产蛋白酶菌株的筛选及酶学特性的研究

为了从自然界和动物消化道内筛选能产高效蛋白酶的有益菌株,试验采用酪蛋白平板法从鸡粪中筛选出一株产蛋白酶的菌株JF,根据形态学鉴定、16S r DNA核酸序列分析,并对该菌所产蛋白酶粗酶液的酶学特性进行分析。结果表明:筛选出的菌株属于短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus);该菌株的酶学特性,最适反应温度为60℃,最适pH值为9. 0,属于中温弱碱性蛋白酶; 30℃时仍能保持73. 0%的相对酶活性,具有一定低温酶的特性; Mn2+对此酶具有极显著促进作用(P0. 01),而Zn2+、乙二胺四乙酸(EDTA)对此酶具有极显著抑制作用(P0. 01)。     

20味中药对大肠杆菌的体外抑菌作用

研究苏木、黄连、石榴皮等20味中药对大肠杆菌的体外抑菌作用。采用水提法制备20味中药的提取物,通过试管二倍稀释法测定20味中药水提取物对大肠杆菌的最低抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC);再将20味中药组成药对,进行联合抑菌,测定药对的MIC和MBC,计算其部分抑菌浓度指数(FIC)。结果表明,20味中药中,黄连、苏木抑菌效果最佳,MIC均为6.250 mg/mL,茯苓、山楂、火麻仁抑菌效果最差,其MIC和MBC均大于400.000 mg/mL。联合抑菌的28组药对中,苏木与石榴皮、石榴皮与黄柏、石榴皮与黄芩、地榆与苏木、地榆与乌梅、地榆与花椒、地榆与黄柏、火麻仁与旋覆花、旋覆花与山楂等9组药对均呈现协同作用,石榴皮与黄连、石榴皮与乌梅均呈现拮抗作用,其他药对呈现相加或无关作用。说明对大肠杆菌抑菌作用强的单味中药与其他中药联合,其抑菌效果未必会增强。     

9种中草药对沙门菌和金黄色葡萄球菌体外抑制作用

研究石榴皮、花椒、大青叶等9种中草药对沙门菌和金黄色葡萄球菌的体外抑菌作用。采用水煎煮法分别提取9种不同中草药的有效成分;采用二倍稀释法、平板培养法分别检测中草药对沙门菌和金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC),筛选出抑菌功效良好的5味中草药,再分别对2种细菌进行联合用药,测定中草药联用的体外抑菌功效。结果表明,花椒、黄连、石榴皮、诃子、龙胆草等单味药具有较好的体外抑菌功效,在9种中草药中抑菌作用最佳的是黄连,其对沙门菌和金黄色葡萄球菌的MIC值分别为1.625 mg/mL和3.125 mg/mL,MBC值分别为100.000 mg/mL和200.000 mg/mL。对金黄色葡萄球菌,中草药间有拮抗作用的组合有黄连+花椒、黄连+诃子、石榴皮+龙胆草,其他中草药联合时均为无关作用;对沙门菌,中草药间有拮抗作用的组合有黄连+花椒、诃子+龙胆草、石榴皮+诃子、黄连+诃子、石榴皮+龙胆草,中草药间有相加作用的组合是花椒+石榴皮,其MIC值为3.125 mg/mL,FIC值为0.75,其他中草药联合时均为无关作用。结果提示,单独用药对细菌具有良好抑菌功效的中草药,联合用药...     

白头翁散与其他中药联合对大肠杆菌的体外抑菌效果

研究中药白头翁散各组分(白头翁、黄柏、黄连、秦皮)以及其他6种中药对大肠杆菌的体外抑菌效果。用传统水煎法分别提取10种中药的有效成分;采用试管二倍稀释法测定单味中药、两药联合组成药对及自制白头翁散对大肠杆菌的最低抑菌浓度(MIC)以及最小杀菌浓度(MBC)。结果显示,白头翁散各组分均可有效抑制大肠杆菌,其中黄连的MIC为6.250 mg/mL,抑菌效果最佳。单味中药中对大肠杆菌杀菌效果较好的是黄连、秦皮、诃子,MBC均为200.000 mg/mL;药对中白头翁+黄连、大青叶+诃子对大肠杆菌的MIC均为3.125 mg/mL,抑菌效果最佳;白头翁+黄连对大肠杆菌的MBC为12.500 mg/mL,杀菌效果最佳。自制白头翁散对大肠杆菌的MIC为3.125 mg/mL、MBC为100.000 mg/mL。结果提示,白头翁散4种单药相加的抗菌效果优于单药和部分药对。     

体外诱导耐药及相关基因检测

[目的]了解常见致病菌产生耐药性后耐药基因和毒力基因的变化。[方法]采用微量肉汤二倍稀释法测定21种临床常见抗生素对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等5种标准菌株的最小抑菌浓度，选取敏感药物进行体外诱导耐药试验，采用PCR法检测耐药基因和毒力基因。[结果]5个标准菌株均对氨基糖苷类药物敏感；大肠杆菌对四环素类药物敏感；鼠伤寒沙门氏菌、多杀性巴氏杆菌和肺炎链球菌对喹诺酮类药物敏感；金黄色葡萄球菌对克林霉素敏感。与标准菌株相比，氨基糖苷类和四环素类耐药菌株中均检测出新出现的相关耐药基因；喹诺酮类耐药基因parE在多杀性巴氏杆菌的标准菌株和耐诺氟沙星菌株中检测出，gyrB基因仅在肺炎链球菌的标准菌株和耐氧氟沙星菌株中检测出。在大肠杆菌中均检测出CS31A毒力基因，此外标准菌株中检测出fimH基因，耐多西环素菌株中检测出afa基因；多杀性巴氏杆菌标准菌株未检测出毒力基因，耐药菌株中均检测出oma87和tbpA基因；而鼠伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和肺炎链球菌仅在标准菌株中检测出毒力基因。[结论]说明氨基糖苷类抗生素更容易诱导菌株产生耐药基因，而毒力基因与耐药基因无明显的相关性。细菌获得耐药性后，其毒力...     

湛江地区水产养殖场大肠杆菌耐药性和耐药基因分析

从湛江地区3个水产养殖场分别采集各场的水、池塘底泥和土壤样品，分离鉴定大肠杆菌，调查水产养殖环境中大肠杆菌的耐药情况。采用PCR法鉴定分离菌株，通过纸片扩散法检测分离菌株对22种抗生素的耐药性，PCR法检测耐药基因的携带情况。结果显示，从水体、池塘底泥和土壤样品中共分离鉴定出90株大肠杆菌，分离菌株对青霉素、林可霉素和克林霉素的耐药率为100%;对磺胺异(口恶)唑、利福平、新诺明、阿莫西林和氟苯尼考的耐药率分别为90.0%、88.9%、80.0%、57.8%和48.9%;对头孢唑啉、头孢噻肟、阿奇霉素和多肽类、喹诺酮类、四环素类、硝基呋喃类抗生素的耐药率较低(1.1%～8.9%);对丁胺卡那霉素和庆大霉素的耐药率为0。分离的90株菌均至少对4种药物耐受，最多耐受14种药物，耐受9种药物的菌株数最多，且90株均为多重耐药菌株。该养殖场分离的90株菌中bla_CTX-M、aphA1、sul2、floR等6种耐药基因检出率较高(≥50%);aac(3)-Ⅱ、ereA、oqxB、tetM、sul1等5种耐药基因检出率较低(≤20%)。单株菌株至少检出1种耐药基因，最多检出1...     

红树植物根际土壤细菌分离鉴定及抑菌活性的研究

为了从红树林植物根际土壤中分离出具有广谱抑菌作用的海洋细菌，试验以大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、链球菌4种常见致病菌为指示菌，采用M10和P3培养基从红树植物根际土壤中分离细菌，以固体琼脂打孔法对分离的细菌进行抑菌活性筛选，并提取分离菌株的基因组DNA,PCR扩增16S rDNA基因并测序，同时采用邻接法构建系统发育树。结果表明：从红树植物土壤中分离得到654株细菌，其中107株细菌具有抑菌活性，占分离菌株的16.4%。菌株M36对大肠杆菌和链球菌抑菌活性最强，抑菌圈直径分别为13 mm、16 mm;菌株P19和P25对金黄色葡萄球的抑菌活性最强，抑菌圈直径均为16 mm;菌株P83对沙门氏菌抑菌活性最强，抑菌圈直径为13 mm;菌株M36和P31的抑菌谱最广。综合两种培养基的培养结果有抑菌活性的菌株被分成4个属，分别是肠杆菌属、芽孢杆菌属、葡萄球菌属、伯克霍尔德氏菌属，其中肠杆菌属为优势菌属，其次为芽孢杆菌属，占比分别为69.2%和15.9%。说明红树植物根际土壤中存在具有广谱抑菌活性的细菌。