红霉素与四环素耐药基因在猪链球菌临床分离株中的检测

为了解临床分离的48株猪链球菌对大环内酯类药物及四环素耐药基因的分布,用微量稀释法测定48株临床分离的猪链球菌对大环内酯类、四环素、β-内酰胺类及头孢类9种抗生素的药物敏感性,建立PCR方法对耐药菌株大环内酯类耐药基因ermA/B/C、mefA/E、msrD、mphB、23S rRNA,L4,L22和四环素耐药基因tetM、tetO、tetL、tetK及与Tn916转座子相关的int和xis基因进行检测。结果表明,31株2型猪链球菌中大环内酯类药物耐药率为3.23%,17株9型猪链球菌红霉素耐药率为88.24%,泰乐菌素、磷酸替米考星、阿奇霉素的耐药率均为70.59%。48株猪链球菌对四环素均耐药,但对青霉素、阿莫西林、头孢曲松钠、氨苄西林均敏感。大环内酯类耐药基因主要以ermB为主,占75%(12/16),mefA/E、msrD占25%(4/16),16株红霉素耐药菌株中,tetM、tetO、int、xis的检出率分别为25%(4/16)、62.5%(10/16)、31.25%(5/16)和31.25%(5/16),没有检测到ermA、ermC、mphB、tetL、tetK。所有红霉素耐药菌株均未检测到23S rRNA、L4和L22突变。     

东北部分地区猪链球菌对四环素类药物耐药机制的研究

为了研究东北部分地区猪链球菌对四环素类药物的耐药机制,在兰氏分群的基础上,对东北部分地区分离的12株猪链球菌进行四环素类药物的耐药性测定和相关基因的扩增。结果表明:12株猪链球菌均属于D群,其中91.7%对多西环素耐药,100%对土霉素耐药,83.3%对盐酸金霉素耐药;12株菌均扩增出tetM基因,但未扩增出tetO基因。同源性分析结果显示扩增的tetM基因与GenBank中的肺炎链球菌、粪肠球菌等的tetM基因的同源性为94%~100%。     

上海市150株猪链球菌对8种常见抗菌药物的耐药情况

为调查上海市猪链球菌耐药情况,采用体外最小抑菌浓度(MIC)药物敏感试验,对2004—2017年从上海市分离的150株猪链球菌,开展了5类8种临床常见抗菌药物的敏感性检测。结果显示:95%的猪链球菌对8种抗菌药物产生了不同程度的耐药,耐药率为16.67%~90.00%。对β-内酰胺类药物的耐药性较低,耐药率分别为氨苄西林16.67%、青霉素19.33%、头孢噻呋26.00%,但也表现出耐药性加重的趋势;对酰胺醇类和喹诺酮类药物出现了一定程度的耐药,其中对氟苯尼考的耐药率为24.67%,对环丙沙星和氧氟沙星的耐药率均为42.00%;对大环内酯类和四环素类药物则出现了极高的耐药性,其中对红霉素、四环素的耐药率分别达到82.67%、90.00%。46%的菌株为多重耐药,其中10.7%的菌株为8重耐药。结果表明,上海市猪链球菌耐药情况较为严峻,除对β-内酰胺类药物较为敏感外,对其他药物均出现了不同程度的耐药,且普遍为多重耐药。因此,上海市需加强兽用抗菌药物的临床用药指导,倡导合理规范用药。     

247株猪源沙门菌对四环素类药物耐药性和耐药基因的检测分析

为探究猪源沙门菌分离株对四环素类抗菌药物耐药性及四环素耐药基因(tet)的流行与分布情况,从7省的合作猪场采集病死猪肝脏、肺脏、肠道作细菌分离,利用沙门菌属特异性侵袭基因(invA)和16S rDNA扩增、测序等方法进行鉴定,并用微量肉汤稀释法测定沙门菌分离株对四环素类抗菌药物的敏感性,PCR方法测定tet基因,以及ERIC-PCR方法分析猪源沙门菌之间的相关性和遗传关系。从823份病料中分离鉴定出247株猪源沙门菌,分离率为30.01%。药敏结果显示,对多西环素、土霉素的耐药率分别为87.45%和94.74%。PCR检测发现,分别有62,66,3株单独携带tetA、tetB、tetC基因;分别有38,8,4,7,1株菌同时携带两种不同的tet基因(tetA+B、tetA+C、tetA+D、tetB+C、tetC+D);分别有9,6,1,6,1,4,3株菌同时携带3种不同的tet基因(tetA+B+C、tetA+B+D、tetA+B+M、tetA+C+D、tetA+D+M、tetB+C+D、tetB+C+M);分别有6,2株菌同时携带4种不同的tet基因(tetA+B+C+D、tetA+C+D+M);没有检测到单独携带tetD、tetM以及同时携带5种tet基因的菌株。接合试验表明,tetM可与tetA或tetC共同在沙门菌与大肠杆菌间转移,导致菌株多西环素抗性水平转移。试验菌共分为A~δ共30个ERIC型,tet基因分布于不同ERIC型菌株中,表明其在试验菌株间水平扩散。本试验首次在猪源沙门菌中发现了编码核糖体保护蛋白的四环素类耐药基因tetM。猪源沙门菌对四环素类药物耐药严重,对多西环素、土霉素具有普遍耐药性,tetA、tetB基因在7省猪源沙门菌中流行最广泛,分离菌对四环素类药物的普遍耐药性与单个或多个tet基因的普遍存在密切相关。     

内蒙古地区奶牛源致病性沙门氏菌耐药性分析及ESBLs基因检测

为研究内蒙古地区奶牛源致病性沙门氏菌的耐药特性及ESBLs基因流行特征,试验采用微量肉汤稀释法测定了22种兽医临床常用抗菌药物对临床分离沙门氏菌的最低抑菌浓度(MICs),并对其多重耐药特性进行了分析;采用PCR法对具有β-内酰胺类药物耐药表型的菌株进行了8种动物源沙门氏菌常见ESBLs基因的检测。结果显示,内蒙古地区奶牛源致病性沙门氏菌对甲氧苄啶(97.4%)及磺胺甲基噁唑(94.7%)的耐药率最高,对多数β-内酰胺类、氨基糖甙类、氯霉素类及四环素类药物的耐药性也较为严重(耐药率为40%~80%),所有菌株对氟喹诺酮类药物均敏感;菌株的多重耐药率为94.7%,有29株菌(76.3%)同时对6类抗菌药物具有耐药性;35株对β-内酰胺类药物耐药的菌株中,有30株(85.7%)为ESBLs基因阳性,共检出6种ESBLs基因,其中CTX-M型基因检出率最高(40.0%),未检出SHV和PSE型基因;共发现15种ESBLs基因型,9种ESBLs基因型组合,有16株菌(45.7%)同时携带两种或两种以上ESBLs基因。结果表明,内蒙古地区奶牛源致病性沙门氏菌对兽医临床常用抗菌药物的耐药性较为严重,且ESBLs基因的流行模式较为复杂,提示兽医临床抗菌药物不合理使用可能是造成该地区奶牛源沙门氏菌耐药性产生的原因。     

致蛋鸡卵黄性腹膜炎大肠杆菌分子分群、耐药表型及耐药基因型检测与分析

为分析邢台和秦皇岛地区致蛋鸡卵黄性腹膜炎大肠杆菌(E.coli)分离株的分子分群情况及耐药表型和耐药基因型之间的相关性,本研究采用PCR法和96孔板微量肉汤稀释法分别对临床分离的42株致鸡卵黄性腹膜炎E.coli的系统进化分群、耐药基因和12种抗菌药物耐药表型进行检测。结果显示,42株分离菌株中属于A、B1、B2、D群的分别有7株、9株、14株、12株,以B2+D群流行为主;42株分离菌株对12种抗菌药物耐药性严重且呈现多重耐药性,其中对阿莫西林-克拉维酸、磺胺间甲氧嘧啶、多西环素等9种药物耐药率在45.24%以上,对其它药物耐药率在19.04%～38.10%,耐12种、9种抗菌药物分离菌株最多,分别占分离菌株的19.05%、16.67%;42株分离菌株中耐药基因tetA、Sul1、TEM、Sul2、mcr-1、floR、SHV、tetR检出率在59.52%以上,其它耐药基因检出率为14.29%～38.10%;ESBLs类、四环素类、喹诺酮类、头孢菌素类、磺胺类、多肽类和酰胺醇类7类抗菌药物的耐药表型和耐药基因型符合率在52.6%以上,其中酰胺醇类、多肽类的耐药表型与耐药基因型符合率为100%。本实验为致蛋鸡卵黄性腹膜炎E.coli防控及临床用药提供参考。     

湛江地区水产养殖场大肠杆菌耐药性和耐药基因分析

从湛江地区3个水产养殖场分别采集各场的水、池塘底泥和土壤样品，分离鉴定大肠杆菌，调查水产养殖环境中大肠杆菌的耐药情况。采用PCR法鉴定分离菌株，通过纸片扩散法检测分离菌株对22种抗生素的耐药性，PCR法检测耐药基因的携带情况。结果显示，从水体、池塘底泥和土壤样品中共分离鉴定出90株大肠杆菌，分离菌株对青霉素、林可霉素和克林霉素的耐药率为100%;对磺胺异(口恶)唑、利福平、新诺明、阿莫西林和氟苯尼考的耐药率分别为90.0%、88.9%、80.0%、57.8%和48.9%;对头孢唑啉、头孢噻肟、阿奇霉素和多肽类、喹诺酮类、四环素类、硝基呋喃类抗生素的耐药率较低(1.1%～8.9%);对丁胺卡那霉素和庆大霉素的耐药率为0。分离的90株菌均至少对4种药物耐受，最多耐受14种药物，耐受9种药物的菌株数最多，且90株均为多重耐药菌株。该养殖场分离的90株菌中bla_CTX-M、aphA1、sul2、floR等6种耐药基因检出率较高(≥50%);aac(3)-Ⅱ、ereA、oqxB、tetM、sul1等5种耐药基因检出率较低(≤20%)。单株菌株至少检出1种耐药基因，最多检出1...     

内蒙古地区羊源大肠杆菌耐药性研究

为确定内蒙古地区羊源大肠杆菌的耐药表型及其耐药基因的流行情况,本研究采用微量稀释法测定了内蒙古地区108株羊源大肠杆菌对13种临床常用抗菌药物的最小抑菌浓度。结果显示,分离菌株对阿莫西林、头孢噻吩、磺胺甲唑、黏菌素的耐药率最高,均达100.0%,对阿莫西林/克拉维酸、四环素、环丙沙星的耐药率在50%~80%之间,对头孢噻肟、美洛培南、新霉素的耐药率均低于10%,较为敏感。108株羊源大肠杆菌中耐7种以上药物的菌株占94.4%,其中15.6%菌株对13种抗菌药物耐药,只有1株菌对所有抗菌药物敏感。采用PCR方法对羊源大肠杆菌分离株所携带的6种相关耐药基因进行检测,结果显示,6种耐药基因中的4种耐药基因bla_TEM、proP-2、sul-Ⅰ、ampG检出率超过50%,耐药基因aph（3'）-Ⅰ携带率达40%,只有耐药基因aac（3）-Ⅱ检出率仅为5.5%。由此可见,内蒙古地区羊源大肠杆菌对13种抗菌药物产生了不同程度的耐药性,且存在严重的多重耐药情况,羊源大肠杆菌分离株携带aph（3'）-Ⅰ、sul-Ⅰ、ampG、bla_TEM、proP-2、aac（3）-Ⅱ耐药基因。     

内蒙古地区奶牛乳源金黄色葡萄球菌耐药性研究

为了确定内蒙古地区奶牛中乳源金黄色葡萄球菌的耐药表型及其耐药基因的流行情况,采用生化鉴定法结合PCR方法对奶牛乳源金黄色葡萄球菌进行了分离、鉴定。采用微量稀释法测定了15种临床常用抗菌药物对21株金黄色葡萄球菌的最小抑制菌浓度(MICs)。结果显示,分离菌株对青霉素和氨苄西林的耐药率较高,分别为81%和75.5%;对头孢菌素类药物的耐药率也较高,均在60%~70%之间;对大环内酯类和四环素类抗生素的耐药率均在40%~50%之间。乳源金黄色葡萄球菌对3种氟喹诺酮类抗菌药物的耐药率较低,均小于30%;对庆大霉素也比较敏感,耐药率13.2%。以上分离菌株对万古霉素全部敏感。联合用药的药敏试验结果显示,菌株对阿莫西林-克拉维酸高度敏感,耐药率仅9.5%。多重耐药表型结果显示,75.5%的菌株耐2~7种药,24.5%的菌株耐8~13种药。通过PCR方法对奶牛乳源金黄色葡萄球菌所携带的耐药表型及基因进行检测,结果表明,分离菌株中有3种四环素耐药基因组合在流行。分别是tet M+tet L1株(4.76%)和18株分离菌携带bla Z耐药基因,检出率为85.7%。由此可见,内蒙古地区奶牛乳源性金黄色葡萄球菌对15种抗菌药物产生了不同程度的耐药性,且多重耐药情况较为严重;分离菌株中有tet M、tet K、tet L和bla Z耐药基因在流行,分别编码了对四环素类和β-内酰类抗生素的耐药性。     

鸡蛋壳蜡样芽孢杆菌的分离鉴定及耐药性分析

【目的】 分析不同环境下鸡蛋外壳携带蜡样芽孢杆菌的情况和分离菌株的基本特征。【方法】 从养殖场和超市各采集9种新鲜鸡蛋,对鸡蛋表面携带的蜡样芽孢杆菌进行分离鉴定、基因分型、毒力基因筛查和耐药性分析。采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）技术对分离菌株进行初步鉴定,全基因组测序后进行菌种鉴定并确定基因分型、筛选毒力基因和耐药基因,同时采用微量肉汤稀释法测定分离株对头孢曲松、红霉素、万古霉素等12种抗菌药物的耐药性。【结果】 经MALDI-TOF MS初步鉴定和基因组菌种鉴定,确定从养殖场3种未经清洁加工的鲜蛋中分离出的6个菌株为蜡样芽孢杆菌,其序列分型（ST）较为多样,其中有2株新的ST型。在毒力基因筛查方面,6株蜡样芽孢杆菌均检出了非溶血型肠毒素nheB基因、腹泻型毒力因子hlyⅡ基因和侵袭免疫系统的inhA基因;nheA和nheC基因携带率为83.3%,编码溶血型肠毒素HBL的hblA、hblC和hblD基因携带率均为66.7%;cytK和hlyⅢ基因携带率分别为33.3%和50.0%;肠毒素基因BceT、entFM和致吐毒素基因ces均未检出。耐药性方面,6株菌均对庆大霉素、四环素、氯霉素、利福平、利奈唑胺和环丙沙星敏感,对氨苄西林、头孢曲松和泰妙菌素耐药;对红霉素、克林霉素的中介率分别为83.3%和100%;33.3%的菌株对万古霉素耐药。6株菌均携带有磷霉素耐药基因FosB和万古霉素耐药基因簇vanA的部分基因vanRSYZ,其中5株菌携带大环内酯类药物耐药基因mphL,部分菌株携带β-内酰胺类药物耐药基因或核苷类药物耐药基因。【结论】 本试验从养殖场未经消毒处理的鸡蛋外壳上成功分离到了蜡样芽孢杆菌,并发现其携带有多种毒力基因,存在多重耐药性,有潜在致病性和公共安全风险。     

天津地区2型猪链球菌的分离鉴定及耐药性分析

为了解天津地区2型猪链球菌的流行及耐药情况,本研究收集该地区部分规模化养猪场疑似猪链球菌病病料317份,通过病原分离培养、染色特性观察、生化试验、PCR扩增等方法进行鉴定,并对分离菌进行致病性及药敏试验。结果从样品中分离鉴定出11株2型猪链球菌。对小鼠的致病力试验结果显示,应用0.5×10⁸ CFU/mL的细菌攻击小鼠,11株2型猪链球菌分离株中有6株具有致死性,其中1株致死率较强,5株致死率较弱。药敏试验结果表明,11株分离菌对9种临床常见药物均表现出很强的耐药性,其中对阿米卡星、四环素和强力霉素耐药性最强,耐药率达到100.00%;且所有分离株均呈多重耐药,其中4个分离株为9重耐药,占36.36%（4/11）。本试验结果表明,天津地区存在2型猪链球菌感染情况,且对多种抗菌药均产生了耐药性,应引起养殖户的高度重视,在防制猪链球菌病时,应有针对性地合理、科学、规范用药和交替用药。     

26株猪链球菌对抗菌药物的敏感性分析

采用纸片扩散法对兽医临床分离的26株猪链球菌进行了常用抗菌药物的敏感性分析,结果表明,猪链球菌对头孢噻肟及氨苄西林/舒巴坦敏感性最高,敏感菌株均占73.0%;其次是丁胺卡那霉素和盐酸多西环素,敏感菌株分别占57.7%和50.0%;分离菌对四环素、庆大霉素、磺胺二甲氧嘧啶表现出较强的耐药性,耐药率分别为92.3%、69.2%、69.2%;此外,分离菌对氯霉素、头孢他啶、克林霉素、磺胺嘧啶钠、复方新诺明也表现出一定的耐药性,耐药率均为57.7%。分离的猪链球菌对部分兽医临床常用抗菌药物产生了较为严重的耐药性,应引起重视。     

猪链球菌2型湖南分离株多重耐药性及相关耐药基因研究

基因突变和基因转移是细菌耐药性产生和存在的重要内因,检测与抗生素耐药性相关的基因具有重要的意义.试验选取25份猪链球菌2型湖南分离株对16种抗生素进行药敏试验,检测菌株耐药性;选出了23株有红霉素抗性的菌株,用PCR检测其erm(B)基因.结果显示,猪链球菌湖南分离株对红霉素、四环素、万古霉素和克林霉素具有高耐药性,在23株红霉素抗性菌株中有18株存在erm(B)基因,由erm(B)基因产生的红霉素耐药菌株占到其中的78.3%.因此,erm(B)基因是链球菌2型湖南分离株对红霉素耐药的主要抗性决定基因.     

Antibiotic susceptibility of bacteria isolated from respiratory tract of pigs in Poland between 2004 and 2008

Antibiotic susceptibility of bacteria isolated from nasal swabs and lungs of pigs, to 16 commonly used antibiotics, was determined by disc diffusion test. beta-lactams showed the best activity against Streptococcus suis (S. suis) (> 99% of susceptible strains). The lowest sensitivity of S. suis was evidenced to: tylosin, tetracycline and neomycin (50%, 40% and 25%, respectively). Isolates of Escherichia coli (E. coli) demonstrated the highest susceptibility to cephalosporin (85% strains), gentamicin and norfloxacin (over 74%). The lowest susceptibility of E. coli was demonstrated to tiamulin and penicillin (11.3% and 1.9%, respectively). Over 80% of Actinobacillus pleuropneumoniae (App) strains were susceptible to all antibiotics tested. The highest resistance of App, but demonstrated by below 20% of tested isolates only, was evidenced to neomycin and LxS. Isolates of Pasteurella multocida (Pm), Haemophilus parasuis (Hps) and Arcanobacterium pyogenes (A. pyogenes) were highly susceptible to the most antibiotics included in the analysis. The comparison of the in vitro susceptibility of pathogens to the chemotherapeutics used on Polish farms for the therapy of bacterial infection of pigs within the last five years and the last 10 years, showed an increasing percent of E. coli and S. suis strains resistant to commonly used antibiotics. It is also shown that Pm, Hps, App and A. pyogenes isolates were continuously susceptible to the most chemotherapeutics applied.     

猪链球菌精氨酸脱亚氨酸酶序列分析及其PCR检测

对9株猪链球菌2型重庆分离株的精氨酸脱亚氨酸酶基因进行克隆测序,结果表明该基因长度为1231bp,与Genbank发表的该基因序列相比,核苷酸同源性高于99%,推导的氨基酸同源性高于96%。根据精氨酸脱亚氨酸酶基因的测序结果建立扩增片段长度为237bp的PCR检测方法,35株猪链球菌致病株中,30株精氨酸脱亚氨酸酶基因的PCR检测阳性,有5株精氨酸脱亚氨酸酶基因的PCR检测阴性;14株正常猪扁桃体分离株中,11株为精氨酸脱亚氨酸酶基因的PCR检测阳性,3株为精氨酸脱亚氨酸酶基因的PCR检测阴性;猪链球菌1型、7型、9型、13型、1/2型各一株,均能扩增出精氨酸脱亚氨酸酶基因的片段。     

Prevalence and mechanism of resistance against macrolides and lincosamides in Streptococcus suis isolates

Eighty-seven Streptococcus suis isolates recovered in 1999-2000 from diseased pigs, all from different farms, were screened for resistance against macrolide and lincosamide antibiotics by the disk diffusion and agar dilution test and a PCR assay, amplifying the ermB gene and the mefA/E gene. Seventy-one percent of the isolates showed constitutive resistance to macrolide and lincosamide antibiotics (MLS(B)-phenotype). All these isolates were positive for the ermB gene in the PCR, but negative for the mefA/E gene. For all strains minimum inhibitory concentrations (MIC) against five other antimicrobial agents were determined. All strains were susceptible to penicillin. Ninety-nine percent of the isolates were susceptible to enrofloxacin and tiamulin. Eighty-five percent of the strains were resistant to doxycycline. A 540bp fragment of the ermB genes of eight S. suis strains was sequenced and compared with ermB genes of five S. pneumoniae and five S. pyogenes strains of human origin. A 100% homology was found between these fragments in seven S. suis, one S. pneumoniae and three of the S. pyogenes isolates. This study demonstrates that resistance against macrolides, lincosamides and streptogramin B is widespread in S. suis and mediated by ribosome methylation, encoded by the ermB gene.     

猪链球菌对红霉素耐药性的研究

从发病猪体内分离、鉴定猪链球菌，采用肉汤稀释法和纸片琼脂扩散法筛选对红霉素耐药的猪链球菌，用双纸片法确定耐药株的耐药表型，通过聚合酶链反应检测对红霉素耐药的基因ermb/mefA。猪链球菌对红霉素的耐药表型为cMLS表型，即同时对克林霉素耐药。在3株红霉素耐药株中扩增到ermb基因，其余未能检测到ermb或mefA基因。     

河南省猪链球菌的分离鉴定及耐药性分析

为探讨河南省猪链球菌的血清型分布和耐药性情况，本试验对2016年5月~2017年5月从河南省猪场采集的各种组织病料进行猪链球菌的分离培养、生化鉴定及PCR鉴定，并进行了血清群的分群鉴定和血清型的分型鉴定，对其中的2型猪链球菌进行了药敏试验。结果显示，试验共鉴定出189株猪链球菌，流行的猪链球菌的血清群主要以D群为主，其次是G群和C群；优势的血清型是2型、7型、9型和1型。其中87株为2型猪链球菌，超过90%的2型菌株对β-内酰胺类（青霉素G、阿莫西林和头孢菌素类）、氯霉素、万古霉素、环丙沙星敏感，超过40%的2型菌株对多西环素、四环素、红霉素、复方新诺明、丁胺卡那霉素、克林霉素、链霉素、米诺环素产生耐药性。以上结果为指导猪场使用敏感药物及时控制疫情、选择血清型相符的疫苗进行预防及减少损失提供参考依据。     

Prevalence of the suilysin gene in Streptococcus suis strains isolated from diseased and healthy carrier pigs

Knowledge of virulence factors of Streptococcus suis is limited. Several virulence factor candidates have been proposed, among them suilysin, which is responsible for a toxic effect on epithelial cells. The aim of this study was to detect the suilysin gene sequence in Streptococcus suis strains of various origin. In total 63 Streptococcus suis isolates were investigated. Forty four of them originated from tissues of streptococcosis affected animals. The remaining 19 strains were isolated from tonsils of healthy carrier pigs. Suilysin gene specific sequence was detected in 79% of the strains tested. In isolates obtained from pigs with signs of streptococcosis this gene sequence was recorded in 85% of cases. In Streptococcus suis strains isolated from healthy carrier pigs the suilysin gene was detected in 63% of the isolates. It seems that suilysin toxic activity is only one of the many steps involved in the pathogenesis of Streptococcus suis infection and that strain's virulence cannot be stated only on the basis of suilysin gene sequence presence.