兔支气管败血波氏杆菌的分离鉴定及耐药性分析

对从内蒙古海拉尔区某规模化兔场病死仔兔肺脏中分离到的1株病原菌进行了培养特性观察、革兰染色、生化试验与PCR鉴定,鉴定结果显示该分离菌株为支气管败血波氏杆菌。为进一步了解该菌株的耐药情况,对其进行了药敏试验及部分耐药基因的检测,结果表明分离菌株对青霉素G、阿莫西林、头孢拉啶等β-内酰胺类抗生素耐药严重,其次为四环素类抗生素,对卡那霉素、诺氟沙星等氨基糖苷类与喹诺酮类抗生素高度敏感。耐药基因检测筛选到bla TEM与tet B两种耐药基因,与分离菌的耐药表型相符。实验结果对兔波氏杆菌病的临床合理用药具有重要的指导意义。     

新疆、内蒙古部分地区乳房炎奶样中金黄色葡萄球菌的流行性与耐药性分析

为确定患乳房炎奶牛乳中金黄色葡萄球菌的流行性和耐药性状况,试验自2018年4月至2018年5月采集了新疆地区70例和内蒙古地区50例患乳房炎奶牛生鲜乳样。通过对奶样中金黄色葡萄球菌进行增菌培养、分离纯化,KB纸片扩散法药敏试验及PCR耐药基因检测发现,新疆和内蒙古地区奶样中金黄色葡萄球菌分离率分别为28.6%和54.0%;新疆地区分离的金黄色葡萄球菌菌株对青霉素G的耐药性最高(75.0%),其次是磺胺异噁唑(60.0%)、林可霉素(55.0%);内蒙古地区的金黄色葡萄球菌菌株同样对青霉素G高度耐受,耐药率为70.4%,其次为林可霉素(63.0%)、克林霉素(51.9%);两地区所分离菌株中,88.9%以上携带多种耐药基因,呈现多重耐药性;两地区所检出的高频耐药基因分别是新疆地区的ermA(30.0%)、dfrS1(30.0%)基因和内蒙古地区的lnuA(46.2%)基因。     

新疆、内蒙古部分地区乳房炎奶样中金黄色葡萄球菌的流行性与耐药性分析

为确定患乳房炎奶牛乳中金黄色葡萄球菌的流行性和耐药性状况,试验自2018年4月至2018年5月采集了新疆地区70例和内蒙古地区50例患乳房炎奶牛生鲜乳样。通过对奶样中金黄色葡萄球菌进行增菌培养、分离纯化,KB纸片扩散法药敏试验及PCR耐药基因检测发现,新疆和内蒙古地区奶样中金黄色葡萄球菌分离率分别为28.6%和54.0%;新疆地区分离的金黄色葡萄球菌菌株对青霉素G的耐药性最高(75.0%),其次是磺胺异噁唑(60.0%)、林可霉素(55.0%);内蒙古地区的金黄色葡萄球菌菌株同样对青霉素G高度耐受,耐药率为70.4%,其次为林可霉素(63.0%)、克林霉素(51.9%);两地区所分离菌株中,88.9%以上携带多种耐药基因,呈现多重耐药性;两地区所检出的高频耐药基因分别是新疆地区的ermA(30.0%)、dfrS1(30.0%)基因和内蒙古地区的lnuA(46.2%)基因。     

湖南省奶牛源金黄色葡萄球菌分离鉴定与耐药性分析

为了掌握湖南省内奶牛源金黄色葡萄球菌的耐药情况,指导临床合理用药,抽取牛乳样品,通过对细菌的分离培养和纯化,采用基质辅助激光电离飞行时间质谱仪和全自动生化鉴定仪进行鉴定,并对分离菌株进行18种抗菌药物耐药性检测;结合耐药表型和mecA基因检测判定MRSA菌株。结果显示,2020-2021年从湖南地区257份牛乳样品中分离出金黄色葡萄球菌39株,89.74%的临床分离菌株表现为不同程度耐药,其中对青霉素耐药最为严重,耐药率达82.05%;对红霉素、克林霉素、替米考星、庆大霉素、头孢西丁耐药率在20%-35%之间;对多西环素及万古霉素绝对敏感,耐药率为0。38.46%分离菌株表现为多重耐药,以7重耐药最多。鉴定出19株MRSA,其中包含15株OS-MRSA和4株OR-MRSA。本研究可为湖南省内奶牛企业制定合理用药措施提供依据。     

新疆部分地区生乳中金黄色葡萄球菌的分离鉴定及耐药性分析

【目的】探明新疆部分地区生乳中金黄色葡萄球菌流行情况及耐药性,为该地区生乳中金黄色葡萄球菌的监测及保障生乳质量安全提供理论依据。【方法】试验随机从南北疆规模化奶牛场采集110份生乳样品。采用增菌培养、分离纯化、革兰氏染色、生化鉴定及PCR法对奶样中金黄色葡萄球菌进行分离鉴定,并利用微量肉汤稀释法及PCR方法对金黄色葡萄球菌进行16种抗菌药物的耐药表型及耐药基因分析。【结果】从110份奶样中分离出18株金黄色葡萄球菌,分离株呈浅黄色、光滑凸起的圆形菌落,革兰氏染色镜检呈紫色、短链状排列的革兰氏阳性菌,生化试验结果符合金黄色葡萄球菌生化特点,经16S rDNA及nuc基因PCR扩增鉴定为金黄色葡萄球菌,分离率为16.36%(18/110)。药敏试验结果显示,金黄色葡萄球菌分离株对氨苄西林、青霉素及磺胺异噁唑具有较高的耐药性,耐药率分别为100%、83.33%和77.78%,而对万古霉素、复方新诺明、苯唑西林、头孢噻吩、头孢噻呋、利福昔明及环丙沙星7种抗菌药物高度敏感,敏感率分别为100%、100%、94.44%、94.44%、94.44%、94.44%和94.44%。其中有14株金黄色葡萄球菌为多重耐药菌,多重耐药率为77.78%。耐药基因检测结果显示,大环内酯类耐药基因ermB检出率最高,为50.00%,其次为β-内酰胺类耐药基因mecA,检出率为27.28%,磺胺类耐药基因Sul1的检出率为22.22%。【结论】新疆奶牛场生乳中分离的金黄色葡萄球菌的流行及耐药情况仍较严重,且存在多重耐药现象,因此,对生乳中金黄色葡萄球菌耐药性的监测有重要意义。     

湖南部分地区乳源金黄色葡萄球菌耐药性及溶血性分析

为调查湖南省部分地区奶牛场生鲜乳源金黄色葡萄球菌的耐药性及耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)的检出情况，同时调查金黄色葡萄球菌溶血素基因型与溶血表型的分布情况及二者的关系。采用肉汤稀释法对分离自湖南省部分地区奶牛场生鲜乳的54株金黄色葡萄球菌进行18种常见抗菌药物耐药性检测，采用绵羊血琼脂平板检测细菌溶血性，并采用PCR方法扩增分离菌株mecA基因及5个溶血素基因。结果显示，54株金黄色葡萄球菌均表现不同程度的耐药，耐药谱型达21种；21株金黄色葡萄球菌表现为多重耐药，最高耐药重数为9重；对青霉素耐药最严重，耐药率达85.19%,对头孢西丁、苯唑西林、克林霉素、庆大霉素及大环内酯类药物(红霉素、替米考星)耐药率在20%～30%之间，对多西环素与万古霉素敏感；从24株分离菌中检出mecA基因，鉴定为MRSA。54株分离株在羊血琼脂平板上主要以β和γ溶血为主，α、β及γ溶血率分别为12.9%、44.4%和42.6%;各溶血素基因检出率分别为98.1%(hla)、94.4%(hlb)、96.3%(hld...     

内蒙古地区羊源大肠杆菌耐药性研究

为确定内蒙古地区羊源大肠杆菌的耐药表型及其耐药基因的流行情况,本研究采用微量稀释法测定了内蒙古地区108株羊源大肠杆菌对13种临床常用抗菌药物的最小抑菌浓度。结果显示,分离菌株对阿莫西林、头孢噻吩、磺胺甲唑、黏菌素的耐药率最高,均达100.0%,对阿莫西林/克拉维酸、四环素、环丙沙星的耐药率在50%~80%之间,对头孢噻肟、美洛培南、新霉素的耐药率均低于10%,较为敏感。108株羊源大肠杆菌中耐7种以上药物的菌株占94.4%,其中15.6%菌株对13种抗菌药物耐药,只有1株菌对所有抗菌药物敏感。采用PCR方法对羊源大肠杆菌分离株所携带的6种相关耐药基因进行检测,结果显示,6种耐药基因中的4种耐药基因bla_TEM、proP-2、sul-Ⅰ、ampG检出率超过50%,耐药基因aph（3'）-Ⅰ携带率达40%,只有耐药基因aac（3）-Ⅱ检出率仅为5.5%。由此可见,内蒙古地区羊源大肠杆菌对13种抗菌药物产生了不同程度的耐药性,且存在严重的多重耐药情况,羊源大肠杆菌分离株携带aph（3'）-Ⅰ、sul-Ⅰ、ampG、bla_TEM、proP-2、aac（3）-Ⅱ耐药基因。     

青海省某奶牛场顽固性乳房炎主要病原菌的分离鉴定与耐药性研究

为了明确青海省某奶牛场顽固性乳房炎的病原菌,并制定有效的防控措施,本试验采用细菌分离、16SrDNA序列分析、细菌基因分型等方法对病牛乳样中的病原菌进行分离鉴定,并进行17种药物的敏感性试验。试验从15份乳样中分离到10株金黄色葡萄球菌、1株表皮葡萄球菌和2株化脓隐秘杆菌,其中10株金黄色葡萄球菌均为荚膜多糖5型分离株;所分离金黄色葡萄球菌对青霉素G、红霉素、头孢氨苄和呋喃妥因耐药率分别为100%、90%、10%和10%;表皮葡萄球菌对青霉素G、复方新诺明和甲氧苄氨嘧啶耐药,而对其他14种抗菌药物敏感;化脓隐秘杆菌对四环素和甲氧苄氨嘧啶耐药,对强力霉素和复方新诺明中度敏感,对其他13种抗菌药物敏感。该牛场顽固性乳房炎是多种病原菌混合感染所致,但以荚膜多糖5型金黄色葡萄球菌为主。不同的病原菌的药物敏感性不同,故而治疗困难,建议使用恩诺沙星治疗病牛并加强隐性乳房炎的筛查与防治,病情得到控制。     

我国部分省区牛源金黄色葡萄球菌抗菌药物敏感性调查

为调查我国奶牛乳房炎奶样中金黄色葡萄球菌的药物敏感性情况,以便为该病的临床用药提供参考,本试验采用纸片扩散法对从北京、山西、内蒙古、新疆、浙江5省区奶牛乳房炎奶样中分离的148株金黄色葡萄球菌进行了抗菌药物敏感性检测。北京、山西、内蒙古分离株的临床药敏试验显示,所有菌株对头孢西丁、多西环素、四环素敏感或中介,对红霉素、克林霉素、青霉素、复方新诺明严重耐药,对氯霉素、环丙沙星和庆大霉素的敏感性有地域性差异,66%～100%的菌株同时对3种以上的抗菌药物耐药;新疆86株分离株和浙江20株分离株的临床药敏试验显示,所有菌株除对红霉素、克林霉素、青霉素、复方新诺明耐药外,对多西环素和四环素完全耐药,86%以上的分离株对5种以上抗菌药物耐药,同时还发现头孢西丁耐药株。调查结果显示,5省区乳房炎奶样中的金黄色葡萄球菌除对头孢类(头孢西丁)敏感外,对其他类型抗菌药物均存在一定程度的耐药,尤其对大环内酯类(红霉素)、林可胺类(克林霉素)、青霉素类(青霉素)、磺胺类(复方新诺明)抗菌药物严重耐药,对3～5种以上不同类型抗菌药物的多重耐药也较为普遍。调查表明,牛源性金黄色葡萄球菌耐药性的广泛存在将对金黄色葡萄球菌性奶牛乳房炎的抗菌药物治疗形成严重挑战。     

内蒙古地区致奶牛子宫内膜炎葡萄球菌超抗原基因分布及耐药性研究

为了解内蒙古地区致奶牛子宫内膜炎葡萄球菌超抗原基因分布及其耐药情况,采用PCR对分离到的葡萄球菌进行鉴定并检测超抗原基因在分离菌中的分布,应用微量肉汤稀释法开展分离菌的药敏试验和PCR检测β-内酰胺类耐药基因BlaZ和mecA的流行情况.结果表明,共分离到金黄色葡萄球菌28株(52.8％),凝固酶阴性葡萄球菌(CNS) 25株(47.2％);超抗原基因SEJ在分离菌中的携带率最高(70.0％),超抗原基因SEA、SEB及SEE携带率最低(1.9％),其他超抗原基因携带率在9.4％～43.4％之间;分离到的葡萄球菌对青霉素耐药率最高(96.2％),对万古霉素最敏感,有多重耐药菌株检出;分离菌中BlaZ携带率达98％,金黄色葡萄球菌中未检出mecA,但CNS中mecA携带率为24.5％.内蒙古地区奶牛子宫内膜炎致病葡萄球菌有12种肠毒素及eta、etb、TSST-1检出,其中SEJ基因的携带率最高;葡萄球菌对β-内酰胺类耐药率较高,并且发现了多重耐药菌株的流行.     

重庆市部分养殖场金黄色葡萄球菌耐药性分析及ESBL基因检测

为了解重庆市部分养殖场动物源性金黄色葡萄球菌的耐药及携带超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrumβ-lactamases,ESBLs)基因情况,从重庆部分养殖场采集共1 371份样品,经前处理、增菌,划线接种,挑取疑似菌落,PCR扩增金黄色葡萄球菌特异性nuc基因,对分离鉴定的金黄色葡萄球菌进行药物敏感性试验,并检测菌株中携带的ESBL基因。结果显示:从1 371份样品中分离到89株金黄色葡萄球菌,包括25株猪源菌株、32株鸡源菌株、6株牛源菌株、10株羊源菌株和16株兔源菌株。89株菌对青霉素类药物耐药最为严重,其次为四环素类、大环内酯类和喹诺酮类。除2株兔源菌株外,其余分离菌均为多重耐药,耐药数量从2种到21种不等,猪源菌株的多重耐药最为严重。ESBL基因检测结果显示共有86株细菌携带blaTEM-1a基因,携带率高达96.6%。分离的金黄色葡萄球菌菌株耐药严重,且广泛携带TEM-1a型ESBL基因。     

金黄色葡萄球菌细胞壁变化与β-内酰胺类抗生素耐药的关系

旨在揭示金黄色葡萄球菌针对β-内酰胺类抗生素可能存在细胞壁增厚的耐药机制。2016—2018年间,采集宁夏地区部分奶牛养殖场临床及亚临床型乳腺炎的乳样,通过显色培养基鉴别、镜检及PCR方法,分离鉴定牛乳源金黄色葡萄球菌;利用微量肉汤稀释法测定细菌对14种抗菌药物的耐药性,了解本地区金黄色葡萄球菌的耐药率及多重耐药情况;通过qRT-PCR方法检测细胞壁增厚相关的pbpB、murG、glmU、atlR基因转录丰度,并结合透射电镜进行形态观察,以确定增厚及发生原因。结果显示,分离鉴定出261株牛乳源金黄色葡萄球菌,其中包括9株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus, MRSA)。药敏试验结果显示,金黄色葡萄球菌对β-内酰胺类抗生素具有较高的耐药率,其中氨苄西林为79.69%,青霉素为78.54%。多重耐药情况是以3、7和8重耐药的菌株居多;其中1株耐药种数达14种之多。qRT-PCR结果表明,4种相关基因的转录丰度均极显著上调(P0.001或P0.01)。透射电镜观察发现,甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌(methicillin sensitive Staphylococcus aureus, MSSA) JY21菌株的细胞壁在64和128μg·mL~(-1)的青霉素浓度下,较对照组均极显著增厚(P0.001),并可见细胞壁表面粗糙,有结节状凸起;但药物浓度从64μg·mL~(-1)升高至128μg·mL~(-1)细胞壁不再显著增厚(P0.05)。MRSA WLD10菌株细胞壁未出现明显增厚(P0.05)。综上所述,本地区牛乳源金黄色葡萄球菌针对β-内酰胺类抗生素,存在细胞壁增厚的耐药机制;增厚的原因主要是肽聚糖的过度合成及细胞自溶的减少。与MSSA JY21菌株相比,细胞壁增厚并非MRSA WLD10重要的耐药机制。     

金黄色葡萄球菌细胞壁变化与β-内酰胺类抗生素耐药的关系

旨在揭示金黄色葡萄球菌针对β-内酰胺类抗生素可能存在细胞壁增厚的耐药机制。2016-2018年间，采集宁夏地区部分奶牛养殖场临床及亚临床型乳腺炎的乳样，通过显色培养基鉴别、镜检及PCR方法，分离鉴定牛乳源金黄色葡萄球菌；利用微量肉汤稀释法测定细菌对14种抗菌药物的耐药性，了解本地区金黄色葡萄球菌的耐药率及多重耐药情况；通过qRT-PCR方法检测细胞壁增厚相关的pbpB、murG、glmU、atlR基因转录丰度，并结合透射电镜进行形态观察，以确定增厚及发生原因。结果显示，分离鉴定出261株牛乳源金黄色葡萄球菌，其中包括9株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin-resistant Staphylococcus aureus，MRSA）。药敏试验结果显示，金黄色葡萄球菌对β-内酰胺类抗生素具有较高的耐药率，其中氨苄西林为79.69%，青霉素为78.54%。多重耐药情况是以3、7和8重耐药的菌株居多；其中1株耐药种数达14种之多。qRT-PCR结果表明，4种相关基因的转录丰度均极显著上调（P<0.001或P<0.01）。透射电镜观察发现，甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌（methicillin sensitive Staphylococcus aureus，MSSA）JY21菌株的细胞壁在64和128 μg·mL^-1的青霉素浓度下，较对照组均极显著增厚（P<0.001），并可见细胞壁表面粗糙，有结节状凸起；但药物浓度从64 μg·mL^-1升高至128 μg·mL^-1细胞壁不再显著增厚（P>0.05）。MRSA WLD10菌株细胞壁未出现明显增厚（P>0.05）。综上所述，本地区牛乳源金黄色葡萄球菌针对β-内酰胺类抗生素，存在细胞壁增厚的耐药机制；增厚的原因主要是肽聚糖的过度合成及细胞自溶的减少。与MSSA JY21菌株相比，细胞壁增厚并非MRSA WLD10重要的耐药机制。     

牛奶源金黄色葡萄球菌耐药基因分布特征的研究

研究旨在了解江苏省牛奶源金黄色葡萄球菌分离株中抗生素耐药基因的分布特征。经耐热核酸酶基因(nuc)和甲氧西林耐药决定子A基因(mec A)的PCR检测,78个牛奶源菌株中18株为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA),60株为甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)。采用PCR方法检测了所有菌株中氨基糖苷类耐药基因aac(6')/aph(2″)、aph(3')-Ⅲ和ant(4',4″),大环内酯类耐药基因erm A、erm C和msr A,四环素类耐药基因tet M和tet K,上述8种耐药基因的检出率分别为32.1%、20.5%、41.0%、16.7%、44.9%、12.8%、29.5%和28.2%。除erm C在MSSA菌株中的检出率高于MRSA菌株之外,其余7种耐药基因的检出率均为MRSA菌株显著高于MSSA菌株。MRSA菌株携带2种及以上耐药基因的百分率较MSSA菌株高,MRSA菌株多重耐药情况更加普遍。     

禽源沙门菌对四环素的耐药性及耐药基因调查分析

为了更好地了解禽源沙门菌对四环素的耐药性及耐药基因分布,从不同来源的家禽样品中分离沙门菌,调查其对四环素的耐药性以及耐药菌株中8种四环素耐药基因[tet(A)、tet(B)、tet(C)、tet(W)、tet(M)、tet(D)、tet(K)和tet(L)]的携带情况.结果表明,18.8%的沙门菌分离株对四环素耐药,健康成鸡分离株对四环素的耐药性明显高于雏鸡、死胚或病禽分离株;四环素耐药株中tet(A)、tet(B)和tet(M)基因的携带比例分别为73.1%、11.5%和3.8%,说明沙门菌对四环素的耐药机制以tet(A)和tet(B)基因介导的主动外排为主.本研究首次在对四环素耐药的沙门菌中检测到tet(M)基因,说明tet(M)基因在沙门菌对四环素的耐药性方面也具有潜在的作用.     

新疆焉耆县羊源葡萄球菌耐药分析及耐药基因检测

为了对新疆焉耆地区羊源葡萄球菌耐药性及其携带的相关耐药基因情况进行检测,为该养殖场今后合理用药提供科学依据,采用微量肉汤稀释法对分离的275株葡萄球菌进行11种常用抗菌药物的药敏试验,并检测了部分相关耐药基因(cfr、fex A、mec A、tet K和tet M)。结果显示:分离的葡萄球菌对青霉素的耐药率高达90.4%,其次为苯唑西林,耐药率为69.1%,对其他被检药物的耐药率在1.4%~38.6%之间;基因检测显示,2株菌携带cfr基因(0.7%,2/275),14株菌携带fex A基因(5.1%,14/275),3株菌携带mec A基因(1.1%,3/275),5株菌携带tet K基因(1.8%,5/275),所有菌株均携带tet M基因(100%,275/275)。结果表明:新疆焉耆地区羊源葡萄球菌对青霉素和苯唑西林高度耐药,提示临床用药应根据药敏试验结果选用敏感药物,如庆大霉素、利福平等,缩短治疗周期和提高治疗效果;耐药基因的检出表明耐药性转移的风险增高,应加强对该地区养殖场的耐药监测。     

重庆市动物源性金黄色葡萄球菌的分离鉴定及药物敏感性分析

为了解重庆市部分区县动物源性金黄色葡萄球菌的耐药情况,采集重庆市北碚区、合川区、荣昌县部分养殖场466份畜禽粪便样品,将样品划线接种于Mueller-HInton高盐平板,挑取可疑菌落接种LB液体培养基,提取基因组后,通过PCR扩增金黄色葡萄球菌特异性nuc基因,对鉴定的金黄色葡萄球菌进行23种临床常用抗菌药物的药物敏感性试验。结果从466份样品中分离出25株金黄色葡萄球菌,包括17株鸡源菌株和8株猪源菌株。25株临床分离株对23种抗菌药物均有不同程度耐药,对氨苄西林、青霉素G、四环素、强力霉素、林可霉素耐药严重,耐药率超过60%,对阿米卡星、呋喃唑酮、万古霉素只有1株细菌耐药。所有分离菌均为多重耐药。表明分离菌的耐药性严重。本试验结果为重庆市养殖场的临床用药提供了参考,为研究重庆市动物源性金黄色葡萄球菌的耐药基因、耐药机制和耐药传播规律奠定了基础。     

金黄色葡萄球菌耐药性及肠毒素分型研究

为了解从生鲜乳中分离得到的31株金黄色葡萄球菌的耐药性和肠毒素分布情况,用微量肉汤稀释法进行药敏试验,用PCR方法进行肠毒素的检测和分型。结果表明,31株金黄色葡萄球菌耐药率在50%以上的抗菌药有7种,药耐药率小于10%的有3种;敏感率大于50%的抗菌药有6种,敏感率小于10%的有5种。31株金黄色葡萄球菌毒素基因携带率为93.5%,同时携带2种及以上毒素的菌株占67.7%,有SEA基因的占38.7%,含其他传统的毒素基因类型SEB、SEC、SED和SEE基因的菌株只占40.4%,携带新发现的毒素基因SEG、SHE、SEI和SEJ的菌株占67.7%。说明本次试验中的31株金黄色葡萄球菌对6类13种抗菌药都有不同程度的耐药性,且多重耐药现象比较严重。生鲜乳中分离的金黄色葡萄球菌带毒率高,且携带新发现的肠毒素基因较多。     

荷斯坦牛乳源金黄色葡萄球菌流行性及其与乳源总菌群的耐药性分析

本研究旨在检测并对比分析中国北方地区3个荷斯坦牛场乳源金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,简称金葡菌)的流行情况及乳汁中总菌群的抗生素耐药性。试验采集北方地区3个荷斯坦牛场的生产群奶样、大罐奶样和临床型乳房炎牛奶样共181份,首先采用Baird-Parker选择性培养基对金葡菌进行分离纯化;再采用特异性PCR方法鉴定含金葡菌特异基因nuc的金葡菌菌株;最后采用琼脂稀释法检测奶样中总菌群及金葡菌对14种抗生素的耐药性。结果发现,181份奶样带菌率为100%;金黄色葡萄球菌检出率为16.03%,分离纯化了48株金葡菌。奶样总菌群耐药性检测结果表明,中国北方地区3个荷斯坦牛场对于β-内酰胺类抗生素(苯唑西林、氨苄西林、头孢西丁、头孢哌酮)耐药性均较高,达89%以上;对红霉素、利福平、四环素、万古霉素、甲氧苄啶/磺胺甲噁唑、阿莫西林/克拉维酸的耐药性达80%以上;对氯霉素的耐药率过半;仅对阿米卡星耐药率较低(18%~58%)。对金葡菌耐药性检测结果显示,3个牛场金葡菌对环丙沙星、头孢西丁和甲氧苄啶/磺胺甲噁唑有较高耐药性,但均对阿米卡星、氯霉素、加替沙星和万古霉素敏感。3个牛场绝大多数菌株都产生了多重耐药谱。研究结果为奶牛场乳源总菌群、金葡菌耐药性情况及科学用药提供试验数据。     

247株猪源沙门菌对四环素类药物耐药性和耐药基因的检测分析

为探究猪源沙门菌分离株对四环素类抗菌药物耐药性及四环素耐药基因(tet)的流行与分布情况,从7省的合作猪场采集病死猪肝脏、肺脏、肠道作细菌分离,利用沙门菌属特异性侵袭基因(invA)和16S rDNA扩增、测序等方法进行鉴定,并用微量肉汤稀释法测定沙门菌分离株对四环素类抗菌药物的敏感性,PCR方法测定tet基因,以及ERIC-PCR方法分析猪源沙门菌之间的相关性和遗传关系。从823份病料中分离鉴定出247株猪源沙门菌,分离率为30.01%。药敏结果显示,对多西环素、土霉素的耐药率分别为87.45%和94.74%。PCR检测发现,分别有62,66,3株单独携带tetA、tetB、tetC基因;分别有38,8,4,7,1株菌同时携带两种不同的tet基因(tetA+B、tetA+C、tetA+D、tetB+C、tetC+D);分别有9,6,1,6,1,4,3株菌同时携带3种不同的tet基因(tetA+B+C、tetA+B+D、tetA+B+M、tetA+C+D、tetA+D+M、tetB+C+D、tetB+C+M);分别有6,2株菌同时携带4种不同的tet基因(tetA+B+C+D、tetA+C+D+M);没有检测到单独携带tetD、tetM以及同时携带5种tet基因的菌株。接合试验表明,tetM可与tetA或tetC共同在沙门菌与大肠杆菌间转移,导致菌株多西环素抗性水平转移。试验菌共分为A~δ共30个ERIC型,tet基因分布于不同ERIC型菌株中,表明其在试验菌株间水平扩散。本试验首次在猪源沙门菌中发现了编码核糖体保护蛋白的四环素类耐药基因tetM。猪源沙门菌对四环素类药物耐药严重,对多西环素、土霉素具有普遍耐药性,tetA、tetB基因在7省猪源沙门菌中流行最广泛,分离菌对四环素类药物的普遍耐药性与单个或多个tet基因的普遍存在密切相关。