不同烹饪方式及体外模拟消化对凡纳滨对虾主要过敏原原肌球蛋白免疫活性的影响

本研究选用水煮、油炸和红烧3种烹饪方式分别处理凡纳滨对虾,并且对烹饪后的虾肉进行体外模拟唾—胃—肠液连续消化,以调查烹饪处理后过敏原原肌球蛋白的免疫活性变化状况。采用电泳、免疫印迹和间接ELISA方法评价样品中主要过敏原原肌球蛋白的变化情况。SDS-PAGE结果显示,3种烹饪处理虾肉样品中TM条带无明显变化,表明TM在烹饪处理时基本不发生降解;免疫印迹和间接ELISA结果显示,水煮、油炸和红烧3种烹饪处理虾肉中TM免疫活性分别降低2.08%、11.33%、15.56%;而烹饪后虾肉的体外模拟消化产物的免疫活性丢失显著,水煮、油炸和红烧处理的免疫活性分别下降86.90%、88.94%、97.39%。研究表明,虾类TM免疫活性的降低主要发生在肠液消化阶段,3种方式烹饪处理能够使TM免疫活性降低,并且红烧处理可明显降低TM的免疫活性。本实验为过敏原消减机制的研究和低致敏性水产品的开发提供了理论依据。     

细菌J-10对凡纳滨对虾非特异性免疫指标的影响

以凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei boone)为试验材料,将细菌J-10添加到饲料中投喂对虾,测定其对凡纳滨对虾血清酚氧化酶(PO)、抗菌活力(Ua)和溶菌活力(U1)、溶血素活性和血清中蛋白含量的影响。结果显示,试验组各项指标均优于对照组,用副溶血弧菌进行人工攻毒,免疫保护率达到40％。结果表明,细菌J-10可以增强凡纳滨对虾的非特异性免疫功能。     

中国对虾主要过敏原的鉴定及理化性质

以中国对虾为研究对象,旨在获得有关中国对虾过敏原的基础数据,为水产品中过敏原的控制提供依据.首先利用聚丙烯酰胺凝胶电泳对中国对虾过敏原组分进行分析,经免疫印迹鉴定其主要过敏原.然后利用高效液相色谱法纯化中国对虾的主要过敏原,并用β消去、紫外扫描、肽质量指纹图谱和红外光谱等方法对其理化性质进行研究.表明中国对虾主要过敏原为分子量36 ku的糖蛋白,糖含量为4.4%,存在O-型糖肽键,其二级结构主要为α-螺旋,与其他甲壳类过敏原之间存在很高的同源性.     

凡纳滨对虾红体病病原菌间接ELISA快速检测方法的研究

以凡纳滨对虾红体病病原菌副溶血弧菌为抗原,免疫兔获得高免血清,建立一种快速检测凡纳滨对虾红体病病原菌副溶血弧菌的ELISA技术。采用棋盘滴定法确定抗原和抗血清的最适工作浓度分别为106CFU·mL-1和1∶2000;病原菌检测灵敏度为每孔104CFU;抗血清与其它细菌标准菌株的交叉反应结果均呈阴性;阻断实验中的阻断率达75.88%;交叉反应和阻断实验结果表明该方法具有较高的特异性。将该方法标准化后检测了30份人工感染后的凡纳滨对虾和健康凡纳滨对虾,阳性检测率分别为93.3%和13.3%,表明该技术不仅能够检测已发病的凡纳滨对虾,而且能够检测带菌的凡纳滨对虾,这对于水产养殖业中疾病的早期诊断有着重要意义。     

饲料中添加铜对凡纳滨对虾特定生长率及血细胞的影响

通过在凡纳滨对虾的饵料中添加不同浓度的铜,研究其对特定生长率、血细胞数及吞噬活性的影响。结果表明,不同浓度的铜对凡纳滨对虾的各项测定指标影响程度均呈现先升高后降低的变化趋势,添加30mg／kg铜时,各项指标值均为最大。此时,凡纳滨对虾的生长最快,但机体是否处于最佳的免疫状态及免疫反应状况,还需要进一步研究。     

海水养殖和低盐养殖凡纳滨对虾脂肪酸分析比较

对饲喂同一种配合饲料分别在海水及低盐水体中饲养的凡纳滨对虾Litopenaeus vannamei肌肉及肝胰脏的脂肪酸组成进行了分析比较.结果显示,(1)海水养殖凡纳滨对虾肌肉中的多不饱和脂肪酸(PUFA)和总含量低于低盐养殖凡纳滨对虾(P<0.05), 而单不饱和脂肪酸(MUPA)总含量高于低盐养殖凡纳滨对虾(P<0.05), 二者的饱和脂肪酸总量(SAFA)无显著差异(P>0.05).海水养殖凡纳滨对虾肌肉中ω3系列脂肪酸总量显著低于低盐养殖对虾(P<0.05),而ω6系列脂肪酸总量显著高于低盐养殖凡纳滨对虾(P<0.05),ω3/ω6比率海水养殖凡纳滨对虾显著低于低盐养殖对虾(P<0.05).(2)海水养殖凡纳滨对虾肝胰脏中多不饱和脂肪酸(PUFA)、单不饱和脂肪酸(MUFA)和饱和脂肪酸(SAFA)总含量均显著高于低盐养殖凡纳滨对虾(P< 0.05).海水养殖凡纳滨对虾肝胰脏中ω3系列脂肪酸总量显著高于低盐养殖凡纳滨对虾(P<0.05),而ω6系列脂肪酸显著低于低盐养殖对虾(P<0.05), ω3/ω6比率海水养殖凡纳滨对虾显著高于低盐养殖对虾(P<0.05).     

凡纳滨对虾的脂肪营养需求

脂肪在凡纳滨对虾的生命活动中有着重要的作用,主要用于能量代谢和生长发育。虾类的脂肪来源一部分来自于体内的三大营养物质转化,另外主要的来源还是来自于饲料的供给。凡纳滨虾饲料中脂肪和脂肪酸的种类以及含量的不同,直接影响凡纳滨对虾的机体的生长和养殖效益。研究发现凡纳滨对虾幼虾饲料C18:3n-3/C18:2n-6比值为0.44,凡纳滨对虾饲料中脂肪添加量在8.5%~9%之间的效果最好。     

海水和淡水养殖凡纳滨对虾肌肉营养成分的比较

测定和分析了海水和淡水养殖的凡纳滨对虾肌肉常规营养成分、氨基酸含量和脂肪酸组成。试验结果表明,海水养殖凡纳滨对虾肌肉中粗蛋白和粗灰分含量显著高于淡水养殖凡纳滨对虾(P0.05),而水分的含量显著低于淡水养殖凡纳滨对虾(P0.05);海水养殖凡纳滨对虾氨基酸总量、必需氨基酸量、鲜味氨基酸总量均显著高于淡水养殖凡纳滨对虾(P0.05);海水和淡水养殖凡纳滨对虾肌肉中均含有丰富的不饱和脂肪酸,总量分别达68.48%和69.80%,但海水虾肌肉中饱和脂肪酸和单不饱和脂肪酸总量显著高于淡水虾(P0.05),而多不饱和脂肪酸总量显著低于淡水虾(P0.01);海水虾肌肉中n-3多不饱和脂肪酸总量亦显著低于淡水虾(P0.05),表明在海水环境中凡纳滨对虾合成n-3多不饱和脂肪酸的能力较差。综合分析表明,海水养殖凡纳滨对虾肌肉的营养价值和风味稍优于淡水养殖凡纳滨对虾。     

锯缘青蟹大眼幼体与凡纳滨对虾混养试验

利用3口池塘共1.14 hm2进行锯缘青蟹大眼幼体与凡纳滨对虾的混养试验,投放锯缘青蟹大眼幼体8500只,凡纳滨对虾苗2.03×105尾,经96~129 d的养殖,收获锯缘青蟹729.1 kg,凡纳滨对虾2804.3 kg;锯缘青蟹平均312 g/只,凡纳滨对虾57.5尾/kg;锯缘青蟹大眼幼体成活率27.5%,凡纳滨对虾成活率79.4%。试验结果表明,锯缘青蟹大眼幼体可以直接投入池塘中与凡纳滨对虾混养,将为今后大规模发展锯缘青蟹养殖摸索出一条有效途径。     

凡纳滨对虾喜添新品种

<正>2017年5月,农业部公布了2017年通过审定的14个水产新品种,由中国科学院海洋研究所与西北农林科技大学、海南广泰海洋育种有限公司合作培育的凡纳滨对虾"广泰1号"榜上有名。这是海洋所自凡纳滨对虾"科海1号"后又一通过审定的凡纳滨对虾新品种。凡纳滨对虾是世界第一大养殖虾类,约占全球养殖对虾产量的70%。凡纳滨对虾养殖产业是我国水产养殖的支柱性产业,同时也是我国水产品出口     

Elimination of the major allergen tropomyosin from shrimp muscle by boiling treatment

Fisheries Science - Tropomyosin (TM) is the major allergen found in invertebrates, including shrimp. To reduce the allergenicity of shrimp muscle, attempts were made to eliminate TM from the muscle...     

蟹类原肌球蛋白基因的克隆与表达

原肌球蛋白是甲壳类动物的主要过敏原之一。本文通过分子生物学技术方法,分别克隆得到锯缘青蟹(Scylla serrata)、中华绒鳌蟹(Eriocheir sinensis)和三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)的原肌球蛋白基因序列。测序结果表明,三个基因的序列长度均为855 bp,编码284个氨基酸残基,三者氨基酸序列同源性为99.3%。三种蟹的原肌球蛋白基因序列与GenBank中其他甲壳类动物的原肌球蛋白具有很高的同源性。将锯缘青蟹的原肌球蛋白基因与pGEX-4T-3载体连接后,经IPTG诱导得到分子量约为61 kDa的融合表达蛋白。通过与甲壳类过敏患者血清的免疫印迹反应,证实融合表达的原肌球蛋白具有过敏原性,表明原肌球蛋白是蟹类的主要过敏原之一。该融合蛋白有望用于甲壳类食物过敏诊断试剂的开发与应用。     

甲壳类水产品主要过敏原原肌球蛋白胶体金免疫层析快速检测方法的建立及应用

为实现甲壳类水产品主要过敏原的快速检测,实验使用凡纳滨对虾原肌球蛋白(TM)作为检测靶标,构建了胶体金免疫层析检测方法。使用天然TM分别免疫SD大鼠和新西兰大白兔制备多克隆抗体,以40 nm胶体金标记的鼠多抗作为检测抗体,以兔多抗为捕获抗体,基于双抗体夹心原理组装免疫层析试纸条,并应用于市售食物样品的检测。结果显示,组建的免疫层析试纸条可在5 min之内显示结果,视觉检出限为10 ng/mL,对虾、蟹、克氏原螯虾及美洲螯龙虾等甲壳类水产品的特异性高,但与蛤蜊、扇贝存在微弱的交叉反应;在不含甲壳类水产品的市售食品中的加标回收率为81%～126%,准确性良好;试纸条的批内、批间变异系数低于15%,市售实际食物样品的检测结果与食物过敏原标签一致。研究表明,该方法具有高灵敏度与检测特异性,可在多种基质与商业化食品中实现甲壳类过敏原的有效检测,具有较强的实际应用价值。     

不同热加工方式对刀额新对虾过敏原活性的影响

选取煮(100 ℃)、蒸(100 ℃)、高压(121 ℃,0.1 MPa)这3种常见热加工方法,分别处理刀额新对虾不同的时间,通过检测总可溶性蛋白、主要过敏原含量和免疫活性的变化,分析3种热加工方式对虾类过敏原免疫活性的影响,并通过质地剖面分析,研究虾肉经过处理后组织结构的变化。经过3种热处理后,分子量为36 ku的主要过敏原蛋白仍然存在,免疫印迹的结果显示其免疫活性有不同程度的下降,高压对免疫活性的降低程度最大,30 min时免疫活性降低了97%;在25~35 ku区域出现一条新的IgE结合蛋白。质构分析结果显示,经过高压热处理后,虾肉的硬度和咀嚼度都有很大程度的降低,口感变差。结果表明:热高压处理在降低虾过敏活性的同时,对其口感也有一定的影响,有必要通过优化高温高压处理工艺,在保持虾口感及营养的基础上,降低其过敏活性。     

南极磷虾主要过敏原的分离纯化及性质研究

为了探究南极磷虾致敏问题,从南极磷虾中筛选、鉴定、分离纯化其主要过敏原,并对过敏原的性质进行研究,实验通过缓冲盐溶液提取南极磷虾蛋白;采用SDS-PAGE和Western blot(WB)筛选南极磷虾过敏原;使用高效液相色谱-串联质谱鉴定过敏蛋白;通过等电点沉淀、硫酸铵盐析、阴离子交换柱层析分离纯化过敏原;采用SDS-...     

Identification of tropomyosin as a major allergen in the octopus Octopus vulgaris and elucidation of its IgE-binding epitopes

ABSTRACT: The major allergen (named Oct v 1) in the muscle of the octopus Octopus vulgaris was purified by gel filtration on Sephacryl S-300, anion-exchange fast protein liquid chromatography on Mono Q and reverse-phase high-pressure liquid chromatography on TSKgel Octadecyl-4PW. In addition to the molecular mass, amino acid composition and cross-reactivity with Tur c 1 (turban shell Turbo cornutus allergen), the determined partial amino acid sequence clearly demonstrated that Oct v 1 is tropomyosin, similar to the known molluscan and crustacean allergens. Using peptide fragments isolated from the lysylendopeptidase digest of Oct v 1, competitive enzyme-linked immunosorbant assay inhibition experiments showed that IgE-binding epitopes of Oct v 1 are contained in two peptides (77–112 and 148–160) in the central region and one peptide (269–281) in the C-terminal region. In the peptide 77–112, the same sequence as the IgE-binding epitope proposed for Cra g 1 (oyster Crassostrea gigas allergen) is recognized at 92-105. Moreover, the peptide 148-160 partly overlaps with the IgE-binding epitopes suggested for Pen i 1 (shrimp Penaeus indicus allergen) and Pen a 1 (shrimp Penaeus aztecus allergen), and the peptide 269–281 with those for Tur c 1 and Pen a 1.     

真鲷天然抗性相关巨噬蛋白全长cDNA的克隆与序列分析

Natural resistance associated macrophage protein (Nmmp) is an innate resistance protein to intracellular parasites, which is expressed plentifully in macrophage ceils. Nramp has been studied in mouse, human, cattle, rainbow trout and channel catfish.However, tittle was known about the structure of Pagrus major Nramp. In order to get the complete sequence of Pagrus major Nramp, a pair of primer is designed according to a 200bp known sequence of Pagrus major Nramp cDNA. By the use of SMART RACE, the full Nramp of Pagrus major cDNA about 5 000 bp was obtained, including about 200 bp 5‘ terminal region (UTR),complete encoding region and 3‘ terminal region. There were 3 ployA signals, which showed many possibilities of cutting at 3‘ terminal region. The character of Pagrus major Nramp nucleotide sequence and deduced amino acid sequence are analyzed. 12 putative transmembrane(TM) regions, a consensus transport motif (CTM), a predicted protein kinase C phosphroylation site and three predicted N-link glycosylation sites are indicated in its deduced amino acid sequence. The ‘consense transport motif‘ CTM is located etween TM8 and TM9. Furthermore, a protein kinase C phosphroylation site and three N-link glycosylation sites were predicted. The lignment of amino acid sequences between Pagrus major Nramp cDNA and several animals is analyzed and the deduced amino acid equence of Pagrus major Nrarnp had 77.8%, 83.0%, 82.3%, 80.0%, 81.1%, 60.4%, 70.3%, 58.5%, 69.5% identity ith rainbow trout α(AAD20721), rainbow trout β(AAD20722), channel catfish(AF400108), fathead minnow (AAF01778),common carp (CABal96), mouse 1 ( AAA39838 ), mouse 2 ( AAC42051 ), human 1 ( D50403 ), human 2 ( NP - 0(106(18 ),respectively. The alignment reveals high conservation in TM and CTM regions. Analysis result makes us get familiar with the structure nd character of fish Nramp, furthermore, offers some infonnat/on for the enhancement of immunity of fish and genetic amelioration on fish breeding.     

加工方式对刀额新对虾主要过敏原免疫原性的影响

选取冻干、烘干、虾丸化以及油炸4种加工方式处理刀额新对虾,通过检测可溶性蛋白、主要过敏原含量和免疫活性的变化以及体外模拟胃液消化实验,分析加工方式对虾类过敏原免疫活性及抗酶解能力的影响。结果表明经过不同的加工处理后,分子量为35 ku左右的主要过敏原蛋白仍然存在,免疫印迹显示其免疫活性有不同程度的下降,其中虾丸化处理对免疫活性的降低程度最大,达87%,冻干处理的影响最小,仅达6.8%;而主要过敏原蛋白抗酶解能力变化不明显。结论:不同的加工方式对虾过敏原活性的降低有比较大的差异,但对于抗酶解能力影响不大。     

鲢鱼骨骼肌过敏原小清蛋白的分离纯化及多克隆抗体制备与应用

小清蛋白是鱼类的主要过敏原,对该蛋白的研究不仅有利于过敏原检测方法的建立也可为低致敏性水产品的开发提供理论依据。通过组织捣碎、冷冻离心、热处理、Superdex75凝胶过滤等方法从鲢白色肉中纯化得到过敏原小清蛋白。Tricine-SDS-PAGE显示,在非还原条件下,该蛋白呈分子量分别为12ku、14ku、24ku的3个条带。而在还原条件下,仅有分子量为12ku的条带。Western-blotting分析表明,分子量为12ku、14ku和24ku的这3个条带都与小鼠抗蛙小清蛋白单克隆抗体(PARV-19)发生特异性反应,提示它们均为小清蛋白的不同形态。用纯化的小清蛋白制备多克隆抗体,经Protein A Sepharose亲和层析纯化得到高纯度的免疫球蛋白G(IgG)。Dot-blot检测发现,抗体稀释至1/51200时仍能与纯化的小清蛋白有显色反应。用制备的多克隆抗体进行Western-blotting分析,能特异地检测4种鱼(鲤、鲢、鲫、黄鳍鲷)中的小清蛋白。