高效液相色谱法检测罗非鱼血浆中L-肉碱的方法研究

以罗非鱼为对象测定血浆中的肉碱含量,就流动相、柱温对色谱峰的影响等方面对样品处理方法及衍生化反应的条件进行研究,建立相应的高效液相色谱法,Kromasil Sil色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈—柠檬酸缓冲液(90∶10,体积比)。每1000mL流动相中加入0.25mL三乙胺,流速1.2mL/min,柱温35℃,检测波长260nm,进样量为20μL。选取10%的对溴苯乙酰基溴为衍生试剂,70℃水浴90min。方法学上考察结果表明,该方法专属性高,其线性回归方程和相关系数分别为y=0.08376x+0.09663(n=6,r~2=0.9995),最低检测限为1μmol/L,日内和日间变异系数分别为1.79%~5.56%、9.83%~11.81%,平均回收率为95.83%,12h峰面积变化相对标准偏差为6.58%,可将其作为检测L-肉碱的分析方法。     

测定三聚氰胺残留量的微波辅助衍生GC-MS法

建立了一种测定水产饲料、鱼肉、奶粉中三聚氰胺含量的方法--微波辅助衍生GC-MS法.在样品前处理开始时加入三聚氰胺-15N3同位素内标物去除基质效应.采用三氯乙酸-乙酸锌超声提取,阳离子聚合物HR-XC固相萃取柱净化,洗脱液氮气流吹干后用微波辅助进行快速衍生化,衍生化产物上机分析,有效去除了基质带来的干扰,提高了检测效率.对衍生化条件进行了探讨,确定使用100 μL BST-FA+TMCS(99:1)和200μL吡啶,微波炉(700 W)中档火力反应1 min.三聚氰胺的线性回归方程为Y=5762.3X-1878.7,相关系数为0.9996.在0.4～800 ng范围内呈现良好的线性关系.对空白饲料、鱼肉、奶粉进行加标回收,回收率在82.5%～105.2%之间,相对标准偏差在1.3%～9.1%之间,在空白试剂、饲料、鱼肉、奶粉基质中的检出限分别为1.2、3.3、3.1、2.9μg/kg.     

饲料中林可霉素检验方法研究

实验应用气相层析质谱仪开发饲料中林可霉素残留检测方法。饲料经5%甲醇溶液萃取及卡瑞试剂沉淀蛋白质后,以hydrophilic-lipophilic balance(HLB)材质固相萃取管纯化,再以N-methyl-N(trimethylsilyl)trifluoroacetamide(MSTFA)衍生化反应,使用内标准品检量线定量,所开发出的方法可成功地应用于饲料中林可霉素的残留检验。     

高效液相色谱法在药残测定中的研究进展

通过介绍高效液相色谱法（HPLC）的原理，阐述了高效液相色谱法在实际应用中的影响因素如流动相、固定相载体、柱温、柱长及柱内径和透射光波长等等；同时也综述了国内外在中、西药成分检测和机体内、外药物残留测定中诸因素的优化筛选；最后笔者结合目前新技术的研究进展提出了HPLC在与其它先进技术联用中的应用展望及应克服的不良因素。     

高效液相色谱法在药残测定中的研究进展

通过介绍高效液相色谱法(HPLC)的原理,阐述了高效液相色谱法在实际应用中的影响因素如流动相、固定相、载体、柱温、柱长及柱内径和透射光波长等等;同时也综述了国内外在中、西药成分检测和机体内、外药物残留测定中诸因素的优化筛选;最后笔者结合目前新技术的研究进展提出了HPLC在与其它先进技术联用中的应用展望及应克服的不良因素。     

柱前衍生液相色谱法测定贝类中氨基酸含量

采用柱前衍生液相色谱法,测定了3种贝类中天冬氨酸、赖氨酸、亮氨酸等17种氨基酸含量。衍生试剂为6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚胺基甲酸酯(AQC),流动相为醋酸盐-磷酸盐缓冲溶液、乙睛、水,梯度洗脱。色谱柱为AccQ·Tag(Waters)氨基酸分析柱,紫外检测。结果显示,氨基酸浓度与峰面积呈良好的线性关系,线性范围10~80μmol/L,检出限为0·23μmol/L,相关系数均在0·998以上,相对标准偏差RSD在2·1%~4·8%之间,回收率在91·3%~113·2%之间。     

pH和色谱柱对日本鳗鲡肝脏抗菌肽分离纯化效果的影响及抗菌活性检测

为了能够快捷地分离纯化出单一的抗菌肽,实验采用不同pH值(离子交换流动相pH3.0、4.0、5.0;反相液相层析流动相pH 2.0、4.5、7.0)缓冲液,不同色谱柱(离子交换和凝胶过滤层析柱分别与反相液相层析柱)联用对日本鳗鲡肝脏抗菌肽分离纯化效果进行了比较,并分析了琼脂板扩散法和微孔液体培养法检测抗菌活性的优缺点.结果显示:pH 4.0缓冲液为最佳离子交换流动相,蛋白提取率为16.43％,得到2个洗脱峰;反相液相层析3种pH缓冲液分离效果均不理想,凝胶过滤层析柱与反相液相层析柱联用能明显改善日本鳗鲡肝脏抗菌肽分离纯化效果,洗脱峰数量较多,峰形单一且尖锐狭窄,基线平而低.琼脂板扩散法检测抗菌活性操作简单,实验结果直观,但所需蛋白量较多,可用于蛋白粗提物抗菌活性的检测;微孔液体培养法检测抗菌活性灵敏,所需蛋白较少,可用于后期色谱分离纯化蛋白抗菌活性的检测.     

液相色谱-串联质谱法测定水产饲料中喹乙醇残留量

为测定水产饲料中喹乙醇的残留量,建立了高效液相色谱-串联质谱的测定方法.水产饲料经5%甲醇溶液提取,HLB固相萃取小柱净化后上机定量检测.采用Zorbax XDB C18色谱柱,并以O.2%乙酸水溶液+甲醇(60+40,体积分数)为流动相,色谱分离后直接进串联质谱器.采用电喷雾正离子,多反应监测模式检测,外标法定量.在1～20 mg/L浓度下具有良好的线性关系,方法的定量限为0.04 mg,/kg,添加浓度在1-20 mg/kg时的回收率为72.2%～98.5%,相对标准偏差小于7.9%.     

柱后衍生高效液相色谱法测定水产品中河豚毒素含量

采用柱后衍生高效液相色谱法检测水产品中的河豚毒素含量，选用河豚Takifugu）和织纹螺（Nassarius）为主要研究对象，样品先由0.1%乙酸提取，经过C18固相萃取柱净化。以庚烷磺酸钠为离子对试剂，应用反相离子对液相色谱分离河豚毒素，采用在线柱后衍生系统，在110 ℃高温和4 mol·L^-1 NaOH强碱条件下，将河豚毒素衍生化成具有荧光特性的C9碱，荧光检测器定量检测。河豚毒素在5～1 600 ng范围内呈良好的线性相关，相关系数r=0.999 7；1、2、8 μg·g^-1，3个浓度水平添加样，日内和日间的回收率为80.9%～91.2%、相对标准偏差为1.93%～5.57%；方法定量限为1 μg·g^-1；从添加样色谱图上看，河豚毒素目标峰附近没有干扰峰，定性准确性好。采用柱后衍生高效液相色谱法与小鼠生物法检测同一阳性河豚样，检测结果一致性好。实验结果表明，柱后衍生高效液相色谱法适用于水产品中河豚毒素的检测。     

高效液相色谱-串联质谱法检测水产品中三聚氰胺残留的比较研究

该研究利用高效液相色谱．串联质谱法（LC—MS／MS）检测水产品中的三聚氰胺，分别比较C18柱、氰基柱（CN）和强阳离子交换与反相C18混合填料柱（CR）3种色谱柱及其相对应的流动相对三聚氰胺的保留和分离效果。结果显示，以甲醇和5mmol的挥发性离子对试剂全氟庚酸作为流动相，采用梯度洗脱，三聚氰胺在C18柱中能得到较好地保留和分离。该研究拓宽了C18柱在药物残留分析中的应用范围。方法成本低、灵敏度高、稳定性和重现性良好，适用于水产品中三聚氰胺的残留检测。     

UPLC法测定水产品中磺胺类药物改进

改进了水产品中磺胺类药物测定-超高效液相色谱法。样品经乙酸乙酯提取、流动相稀释后进高效液相色谱仪进行检测分析。色谱条件:ACQUITY UPLC HSS T3(1.8μm,2.1×100mm)色谱柱,流动相为甲醇与0.2%甲酸水,检测波长范围270nm,柱温40℃,进样量为4μL,磺胺类药物在0.01~0.5μg/mL范围内呈良好的线性关系。该方法简便、准确,可以准确地判断水产品中磺胺类药物,并进行定量计算。     

常见水产品中生物胺的调查及分析

为研究不同水产品中生物胺的产生情况,利用高效液相色谱-柱后衍生-荧光检测技术对蓝点马鲛、黄鳍金枪鱼、银鲑、牙鲆、中国明对虾、鹰爪虾、中华绒螯蟹、杂色蛤、杂色鲍中的7种生物胺含量进行调查与分析。试验结果表明,鲜活水产品中几乎不含生物胺,或仅含少量的精胺、亚精胺;腐败水产品中检出大量的生物胺,其中蓝点马鲛、黄鳍金枪鱼、银鲑、牙鲆中的组胺含量分别为422.57、640.00、309.63、151.86mg/kg,而虾、蟹、贝类等无脊椎动物几乎不产生组胺。不同水产品在腐败过程中产生的生物胺种类、含量、比例不同。生物胺总量可作为水产品腐败变质程度的指标。     

马氏珠母贝正常贝肉与黑壳病贝肉成分对比

为了研究黑壳病造成马氏珠母贝肉成份的变化,首先采用水蒸气蒸馏法分别提取正常马氏珠母贝和黑壳病马氏珠母贝肉的挥发性成份进行分析,正常马氏珠母贝肉检测出58种,黑壳病贝肉检测出59种。但黑壳病贝肉中仅有7种化合物与正常贝肉的挥发性成分相同。在黑壳病贝中,含量较高的成分有二十一烷和十八醛,分别为18.52%和17.95%,但在正常贝肉未检出。其次,采用茚三酮作柱后衍生试剂测定氨基酸的方法检测正常马氏珠母贝和患黑壳病的马氏珠母贝肉中牛磺酸的含量,结果分别为72.47mg/g、72.75mg/g,牛磺酸含量基本一致。通过分析黑壳病引起马氏珠母贝体内挥发性成分和牛黄酸成分变化,为研究马氏珠母贝患黑壳病的病变机理提供一定的科学依据。     

高效液相色谱法测定生物胺衍生条件的优化研究

利用荧光检测器（FLD）,采用柱前衍生高效液相色谱法（HPLC）对组胺（HIS）、色胺（TRP）、2-苯乙胺（2-PHE）、腐胺（PUT）、尸胺（CAD）、酪胺（TYR）、亚精胺（SPD）和精胺（SPM）8种生物胺（BA）进行测定分析。通过探究丹酰氯（Dns-Cl）质量浓度、反应体系的pH、衍生时间及衍生温度对生物胺衍生反应的影响,确定最优的衍生条件。结果显示,当Dns-Cl的质量浓度为BA质量浓度的10倍、pH 11.0、40℃下避光反应45 min,所有BA均能有效分离。BA的相对标准偏差（RSD）在3%以内,能够满足分析要求。     

SPE-HPLC法测定鳗鲡中13种磺胺类药物

针对鳗鲡基质油脂较多的特点,建立了一种同时测定鳗鲡体中13种磺胺类药物残留的固相萃取-高效液相色谱方法。样品用乙酸乙酯提取,浓缩后用盐酸溶解,正己烷除脂,经混合型阳离子交换固相萃取柱净化后,用高效液相色谱分离,DAD检测器检测,外标法定量。13种磺胺类药物在0.01～2.0μg/mL范围内线性关系良好,相关系数R2≥0.9999,平均加标回收率为71.7%～89.8%,相对标准偏差为0.80%～7.82%。方法检出限为3.05～5.24μg/kg,定量限为10.1～17.5μg/kg。     

超高效液相色谱荧光法检测贝类中三种高毒性麻痹性贝毒

建立灵敏可靠的麻痹性贝类毒素(PSP)检测技术是保障我国贝类水产品质量安全的有力手段。本研究选取3-(2-呋喃甲酰基)-喹啉-2-羰醛(FQ)为荧光衍生试剂,利用超高效液相色谱(UPLC)和柱前衍生荧光检测技术,建立了贝类中3种高毒性PSP毒素成分(STX、GTX1及NEO)的检测方法,对影响荧光衍生效率和色谱分离效果的各主要实验因素分别进行了优化。结果表明,在优化后的最佳实验条件下,3种PSP毒素成分线性方程的相关系数(r)均大于0.998,保留时间(tm)及峰面积(PA)的日内及日间精密度RSD值分别小于3.1%和5.6%,当信噪比(S/N)等于3时,检测限范围为7～14μg.kg-1,样品加标回收率为82%～92%,RSD值小于5.2%。该方法灵敏、稳定且可靠,可用于贝类中三种高毒性PSP毒素成分的日常分析检测。     

高效液相色谱法测定水产品孔雀石绿残留量的优化研究

采用高效液相色谱法测定水产品中孔雀石绿的残留量,优化了检测过程中的提取方式、硼氢化钾用量、蒸馏温度、固相萃取柱选择和流动相选择等对加标回收率的影响因素。样品经匀浆与超声相结合提取,用质量分数为6%的硼氢化钾还原,40℃真空蒸干,PRS固相萃取柱净化,所得样液以V（乙腈）：V（乙酸铵）=75？25的缓冲液为流动相进行测定。结果表明,样品回收率高,且前处理简便,结果准确。     

超高效液相色谱法测定鱼体组织中培氟沙星的含量

建立了测定鱼血浆、肌肉、肝胰脏、肾脏中培氟沙星含量的超高液相色谱一紫外法。将组织样品剪碎后用磷酸二氢钾溶液提取,固相萃取柱净化,0．1％甲酸水溶液：LN（V：V=90：10）流动相洗脱。该方法血浆的检出限为0．01μg·mL-1,肌肉、肝胰脏、肾脏的检出限均为0．02μg·g-1,线性范围为0．01-10μg·mL-1,平均回收率为70．2-95．1％。本方法的前处理过程操作简便,避免使用有机溶剂,减少对环境的污染和人体健康的伤害。     

暗纹东方鲀TTX的微量、快速检测

采用高效液相色谱法建立快速、微量检测河毒素方法。使用WaterspicoTagTMFAA色谱柱；以5％乙腈中含0．005N三氟乙酸和0．005N乙酸为流动相；荧光检测波长：激发波长为365nm，发射波长为510nm。该方法在25ng／ml～300ng／ml线性范围内峰面积响应值与其浓度呈良好的线性关系，r＝0．9994。最低检测线为1ng。该方法可简便、快速、微量、准确定性、定量检测河毒素。