感染桃拉综合症病毒的凡纳滨对虾体内4 种同工酶酶谱的变化

采用聚丙烯酰胺凝胶垂直平板电泳法，对凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei）成体的复眼、肝脏、心脏、鳃和肌肉等5种组织中的酸性磷酸酶（ACP）、碱性磷酸酶（AKP）、酯酶（EST）和过氧化物酶（POD）4种同工酶进行研究，并将健康虾与感染桃拉综合症病毒（TSV）病虾的同工酶酶谱进行比较。结果表明，这4种同工酶在凡纳滨对虾体内的不同组织均有分布，但在酶活性和条带数量上存在不同程度的组织特异性，其中4种同工酶均在肝脏组织中表达最强，ACP和POD在肌肉中、EST在复眼中表达最弱，AKP在复眼中不表达。感染TSV后，病虾的ACP和AKP均出现酶带数量减少和酶活性降低，如病虾的ACP酶谱在肝脏、心脏和鳃中缺失的酶带数分别为2、1和1条，酶活性也呈现下降；AKP酶谱在肝脏、心脏和肌肉中缺失的酶带数分别为3、4和3条，且酶活性均明显降低；而病虾的EST和POD表达的酶带数和酶活性却均有明显增加，尤其是在肝脏和心脏中，EST分别新增3条和5条酶带，POD各新增1条酶带。总之这4种同工酶的表型在健康虾和病虾之间存在着明显的差异，尤其是在肝脏中的变化最为明显，说明肝脏中这4种同工酶的特异性变化可以作为研究凡纳滨对虾桃拉综合症的生理生化指标。     

左旋咪唑对罗氏沼虾免疫功能及抗病力的影响

以0(对照)、50、100和150 mg/kg饲料的剂量将左旋咪唑(LMS)添加于基础饲料中制成颗粒饲料投喂罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)14 d,采样测定了罗氏沼虾血细胞吞噬活性、血清酚氧化酶(PO)、溶菌酶(LSZ)及超氧化物岐化酶(SOD)活性,并以6×105cells/mL浓度的致病性嗜水气单胞菌(Aerom onas hydrophila)对罗氏沼虾进行肌肉注射(20μL/尾),记录接种7 d后罗氏沼虾的累积死亡率。结果表明,3个LMS处理组的罗氏沼虾血细胞吞噬百分比和吞噬指数、血清PO、LSZ及SOD活性均显著地高于对照组(P<0.05);LMS处理组的罗氏沼虾对嗜水气单胞菌的抵抗力明显增强。因此,饲喂适量的LMS能促进罗氏沼虾的免疫力和抗病力;在本试验条件下,100 mg/kg饲料的剂量为最适添加剂量。     

盐度对凡纳滨对虾血细胞吞噬与免疫相关因子基因表达的影响

在水温27～29℃下,将平均体长7.01 cm的凡纳滨对虾Litopenaeus vannamei饲养在730 mm×530 mm×450 mm的水族箱中,每箱30只,盐度6、18和30,每个盐度组3个平行,饲养6周,探讨盐度对凡纳滨对虾血细胞吞噬与免疫相关因子基因表达的影响。结果表明:盐度30和18组凡纳滨对虾血细胞吞噬活性显著高于盐度6组对虾(P0.05),盐度18组血细胞吞噬活性最高。30和18盐度组凡纳滨对虾肝胰腺中Toll样受体(TLR)、免疫缺陷基因(immune deficiency,IMD)、酚氧化酶(PO)、过氧化氢酶(CAT)及溶菌酶(LZM)基因表达水平显著高于盐度6组(P0.05);18盐度组凡纳滨对虾血细胞中TLR、IMD、PO、SOD及LZM基因表达显著高于6盐度组(P0.05);盐度30组对虾的TLR基因表达水平显著高于盐度18组(P0.05),而盐度30组对虾的PO和CAT基因表达水平显著低于盐度18组(P0.05);其他免疫因子基因的表达水平没有显著性差异。综上,环境中盐度的变化可能通过影响凡纳滨对虾各组织的抗氧化能力、溶菌活性、识别能力和血细胞吞噬活性等,调控凡纳滨对虾细胞和体液免疫。     

大弹涂鱼急性镉中毒对脾脏4种同工酶表达的影响

用聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳法研究了镉对大弹涂鱼(Boleophthalmus pectinirostris)脾脏的酯酶(EST)、过氧化物酶(POD)、苹果酸脱氢酶(MDH)和超氧化物歧化酶(SOD)表达的影响。结果表明,在急性中毒条件下,与空白对照组相比,25、50和75mg／L 3个处理组的4种同工酶均有特异性酶带出现,各种酶活性也有显著变化。本文探讨了急性镉中毒对大弹涂鱼脾脏4种同工酶表达的影响,以及大弹涂鱼脾脏的同工酶标记用作海洋环境生态毒理学指标的可行性。     

家蝇抗菌肽对凡纳滨对虾生长性能及免疫相关指标的影响

通过8周的生长实验研究了饲料中添加家蝇幼虫抗菌肽提取物对初始体质量为(0.86±0.01)g的凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)的生长性能、体成分及免疫相关指标的影响。家蝇抗菌肽提取物添加量分别为0、1000mg/kg、2000mg/kg、3000mg/kg、4000mg/kg、5000mg/kg,每组饲料设4个重复,每个重复饲养40尾虾。结果显示,在一定添加水平范围内,家蝇抗菌肽能显著提高凡纳滨对虾成活率、增重率、特定生长率、饲料效率(P0.05),当抗菌肽提取物添加量为2000～3000mg/kg时,以上4个指标均达最高,且显著高于对照组(P0.05)。以增重率为评价指标,凡纳滨对虾饲料中家蝇抗菌肽提取物的最适添加量为2900mg/kg。当抗菌肽提取物添加量为2000～3000mg/kg时能显著提高虾体的粗蛋白和灰分含量,虾体粗脂肪不受添加抗菌肽水平的显著影响。添加2000～5000mg/kg抗菌肽提取物组与对照组相比能显著提高对虾血细胞数量;添加3000mg/kg抗菌肽提取物时对虾血细胞吞噬率最高。当抗菌肽提取物添加量为2000～3000mg/kg时,对虾血清中酚氧化酶PO、过氧化物酶POD、碱性磷酸酶AKP、溶菌酶LZM的活性和总抗氧化能力T-AOC均维持在一个较高的水平,且显著高于对照组;超氧化物歧化酶SOD的活性在各组组间差异不显著(P0.05)。肝胰腺中AKP、SOD、T-AOC活性各组间差异均不显著(P0.05);LZM活性以3000mg/kg组最高,显著高于其他组。结果表明,饲料中添加适量的家蝇抗菌肽对凡纳滨对虾有一定的促生长作用,并能提高对虾的免疫相关指标。     

对虾弧菌病的同工酶分析

本文通过肌肉注射感染方法,分别对感染非01群霍乱弧菌、溶藻弧菌和副溶学弧菌的病虾组织进行了同工酶电泳分析。结果表明:乳酸脱氢同工酶(LDH)和苹果酸脱氢同工酶(MOH)在健康虾与病虾间无明显差异。脂酶(EST)在肝胰腺中表达最明显,病虾酶活性下降。超氧化物歧化酶(SOD)在肌肉组织显示较明显,病虾该酶活性显著提高,是对虾体内免疫系统应激反应的表现。     

鄱阳湖日本沼虾幼体发育及其同工酶研究

对鄱阳湖日本沼虾(Macrobrachiumnipponensis)幼体发育的5个阶段即Z0、Z1、Z3、Z5～Z6及Z9～Z11期进行观察,分析乳酸脱氢酶(LDH)、酯酶(EST)、苹果酸脱氢酶(MDH)同工酶谱带变化。结果表明,各期间幼体形态均有明显变化,幼体蜕皮次数随发育快慢不同,发育快的需9次蜕皮完成变态发育过程,慢的则需14次;LDH酶谱在5个发育阶段各有5条带,仅酶活性有强弱变化;EST酶谱不仅条带数从2条增加到9条,酶活性也有明显变化,EST1和EST3在5个阶段都出现,且酶活性逐渐升高;MDH酶谱共出现6条带,MDH1和MDH4分布延伸时间跨度大,酶活性高,可看作主带。因此日本沼虾变态发育过程中同工酶谱带随变态发育而变化,反映了不同组织器官细胞组成和不同组织中不同同工酶的活性和出现顺序,可作为鉴别种属特异性和发育阶段特异性的一项生化指标。     

脂多糖、多巴胺与蛋白激酶抑制剂联合作用对凡纳滨对虾血细胞吞噬率、胞吐酚氧化酶活力的影响

研究了脂多糖(LPS)、多巴胺(DA)对凡纳滨对虾血细胞吞噬、胞吐及信号通路的影响。结果表明,LPS、DA对凡纳滨对虾血细胞数量、吞噬率和胞吐酚氧化酶活力影响显著(P<0.05),LPS、DA与血细胞孵育30min后,高浓度(1～10mg/L或μmol/L)处理组对虾血细胞数量均随作用浓度增大而明显下降,胞吐酚氧化酶活力则显著升高,LPS处理组对虾血细胞吞噬率显著升高,而DA处理组对虾血细胞吞噬率则表现出明显的下降趋势。同时在LPS作用下,分别加入蛋白激酶C(PKC)、酪氨酸蛋白激酶(TPK)抑制剂chelerythrine、genistein后,凡纳滨对虾血细胞吞噬和胞吐作用均受到明显的抑制作用,抑制剂对吞噬的抑制效果为genistein>chelerythrine,对胞吐的抑制效果则为chelerythrine>genistein;在DA作用下,加入蛋白激酶A(PKA)抑制剂H-89后,血细胞吞噬作用得到增强,但对胞吐作用无明显影响,chelerythrine、genistein均抑制对虾血细胞的胞吐作用,抑制剂的作用效果为chelerythrine>genistein,两种抑制剂对吞噬均无显著影响。     

低聚木糖对凡纳滨对虾生长、体组成和非特异免疫的影响

采用单因子试验设计在凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)基础日粮中添加不同浓度的低聚木糖,分别为0(对照组)、0.01%、0.03%、0.05%,共4个处理,每个处理3个重复,饲养56 d,研究了低聚木糖对凡纳滨对虾生长性能、体组成和非特异免疫的影响。结果显示:低聚木糖对对虾末重、增重率和特定生长率均无显著影响(P>0.05),但试验组对虾末重、增重率和特定生长率均高于对照组,试验组饵料系数均较对照组下降,其中0.03%组饵料系数显著低于对照组(P<0.05),试验组饲料效率较对照组均有提高,其中0.03%组获得显著提高(P<0.05);血清免疫指标过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)、溶菌酶(LSZ)和酚氧化酶(PO)活力试验组均较对照组有所增加,分别提高了1.27%~5.16%(P>0.05)、0.17%~8.93%(P>0.05)、9.24%~12.61%(P>0.05)和4.17%~66.67%(P<0.05),血清蛋白含量增加了9.72%~39.64%(P<0.05);试验组体蛋白含量较对照组升高,其中0.01%组虾体蛋白质含量最高,且显著高于空白组(P<0.05)。在凡纳滨对虾料中添加低聚木糖有促进生长、降低饵料系数和提高饲料效率的趋势,并提高对虾非特异免疫力的趋势,对对虾体组成除蛋白质外没有显著影响。     

美国金鳟的同工酶分析

本实验运用聚丙烯酰胺凝胶电泳法对养殖型美国金鳟眼(E)、心(H)、肾(K)、肝(L)、肌肉(M)五种组织的乙醇脱氢酶(ADH)、酯酶(EST)、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G-6- PDH)、谷氨酸脱氢酶(GDH)、乳酸脱氢酶(LDH)、苹果酸脱氢酶(MDH)和过氧化物酶(POD)等7种同工酶进行电泳研究。结果显示：美国金鳟中ADH、EST、G-6-PDH、GDH、LDH、MDH、POD、SOD 7种同工酶都有不同程度的组织特异性；美国金鳟群体同工酶分析共记录18个基因座位,其中有8个基因座位为多态,等位基因总数为26个,从而得出多态座位百分数P为44．44％,位点有效等位基因数Ne=1．4444,表明美国金鳟群体遗传多样性偏高。     

不同养殖措施防治对虾暴发性流行病效果的初步研究

利用水泥池、土池及不同水处理方法等不同措施养殖对虾，研究养殖升旗与对虾暴发性病毒发生的关系，探讨合理养殖模式。试验结果表明，利用水泥池、沙滤水、封闭式循环水养殖和使用防病药物等措施对防治暴发性疾病都有一定的效果；使用优质饵料强化对虾体质，合理使用防病药物及水质净化剂，优化养殖生态环境对增强对虾抗病能力有效；虾池内放养部分肉食性鱼类能延缓对虾发病时间。     

中国对虾病虾体内同工酶表型变化的初步研究

应用对流免疫电泳及核酸探针检测技术筛选感染病毒的中国对虾（Ｐｅｎａｅｕｓｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）病虾,采用不连续的聚丙烯酰胺凝胶电泳研究病虾体内同工酶的表型变化。用分光光度仪对电泳带扫描分析表明,病虾体内４种同工酶—酯酶（ＥＳＴ）、苹果酸脱氢酶（ＭＤＨ）、谷草转氨酶（ＧＯＴ）、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）的表型与健康虾比较存在显著差异。其中,ＭＤＨ、ＥＳＴ、ＧＯＴ的变化分别反映病虾体内糖类、脂类、氨基酸等３大物质代谢明显紊乱,ＳＯＤ活性下降,显示病虾免疫防御机能明显衰退。对虾体内同工酶表型变化规律稳定,重复性好,可作为对虾病害检测与诊断的生理生化指标     

Effects of biological water purification grid on microbial community of culture environment and intestine of the shrimp Litopenaeus vannamei

Biological water purification grid (BWPG), a type of biofilm, could increase aquaculture production by improving the growth of shrimp and culture environment. In this study, the microbial community composition and diversity of water, sediment and shrimp intestine were analysed using the Illumina Miseq high‐throughput sequencing technique. Installation of BWPG did not only increase the dissolved oxygen, pH and decreased inorganic nutrients, but also increased shrimp body length by 5.39% and weight by 16.35%. Furthermore, it was found that the microbial community diversity of water and shrimp intestine in test pond with BWPG was higher than that of control pond without BWPG. Cyanobacteria, Bacillus and Lactococcus were enriched in the test pond with BWPG. However, Rhodobacter was mainly identified in the test pond. It thus seems to suggest that the application of BWPG in shrimp culture pond enhanced the microbial species richness, types of species and proportion of beneficial bacteria in culture environment as well as shrimp intestine. The results from this study will therefore provide some scientific basis for the improvement and development of shrimp aquaculture.     

枯草芽孢杆菌B7的分离和净化水质的初步研究

对水产养殖水体及底泥中的芽孢杆菌进行分离,得到四株芽孢杆菌。筛选各项指标较好的B7,研究其对水质的净化作用。结果表明,添加枯草芽孢杆菌后,池水的氨氮和亚硝酸盐浓度比对照池显著降低,即枯草芽孢杆菌B7对水质具有明显的净化作用。     

一株芽孢杆菌的分离鉴定及在生物絮团对虾养殖中的应用

从对虾养殖池中分离到1株细菌(编号2013042402,简称菌株02),分别用16S rDNA序列比对法和细菌全细胞脂肪酸气相色谱法对该菌进行鉴定.结果显示,菌株02为芽孢杆菌(Bacillus sp.).为探讨该芽孢杆菌在生物絮团对虾养殖中的使用效果,实验分别设置加菌加糖组(菌株02的量为2.0× 104 CFU/ml,蔗糖量为饵料的70％)、加菌组、加糖组(生物絮团组)及空白对照组,研究了菌株02对养殖水质(温度、盐度、溶氧、pH、氨氮及亚硝酸氮)、对虾存活率及水体中主要菌群组成等指标的影响.结果显示,加菌加糖组能显著降低养殖水体中的氨氮和亚硝酸氮浓度,提高对虾存活率.生物絮团对虾养殖系统中添加菌株02,能够改善菌群结构,抑制弧菌生长.研究结果可为生物絮团对虾养殖中定向培养有益微生物提供技术支持.     

强降雨对粤西凡纳滨对虾养殖池塘微生物群落的影响

于强台风"莫拉菲"环流云系带来的持续强降雨天气前后(2009年7月14日和7月28日),对广东省茂名市电白县凡纳滨对虾半集约化养殖土池的水样和泥样进行调查,研究施用微生态制剂和未施用微生态制剂的虾池水体及底泥中的异养细菌、弧菌和芽孢杆菌的变化情况,并利用BIOLOGECO微板对水体和底泥的微生物群落代谢变化进行探讨。结果发现,定期施用微生态制剂的虾池水体和底泥中的细菌数量和微生物群落功能在强降雨前后基本保持稳定;未施用微生态制剂的虾池在强降雨后,水体的弧菌数升高,Simpson指数和McIntosh指数显著降低(P0.05),水体和底泥微生物群落对碳源的利用率变化明显。研究结果表明,与施用微生态制剂的虾池相比较,未施用微生态制剂的虾池在强降雨后,水体及沉积物环境波动变化明显,强降雨对其水域环境产生很大的影响。因此建议在对虾养殖过程中定期施用微生态制剂,并针对恶劣天气采取有效措施,以稳定虾池水体及沉积物的微生物生态。     

3种微生态制剂对养殖水体水质影响的比较研究

对3种微生态制剂改善河蟹养殖池水质的效果进行分析比较。实验组各池中分别加入超浓缩光合细菌(PSB)、西菲利活菌生物净水剂、活菌净水剂以及3种微生态制剂组成的混合制剂。观察氨态氮、亚硝态氮、硫化氢、溶解氧、化学耗氧量、pH及异养菌总数等水质指标。结果表明:3种微生态制剂均能改善水质,抑制异养菌的过度增长,但对水质指标的改善各有侧重,混合制剂优于单一制剂。     

生物絮团对罗氏沼虾体组成和消化酶活性的影响

通过向养殖水体中泼洒糖蜜构建生物絮团养殖模式,分析生物絮团营养组成,并探讨生物絮团对罗氏沼虾体组成和消化酶活性的影响。试验分对照组和试验组(生物絮团组),其中试验组在养殖过程中泼洒糖蜜。试验在室内水泥池内(2 m×2 m×0.6 m)进行,每个处理有3个重复,每个重复225尾虾(0.26 g±0.02 g),试验周期为90 d。养殖过程中不换水,糖蜜的泼洒量根据饲料投喂量进行计算(C/N为20)。结果显示:添加糖蜜能够显著促进生物絮团的形成,到第90天时,试验组的絮团体积达21.22 mL/L;而对照组为6.03 mL/L;试验组絮团粗蛋白含量为29.47%,粗脂肪含量为4.32%,二者均显著高于对照组,而粗灰分含量为11.36%,显著低于对照组;泼洒糖蜜对罗氏沼虾体组成的影响不显著,对照组和试验组肌肉粗蛋白含量分别为21.09%和21.20%,粗脂肪含量分别为2.91%和3.06%;另外,向水体中泼洒糖蜜对罗氏沼虾消化酶活性影响显著。试验组罗氏沼虾肠脂肪酶活性、胃脂肪酶活性和胰脂肪酶活性均显著高于对照组;试验组罗氏沼虾糜蛋白酶活性、胰蛋白酶活性也均显著高于对照组。但泼洒糖蜜对肠淀粉酶、胃蛋白酶、胃淀粉酶、胰淀粉酶和纤维素酶活性没有显著影响。试验表明,生物絮团营养组成丰富,能够有效提高消化酶活性。     

强壮藻钩虾对中国明对虾与日本囊对虾生长和抗病力的影响

以强壮藻钩虾(以下简称钩虾)作为中国明对虾和日本囊对虾的天然饵料,以对虾人工配合饲料为对照研究钩虾对中国明对虾和日本囊对虾生长和抗病力的影响。对两种规格的中国明对虾[体质量分别为(0.33±0.0204)g和(2.07±0.184)g,分别记为SF组和MF组]和日本囊对虾[体质量为(0.25±0.018 1)g,记为SM组]分别投喂人工配合饲料和钩虾,养殖35 d。结果显示:(1)与人工配合饲料相比钩虾可以提高MF组和SM组对虾的特定生长率和SM组对虾的成活率;(2)钩虾可以显著提高SF组和SM组对虾血细胞总数(P<0.05);(3)钩虾可以显著提高3组对虾血清总蛋白含量(P<0.05)及SF组和SM组血蓝蛋白含量(P<0.05);(4)钩虾可以显著提高日本囊对虾溶菌酶活力(P<0.05);(5)钩虾可以显著提高FM组和SM组对虾酚氧化酶活力和超氧化物歧化酶活力(P<0.05);(6)钩虾可以显著性提高SF组和SM组对虾血清过氧化物酶相对活力(P<0.05);(7)对虾健康指标总得分与其感染WSSV后的100%致死时间关系密切,两者之间呈现一定的线性关系(R2=0.948 9)。研究结果表明,钩虾与对虾人工配合饲料相比可以促进中国明对虾和日本囊对虾的生长及提高对虾抗病力。     

对虾育苗水体副溶血性弧菌耐药性分析

为了解广东、广西沿海2010-2012年对虾育苗水体中副溶血性弧菌的耐药性变化,为育苗期对虾病害预防提供依据.研究依据GB/T4789.7-2008对各地育苗水体样品进行菌株分离、鉴定,并用纸片法进行耐药性检测.结果显示,72株在TCBS培养基上显示绿色的弧菌中检出副溶血性弧菌30株,检出率为41.7％,分离菌株对青霉素、氨苄西林、苯唑青霉素、米诺环素、阿莫西林、四环素、阿洛西林显示高度耐药,对四环素的耐药率达97％.对虾育苗水体在TCBS培养基上显示绿色的弧菌主要以副溶血性弧菌为主,所有菌株耐药性比较强,应加强育苗期抗生素使用的管理.