淡水鱼类主要过敏原的模拟肠胃液消化

采用Tricine-十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(Tricine-SDS-PAGE)和免疫印迹(Western-blot)方法,通过模拟肠胃液消化实验分析淡水鱼类肌肉中主要过敏原小清蛋白(parvalbumin,PV)的消化特性。Tricine-SDS-PAGE结果显示,纯化的鲫、鲢PV在模拟胃液消化实验中反应5～30min明显分解,而在模拟肠液消化实验中4h仍未见明显分解。鲫、鲢肌浆蛋白在模拟胃液消化实验中,肌浆蛋白中的PV比纯化PV的分解时间明显延长,消化30～60min仍未被完全分解,而其它肌浆蛋白消化10～30min就完全分解。采用抗PV多克隆抗体的Western-blot显示,该抗体能特异识别PV及其降解产物。研究结果表明,淡水鱼类PV相对于非过敏蛋白具有较高的消化稳定性,而胃蛋白酶能较好地分解该过敏原。     

加工处理对鲢小清蛋白免疫活性的影响

采用鱼丸加工、烘烤、油炸、高压4种方式对鲢进行加工,并比较在这4种鲢制品中小清蛋白的含量、免疫活性以及体外模拟胃液消化稳定性的变化情况.通过Tricine-SDS-PAGE和Western-blotting分析表明,鱼丸加工、烘烤、油炸、高压等方式处理可降低鲢制品中小清蛋白的含量,但在一定程度上提高了小清蛋白的胃液消化稳定性;高压几乎可完全破坏小清蛋白的IgG结合能力,是较为理想的降低食物过敏原免疫活性的加工方式之一.     

甘露糖—小清蛋白美拉德反应产物的免疫活性

为探讨以甘露糖为还原糖进行美拉德反应对小清蛋白免疫活性的影响,通过将鲢重组小清蛋白(r PV)和甘露糖混合物在干热条件下(100°C)反应100 min制得糖化的r PV(Mr PV),采用Tricine-SDS-PAGE和斑点杂交(Dot-blotting)分析糖化前后r PV的聚合特性、免疫活性及消化稳定性的变化;采用圆二色谱仪和扫描电子显微镜分析糖化对r PV的二级结构及微观结构的影响。结果显示,r PV糖化后形成大分子量的片状聚集体;甘露糖糖化修饰的r PV免疫活性及消化稳定性均显著下降;美拉德反应导致r PV二级结构中的α-螺旋和无规则卷曲的含量有一定程度的减少,而β-折叠的含量显著增加。研究表明,以甘露糖为还原糖进行美拉德反应可有效降低r PV的免疫活性及消化稳定性,这可能与糖化后r PV聚集体的形成及二级结构的改变有关。     

口虾蛄主要过敏原原肌球蛋白的免疫活性

原肌球蛋白(TM)是甲壳类动物的主要过敏原,其氨基酸序列具有很高的保守性。本研究以口虾蛄为研究对象,旨在探明TM是否是其主要过敏原并对其相关性质进行研究。利用过敏患者血清通过免疫印迹法确定口虾蛄的主要过敏原分子量约为36ku。通过制备丙酮粉、等电点沉淀、硫酸铵盐析及加热等方法纯化了该主要过敏原。采用抗中华绒螯蟹TM多克隆抗体进行免疫学性质分析表明该蛋白为TM。抑制性免疫印迹和抑制性ELISA实验表明口虾蛄TM与凡纳滨对虾和锯缘青蟹等甲壳类动物的TM具有较强的免疫交叉反应,但与贝类动物杂色蛤的免疫交叉性较低。通过ELISA方法对甲壳类动物的TM进行定量测定,结果表明,口虾蛄肌肉中TM的含量约只有凡纳滨对虾TM含量的1/45,但仍具有一定的致敏性。     

黄鳍鲷骨骼肌伴肌动蛋白的纯化及其抗体制备

采用Sephacryl S-400凝胶过滤柱层析和电洗脱等纯化方法,首次从黄鳍鲷骨骼肌中分离纯化到伴肌动蛋白,并制备了特异性多克隆抗体.多克隆抗体经Protein A-Sepharose亲和层析柱纯化得到高纯度免疫球蛋白G(IgG).采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、免疫斑点印迹(Dot-Blot)和免疫印迹(Western-Blot)等方法对纯化的伴肌动蛋白及其多克隆抗体进行分析鉴定,并研究了不同贮藏条件下伴肌动蛋白的变化情况.SDS-PAGE结果显示本研究从黄鳍鲷骨骼肌中分离纯化了高纯度伴肌动蛋白;Dot-Blot检测结果显示兔抗黄鳍鲷伴肌动蛋白多克隆抗体效价为5×104;Western-blot检测表明兔抗黄鳍鲷伴肌动蛋白多克隆抗体能与肌原纤维蛋白中的伴肌动蛋白发生特异性反应,而与其它蛋白不发生免疫交叉反应.     

抗冻蛋白AFPⅢ的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备

采用基因重组技术将AFPⅢ基因与原核表达载体pET32a(+)连接,转化大肠杆菌BL21(DE3),通过PCR、单双酶切及测序鉴定构建结果.用IPTG诱导蛋白表达,将融合蛋白纯化后,免疫6-7周龄的小白鼠,制备AFPⅢ多克隆抗体,采用Western印迹法检验抗体特异性.通过酶联免疫吸附试验(ELISA)测定多克隆抗体滴度.成功地构建了AFPⅢ的原核表达载体,经在大肠杆菌中诱导表达、镍柱亲和层析纯化,得到较纯的相对分子质量约26 000 Da的融合蛋白,免疫小白鼠后得到多抗血清,Western印迹结果显示此多克隆抗体与AFPⅢ蛋白特异性结合.该试验为进一步研究AFPⅢ在转基因鱼中的定点表达以及作用机制奠定了基础.     

鲤春病毒血症病毒核蛋白、磷蛋白与基质蛋白的表达、抗体制备及免疫原性比较

鲤春病毒血症病毒(SVCV)能够引起鲤科鱼类大量死亡,被世界动物卫生组织(OIE)列为必须申报的重要疫病,也是我国唯一被列为一类疫病的鱼类传染病。为建立SVCV的快速免疫学诊断方法,研究其主要结构蛋白间的免疫原性差异,实验首先采用原核表达系统克隆并诱导表达,纯化SVCV的核蛋白(N)、磷蛋白(P)和基质蛋白(M),并进一步免疫新西兰白兔制备抗血清,抗血清经Protein A柱进一步纯化获得3种蛋白的多克隆抗体。利用间接酶联免疫吸附测定(ELISA)和免疫印迹实验(Western blot)对抗体效价和特异性进行分析验证。结果发现,SVCV的N、P和M重组蛋白均在原核表达系统获得大量表达,且表达的蛋白经纯化后免疫实验动物产生了相应的多克隆抗体。Western blot结果显示,3种蛋白抗体均与SVCV重组蛋白及天然蛋白发生特异性的免疫反应。ELISA结果显示,针对P蛋白制备的抗体效价最高,可达409 600;针对N和M蛋白制备的抗体效价也均大于204 800。同时,特异性检测实验结果显示,制备的3种蛋白抗体均仅与SVCV发生特异性免疫反应,而与SVCV宿主其他易感病毒均不发生交叉反应。实验结果将对SVCV的快速诊断及疫苗开发提供新的手段和思路。     

抗大鲵虹彩病毒MCP COE蛋白单克隆抗体的制备及初步应用

制备抗大鲵虹彩病毒(CGSIV)MCP COE蛋白的单克隆抗体,并对其基本特性进行鉴定及开展初步应用。用纯化的重组CGSIV MCP COE蛋白免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,间接ELISA法检测阳性孔,经有限稀释法亚克隆,筛选单克隆杂交瘤细胞株。采用间接ELISA法、免疫印迹法和单克隆抗体亚型检测试剂盒等鉴定单抗的稳定性、特异性和亚型;采用腹水诱生法制备单抗腹水,饱和硫酸铵法纯化腹水单抗;间接ELISA法分别测定单抗杂交瘤细胞上清液和腹水单抗的效价;利用间接免疫荧光法观察CGSIV的增殖。结果显示,细胞融合克隆率为98.68%,阳性率为20.52%,得到1株能够稳定分泌特异性抗体的阳性杂交瘤细胞,命名为1M6。单克隆抗体的亚型属于Ig G2b,κ链;免疫印迹法和间接ELISA法测定结果显示,单抗具有很好的特异性;杂交瘤细胞株培养上清液的效价为1∶1600,腹水单抗效价为1∶2×106,亲和常数为2×105。间接免疫荧光显示CGSIV感染EPC细胞24 h后在宿主细胞质中可以观察到成熟的病毒粒子形成的包涵体,而且在宿主细胞核内也能发现病毒粒子。抗CGSIV MCP COE蛋白单克隆抗体的成功制备为CGSIV免疫学检测方法的建立和其他相关研究的开展奠定了基础。     

中华鳖裙边胶原蛋白的提取及其特征

胶原蛋白是生物体内一种重要的蛋白质,也是结缔组织的主要蛋白成分。与陆生动物(如猪、牛等)比较,水生动物胶原蛋白具有优良的理化性质和生理活性功能,已引起人们的广泛关注。中华鳖是我国传统的名贵水产品,其裙边胶原蛋白含量丰富,具有极高的药用价值和营养价值。采用胃蛋白酶酶解法在酸性条件下提取中华鳖裙边胶原蛋白,研究酶添加量、底物浓度、提取时间对提取效果的影响,确定了制备裙边胶原蛋白的最适条件为：酶添加量4 mg/mL,底物浓度4%,提取时间14 h。粗提胶原蛋白通过盐析、透析等纯化步骤,再经SDS-PAGE电泳、热变性温度测定、紫外及傅立叶变换红外扫描等技术方法分析了胶原蛋白的生化特征,结果显示提取到的裙边胶原蛋白具有较高的纯度,含有两条α链和1条β链,属于典型的I型胶原蛋白。研究表明：中华鳖裙边胶原蛋白可以作为猪皮、牛皮胶原蛋白的有效替代品,这为今后进一步综合开发利用鳖类裙边胶原多肽提供了科学的理论依据。     

抗传染性胰腺坏死病毒VP3蛋白单克隆抗体的制备

利用纯化后的传染性胰腺坏死病毒(IPNV VP3)重组蛋白免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合技术,采用间接ELISA和有限稀释法筛选杂交瘤细胞,利用染色体鉴定、蛋白印迹和免疫荧光等方法对单克隆抗体进行鉴定,共得到2株能稳定分泌特异性抗体的阳性细胞株,分别命名为2F1、4A7,亚类鉴定2株单抗均为IgG1亚类。ELISA检测其腹水效价,蛋白印迹检测表明获得的2株单抗均能特异性识别IPNV VP3蛋白;间接免疫荧光鉴定表明2株单抗均与IPNV发生反应;间接ELISA检测结果表明2株单抗均不与HSV、SVCV、HRV等病毒反应,与IPNV具有较强的特异性反应。     

基于文献计量分析的淡水鱼类寄生虫研究现状及热点探析

为了解淡水鱼类寄生虫的研究现状及前沿热点，为该领域研究工作的开展提供科学量化的参考依据，以Web of Science(WOS)核心合集数据库收录的1980—2020年共1 088篇相关文献为数据样本，运用VOSviewer和CiteSpace可视化软件绘制了淡水鱼类寄生虫研究的发文量、发文地区、发文作者、发文机构、关键词频次和突现状况等知识图谱，并对发文趋势和研究热点进行了分析。结果表明，淡水鱼类寄生虫研究领域的发文量总体呈上升趋势，2009年后上升趋势明显；淡水鱼类寄生虫的研究受到广泛关注，巴西、捷克和美国是淡水鱼类寄生虫领域的研究中心；捷克共和国科学院、墨西哥国立自治大学和新西兰奥塔哥大学等3个机构是淡水鱼类寄生虫领域的高产研究机构；Poulin R、Scholz T和Salgado-Maldonado G等3位研究人员是淡水鱼类寄生虫研究的核心力量；发文国家间和机构间形成了良好且稳定的合作关系，但研究者间合作关系较为分散，缺少跨团队合作；International Journal for Parasitology、Parasitology Research、Parasitolo...     

斜管虫研究进展

斜管虫是发现于我国淡水养殖鱼类的一种原生动物,对温水性和冷水性淡水鱼可造成危害,并引发斜管虫病,造成鱼苗与鱼种大量死亡。根据其繁殖快、适温广、宿主多的特性,今后可能会对淡水养殖鱼类造成很大的危害。为此,本文对斜管虫的种类、感染宿主种类、研究方法、流行情况与生活方式、患病症状与诊断、主要防治方法等研究进展做了归纳和总结,阐述其相关状况。同时,以一些常见宿主为例,了解其感染途径及防治措施,为今后科学防治斜管虫病提供参考。     

Reduced total hardness of fresh water enhances the efficacy of bathing as a treatment for amoebic gill disease in Atlantic salmon, Salmo salar L

The current treatment for amoebic gill disease (AGD)-affected Atlantic salmon involves bathing sea-caged fish in fresh water, often sourced from local dams, for 3-4 h. In both a small-scale laboratory and an on-farm field experiment, the effects of water hardness on the efficacy of freshwater bathing were assessed. Results showed that soft fresh water (19.3-37.4 mg L(-1) CaCO3), whether it be naturally soft city mains water or artificially softened dam water, was more efficacious at alleviating AGD in affected fish than hard fresh water (173-236.3 mg L(-1) CaCO3). Soft freshwater bathing significantly reduced viable gill amoebae numbers (from 73.9 to 40.9% of total count) and significantly alleviated gill pathology, both gross and histological. Following bathing, gross gill pathological scores of soft freshwater bathed fish lagged 2 weeks behind hard freshwater bathed fish. Significant gill lesion fragmentation, and shedding of lesion-associated hyperplastic tissue, was accompanied by a significant reduction in AGD-affected gill filaments in soft freshwater bathed fish. Furthermore, soft freshwater bathing alleviated the blood plasma electrolyte imbalance seen in control (sea water) and hard freshwater bathed fish. This study showed that the use of soft fresh water for bathing AGD-affected Atlantic salmon could be an improvement to the current method of treatment. Not only does it reduce gill amoeba numbers, but also, it is of a therapeutic advantage with the potential to reduce bathing frequency.     

高不饱和脂肪酸（HUFAs）在淡水鱼类中的营养作用研究进展

鱼粉、鱼油资源的短缺促使全球水产养殖业积极寻找其替代原料,而探究鱼粉、鱼油与其替代物之间的差异尤为重要,其中最主要的差异就是高不饱和脂肪酸(highly unsaturated fatty acids,HUFAs)是否存在及其含量多少。HUFAs是一类碳原子数目≥20、双键数≥3的脂肪酸,具有为动物提供能量、构成细胞膜组分、形成高生物活性物质、调控脂质代谢和免疫功能等重要作用,主要存在于鱼油和某些类别的微藻中。淡水鱼类具备自身合成HUFAs的能力,因此,一般认为HUFAs不是淡水鱼类的必需脂肪酸,无需通过饲料提供。但已有研究指出,饲料中添加一定量的HUFAs能够对淡水鱼类产生积极的营养作用,表明淡水鱼类的脂肪酸营养理论尚需进一步完善。本文综述了HUFAs在淡水鱼类生长、脂质代谢、健康免疫、繁殖特性等方面发挥作用的相关研究结果,明确提出淡水鱼类需要摄取一定水平的外源性HUFAs,指出在当前淡水鱼饲料中普遍使用HUFAs相对缺乏的蛋白源和油脂源的背景之下,HUFAs对淡水鱼类的作用应受到关注。最后,本文对今后淡水鱼类HUFAs营养的研究方向,以及新的HUFAs油脂源的开发前景进行了展望。     

油茶皂素鱼毒制剂对常见淡水鱼虾的毒性研究

采用水箱养殖方式,研究油茶皂素鱼毒制剂对常见淡水鱼虾的毒性作用。结果显示,油茶皂素鱼毒制剂对闽江流域常见淡水鱼类具有较强的毒性,并呈现出良好的剂量-药效和时间-药效关系。在投药浓度为2.5mg/L时,该制剂在24 h内即可将实验鱼全部杀死,LD50为1.60~1.75 mg/L,对泥鳅的LD50为3.0 mg/L。但是该制剂对南美白对虾和河蟹却很安全,在投药浓度达50 mg/L时,南美白对虾48 h存活率可达100%,河蟹48 h存活率可达90%以上。研究结果表明,油茶皂素鱼毒制剂对闽江流域常见淡水鱼类具有显著的的毒杀能力。     

Feeding and growth of exercised and unexercised juvenile Atlantic salmon in freshwater,and performance after transfer to seawater

Juvenile Atlantic salmon (Salmo salar), selected from the upper modal group, were first held for 122 days (from December to May) in freshwater, and then for 49 days in seawater (34% salinity). In freshwater, the fish were exposed to either standing water or water currents corresponding to a swimming speed of 1 Bl s^–1. Natural light conditions prevailed throughout the whole experiment.In the freshwater phase, food intake, growth rate and condition factor of the fish increased with increasing daylength. Condition factors, however, decreased slightly during the last month of the freshwater period, suggesting that the fish underwent parr-smolt transformation. The growth rate and food intake of the fish subjected to standing water were approximately 15% lower than those of fish exposed to water currents.Transient suppression of appetite and growth, and an increase in plasma concentration of Cl^–, were seen after exposure of the fish to seawater. Within 28 days, all these parameters had been restored to pre-transfer levels. Previous exercise did not appear to have influenced the hypoosmoregulatory capacity of the fish. Growth rate and food intake observed during the seawater phase were similar, irrespective of the treatment experienced by the fish during freshwater rearing.     

Particularities of early life stages in temperate freshwater fish species: comparisons with marine species and implications for aquaculture practices

Both egg and larvae are different between freshwater and marine fish species. Freshwater fish species have generally larger and fewer eggs than marine species. Most freshwater fish species have demersal eggs that develop stuck to various substrata, such as plants or gravels, while eggs of most marine fish species develop in the water column. These differences have consequences for both the evaluation of the quality and the incubation of eggs of freshwater fish species compared with marine species. The larvae of many freshwater fish species are larger and more developed at hatching than their marine counterparts: thus, larval feeding regimes could be different and cannibalism may emerge sooner in certain freshwater fish species. The main differences of egg and larvae between freshwater and marine species are highlighted and the possible implications for aquaculture practices are discussed.     

Further studies on acquired resistance to amoebic gill disease (AGD) in Atlantic salmon, Salmo salar L.

Trials were designed to test the efficacy of freshwater treatments for amoebic gill disease (AGD) of Atlantic salmon, Salmo salar L., and the effect they had on the acquisition of resistance to reinfection with AGD. The first trial involved fish being given an industry‐simulated freshwater bath of 2–3 h duration which simulated treatments given on farms. These fish did not display appreciable resistance to reinfection. The second trial involved four groups of fish which had been infected with and treated for AGD in a number of different ways. Once again the fish that had been infected for the first time and given a single 2–3 h freshwater bath and then re‐exposed did not exhibit appreciable resistance to reinfection. In contrast, those fish that had been given a second 2–3 h freshwater bath and those that had been maintained in freshwater for 4 weeks displayed high levels of resistance. There is preliminary evidence to suggest that this resistance could be related to stimulation of the non‐specific immune system.     

食用鱼类甲醛本底含量研究初报

通过对56种海水鱼共计105个样品,16种淡水鱼共计19个样品的甲醛本底含量研究。结果发现,食用鱼类的甲醛本底含量不同且差异较大,海水活鱼与海水冷冻鱼的甲醛含量均显著高于淡水活鱼与淡水冷冻鱼（P〈0．01）;海水鱼中龙头鱼和鳕鱼类样品甲醛本底含量较高;大部分淡水鱼未检出甲醛;同一品种不同存活状态的鱼,其甲醛含量也不同,活体鱼中甲醛含量最低,冰鲜样品中甲醛含量最高,冷冻样品随着冻藏时间的延长甲醛含量呈现上升趋势。     

草鱼呼肠孤病毒湖州分离株的分离及鉴定

2008年6月从湖州某患病草鱼池塘采集草鱼出血病疑似病样,将除菌过滤后的患病鱼肝、脾、肾组织滤液,注射健康的8～10 cm的草鱼鱼种.5d后草鱼开始发病,且症状与原发病症状一样,死亡率为57%,对照组未有死亡.将无菌处理的病样滤液接种草鱼肾细胞(CIK),连续接5代均出现明显的细胞病变(CPE),并与草鱼呼肠孤病毒参考株所产生的CPE一致.该株病毒的TCID50为10-8/0.1ml.内脏组织经超薄切片,电子显微镜观察,发现组织内有大量的病毒颗粒,大小均一,近似球形,直径约70～75 nm.理化鉴定表明,氯仿、乙醚处理组病毒的感染力和对照组相比并没有多大变化,说明该株病毒对氯仿和乙醚有一定的抗性.经草鱼呼肠孤病毒特异性的RT-PCR检测,获得阳性的目的片段,测序的结果与草鱼呼肠孤病毒相应序列的同源性达99%以上.上述鉴定结果表明所分离的病毒为草鱼呼肠孤病毒,将其命名为HZ2008.