株对猪的致病性情况，本试验将PRV R13139株和PRV经典强毒株SC株均以10⁶ TCID₅₀剂量经滴鼻途径接种6和9周龄健康仔猪各3头，空白对照组鼻腔接种生理盐水，通过攻毒后两个年龄段猪的临床症状表现、眼观病例变化、显微病理变化、抗体产生情况及病毒在体内部分情况评定两毒株对猪的致病力差异。结果显示，SC株对6和9周龄猪的致死率分别为66.7%（2/3）和100.0%（3/3），而R13139株对6和9周龄猪的致死率分别为33.3%（1/3）和66.7%（2/3），表明R13139株对猪的致死性弱于SC株，但R13139株引起两个年龄段猪发病时间比SC株早，同时间段的体温升高幅度更高，神经发症状更严重；眼观病理变化发现，R13139株引起的发病猪肝脏坏死现象比SC株更明显，而心脏、肺脏、脾脏、膀胱和脑的病理变化差异不明显；显微病理结果显示，R13139株对病猪的扁桃体、肺脏、肝脏和三叉神经节等组织造成的病理损伤明显强于SC株；PCR结果显示，R13139株在濒死猪扁桃体、脾脏、肺脏、三叉神经节和淋巴节（腹股沟、肠系膜和颌下）等组织脏器中分布比SC株更广泛；应用ELISA检测攻毒猪抗体发现，R13139株诱导PRV-gB抗体产生的时间比SC株早1 d。本研究结果可为揭示中国伪狂犬病重新流行的原因及进一步开展防控技术研究提供科学依据。     

禽腺病毒血清4型纳米PCR检测试剂盒的研制及应用

为研制一种高效、快捷、灵敏的禽腺病毒血清4型（FAdV-4）检测试剂盒，本研究根据FAdV-4的保守序列设计了一对引物及探针，并在下游引物标记FITC，探针标记Biotin，应用纳米PCR技术结合横向流动试纸条技术（LFD），优化反应及杂交条件后建立了检测FAdV-4的纳米PCR-LFD方法，并组装了FAdV-4纳米PCR检测试剂盒。同时对试剂盒进行了特异性、敏感性、批内批间可重复性、稳定性、保存期评估等试验及临床样品检测。特异性试验表明，此试剂盒能够特异性检测出FAdV-4，而对于禽的其他主要病毒性及细菌性病原如鸡传染性喉气管炎病毒（ILTV）、鸡传染性支气管炎病毒（IBV）、鸡传染性法氏囊病病毒（IBDV）、鸡马立克病病毒（MDV）、鸡减蛋综合征病毒（EDSV）、鸭瘟病毒（DPV）、新城疫病毒（NDV）、禽流感病毒H9亚型（AIV（H9））、禽呼肠孤病毒（ARV）、FAdV标准株（FAdV-1、FAdV-2、FAdV-8a、FAdV-8b和FAdV-11）、鸡大肠杆菌（E.coli）、金黄色葡萄球菌（SA）、鸡白痢沙门氏菌（SP）、鸡毒支原体（MG）的检测结果均为阴性。敏感性试验表明，此试剂盒的敏感性比常规PCR方法敏感10倍，最低核酸拷贝数检出量可以达到56.0拷贝/μL。试剂盒的批内、批间检测结果具有良好的一致性和稳定性。稳定性试验结果说明试剂盒至少可以耐受20次的反复冻融，依然有很好的检测效果。保存期试验证实，试剂盒在4 ℃条件下至少可以保存3个月，在-20 ℃条件下至少可保存12个月。此试剂盒实现了对FAdV-4检测结果的可视化，简化了操作流程，提高了检测效率。对天津及周边地区临床送检的117份样品检测结果显示，FAdV-4阳性率为17.95%（21/117）。本试验研制的试剂盒可用于FAdV-4的临床诊断和分子流行病学调查，对养禽场FAdV-4感染的早期检测与制定综合防控措施提供了重要的技术支撑。     

天津地区奶牛乳房炎调查及阳性乳中真菌的分离鉴定

用兰州奶牛乳房检测试剂(LMT)和临床检查对天津市4个区县奶牛场的奶牛进行了乳房炎检测.共检测奶牛乳房炎阳性奶样181头份,其中临床型乳房炎奶样125头份,隐性型乳房炎奶样56头份,然后对阳性样品进行真菌的分离和鉴定.结果共分离到酵母样真菌46株,分离率为25.4%;天津地区奶牛真茼性乳房炎主要为新型隐球菌、白色念珠菌...     

酵母葡聚糖对金葡菌灭活苗免疫新西兰兔效果的影响

为了研究酵母葡聚糖对金黄色葡萄球菌油乳剂灭活苗免疫新西兰兔效果的影响,将其添加到金黄色葡萄球菌油乳剂灭活苗中,配制成低(5 g/L)、中(10 g/L)、高(15 g/L)3个剂量的酵母葡聚糖金黄色葡萄球菌油乳剂灭活苗,同时用不添加酵母葡聚糖的金黄色葡萄球菌油乳剂灭活苗和生理盐水作为对照,分别给每只新西兰兔皮下注射1 mL,在注射后第7、14、21、31、41和51天,分别采血检测新西兰兔淋巴细胞转化率和抗体水平。结果表明,中剂量(10 g/L)的酵母葡聚糖金黄色葡萄球菌油乳剂灭活苗能明显提高新西兰兔的淋巴细胞转换率和血清抗体水平。说明灭活苗中添加适量的酵母葡聚糖能提高疫苗的免疫效力,增强新西兰兔的免疫功能。