紫杉木霉菌株ZJUF0986原生质体的制备及诱变抗性菌株的选育

通过原生质体诱变,以目标代谢产物木霉菌素为抗性筛选标记选育木霉菌素高产菌株。紫杉木霉野生型菌株ZJUF0986在N15培养基中生长20h的菌丝体,用15mg/mL崩溃酶、30mg/mL蜗牛酶和30mg/mL溶壁酶组合成的混合酶为酶裂解液,以菌丝量∶ 酶裂解液=1∶ 2.5(w/v)的比例,在30℃、100r/min条件下酶解90min,原生质体释放量最佳,达到9.42×10⁸个/mL。所制备的原生质体进行氯化锂-紫外复合诱变,紫外照射剂量为60s时的突变率和正突变率最高,筛选到高产突变体菌株UL60-11,其发酵效价比野生型菌株提高67.3%。     

玉米大斑病菌黑色素缺失突变体的获得及其生物学特性

DHN黑色素是许多植物病原真菌的致病相关因子,为明确黑色素在玉米大斑病菌致病过程中的作用,采用三环唑和紫外线复合诱变的方法获得了黑色素缺失的6个突变菌株,对突变菌株的生长量、产孢量、HT-毒素活性、致病力进行测定。结果显示,突变菌株产毒能力变化不大,但生长量下降,产孢量和致病力显著下降或完全丧失,野生型菌株的产孢量和侵染频率分别是突变菌株的30～50倍和5倍。突变菌株与黑色素共培养后,菌株M01-23a和M01-23b恢复了致病力,但病斑面积和侵染频率较小。玉米大斑病菌黑色素与致病力具有一定的相关性。     

长枝木霉T6菌株对小麦耐盐性的影响

利用NaCl溶液模拟盐胁迫条件,测定了长枝木霉T6菌株耐盐性及其对小麦耐盐性的影响。结果表明:当NaCl溶液浓度为30~50 mg·m L~(-1)时,其对长枝木霉T6菌株生长具有显著的抑制作用,并且其影响作用随着NaCl溶液浓度的升高而增强,随着处理后培养时间的增加而逐渐减小,但当NaCl溶液浓度为10、20 mg·m L~(-1)时,与对照相比其对长枝木霉T6菌株生长无显著影响,且表现出较强的耐盐性;长枝木霉T6菌株对NaCl溶液胁迫下小麦种子的发芽率、发芽势、萌发指数、胚芽和胚根长度具有明显的促生作用,且与对照相比分别增加了3%~15%、6%~14%、4%~16%、9%~34%和9%~31%。因此,长枝木霉T6菌株具有较强的耐盐性和解盐促生作用。     

短密木霉菌株GAS1-1的分离鉴定、拮抗作用及其生物学特性

为了解短密木霉Trichoderma brevicompactum对植物病害的生防作用及其生物学特性,利用稀释平板分离法从甘肃省景泰县马铃薯连作田植株根际土壤中分离获得1株木霉菌株GAS1-1,经形态观察、rDNA-ITS和EF-1α序列分析明确其分类地位;用生物学方法研究该菌的营养生长和产孢条件;采用对峙培养法测定该菌株对5种植物病原真菌的抑制作用。结果表明,基于形态学特征和基因序列分析结果,菌株GAS1-1被鉴定为短密木霉Trichoderma brevicompactum,为甘肃省木霉新记录种。该菌株对玉米镰孢茎腐病菌Fusarium graminearum、玉米穗腐病菌F. verticillioides、棉花枯萎病菌F. oxysporum、玉米腐霉茎腐病菌Pythium inflatum和灰葡萄孢霉Botrytis cinerea均具有较好的拮抗效果,尤其对玉米腐霉茎腐病菌的抑制作用最好,抑菌率达100.00%。该菌株营养生长和产孢的最适碳源和氮源分别为葡萄糖和酵母膏;其在15～35℃均可生长,菌丝最适生长温度为30℃,最佳产孢温度为25℃;在pH 5～12的培养基上菌丝均可生长,菌丝最适生长和产孢的pH均为5;24 h黑暗条件下菌丝营养生长最快,12 h光暗交替条件有利于产孢;孢子致死温度为69℃,10 min。表明短密木霉菌株GAS1-1具有较好的生防应用潜力。     

生防棘孢木霉T31菌株的分离筛选及其生物学特性

为评价具有生防潜力的棘孢木霉,采用平板对峙法、对扣培养法、圆盘滤膜法从长白山土样中分离筛选出木霉菌株T31,结合形态学及分子生物学分析对其进行种类鉴定,并采用菌丝生长法研究了该菌株的生物学特性。所分离的菌株T31被鉴定为棘孢木霉Trichoderma asperellum,该菌株对8种靶标菌的抑菌率在44.49%~77.91%之间,其中,对玉米大斑病菌Exserohilum turcicum、核盘菌Sclerotinia sclerotiorum、腐霉菌Pythiumuhtimum sp.及镰刀菌Fusarium sp.均有较强生长竞争优势,对玉米灰斑病菌Magnaporthe oryzae具明显重寄生作用。菌株T31的最适培养基为PDA培养基,最适生长温度为30 ℃、最适产孢温度为25 ℃,最适pH值为6。持续光照可以促进木霉菌孢子产生,Zn²⁺、Mn²⁺、Ca²⁺和Mg²⁺利于菌丝生长,但是高浓度的Fe²⁺和Cu²⁺抑制菌丝生长,Mn²⁺和Mg²⁺可促进产孢。此外,与普通木霉菌相比,该菌株具有耐寒性及耐盐性。     

拟康宁木霉T-51菌株生物学特性及其生物防治潜力

为进一步扩宽拟康宁木霉Trichoderma koningiopsis T-51菌株的生防应用范围,该研究测定T-51菌株菌丝生长、产孢和分生孢子萌发的最适温度、光照和碳氮源条件及其对灰葡萄孢Botrytis cinerea菌核的重寄生能力和对12种植物病原真菌的生防潜力。结果表明,拟康宁木霉T-51菌株在26℃下菌丝生长最快,生长速度达到2.5 cm/d,在20℃光照条件下产孢量最大,达到1.64×109个/皿,26～28℃光照条件下适宜T-51菌株分生孢子萌发;供试氮源中硫酸铵和硝酸铵适宜T-51菌株菌丝生长、产孢和分生孢子萌发,供试碳源中葡萄糖和可溶性淀粉适宜T-51菌株菌丝生长和分生孢子萌发,果糖和乳糖适宜T-51菌株产孢;T-51菌株能够重寄生灰葡萄孢菌核,当分生孢子悬浮液浓度为1×108个/mL时,重寄生效果最好;T-51菌株对核盘菌属Sclerotinia和丝核菌属Rhizoctonia植物病原真菌重寄生能力较强,对镰刀菌Fusarium spp.、暹罗刺盘孢菌Colletotrichum siamense、桃褐腐病菌Monilinia fructicola和稻瘟菌Mag...     

巨大芽胞杆菌CJLC2菌株对盐胁迫下番茄生长及耐盐生理生化指标的影响

为增强番茄耐盐能力,采用菌液浸种、灌根以及蒽酮比色和钼锑抗显色等方法,研究巨大芽胞杆菌Bacillus megaterium CJLC2菌株增强番茄耐盐能力的效果及其作用机制。在非NaCl胁迫条件下,CJLC2菌株显著促进番茄的生长,对根长、株高和鲜重的促生率分别为14.33%、9.20%和17.75%。在NaCl胁迫条件下,随NaCl浓度增加对番茄的生长抑制作用增大,而CJLC2菌株在一定程度上提高了番茄对NaCl耐受能力。其中,番茄对100 mmol/L NaCl的耐受能力显著提高,加菌处理对根长、株高和鲜重的促生率分别为17.05%、18.04%和15.81%。CJLC2菌株可提高番茄叶片可溶性糖和可溶性蛋白含量,在200 mmol/L NaCl处理时效果显著,分别提高了40%和41%。CJLC2菌株还影响番茄矿物质元素的含量,其中在100 mmol/L NaCl胁迫下,加菌处理番茄根系磷、钾、铁、铜和锌的含量以及K⁺/Na⁺比值分别提高190%、12.88%、6.80%、34.78%、10.17%和50.72%,而根系钠的含量降低25.11%。此外,CJLC2菌株可降低受害番茄乙烯的含量。研究表明,巨大芽胞杆菌CJLC2菌株通过提高番茄耐盐相关生理生化指标,增强番茄的耐盐能力并促进其生长。     

小RNA生物合成途径主要元件调控稻瘟病菌生长发育和致病性

为探究小RNA生物合成途径主要蛋白在稻瘟病菌Magnaporthe oryzae生长发育、胁迫响应和致病过程中的作用,在野生型菌株Guy11背景下,分别构建其单基因敲除突变体ΔMoago3、ΔModcl2、ΔMordrp2和双基因敲除突变体ΔMoago3ΔModcl2、ΔMoago3ΔMordrp2、ΔModcl2ΔMordrp2,并测定不同突变体的营养生长、产孢过程、对不同胁迫的响应、致病性及侵染菌丝类型。结果显示,仅双基因敲除突变体ΔMoago3ΔModcl2和ΔMoago3ΔMordrp2的菌落直径较野生型菌株Guy11显著减少;突变体ΔModcl2和ΔModcl2ΔMordrp2的产孢量分别显著下降至野生型菌株Guy11和突变体ΔMordrp2的66.67%;十二烷基硫酸钠（sodium dodecylsulfate,SDS）、NaCl、山梨醇和H2O2胁迫对各突变体的抑制率影响不显著,但在刚果红胁迫下,突变体ΔMoago3、ΔMordrp2和ΔMoago3ΔModcl2的抑制率均显著高于野生型菌株Guy11的抑制率;与野生型菌株Guy11相比,突变体ΔMoago3、ΔModc...     

生防放线菌ZZ-9耐药菌株的微波诱变选育

为了获得耐甲基硫菌灵的菌株， 采用微波诱变法对放线菌ZZ-9菌株进行0～75 s的处理，筛选出在甲基硫菌灵致死浓度下仍能较好生长的突变菌株，并测定其对苹果树腐烂病菌拮抗性和传代稳定性的影响，选育出性能优良的耐药菌株，与甲基硫菌灵协同作用进行防治苹果树腐烂病试验。结果表明，在微波辐照15～60 s条件下，获得4株耐70 μg·mL^-1甲基硫菌灵的突变菌株ZZ-9A、ZZ-9B、ZZ-9C和ZZ-9D。通过对4株突变菌株进行抑菌率和传代稳定性测定，筛选出一株抑菌率较好且传代稳定的突变菌株ZZ-9B。菌株ZZ-9B与70 μg·mL^-1甲基硫菌灵协同作用测定表明，当菌株ZZ-9B与甲基硫菌灵配比为8∶2时，在离体枝条上对苹果树腐烂病的协同防效为89.42%，明显高于单独使用突变菌株和甲基硫菌灵的防效。因此，在使用菌株ZZ-9B来防治苹果树腐烂病时，添加少量的甲基硫菌灵，可显著提高防效。     

磁场对白僵菌菌丝生长和产孢量的影响

优质菌株能获得最佳产品和防治效果。长期以来,研究菌种退化问题,从不同途径和处理方法提高产孢量。宋明芝(1976)用钴₆₀和化学药剂处理白僵菌株;张爱文(1991)紫外线诱变选育等,都获得优质菌株^[2],但随转代递增退化严重。为此,本着简单易行经济有效的原则,应用磁场处理白僵菌株达到加快菌丝生长,提高产孢量的作用。     

木霉菌REMI转化体对番茄灰霉病的防治及其机理的研究

研究不同木霉菌转化体对番茄灰霉病防治效果及机理,为木霉菌生物防治的合理利用奠定基础。利用限制性内切酶介导基因整合技术(restriction enzyme-mediated integration,REMI),通过插入线性化质粒DNA获得了生物防治番茄灰霉病(Botrytis cinerea)效果优于出发菌T21菌株(出发菌)的3个木霉菌转化体Ttrm31、Ttrm34和Ttrm55,对侵染花器和叶片的灰霉病防效分别比原生物防治木霉菌株提高了16.9%和8%。木霉菌转化体的产孢能力、分生孢子的萌发率、对碳氮源的利用能力及对高温的抵抗能力都有所提高;木霉菌转化体本身产生的几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶的活性均比出发菌高,因此通过REMI技术可以获得新的有益木霉菌转化体,在一定程度上提高了生物菌株防治番茄灰霉病的水平。说明REMI技术可以用于改良生防木霉菌株的功能,提高生物防治效果。     

盾壳霉抗菌核净菌株的诱导及其特性初步研究

为筛选可与菌核净配合防治作物菌核病的盾壳霉菌株,进行了紫外线辐射和药剂驯化试验,分别得到4个和2个盾壳霉抗菌核净突变菌株,并研究了其生物学特性。结果表明:除菌株D-1外,其余突变菌株生长速率(菌落直径57.00 ~62.75 mm,生物量6.38 ~8.63 mg/mL)均大于亲本菌株(菌落直径54.00 mm,生物量5.91 mg/mL);大部分突变菌株产孢量(对数值7.33 ~8.16)小于亲本菌株(8.40);菌核净对突变菌株的EC50值是亲本菌株的2.23 ~191.84倍;突变菌株D-3、U-6有微弱的几丁质酶活性,且除U-4外的突变菌株葡聚糖酶活性增强(亲本菌株8.96 U,突变菌株9.18 ~17.61 U)。综合分析,U-6菌株既有较高的葡聚糖酶活性又有几丁质酶活性,并能保持较快的生长速率,是值得开发的优良菌株。     

拮抗性木霉菌株抗逆性筛选评价标准与方法

本研究旨在为高效筛选耐受高温胁迫、低温胁迫、盐胁迫及干燥（干旱）胁迫拮抗性木霉菌株提供筛选阈值。根据5种、20株拮抗尖孢镰孢菌效果较好的木霉菌对上述逆境因子的反应差异，建立每种逆境因子在不同水平下的木霉菌株生长和酶活变化检测阈值和标准化评价方式；分析木霉菌在不同胁迫条件下发育相关生化因子与菌株生长变化之间的关系，及相应胁迫下的孢子萌发率与菌落直径之间的相关性。通过正态性检验获得供试木霉菌株生长响应胁迫的阈值为：1 mol/L NaCl（盐胁迫阈值），36℃（高温胁迫阈值），14℃（低温胁迫阈值），400 g/L PEG-6000（干旱胁迫阈值）。相应胁迫下的菌落直径与孢子萌发率明显正相关。菌株在大部分胁迫下的抗坏血酸过氧化物酶（APX）及过氧化氢酶（CAT）酶活与菌丝干重有明显的相关性。本研究为科学评价生物防治木霉菌资源的抗逆性提供了依据。     

Trichoderma harzianum produces nonanoic acid, an inhibitor of spore germination and mycelial growth of two cacao pathogens

An isolate of Trichoderma harzianum Rifai from an infected cacao pod produces and secretes nonanoic (pelargonic) acid into a liquid culture medium. Nonanoic acid (NA) was very inhibitory to spore germination and mycelial growth of two cacao pathogens, Crinipellis perniciosa Stahel and Moniliophthora roreri Cif. H.C. Evans. It was highly active causing 75% inhibition of spore germination in an in vitro assay at a rate as low as 0.09 μM for M. roreri and 0.92 μM for C. perniciosa. Mycelial growth was comparatively less sensitive to inhibition, but still there was a 75% reduction in growth with 0.62 μM in M. roreri and 151 μM NA in C. perniciosa. In contrast, NA did not affect Trichoderma mycelial growth or spore germination at concentrations that were inhibitory to the pathogens. 6-pentyl-α-pyrone was also produced and secreted into the medium by T. harzianum, however; it was not antagonistic to the cacao pathogens. Although a number of metabolites produced by Trichoderma spp. have been identified in the past, this is the first report of NA production and secretion by any Trichoderma. The results suggest that NA may play a role in the successful use of some Trichoderma spp. isolates in the biocontrol of fungal diseases of plants.     

木霉分生孢子和厚垣孢子对黄瓜叶片抗氧化系统及枯萎病防效的影响

采用前期筛选出的对黄瓜枯萎病菌有较好拮抗作用的3株木霉菌,即哈茨木霉菌(Trichoderma harzianum)809、拟康氏木霉菌(Trichoderma pseudokoningii)886和棘孢木霉菌(Trichoderma asperellum)525,利用盆栽试验,测定了木霉菌分生孢子和厚垣孢子对黄瓜幼苗抗氧化能力及对枯萎病防效的影响。结果显示:3株木霉菌分生孢子和厚垣孢子对黄瓜枯萎病的盆栽防效均在66.81%以上,且以拟康氏木霉菌886厚垣孢子防效最高,达到81.46%;当黄瓜幼苗长至三叶一心时,与CK(即只接种病原菌)相比,经哈茨木霉菌809、拟康氏木霉菌886、棘孢木霉菌525分生孢子以及厚垣孢子处理后,黄瓜幼苗叶片相对电导率和丙二醛(MDA)含量均呈下降趋势,而保护性酶包括过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)、抗坏血酸过氧化物酶(APX)、超氧化物歧化酶(SOD)活性则呈上升趋势,其中以拟康氏木霉菌886厚垣孢子的变化幅度最显著;拟康氏木霉菌886厚垣孢子处理的黄瓜幼苗叶片相对电导率、MDA含量分别比CK下降了47.74%、41.40%;而叶片中的POD、CAT、APX、SOD活性则分别比CK增加了318.11%、155.36%、157.09%和300.34%。研究表明3株木霉菌分生孢子和厚垣孢子均能通过改善黄瓜幼苗叶片抗氧化能力,增加保护酶活性,提高了对黄瓜枯萎病的防治效果。     

木霉分生孢子和厚垣孢子对黄瓜幼苗生理特性及枯萎病防效的影响

采用前期筛选出的对黄瓜枯萎病菌有较好拮抗作用的3株木霉菌,即哈茨木霉Trichoderma harzianum 809、拟康氏木霉Trichoderma pseudokoningii 886和棘孢木霉Trichoderma asperellum 525,利用盆栽试验,测定了木霉菌孢子不同类型施用对黄瓜幼苗生长、生理特性及枯萎病防效的影响。结果表明:哈茨木霉809、拟康氏木霉886、棘孢木霉525分生孢子和厚垣孢子对黄瓜枯萎病的盆栽防效均在66.81%以上,且以拟康氏木霉886厚垣孢子防效最高,达到81.46%。当黄瓜幼苗长至三叶一心时,3株木霉菌分生孢子和厚垣孢子处理的黄瓜幼苗株高、茎粗、根体积、叶面积、全株鲜质量均比CK显著上升,以厚垣孢子886的促进效果最显著,其株高、茎粗、根体积、叶面积、全株鲜质量分别较CK增加了85.33%、108.43%、235.29%、144.38%、272.32%。同时,3株木霉菌分生孢子和厚垣孢子处理的黄瓜幼苗叶绿素含量、根系活力、叶片可溶性糖含量、叶片可溶性蛋白含量也均比CK显著上升,厚垣孢子886的促进效果仍最显著,其叶绿素含量、根系活力、叶片可溶性糖含量、叶片可溶性蛋白含量分别较CK增加了97.47%、86.05%、172.49%、201.91%。     

三株球孢白僵菌对草地贪夜蛾的毒力比较

为筛选有效防治草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda的微生物制剂,采用室内生物测定法测定从北京市、浙江省和海南省土壤样品中分离获得的3株球孢白僵菌Beauveria bassiana菌株bbbj、bbzj和bbhn对草地贪夜蛾3龄幼虫的毒力,并比较这3株菌株的产孢情况和合成白僵菌素的能力。结果显示,分离自北京市的菌株bbbj对草地贪夜蛾3龄幼虫的毒力最强,LC50为3.37×105个孢子/mL;其次为浙江省的菌株bbzj,毒力略逊于菌株bbbj;海南省的菌株bbhn毒力最弱,其在试验最高浓度108个孢子/mL处理7 d后对草地贪夜蛾3龄幼虫的致死率低于50%。菌株bbbj的产孢量远高于另外2株菌株,并且其菌丝结构上着生大量芽生孢子簇,而且菌株bbbj菌体中的白僵菌素含量最高,培养5 d后,分别为菌株bbzj和bbhn的40.08倍和65.85倍。虽然补充白僵菌素可以提高菌株bbhn的毒力,但是草地贪夜蛾幼虫对白僵菌素敏感度不高。表明球孢白僵菌菌株bbbj对草地贪夜蛾幼虫有较高的毒杀活性,具有作为草地贪夜蛾生防菌株的潜力。     

武夷菌素产生菌阻断突变株的筛选及分析

以不吸水链霉菌武夷变种Streptomyces ahygroscopicus var.wuyiensis为出发菌株,分别用亚硝基胍、氯化锂、微波为单一诱变剂,亚硝基胍和氯化锂为复合诱变剂进行处理,从亚硝基胍处理的菌株中筛选到1株丧失抑菌活性且性状稳定的突变株N1。突变株孢子丝为长螺旋形,孢子呈椭圆形,与出发菌株相比,在形态上没有显著变化且产孢量无变化。突变株的抑菌活性发生了显著变化,对所有8种供试菌株均无抑制作用。HPLC结果显示与出发菌株不同,突变株中抗生素的特征峰消失。本研究为今后开展武夷菌素合成途径和生物合成基因研究奠定基础。     

一株分离自德国小蠊的贵州绿僵菌的鉴定及生物学特性

从安徽省宣城市麻姑山林场采集到自然罹病的德国小蠊僵虫，通过分离纯化获得一株绿僵菌RCEF6416，采用显微形态和分子生物学相结合方法将该菌株鉴定为贵州绿僵菌。本试验研究了在不同培养基、盐浓度、pH以及高温胁迫等条件下，该菌株的培养特征及产孢能力，以期为世界性卫生害虫德国小蠊的生物防治提供种质资源和理论依据。结果表明：该菌株在PPDA培养基上的生长速度较快，菌落直径平均日增量为4.94 mm/d，但在PDA培养基上产孢量最大，为5.1×10⁷孢子/cm²；在一定范围内，随着盐浓度增加菌落直径日增量增加，但是产孢量逐渐下降，且菌落逐渐产生白色菌丝圈；当pH为8时，菌株生长速度最快，产孢量最大；高温对菌株孢子萌发率影响很大，当水浴温度为45℃处理4 h后，其孢子萌发率仅为2.6%。     

紫花苜蓿根际芽胞杆菌YB-2的鉴定及其生防和促生能力分析

为获得对紫花苜蓿Medicago sativa生长有益的生防菌,以尖孢镰刀菌Fusarium oxysporum为指示菌从紫花苜蓿根际土壤中分离筛选拮抗菌株,基于形态学特征、生理生化特性和16S rDNA与gyrB基因序列分析对其进行鉴定,并评价其对紫花苜蓿根腐病的生防效果以及提高寄主植物耐盐碱胁迫的能力。结果表明,从紫花苜蓿根际土壤中筛选到1株对尖孢镰刀菌有较强拮抗作用的菌株YB-2,该菌株对尖孢镰刀菌菌丝生长的抑制率为71.37%;结合形态学特征、生理生化特性和16S rDNA与gyrB基因序列分析结果将菌株YB-2鉴定为枯草芽胞杆菌Bacillus subtilis。菌株YB-2具有溶解无机磷的能力,且具有产氰化氢、羧甲基纤维素酶、1-氨基环丙烷-1-羧酸脱氨酶、吲哚乙酸和嗜铁素的能力,在NaCl含量为1%～9%、pH 7～9条件下均能生长。菌株YB-2对紫花苜蓿根腐病的相对防效达56.83%;在盐碱条件下,与对照相比,接种YB-2的紫花苜蓿株高极显著增加了17.82%,根长显著增加了28.22%,地上部鲜重和地上部干重分别显著增加了51.12%和48.57%。表明菌株YB-2兼...