鸭传染性产蛋减少症（暂定名）的病原分离初报

本文对2010年在成年蛋鸭中流行的以产蛋下降为特征的未知疫病病原进行了初步鉴定。病原能在鸭胚、鸡胚和细胞上复制增殖,对鸭胚、鸡胚的致死率达100%。鸭胚病毒分离物不具有血凝性,在透射电镜下可观察到直径为50~100 nm、有囊膜带突起的病毒粒子。病毒对酸敏感、能耐受pH9的碱性环境,50℃1 h可使病毒失去感染能力。SPF鸡人工感染试验结果显示,感染鸡生长缓慢、致死亡率低、能回收病毒。说明引起鸭产蛋量下降的疫病病原是病毒性的,并导致鸡感染发病,我们将此病暂称为鸭传染性产蛋减少症。     

鸭坦布苏病毒江西株的分离与鉴定

2015年9月,江西省乐平市等地相继暴发了以产蛋量大幅下降为特征的传染病,为了明确病因,对病原进行了鉴定、特异性目的基因片段扩增和动物回归等试验。结果显示:分离毒(命名为JX01株)能致死鸭胚和鸡胚,不凝集鸡红细胞;对病料和接毒鸭胚尿囊液进行RT-PCR,可扩增出特异性基因片段,其核苷酸序列与鸭坦布苏病毒BYD-1株的相似性为92.1%;用鸭胚分离毒接种300日龄蛋鸭,能够复制出产蛋量下降病例。分析表明,分离毒为鸭坦布苏病毒,该病毒是引起此次鸭病疫情的病原。     

鸭出血性卵巢炎的初步研究

2010年6月以来,我国部分地区所饲养的种鸭和蛋鸭发生一种疾病,以突发产蛋急剧下降为特点,根据病变,暂将该病称为鸭出血性卵巢炎(duck hemorrhagic ovaritis,DHO)。从不同地区的发病鸭群采集34份样品,取15份样品进行病毒分离,获得10个鸡胚分离物和5个鸭胚分离物。RT-PCR检测结果表明,15个分离物均为禽流感阴性,14个分离物为新城疫阴性。选分离株YY5株进行了电镜观察和PCR排查,结果表明,该毒株的毒粒直径为40~50 nm,呈鸭瘟病毒、水禽细小病毒、鸭呼肠孤病毒、鸭甲肝病毒、鸭星状病毒、鸭圆环病毒、鸭冠状病毒、鸡传染性支气管炎病毒PCR阴性,但为黄病毒RT-PCR阳性。基于黄病毒NS1序列合成引物,用RT-PCR检测15株病毒分离物和其余19份临床样品,黄病毒阳性率为82.4%。用YY5株的221-nt NS1序列进行分析的结果显示,YY5株与黄病毒科黄病毒属恩塔亚病毒群(Ntaya virus group)的巴格扎病毒(Bagaza virus)具有相近的遗传进化关系,但遗传距离介于病毒种的水平。用一株鸭胚分离株感染91日龄临近开产的麻鸭和232日龄的产蛋麻鸭,可复制出卵泡膜出血的病变。结果表明,从DHO自然病例分离到一种新的黄病毒,暂称为鸭黄病毒(duck flavivirus,DFV),DFV可能与DHO有关。     

种鸭黄病毒病疫苗免疫效果观察

通过对免疫过黄病毒病活疫苗和灭活疫苗的产蛋种鸭采用分离黄病毒强毒株(JQ)进行攻毒试验,并设未免疫组进行对照。攻毒后每天观察试验鸭精神、采食、产蛋等情况,连续观察21d。结果发现,免疫组攻毒后,精神、采食、产蛋均未受影响;未免疫组攻毒后第2天,采食、产蛋开始下降,并在后期出现死淘情况。试验结果表明,蛋种鸭开产前进行3次油苗和1次弱毒苗免疫,能抵抗黄病毒感染。经鸡胚成纤维细胞多次传代致弱的黄病毒QL株有较好的免疫原性,对鸭没有致病性。     

鸭坦布苏病毒江苏XZ株的分离和鉴定

从江苏徐州地区分离到的以引起樱桃谷鸭产蛋下降和死亡为特征的1株病毒,命名为XZ株。对该病毒进行电镜观察、血凝试验、ELD₅₀测定、RT-PCR扩增特异性目的基因、序列比对分析和动物回归试验。结果显示,分离毒株能致死鸭胚和鸡胚,电镜下观察到球形病毒粒子,不具有血凝性,对病料和接毒鸭胚尿囊液进行RT-PCR,均可扩增出基因片段,其核苷酸序列与坦布苏病毒奉贤株的相似性最高,为98.7%,与其他坦布苏病毒的毒株也具较高同源性,为86%~98%。用鸭胚分离毒株接种健康产蛋鸭,能复制出同样的疾病。结果表明分离病毒为鸭黄病毒属的坦布苏病毒。     

广东地区鸭黄病毒JM株的分离和初步鉴定

2010年4月以来,我国部分地区陆续发生以产蛋鸭产蛋急剧下降为特点的疾病。从广东省江门地区某鸭场的发病鸭群采集样品,接种鸭胚后分离到一株病毒,并命名为JM株,经RT-PCR检测为黄病毒核酸阳性。序列测定后分析显示,该分离株JM株与黄病毒属Tembusu病毒的对应序列相似性最高,其中与Tembusu病毒JS804株相似性最高达98%。结果表明,JM株为黄病毒,与该病鸭产蛋急剧下降有关。     

广东地区鸭黄病毒QS株的分离和初步鉴定

从广东省清远地区某蛋鸭场采样,接种鸭胚后分离到一株疑似鸭黄病毒QS株,经PCR、RT-PCR检测为黄病毒阳性。序列测定后分析显示,QS株与黄病毒属Tembusu病毒相似性最高,其中与Fengxian株相似性最高达99%。结果表明,QS株为黄病毒并与该病鸭产蛋急剧下降有关。     

鸭黄病毒感染病例的病理组织学观察

为了探明湖北省肉种鸭和蛋鸭产蛋下降的原因,对引起产蛋下降的病鸭的卵巢中分离的病毒的目的基因进行测序,对3代接种的SPF鸡胚尿囊液进行电镜观察,对脑等组织进行组织病理学观察。序列分析结果表明,扩增的序列属于黄病毒的NS5基因,且与恩塔亚病毒群有相近的遗传进化关系。电镜可观察到40nm～60nm的有囊膜的病毒粒子。组织病理学观察发现输卵管出现严重的充血、出血和炎性反应,脑充血、炎性反应,心脏中有大量变性坏死的炎性细胞。     

产蛋下降综合征病毒的分离鉴定

对我省几个暴发产蛋下降综合征(EDS-76)的鸡群进行了流行病学调查。用9日龄的鸭胚从病鸡的输卵管和子宫内分离到两株EDS-76病毒(J.M-Ⅰ和J.M.-Ⅱ)。该病毒对鸡红细胞的凝集作用可被EDS-76的标准阳性血清所抑制。用分离毒接种189日龄产蛋母鸡6只,6/6发病。接毒后5天,可从血中测出HI抗体,15大时达最高峰,25天后开始渐渐下降。卵黄HI抗体与血液HI抗体呈正相关,只是卵黄HI抗体价比血液的高一个滴度。接毒鸡所产的蛋,EDS-76病毒的回收数为6/6。病毒可在鸡胚内复制,对鸡胚的致死数为3/30。     

鸡黄病毒灭活疫苗的研制及免疫效果研究

鸡黄病毒FQ—C1株经SPF鸡胚连续传40代后,检测其尿囊液毒的ELD50达到1×10^-4.33／0．1mL。将该病毒第40代SPF鸡胚液毒灭活后制备成油乳剂灭活疫苗。SPF雏鸡和蛋鸡安全性试验表明,该疫苗的安全性好,无不良影响。以该疫苗一次单剂量（1mI／只）免疫开产蛋鸡,28d后攻以鸡黄病毒强毒测定疫苗的保护效果,结果显示疫苗免疫组较未免疫组蛋鸡的产蛋率高出75．8％,产蛋保护率达93．2％以上。试验表明,本研究制备的鸡黄病毒灭活疫苗安全性好,且具有良好的免疫原性,免疫后可有效抵抗鸡黄病毒所致的产蛋骤降。     

鸭源H9亚型禽流感病毒的分离及其生物学特性的研究

从南京某肉鸭养殖场用灭菌棉拭共采集肉鸭的泄殖腔样品20份,通过SPF鸡胚尿囊腔传代接种法分离到1株病毒。HA-HI试验表明:该病毒可凝集鸡红细胞,不能被ND、EDS-76阳性血清抑制,但能被H9阳性血清所抑制,为H9亚型AI。该分离株生物学特性研究结果表明,对鸡表现为弱致病性,而对鸭无致病性。能在小鼠体内良好的增殖,并且可引起发病和死亡。     

鸡黄病毒CJD05株E基因克隆与序列分析

为了解福建省鸡黄病毒(CFV) CJD05株来源及其遗传进化关系,根据鸭黄病毒(DFV) BYD-1株E基因全序列设计合成1对引物,特异性扩增CFV CJD05株的E基因,并对其序列进行分析.结果表明克隆获得CFV CJD05株1 503 bp的E基因特异性目的条带,同源性分析表明CFV CJD05株E基因核苷酸序列与DFVBYD-1株、鹅黄病毒(GFV) JS804株的同源性分别为99.2％、99.3％,氨基酸的同源性分别为99.0％、98.6％,表明CFV CJD05株、DFV BYD-1株和GFV JS804株高度同源,与坦布苏病毒(TBSV)的同源性高于其它虫媒介黄病毒.     

鸭副粘病毒强毒株的分离和鉴定

采用鸡胚接种法从安徽凤阳某患病肉鸭群中分离到一株病毒。该素株对鸡红细胞具有凝集性，并可被康复鸭鸭血清和NDV阳性抗血清所抑制，而不能被禽流感标准阳性血清抑制，结合血清中和鸡胚接种试验，病毒回归试验和免疫防治效果的研究结果，确认为鸭副粘病毒。参照国际上规定的新城疫病毒毒力判定的标准及其方法，测定该分离株的鸡胚最小致死量平均死亡时间（MDT），1日龄鸡及脑内接种致病指数（ICPI）和6周龄鸡静脉内接种致病指数（IVPI）分别为48.9h,1.80和2．45。表明该鸭副粘病天线离株具有新城疫病毒（NDV）速发型相类似的毒力，属强毒力毒株，并定名为WF00D株。     

鸽新城疫病毒的分离与鉴定

用SPF鸡胚从疑为鸽新城疫的浙江温州某肉鸽场分离到一株毒株。该毒株能凝集鸡红细胞,初代分离毒HA效价高达8 log2;且其凝集作用能被鸡新城疫标准阳性血清抑制;将分离毒回归鸽,复制出与自然病例相似的临床症状和病变,且感染后10d内全部死亡,说明为强毒株。试验结果表明该毒株为鸽新城疫病毒。     

1株鸡新城疫强毒株的分离鉴定及致病性

从山东省一发病率、死亡率高的肉鸡群中分离到1株病毒,经HA、HI试验和动物回归试验确定所分离的毒株为新城疫病毒,命名为新城疫LVCX株。按常规方法测得LVCX株的MDT、ICPI和IVPI分别为47.4h、1.975和2.85,鸡胚半数致死量LD50为10-9.8。F基因分析表明分离株LVCX为基因Ⅶ型,其多肽裂解位点为112-RRQKRF-117,表明LVCX株为新城疫病毒强毒株。该毒株F基因核苷酸同源性与近几年分离的基因Ⅶ型鸡源毒株同源性在93.5%～98.3%之间;与经典强毒株F48E9和Lasota株的核苷酸和氨基酸同源性分别为85.8%、91.3%和83.3%、88.4%;且与近几年分离的几株鹅源、鸭源核苷酸同源性也较高,在95.2%～96.5%之间。     

禽黄病毒套式RT-PCR检测方法的建立及应用

禽黄病毒病是新发的一种疫病,可引起鸭、鹅和鸡等家禽产蛋和采食量下降及死亡。本研究旨在建立一种快速诊断方法用于临床诊断及流行病学调查。根据GenBank发表的鹅黄病毒JS804株全基因序列,应用Primer Premier 5.0软件设计了2对特异性引物,建立了禽黄病毒套式RT-PCR检测方法。结果:该套式RT-PCR方法具有特异性强、敏感性高的特点,最低病毒检测量为101.89TCID50/0.1 mL,比普通RT-PCR方法敏感性高1 000倍。应用该方法对江苏地区疑似禽黄病毒病的70份鹅病料、4份鸭病料、12份鸡病料进行检测,总阳性率为58.14%,而用普通RT-PCR方法检测的阳性率仅为17.44%。结果表明,禽黄病毒套式RT-PCR检测方法具有快速、特异、敏感的特点,可用于禽黄病毒感染的临床诊断和流行病学调查。     

番鸭副粘病毒1型的分离鉴定

自表现神经症状、腹泻、病死率较高、腺胃粘膜局灶性出血或溃疡及肠道粘膜出血为特征的病死番鸭肝脏中分离到病毒,经电镜观察、血凝及血凝抑制试验鉴定为副粘病毒1型.以SPF鸡胚测定其平均致死时间(MDT)为51 h,对1日龄SPF鸡的脑内接种致死指数(ICPI)为1.74,表明该毒株属强毒株.经肌肉注射途径攻击10 d雏番鸭致死率达66.7%,表明该分离毒对雏鸭有高度的致病性.     

鸭坦布苏病毒病活疫苗（FX2010-180P株）毒种保存期的研究

鸭坦布苏病毒病是新发的一种以蛋鸭产蛋下降为主要特征的传染病,目前仍没有疫苗可预防和控制该病。将鸭坦布苏病毒强毒（FX2010株）在鸡胚成纤维细胞（chicken embryo fi broblasts,CEFs）上连续传代培养180代,获得1株致弱毒株（FX2010-180P株）,利用该弱毒株研制了鸭坦布苏病毒病活疫苗。本研究为了测定鸭坦布苏病毒病活疫苗（FX2010-180P株）毒种的保存期,将-80℃条件下保存了16个月的原始种子批和基础种子批各取3支,进行纯净性检验、鉴别检验以及病毒滴度测定。结果表明,各批次毒种在保存16个月后,病毒纯净无污染,病毒滴度没有明显下降。把基础种子在CEFs上增殖后,低剂量接种鸭子,检验毒种的免疫原性。结果显示,用毒种增殖的病毒免疫原性良好,101.5和102.5 TCID50的剂量可以为接种鸭提供90%和100%的保护。