微生物发酵对罗非鱼下脚料蛋白酶解液脱腥去苦效果比较

以嗜热链球菌(Streptococus thermophilus)、保加利亚乳杆菌(Lactobacillus bulgaricus)和瑞士乳杆菌(L.helveticus)及2种酿酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)为菌种,对罗非鱼(Oreochromis niloticus)下脚料蛋白酶解液进行发酵,利用感官评定法,比较不同微生物发酵对酶解液脱腥去苦效果.试验结果表明,乳酸菌脱腥效果优于酵母菌,其中以嗜热链球菌脱腥效果最好,其适宜的发酵条件为接种量10%,发酵温度42℃,发酵时间9 h.微生物发酵去苦效果不明显.     

一种复方中草药消毒液杀菌效果试验

选择几种体外有良好杀菌效果的中草药制成一种复方制剂,研究其对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、链球菌、枯草芽胞杆菌作灭活效果。实验结果表明:其3.30%稀释液作用3min对金黄色葡萄球菌杀灭率达99.96%,作用5min对大肠杆菌杀灭率达99.95%,作用5min对白色念珠菌杀灭率达99.98%;作用3min对链球菌和枯草芽胞杆菌杀灭率均≥99.94%,在有机物存在下杀菌效果不受影响。置54℃温箱14天后,杀菌效果基本不变。     

枯草芽孢杆菌固态发酵工艺研究

对枯草芽孢杆菌（Bacillus Subtilis）的固态发酵工艺进行了研究，包括碳源、氮源、含水量、初始pH、接种时间、接种量等影响因素，并通过单因子试验和正交试验优化，确定了枯草芽孢杆菌的固态发酵工艺为：（1）培养基：麸皮19．5g，稻谷壳0．5g，豆粕1．0g，水22mL；（2）发酵条件：初始pH为7．0、接种时间20h，接种量为0．9mL。照此工艺发酵，枯草芽孢杆菌的活茵数高达435亿个／g。     

罗非鱼无乳链球菌拮抗株的筛选及特性研究

自吉富罗非鱼养殖池塘水体、底泥和鱼体肠道中筛选无乳链球菌拮抗株。对其中1株抑菌能力最强的菌株LT3-1进行溶血性、形态、生理生化、16S rRNA基因序列测定,并进一步对其抑菌活性与发酵时间的关系、抑菌物质对温度的耐受性、产酶性能、降解亚硝酸盐性能、药物敏感性、安全性试验、攻毒试验进行研究。鉴定结果表明,菌株LT3-1为枯草芽孢杆菌,无溶血性。液体发酵16 h时,抑菌活性最强,抑菌圈平均直径为(25.30±0.57) mm。随温度的升高抑菌活性下降,但仍然存在,说明抑菌物质有耐高温特性。枯草芽孢杆菌LT3-1具有水解蛋白、淀粉和纤维素的能力。亚硝酸盐降解试验表明,枯草芽孢杆菌LT3-1菌液密度为10^5 cfu/mL时,6 h即可将亚硝酸盐质量浓度由2.5 mg/L降至0.03 mg/L,降解率达98.8%( P <0.05)。枯草芽孢杆菌LT3-1对检测的9种抗生素均敏感,罗非鱼接种密度为10^7 cfu/mL的枯草芽孢杆菌LT3-1菌液200 μL后,仍然存活且未有异常表现。动物攻毒试验表明,添加0.05%枯草芽孢杆菌LT3-1菌粉的试验组罗非鱼存活率提高20%,显著高于对照组( P < 0.05 )。综上所述,筛选自吉富罗非鱼肠道的枯草芽孢杆菌LT3-1能有效拮抗罗非鱼无乳链球菌,可以作为防治当地罗非鱼无乳链球菌病的良好菌种资源。     

微生物在饲料开发中的应用

1 用于饲料开发的微生物 微生物种类多,其代谢特征各异,菌体蛋白质含量较高, 能利用的物质也很丰富,这就奠定了其在饲料开发中的重要 地位.因为饲料是动物要进食的,所以用于饲料生产的微生物 必须无毒,同时,动物饲用其代谢产物或菌体后应该有益并且 要适于生产过程中的各种环境.细菌、放线菌、酵母菌和丝状 真菌中的许多种都已用于饲料生产.酵母菌中的酿酒酵母、假 丝酵母、白地霉等用于生产SCP或生理活性物质,细菌中的 乳酸菌、链球菌、肠道细菌、芽胞杆菌、光合细菌等已制成微生 态制剂,用于畜禽饲料生产的芽胞杆菌有枯草芽胞杆菌、地衣 芽胞杆菌、凝结芽胞杆菌、缓慢芽胞杆菌、短小芽胞杆菌、蜡样 芽胞杆菌、环状芽胞杆菌、巨大芽胞杆菌、坚强芽胞杆菌、东洋 芽胞杆菌、纳豆芽胞杆菌、芽胞乳杆菌、丁酸梭菌等,丝状真菌 已用于纤维素等难利用物质的处理和生产饲用酶制剂,放线 菌也已用于生产饲料添加剂.     

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)在刺参养殖中的益生作用

运用生化方法分析了不同浓度枯草芽孢杆菌制剂对养殖水质、刺参的生长、消化酶活性、非特异性免疫酶活性的影响。结果显示,与对照组相比,添加枯草芽孢杆菌制剂,能够显著降低养殖水体中的硝酸盐和亚硝酸盐,去除率最高可达42.28%和22.33%,对水体中氨氮含量和化学需氧量影响不显著;实验组刺参特定生长率显著提高,枯草芽孢杆菌添加量为6×10–6时,SGR提高40.74%,添加量为6×10–6时,淀粉酶活性提高30.27%,添加量为5×10–6时,蛋白酶活性提高53.93%,达到显著水平差异,但脂肪酶活性无显著提高;非特异性免疫酶(过氧化物酶、碱性磷酸酶、溶菌酶、超氧化物歧化酶)活性均显著高于对照组,枯草芽孢杆菌添加6×10–6效果最好,分别提高135%、27%、396%、192%。本研究表明,添加适当的枯草芽孢杆菌能够有效改善刺参养殖水体水质,提高机体消化酶和非特异性免疫酶活性,从而促进刺参生长。     

苏云金芽孢杆菌酵解大西洋鲑加工废弃物制备抗氧化酵解液研究

为减少因大西洋鲑加工废弃物中的蛋白成分而造成的环境污染和资源浪费,同时提高其综合利用价值,探索以大西洋鲑加工废弃物制成的干粉为原料,使用一株苏云金芽孢杆菌,通过控制料液比、接种量、发酵时间、温度、pH和菌龄等发酵条件来酵解鱼粉,以制取抗氧化酵解液。首先以总抗氧化活性和α-氨基氮含量为指标,找到最佳单因素条件;然后在单因素试验的基础上,以水解度和总抗氧化活性为指标,使用正交实验L_(25)(5~6)对发酵条件进行优化,确定最佳发酵条件为:料液比2.0 g/50 m L,接种量3%,发酵时间72 h,温度30℃,pH 6.6,菌龄48 h,该条件下酵解得到的发酵液总抗氧化活性为503.59 U,鱼粉水解度为17.29%。研究表明,采用苏云金芽胞杆菌酵解大西洋鲑加工废弃物以制取抗氧化酵解液,具有一定的可行性。     

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)在刺参养殖中的益生作用

运用生化方法分析了不同浓度枯草芽孢杆菌制剂对养殖水质、刺参的生长、消化酶活性、非特异性免疫酶活性的影响。结果显示,与对照组相比,添加枯草芽孢杆菌制剂,能够显著降低养殖水体中的硝酸盐和亚硝酸盐,去除率最高可达42.28%和22.33%,对水体中氨氮含量和化学需氧量影响不显著;实验组刺参特定生长率显著提高,枯草芽孢杆菌添加量为6×10–6时,SGR提高40.74%,添加量为6×10–6时,淀粉酶活性提高30.27%,添加量为5×10–6时,蛋白酶活性提高53.93%,达到显著水平差异,但脂肪酶活性无显著提高;非特异性免疫酶(过氧化物酶、碱性磷酸酶、溶菌酶、超氧化物歧化酶)活性均显著高于对照组,枯草芽孢杆菌添加6×10–6效果最好,分别提高135%、27%、396%、192%。本研究表明,添加适当的枯草芽孢杆菌能够有效改善刺参养殖水体水质,提高机体消化酶和非特异性免疫酶活性,从而促进刺参生长。     

生物絮凝技术处理水产养殖用水效果的初步研究

在水产养殖中应用生物絮凝技术(BFT),可以将养殖过程中产生的残饵和粪便转化为可被部分养殖对象重新摄食的絮体饵料,而且在絮凝体形成过程中对水体氨氮等物质的去除有明显作用。试验在自建的生物絮凝反应器中分别接种活性污泥和枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis),研究絮凝体形成过程中主要水质指标的变化情况。结果表明:接种活性污泥的装置中,氨氮、亚硝酸盐氮的去除率分别为72.25%、94.04%;接种枯草芽孢杆菌的装置中,氨氮、亚硝酸盐氮的去除率分别为81.53%、97.89%;同时接种活性污泥和枯草芽孢杆菌的装置中,氨氮、亚硝酸盐氮的去除率分别为40.85%、63.19%;对照装置中不接种任何物质,氨氮、亚硝酸盐氮的去除率分别为11.41%、70.56%。分别接种活性污泥和枯草芽孢杆菌的装置在去除氨氮、亚硝酸盐氮方面较好。试验装置中所形成的絮体颗粒直径在0.1~1.0 mm,粒径大小适合作为部分养殖鱼类稚鱼期的开口饵料。     

枯草芽孢杆菌的培养条件及对水质的净化作用

研究了枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis Cohn,1872)(菌株编号:LB-B3)的培养条件及其在净化对虾养殖池水样方面的效果。实验分别设置了9个不同的pH值梯度(pH 2～10)和6个不同接种量梯度(0.3%、0.5%、1%、3%、5%和7%),以吸光值(OD)为生长指标,进行了枯草芽孢杆菌培养条件的优化实验;同时又设置了5个不同接种浓度(0 CFU/mL、5.2×104CFU/mL、1.04×105CFU/mL、1.56×105CFU/mL和2.08×105CFU/mL)接种待处理水样,测定了96 h内化学耗氧量、亚硝酸氮、氨态氮和溶氧等4个水质指标的变化情况。结果表明:pH=7.0、接种量为7.0%时,OD值最大;枯草芽孢杆菌能显著净化水质,但使用后会暂时性增加耗氧。     

Effects of feeding soybean meal with varying trypsin inhibitor activities on growth of fingerling channel catfish

Uncooked hexane extracted soybean meal was heated for various lengths of time to produce meals with varying trypsin inhibitor activities. Fingerling channel catfish (Ictalurus punctatus) were fed 25 and 35% crude protein practical type test diets containing soybean meal with graded levels of trypsin inhibitor activity for 10 weeks. Growth rates and protein efficiency ratio (PER) values were reduced in fish fed raw and inadequately heated soybean meal at both protein levels. These effects were more severe at the lower dietary protein level. Growth rates and PER values improved in each study as the trypsin inhibitor activity of the soybean meal decreased to tolerable levels. Fish fed the 35% crude protein diets appeared to tolerate soybean meal with much higher trypsin inhibitor activity than fish fed the 25% crude protein diets. Even though growth rates and PER values were not significantly different over a rather wide range of dietary trypsin inhibitor activities, the best growth rates were not observed at either protein level until about 83% of the trypsin inhibitor activity in the soybean meal had been destroyed.     

枯草芽孢杆菌B2的生长及其对仿刺参的益生特性

从大连湾地区健康的仿刺参养殖池塘沉积物中分离得到一株芽孢杆菌菌株B2,经16SrDNA鉴定以及形态学分析确定其为枯草芽孢杆菌。该菌株生长适宜温度为15~35℃,适宜pH为6~8,适宜盐度为30~50。电镜观察发现,枯草芽孢杆菌B2周围有明显可见的芽孢。枯草芽孢杆菌B2可产淀粉酶和蛋白酶,但不具有产脂肪酶的能力。将枯草芽孢杆菌B2按照仿刺参体质量的0.1%、0.2%和0.3%配成不同密度的菌液,添加至饲料中,投喂7d后发现,该菌株可有效提高仿刺参肠道内的消化酶以及体腔液中多种非特异性免疫酶的活性。结果表明,枯草芽孢杆菌B2可作为益生菌剂的基础菌株添加至仿刺参饲料中。     

4株凡纳滨对虾肠道益生菌分离、鉴定及应用研究

为将凡纳滨对虾肠道分离的益生菌用于对虾的养殖,利用乳酸菌培养基分离对虾肠道中的益生菌并对菌株进行初步分类鉴定,利用体外抑菌方法筛选有抗菌活性的菌株,用于考察对虾实验室养殖过程中抗有关致病菌的效果。试验结果显示,自虾肠道分离得到W7、W25、W27、W31菌株,分别属于啤酒酵母、短小芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌沙漠亚种和暹罗芽孢杆菌,它们对致病菌副溶血弧菌、金黄色葡萄球菌和沙门氏菌有一定的抗菌活性,其中暹罗芽孢杆菌W31抗菌效果最好。将啤酒酵母W7和暹罗芽孢杆菌W31菌体与饲料混合用于对虾的养殖,能够明显增强凡纳滨对虾抵抗弧菌侵染的能力,提高存活率。     

海带抗菌活性的研究

研究了海带提取物对4种微生物:枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、黑曲霉、酵母菌的抗菌作用,并对海带提取物的提取条件进行研究.试验结果表明:海带提取物仅对枯草芽孢杆菌具有抗菌作用;较好的提取溶剂为95%甲醇.最佳提取条件为:温度为30 ℃,时间为8 h,pH 7.     

Purification and characterization of three trypsin isoforms from viscera of sardinelle (<Emphasis Type="Italic">Sardinella aurita</Emphasis>)

Three trypsin isoforms A, B and C were purified to homogeneity from the viscera of sardinelle (Sardinella aurita). Purification was achieved by ammonium sulfate precipitation (20–70% (w/v)), Sephadex G-100 gel filtration and Mono Q-Sepharose anion-exchange chromatography. The molecular weights of these purified enzymes were estimated to be 28.8 kDa by sodium dodecyl sulfate–polyacrylamide gel electrophoresis (SDS–PAGE). Based on the native PAGE and casein-zymography, each purified trypsin appeared as a single band. Trypsins A and C exhibited the maximal activity at 55°C, while trypsin B at 50°C. All isoforms showed the same optimal pH (pH 9.0) using Nα-benzoyl-dl-arginine-p-nitroanilide (BAPNA) as a substrate. The three trypsins were stable at temperatures below 40°C and over a broad pH range (7.0–11.0). The activities of the three isoforms were strongly inhibited by soybean trypsin inhibitor and phenylmethylsulfonyl fluoride, a serine protease inhibitor, and partially inhibited by ethylenediaminetetraacetic acid, a metalloenzyme inhibitor. Kinetic constants of trypsins A, B and C for BAPNA were evaluated at 25°C and pH 9.0. The values of K _m and k _cat were 0.125, 0.083 and 0.10 mM, and 2.24, 1.21 and 5.76 s⁻¹, respectively. The N-terminal sequences of the first 10 amino acids were “I V G G Y E C Q K Y” for trypsin A and “I V G G Y E A Q S Y” for trypsins B and C. These sequences showed highly homology to other fish trypsins.     

不同大豆产品替代鱼粉饲养南美白对虾的试验

分别采用脱皮豆粕、大豆蛋白、发酵豆粕等大豆产品,等氮替代饲料中10%的鱼粉(对照组鱼粉35%,替代组鱼粉25%),饲养体重为0.06 g南美白对虾(Penaeus vannam eiBoone)一个月,结果表明,对照组(35%鱼粉)幼虾的增重率、成活率均最大,为1316%、97.5%;脱皮豆粕组幼虾的增重率为最低,仅783%;哈姆雷特大豆蛋白、比多福大豆蛋白、富肽蛋白(发酵豆粕)组幼虾增重率为1033%、983%、1050%,均显著高于脱皮豆粕组(P<0.05),但低于对照组(P<0.05);对虾体肌肉成分的分析显示,各组幼虾肌肉在水分、蛋白质含量方面没有显著差异。上述结果表明,大豆蛋白和发酵豆粕均为优于脱皮豆粕的鱼粉替代品。     

发酵豆粕替代鱼粉对凡纳滨对虾生长、免疫相关酶及免疫相关基因表达的影响

从免疫相关酶活及基因转录水平角度探讨发酵豆粕替代鱼粉对凡纳滨对虾健康生长及免疫机能机制的影响。实验设置5种实用饲料,以30%鱼粉组(FM)为对照组,分别用4%(FSM4)、8%(FSM8)、12%(FSM12)和16%(FSM16)的发酵豆粕,替代9.7%、19.4%、29.1%和38.8%鱼粉,分为4个处理组,饲养体质量为(7.62±0.23)g的凡纳滨对虾60 d后,统计生长性能,检测肌肉营养成分、血清及肝胰腺免疫相关酶活性,肝胰腺HSP70和鳃Toll受体、IMD、溶菌酶(LZM)免疫相关基因m RNA的表达水平。结果显示:(1)与对照组相比,发酵豆粕替代鱼粉对凡纳滨对虾成活率无显著影响;过低或过高水平的发酵豆粕替代鱼粉皆会影响凡纳滨对虾的特定生长率。(2)除FSM12组外,肌肉粗蛋白含量发酵豆粕替代组均低于对照组;粗脂肪含量随着发酵豆粕替代量的升高而降低,FSM16组最低。(3)血清谷丙转氨酶活FSM4和FSM16组显著高于对照组;谷草转氨酶活FSM4组最高,而FSM8组最低;除FSM12组外;碱性磷酸酶活性发酵豆粕替代组显著高于对照组;除FSM16组外,血清总蛋白与肝胰腺丙二醛含量发酵豆粕替代组与对照组无显著性差异。(4)随着发酵豆粕替代量增加,鳃Toll受体m RNA表达呈上升趋势,鳃IMD m RNA表达则呈先升后降趋势,发酵豆粕替代比例过高会降低鳃LZM m RNA表达水平,而肝胰腺HSP70 m RNA表达量则随着发酵豆粕替代比例增加呈上升趋势。综上所述,发酵豆粕适量替代鱼粉对凡纳滨对虾生长性能无显著影响,并可提高免疫相关酶活,改变免疫相关基因的表达。本实验条件下适宜发酵豆粕用量为8%~12%;替代量过高,会引起机体的过度应激。     

Anionic Trypsin from the Pyloric Ceca of Pacific Saury (Cololabis saira): Purification and Biochemical Characteristics

Anionic trypsin from Pacific saury (Cololabis saira) pyloric ceca was purified to homogeneity by ammonium sulfate precipitation, ion-exchange chromatography, and gel filtration chromatography. It was purified to 53.7-fold with a yield of 6.1%. The apparent molecular weight of the enzyme was about 24 kDa, as determined by size exclusion chromatography and sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). On native-PAGE, trypsin showed a single band. The purified anionic trypsin displayed optimal activity at pH 8.5 and 55°C. The enzyme was stable at neutral and alkaline pH and in the temperature range of 20–50°C. The stability was affected by the calcium ion. The activity of purified anionic trypsin was completely inhibited by soybean trypsin inhibitor and N-p-tosyl-L-lysine chloromethyl ketone (TLCK) and partially inhibited by ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA). NaCl (0–30%) decreased the activity in a concentration-dependent manner. The kinetic trypsin constants K_m and K_cat were 0.19 mM and 210 s^?1, respectively, while the catalytic efficiency (K_cat/K_m) was 1105.26 s^?1 mM^?1. The N-terminal amino acid sequences of anionic trypsin, IVGGYECQAH, were found and were homologous to those of trypsin from other fish species.     

暗纹东方鲀饲料中豆粕替代鱼粉的营养生理效应及其与大豆抗原蛋白的相关性

选择体质量为(39.84±3.09)g暗纹东方鲀,分为8组,分别饲喂等氮等能的高鱼粉组、低鱼粉组、低鱼粉发酵豆粕组、低鱼粉豆粕组4组实用饲料和添加大豆抗原蛋白的半纯化饲料(大豆抗原蛋白含量分别为0%、5%、8%和12.5%),进行为期两个月的生长实验,探讨大豆抗原蛋白对暗纹东方鲀生长和生理生化的影响。结果显示,用发酵豆粕替代部分鱼粉的低鱼粉发酵豆粕组生长性能显著优于低鱼粉组,用豆粕替代部分鱼粉的低鱼粉豆粕组与低鱼粉组无显著差异。半纯化饲料中随着大豆抗原蛋白含量增加,生长率呈现先增后降趋势;实用饲料和半纯化饲料对肌肉组成有不同程度的影响;在肝脏丙二醛、总抗氧化能力和血清丙二醛指标中,低鱼粉豆粕组显著高于低鱼粉组,低鱼粉发酵豆粕组则与低鱼粉组无显著性差异,半纯化饲料系列在8%组出现峰值,显著高于其他组。低鱼粉豆粕组血清谷草转氨酶活性显著高于低鱼粉组,低鱼粉发酵豆粕组与低鱼粉组相比无显著性差异,半纯化饲料组谷草转氨酶和谷丙转氨酶呈现先增后减趋势。研究表明,与豆粕替代鱼粉相比,用发酵豆粕替代鱼粉更能促进鱼体生长;大豆抗原蛋白是影响豆粕替代鱼粉效果的重要因素,但对生长、抗氧化性能和生理生化指标的影响则因大豆抗原蛋白的含量与单独存在与否而异。