一株分离自德国小蠊的贵州绿僵菌的鉴定及生物学特性

从安徽省宣城市麻姑山林场采集到自然罹病的德国小蠊僵虫，通过分离纯化获得一株绿僵菌RCEF6416，采用显微形态和分子生物学相结合方法将该菌株鉴定为贵州绿僵菌。本试验研究了在不同培养基、盐浓度、pH以及高温胁迫等条件下，该菌株的培养特征及产孢能力，以期为世界性卫生害虫德国小蠊的生物防治提供种质资源和理论依据。结果表明：该菌株在PPDA培养基上的生长速度较快，菌落直径平均日增量为4.94 mm/d，但在PDA培养基上产孢量最大，为5.1×10⁷孢子/cm²；在一定范围内，随着盐浓度增加菌落直径日增量增加，但是产孢量逐渐下降，且菌落逐渐产生白色菌丝圈；当pH为8时，菌株生长速度最快，产孢量最大；高温对菌株孢子萌发率影响很大，当水浴温度为45℃处理4 h后，其孢子萌发率仅为2.6%。     

海洋生境棘孢木霉菌TCS007对植物的促生长及诱导抗逆作用

为研究海洋生境棘孢木霉菌Trichoderma asperellum TCS007对植物的促生长及诱导抗逆作用,以黄瓜和水稻为试材,评价菌株TCS007对植物种子萌发、幼苗和根系生长等生长量及其对叶绿素、可溶性糖和蛋白含量的影响,并在低温和高盐胁迫条件下,研究其对植株生长相关生理指标影响。结果表明:1 × 106 CFU/mL的TCS007孢子悬浮液可以显著促进黄瓜种子萌发,且处理后黄瓜幼苗的株鲜重、叶面积、根鲜重及根系活力分别提升13.53%、17.97%、66.67%和27.30%,总叶绿素、可溶性糖和可溶性蛋白含量分别增加22.75%、18.24%和8.60%;在5 ℃、10 ℃和15 ℃低温胁迫下,1 × 106 CFU/mL的TCS007孢子悬浮液显著提高了黄瓜叶片中过氧化物酶 (POD) 和超氧化物歧化酶 (SOD) 的活性,降低了丙二醛 (MDA) 含量和相对电导率 (REC);在0.1 mol/L的氯化钠 (高盐) 胁迫下,不同含量的TCS007孢子悬浮液均可显著缓解氯化钠对水稻幼苗的盐害作用,且随着孢子含量的增高,缓解效果越为明显,其中添加5% 1 × 106 CFU/mL TCS007孢子悬浮液的水稻幼苗POD、SOD和过氧化氢酶(CAT)活性均显著增加并能降低其REC。综上,棘孢木霉菌TCS007对植物具有良好的促生长效果和诱导抗逆作用,研究结果可为其开发成为新型生物农药提供理论依据。     

木霉对烟草黑胫病菌的拮抗机制

采用平板对峙法、水解酶平板活性测定、圆孔滤液法与游动孢子萌发检测、挥发性抑菌物检测等方法探讨木霉生防菌株对烟草疫霉Phytophthora nicotianae Brada de Hann的拮抗作用机制。结果表明,TR13、TR14、TR17对烟草疫霉有竞争、重寄生和抗生作用,但不同木霉菌株对烟草疫霉的拮抗作用有所不同,TR13、TR14的竞争作用较强;水解酶平板活性测定表明,3个木霉菌株均产生β-1,3-葡聚糖酶、纤维素酶,两种酶均参与烟草疫霉细胞壁的消解,以TR13与TR14酶的活性较高;3个菌株均产生非挥发性抗生素抑制烟草疫霉菌孢子萌发,但对疫霉菌菌丝的生长影响不大;TR13、TR14几乎不产生挥发性抗生素,TR17则产生挥发性抗生素,明显抑制疫霉菌生长。     

球孢白僵菌不同分离株的生物学特性的研究

为了明确不同白僵菌菌株的生物学特征,对15株白僵菌菌株的ITS片段进行测序分析,并对这些菌株的菌落生长速率、产孢量、孢子萌发率、单芽管孢子萌发比例、单芽管平均长度和长芽管平均长度等多项生物学指标进行测定。结果表明,单芽管孢子萌发比例变化范围在11．91％～96．03％;单芽管平均长度和双芽管平均长度分别为6．28-21．43μm和10．338～19．902μm;各菌株间孢子萌发率差异很大,变化范围22．09％-86．32％。对菌株的培养特性（孢子萌发率、产孢量和菌落生长速率）与孢子萌发特性（单芽管孢子萌发比例、芽管总平均长度和芽管整齐度）这两个主因子进行典型相关分析,两性状集团总体相关不显著（P=0．341）,而孢子萌发率与单芽管孢子萌发比例相关显著,菌落生长速率与芽管总平均长度呈显著相关。     

绿色木霉TR-8菌株对尖镰孢的拮抗机制

对绿色木霉TR-8菌株抑制尖镰孢的拮抗机制进行了研究。平板对峙培养结果表明，绿色木霉生长快于尖镰孢FO-G1，接触后FO-G1生长停止，TR-8继续生长，覆盖FO-G1的菌落并大量产孢，但不形成抑菌圈。观察了TR-8对FO-G1的重寄生现象，TR-8菌丝首先向FO-G1趋性生长，然后紧贴FO-G1菌丝平行生长或穿入菌丝生长，最后FO-G1菌丝瓦解。在扫描电镜下可以看到FO-G1菌丝原生质凝结，菌丝上有孔洞出现。发酵7d，TR-8发酵液中β-1，3-葡聚糖酶的活性为20．15U／ml，几丁质酶的活性为11．67U。发酵原液对FO-G1菌丝生长和孢子萌发均无抑制作用，但TR-8的挥发性分泌物对病菌孢子萌发具有一定的抑制作用。含有TR-8分泌物的培养基对病菌孢子萌发有很强的抑制作用，抑制率高达75．06％。     

木霉耐盐突变菌株的紫外诱变选育

为了获得高效耐盐木霉突变菌株，以盐碱土中分离的一株深绿木霉T-YM作为原始菌株进行紫外诱变处理，并筛选了突变菌株的最佳诱变条件，利用NaCl溶液模拟盐胁迫条件测定了突变菌株耐盐指标生长速率、产孢量和菌丝生长量。结果表明，与对照(野生型菌株)相比，当诱变时间为3 min时能够显著提高深绿木霉T-YM突变菌株菌落生长速度和产孢量，分别增加17.69%和28.82%；诱变时间为0.5 min和5 min时能够显著提高突变菌株菌丝生长量，分别增加42.22%和46.67%。利用10 mg·mL^-1 NaCl溶液模拟盐胁迫条件时，与对照相比突变菌株菌落生长速度、产孢量和菌丝干重整体高于野生型菌株，尤其当诱变时间为3 min时，不同浓度盐胁迫下其产孢量平均增加51.18%，诱变时间为0.5 min时其菌丝干重平均增加23.65%；NaCl胁迫(10 mg·mL^-1)下，诱变处理0.5 min获得的正突变菌株经传代接种培养后其耐盐性较为稳定。因此，紫外诱变可作为一种选育高效耐盐木霉突变菌株的有效方法。     

棘孢木霉菌鉴定及其对花生白绢病生防机制的研究

为了利用生防菌有效防控花生白绢病Sclerotium rolfsii,本研究采用稀释培养法从花生根际土中分离木霉菌,采用平板对峙法和盆栽试验筛选对花生白绢病具有高效生防效果的菌株并测定其生防机制,通过形态学、分子生物学技术和环境因子对发育的影响确定生防菌株的分类地位及生物学特性。结果表明,从分离的132株木霉菌中筛选出1株对齐整小核菌S. rolfsii 具有高效抑菌效果的菌株GH-20,抑菌率达89.93%,将其鉴定为棘孢木霉菌Trichoderma asperellum。对峙培养时,菌株GH-20对齐整小核菌的拮抗指数达Ⅰ级,当其菌落覆盖病原菌菌落后,其菌丝缠绕和侵入病原菌菌丝,并使病原菌菌丝体逐渐消解、减少,导致病原菌不能产生菌核;菌株GH-20产生的挥发性代谢产物（volatile gas,VOG）和非挥发性代谢产物（non-VOG）对病原菌的抑菌率分别为59.95%和79.49%。盆栽试验结果表明,同时接种菌株GH-20和齐整小核菌对花生白绢病生防效果最好,为79.64%。另外,该菌株具有在以果糖为碳源,以酵母膏为氮源和pH 7的条件下生长发育较好,光照有利于生长而光暗交替有利于孢子形成等生物学特性。生防机制研究结果显示,棘孢木霉菌GH-20主要通过竞争、重寄生作用和产生拮抗物质抑制和消解齐整小核菌,从而起到防病效果。     

N~＋注入选育高毒力球孢白僵菌菌株及对3种油茶害虫的毒力测定

以低能氮离子注入（N＋）作为诱变手段对球孢白僵菌进行诱变,并对3种油茶主要害虫进行了毒力测试。结果表明：不同剂量的氮离子注入后白僵菌存活率呈＂马鞍曲线＂,其峰值即150×1013ions.cm-2为诱变最佳剂量。氮离子注入对白僵菌的菌落形态、产孢量、孢子萌发率等生长特性均有影响,通过产孢量、Pr1蛋白酶活和几丁质酶活指标筛选我们得到3株优良菌株,其中BbⅢ22菌株的Pr1蛋白酶活和几丁质酶活分别达0.230、0.137（OD值）,为出发菌株的近2倍水平。BbⅢ22菌株对油茶叶蜂、油茶毒蛾有较强的致病力,在孢子浓度为107孢子.mL-1时,致死率达到了80%以上,而对油茶象甲的致死率相对较弱为60%左右。对油茶叶蜂、油茶毒蛾和油茶象甲的LD50对数浓度分别为5.2960、5.6347、6.3555。     

拮抗尖孢镰刀茵的木霉菌筛选方法评估

利用11株不同木霉菌株分别比较对峙培养法、病原菌存活率测定法、生防菌分泌物降解病原菌测定法、浸种抑菌萌发试验法及种苗接种活体筛选法对抑制黄瓜枯萎病尖孢镰刀菌Fusariumoxysporum的拮抗木霉菌的筛选效率。试验表明不同的筛选方法获得拮抗木霉菌菌株的结果差异较大,其中病原菌存活率测定法与种苗活体接种筛选法结果一致性较高,可推荐作为生防木霉菌株初筛的有效方法。     

桃小食心虫病原菌—球孢白僵菌TST05菌株生物学特性研究

[目的]研究从自然染病的桃小食心虫幼虫上分离的球孢白僵菌TST05菌株的生物学特性.[方法]测定不同培养基、外界不同温度和湿度对该菌株菌丝营养生长及孢子萌发的影响.[结果]该菌株在PDA、PPDA、SDAY、SMAY 4种培养基上均生长良好,菌落厚而致密,产孢量均大于3.95×107孢子/mL;菌株适应的温度和湿度范围宽,15～30℃之间,RH 30 ％～100％之间孢子均可萌发、生长和产孢.随着温度接近25℃、湿度增大,孢子的萌发率、菌落的生长速率和产孢量都显著增加.15℃、RH 100％时产孢量为1.32× 107孢子/mL;25℃、RH 30％时,产孢量也能达到1.37×107孢子/mL;25℃、RH 100％时产孢量达到6.19×107孢子/mL.15℃、RH 100％孢子萌发率为52.28％;25℃、RH＞80％时,孢子萌发率都能达到90％以上.[结论]TST05菌株能适应北方干旱低温条件,可开发成为防治桃小食心虫的生物制剂.     

甜荞资源萌发期耐旱性鉴定体系建立与种质筛选

为了探索荞麦萌发期耐旱性鉴定胁迫浓度与鉴定指标,建立甜荞萌发期耐旱性鉴定体系,筛选优异种质资源,以80份不同来源的甜荞种质资源为材料,通过设置不同的PEG6000胁迫浓度(10%、20%、25%和30%),研究了不同干旱胁迫对甜荞种子萌发和生长的影响。结果表明:低浓度胁迫(10%PEG6000)对甜荞种子的萌发率和根的生长影响较小,萌发抗旱指数变幅为80.92%～109.31%,对部分品种具有一定的促进作用;随着PEG6000高渗溶液浓度的升高,种子萌发率、萌发抗旱指数、株高和根长等各项指标呈下降趋势,20%PEG6000溶液胁迫下,萌发抗旱指数为50.82%～101.62%,在25%PEG6000溶液胁迫下各品种的萌发抗旱指数均在50%以下,当浓度达到30%时,萌发抗旱指数均在5%以下,显著抑制了种子的萌发,20%PEG6000溶液为荞麦萌发期耐旱性鉴定的适宜浓度;种子的相对发芽率、萌发抗旱指数、相对根长指数和根长胁迫指数4个指标与甜荞耐旱性等显著相关,相关系数分别为-0.92、-0.94、-0.85和0.85,可作为甜荞萌发期耐旱性鉴定的有效指标;通过对80份甜荞种质资源进行耐旱性鉴定,共筛选到耐旱性极强的种质资源3份(3.75%),耐旱型种质13份(16.25%),耐旱性较弱种质33份(41.25%),敏感型种质31份(38.75%)。     

玫烟色棒束孢FZ-01鉴定及对烟粉虱的防治潜力评估

为了明确从罹病烟粉虱Bemisia tabaci上分离的虫生真菌（菌株FZ-01）的分类归属及其生物防治的潜力，采用形态学特征观察和rDNA-ITS序列分析方法对该菌株进行鉴定，并对其生物防治潜力进行评估。结果发现：菌株FZ-01为玫烟色棒束孢Isaria fumosorosea；该菌株在马铃薯PDA培养基上生长良好；适应温度和酸碱度范围较广，可耐高温（35℃）和酸碱（pH4～10）；孢子萌发速率快（5 h）且萌发率高（>90%）；菌株致病力测定表明分生孢子浓度为1.0×10⁷ cfu/mL时，对烟粉虱（MEAM1）成虫致死中时间（LT₅₀）仅为2.75 d，接菌4 d时致死中浓度（LC₅₀）仅为2.69×10⁴ cfu/mL。综上结果表明，玫烟色棒束孢FZ-01对烟粉虱具有十分优良的生防潜力。     

80份紫花苜蓿引进品种萌发期耐盐性评价

通过室内萌发试验,以80份引进紫花苜蓿主推品种为材料,研究1.2% NaCl处理对紫花苜蓿萌发期根长、芽长、发芽指数、发芽率、发芽势、活力指数及根芽比的影响。采用主成分分析、隶属函数及聚类分析相结合的方法,对紫花苜蓿萌发期的耐盐性开展综合性评价。结果表明：盐胁迫极显著影响紫花苜蓿的发芽势、发芽率和发芽指数（P<0.01）,不同品种间的变异系数介于0.008～0.723。两个主成分的累计贡献率为73.922%。发芽势与根芽比可作为紫花苜蓿萌发期耐盐性筛选的主要评价指标。聚类分析结果将80份紫花苜蓿品种划分为5个级别,其中强耐盐级别包括9份品种;较强耐盐级别包括14份品种;中等耐盐级别包括43份品种;弱耐盐级别包括13份品种;最弱耐盐级别包括1份品种。在此基础上,筛选出萌发期强耐盐级别紫花苜蓿品种为：WL168HQ、游客、天马、迪特、巨能801和巨能995。     

Eco-physiological studies on desert plants: germination of Halothamnus iraqensis Botsch. seeds under different conditions

With the aim to investigate if the halophyte Halothamnus iraqensis Botsch. can be suitable for re-vegetation and remediation of salt-affected lands, this study evaluated(1) the effects of photoperiod, thermoperiod, storage period and wings' presence on its seed germination, and(2) the ability of its seeds to have successful germination recovery after salt stress. Germination tests in different photoperiods(12 h light/12 h darkness and total darkness) and thermoperiods(15℃/20℃ and 20℃/25℃) were conducted for seeds collected in 2012, 2013, 2014, 2015 and 2016. The seeds collected in 2016 were sown under different salinity levels(0, 100, 200, 400 and 600 m M Na Cl) to assess the salinity tolerance during the germination. Wings' presence highly inhibited seed germination of this species in both photoperiods and thermoperiods under all salinity level treatments. In addition, the germination recovery occurred well when seeds were deprived of their wings. The photoperiod of 12 h light/12 h darkness and the thermoperiod of 15℃/20℃ were the best conditions for seed germination. Germination percentages of H. iraqensis seeds decreased with the increasing storage duration, especially after three years of the collection. In addition, H. iraqensis seeds were able to germinate under different salinity levels, and their germination percentages decreased with increasing salinity levels. H. iraqensis seeds have the ability to recover their germination after alleviating the salt stress, irrespective of photoperiod, highlighting the halophilous character of this species.     

长枝木霉T6生防菌剂发酵条件优化及其对辣椒立枯病的防治效果

为优化拮抗菌长枝木霉Trichoderma longibrachiatum T6生防菌剂的固体发酵条件，本研究以生产中的废弃物草炭、蛭石、牛粪为主要培养基成分，采用单因素试验和响应面法，对长枝木霉T6生防菌剂在不同发酵条件下的产孢量进行测定并优化，分析了含水量、接种量、透气性等因子对该菌株生长的影响，并通过盆栽试验研究了该木霉菌剂对辣椒植株生长的影响及其对辣椒立枯病防治效果。单因素试验表明：长枝木霉T6生防菌剂产孢量的最优发酵条件为含水量60%、接种量30%、透气性9层纱布、温度28℃、pH 5.6，通过试验分析，并确定含水量、接种量、透气性为影响产孢量的3个重要因素；响应面分析得到最佳发酵条件：含水量64%、接种量27%、透气性9层纱布，在此优化条件下产孢量高达8.4×10⁸ cfu/g。从促生效果来看，土壤与木霉菌剂50：1的处理表现出较强的促生作用，与对照1（不施任何肥料）相比，其株高、地上鲜重、根系鲜重、基部茎粗、根系长度的相对增长率分别为54.90%、82.46%、89.19%、56.41%和46.62%；盆栽试验表现为施入木霉菌剂的辣椒粗壮、高大，叶片深绿，根系发达。在病害防治试验中发现，长枝木霉T6生防菌剂对辣椒立枯病具有良好的防治效果，可有效控制病害的蔓延，防效达到54.8%，与化学农药多菌灵相比，相对防效提高了12.5%。     

芥菜型油菜资源品质与萌发期模拟干旱抗性的评价及其相关性分析

为研究不同芥菜型油菜种质萌发期耐旱性，探索油菜籽脂肪酸与萌发期耐旱性的关系，便于耐旱种质的筛选，采用PEG-6000模拟中度及重度干旱胁迫，对193份芥菜型油菜萌发期的耐旱性及其与品质性状的相关性进行研究。结果表明，参试材料的脂肪酸组成变异丰富，尤其是芥酸、花生烯酸和油酸变异系数均超过50%；中度及重度干旱胁迫均能显著影响油菜萌发，重度干旱胁迫条件下参试材料相对发芽率差异更大，变异系数为81.66%~112.88%；芥菜型油菜萌发期耐旱性普遍较高，两种不同程度干旱胁迫条件下的材料耐旱性呈极显著正相关，相关系数约为0.35~0.56；芥菜型油菜耐旱性与脂肪酸含量及脂肪酸组成均相关，尤其是脂肪酸组成，高含量的超长链脂肪酸及低含量的长链脂肪酸有利于芥菜型油菜萌发期对干旱的适应。采用连锁聚类分析综合评价两种不同胁迫条件下材料的耐旱性表现，筛选出20个综合耐旱性强的芥菜型油菜品种（系），其中仅有3份为低芥材料，超过80%的材料芥酸含量大于25%。     

苜蓿轮枝菌的生物学特性分析及ATMT遗传转化体系的建立

 为了揭示苜蓿轮枝菌Verticillium alfalfae的生物学特性及其致病机理,在室内条件下测定不同温度、pH值、碳源和氮源对菌株Ms198的生长速率和产孢量的影响,同时利用农杆菌转化法(Agrobactirium tumfacience-mediated transformant,ATMT)将带有潮霉素(Hygromycin,Hyg)抗性标记和绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)报告基因的双元载体转入苜蓿轮枝菌的分生孢子,获得147株阳性转化子,以野生型菌株为对照,对挑取的15株阳性转化子的菌落形态、生长速率、产孢量、孢子萌发率、粗毒素分泌量和致病力进行研究。结果表明,苜蓿轮枝菌具有较宽的温度和酸碱度适应范围,最适生长和产孢温度分别为25 ℃和20 ℃,最适生长pH值为6 ~ 9,最适产孢pH值为9。可以利用多种碳、氮源,最适生长的碳、氮源分别为可溶性淀粉和牛肉膏,最适产孢的碳、氮源分别为D-牛乳糖和胰蛋白胨。与野生型菌株相比,15株供试转化子中有66.67%的转化子在菌落形态方面与野生型菌株无明显差别,而其生长速率、产孢量和孢子萌发率均有不同程度的降低。在产毒能力和致病力方面,1株转化子的粗毒素分泌量显著高于野生型菌株,9株显著低于野生型菌株,其余5株与野生型菌株无显著差异;4株转化子的致病力显著低于野生型菌株,其余11株转化子的致病力与野生型菌株均无显著差异。研究结果表明,转化子的生物学特性以及产毒能力和致病力,随外源基因插入位点的随机性而有所变化。