花鲈免疫球蛋白的分离纯化及部分特性分析

分离纯化了花鲈(Lateolabrax japonicus)血清免疫球蛋白(Ig),并对其特性进行初步研究与分析.采用山羊-IgG(Goat-IgG)免疫花鲈并制备血清,分别采用硫酸铵分级沉淀法、A蛋白亲和层析法及Goat-IgG偶联亲和层析法提取花鲈Ig,对提取组份进行了蛋白浓度测定、间接ELISA效价测定、SDS-PAGE和Western-blotting分析.结果表明,采用硫酸铵分级沉淀法提取的花鲈Ig主要集中在硫酸铵饱和度为30%～50%的区间,其中45%饱和度硫酸铵富集的的抗体比活最高,ELISA效价为2×104/mg蛋白,比血清ELISA效价提高2.2倍;A蛋白柱亲和层析可得单一蛋白峰,洗脱峰集中在洗脱体积0.8～1.6 mL,处,占洗脱蛋白总量的76.2%,峰值的ELISA效价为1.37×105/mg蛋白,抗体得率为2.57%;Goat-IgG偶联Sephrose 4B亲和柱层析也可得单一蛋白峰,洗脱峰集中在洗脱体积1.4～2.8 mL处,占洗脱蛋白总量的72.4%,峰值的ELISA效价为1.39×105/mg蛋白,抗体得率为2.63%.以上3种提取方法均可得到79 kD的重链和29 kD轻链,表明可得到纯化的免疫球蛋白;采用鼠抗花鲈Ig血清和单抗AA5经Western-blotting证实提取成份为花鲈Ig.本研究表明,A蛋白柱和Goat-IgG偶联柱亲和层析均可用于花鲈Ig的提取,其中A蛋白柱法获得的洗脱峰值更为集中,抗体效价高,且提取过程不需要Goat-IgG免疫鱼体,是一种更为有效的免疫球蛋白提取方法.     

中华鲟、史氏鲟及达氏鳇血清免疫球蛋白的纯化及部分特性分析

采用饱和硫酸氨分步沉淀和Sephadex G200凝胶层析的方法，首次分别纯化制备了健康非免疫状态下中华鲟（Acipenser sinensis）、史氏鲟（Acipenser schrenckii）和达氏鳇（Huso dauricus）的血清免疫球蛋白（Ig） ，并采用聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDSPAGE）、蛋白免 疫印迹（Western blotting）及免疫琼扩实验等方法对其Ig及Ig亚单位的分子量和部分特性进行了分析。PAGE及SDSPAGE的结果显示：史氏鲟，中华鲟和达氏鳇IgM的相对分子量分别为867 kD， 896 kD和924 kD；3种鲟鱼Ig的重链分子量均为88 kD，都具有29 kD的轻链，其中达氏鳇还另有一分子量约为26 kD的轻链蛋白。分子量的测定及计算结果显示鲟鱼的Ig为四聚体。Western-blotting的检测结果表明，3种鲟鱼Ig的重链与其Ig具有同样的抗原性，在硝酸纤维素膜上可被兔抗鲟Ig多克隆抗体所识别，而轻链的Western blotting检测结果则呈阴性。免疫沉淀反应的结果显示，3种鲟鱼的血清及其Ig与相互之间的兔抗Ig血清有免疫沉淀反应，但与兔抗鲤Ig血清无免疫沉淀反应，这表明3种鲟科鱼类的Ig在结构和序列上是较为相似的，而与鲤鱼等高等硬骨鱼类的Ig存在较大的差别。     

黄鳍鲷骨骼肌伴肌动蛋白的纯化及其抗体制备

采用Sephacryl S-400凝胶过滤柱层析和电洗脱等纯化方法,首次从黄鳍鲷骨骼肌中分离纯化到伴肌动蛋白,并制备了特异性多克隆抗体.多克隆抗体经Protein A-Sepharose亲和层析柱纯化得到高纯度免疫球蛋白G(IgG).采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、免疫斑点印迹(Dot-Blot)和免疫印迹(Western-Blot)等方法对纯化的伴肌动蛋白及其多克隆抗体进行分析鉴定,并研究了不同贮藏条件下伴肌动蛋白的变化情况.SDS-PAGE结果显示本研究从黄鳍鲷骨骼肌中分离纯化了高纯度伴肌动蛋白;Dot-Blot检测结果显示兔抗黄鳍鲷伴肌动蛋白多克隆抗体效价为5×104;Western-blot检测表明兔抗黄鳍鲷伴肌动蛋白多克隆抗体能与肌原纤维蛋白中的伴肌动蛋白发生特异性反应,而与其它蛋白不发生免疫交叉反应.     

大黄鱼血清IgM纯化及其兔抗血清的制备

分别用饱和硫酸铵二次盐析法和蛋白A亲和层析法对健康大黄鱼（Pseudosciaena crocea）血清中的免疫球蛋白（IgM）进行分离纯化,所得产物用SDS-PAGE进行检测.结果表明,蛋白A亲和层析法可以较好地分离到高纯度的大黄鱼血清IgM,产物的电泳胶中只有重链和轻链2个条带;饱和硫酸铵二次盐析法除了有这2个条带,还有很多杂带,而且蛋白A亲和层析法更为简便、快速,因此用蛋白A亲和层析法分离纯化IgM优于饱和硫酸铵二次盐析法;大黄鱼免疫球蛋白重链的分子量在76 kD左右;轻链分子量在28 kD左右.用纯化的大黄鱼IgM免疫实验兔,获得效价高达1：40 960的兔抗鱼IgM血清.本实验所建立的蛋白A亲和层析法提取大黄鱼血清IgM可以方便、快捷地获得高纯度的产物,适合在实验室中纯化鱼类IgM.本研究所制备的兔抗大黄鱼IgM血清可为今后的相关研究工作打下基础.[中国水产科学,2006,13（3）：475-479]     

固始鸡血清免疫球蛋白G的纯化及分子量的测定

采用硫酸铵分级沉淀法、葡聚糖凝胶Sephadex-25层析脱盐、DEAE-纤维素纯化等方法获得固始鸡血清免疫球蛋白G,再用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法进行分离,发现固始鸡血清免疫球蛋白显示两条蛋白谱带,它们分别是固始鸡血清免疫球蛋白G的重链(H)和轻链(L),与已知分子量的标准参照蛋白比较,测得其分子量分别约为72000kD、30000kD。     

绵羊血清免疫球蛋白G的纯化及分子量的测定

采用硫酸胺分级沉淀法、葡聚糖凝胶Sephadex-25层析脱盐、DEAE-纤维素纯化等方法获得绵羊血清免疫球蛋白G。通过SDS-聚丙稀酰胺凝胶电泳法进行分离获得绵羊血清免疫球蛋白G的重链(H链)和轻链(L链),与已知分子量的标准参照蛋白比较,测得重链的分子量约为53000～57000Da,轻链的分子量约为27000～29000Da。     

绵羊血清免疫球蛋白G的纯化及分子量的测定

采用硫酸胺分级沉淀法、葡聚糖凝胶Sephadex-25层析脱盐、DEAE-纤维素纯化等方法获得绵羊血清免疫球蛋白G。通过SDS-聚丙稀酰胺凝胶电泳法进行分离获得绵羊血清免疫球蛋白G的重链（H链）和轻链（L链），与已知分子量的标准参照蛋白比较，测得重链的分子量约为53000—57000Da，轻链的分子量约为27000—29000Da。     

中华鲟和达氏鳇血清免疫球蛋白的木瓜蛋白酶水解片段分析

首先采用饱和硫酸氨分步沉淀和Sephadex G-200凝胶层析的方法,获得了非免疫状态下中华鲟(Acipenser sinensis Gray)和达氏鳇(Huso dauricus Georgi)的血清免疫球蛋白(Ig),在此基础上使用木瓜蛋白酶水解对所获得的免疫球蛋白片段进行了酶解,并采用SDS-PAGE和Western-blot等方法分析了所获得的水解片段。结果显示,2种鲟鱼的免疫球蛋白均可被木瓜蛋白酶水解蛋白,通过Sephadex G-100凝胶层析后均可得到两个完全分离的、均一的蛋白峰。SDS-PAGE检测两个水解片段的相对分子量分别为44KD和66KD,West-ern-blot检测结果显示,66KD的片段可以在硝酸纤维素杂交膜上被各自的兔抗鲟IgM多克隆抗体所识别,而44KD片段的检测结果为阴性。这表明,2种鲟科鱼类的木瓜蛋白酶水解特性相同,提示鲟科鱼类的免疫球蛋白在免疫学及生化方面具有较大的相似性。     

欧洲鳗鲡血清免疫球蛋白纯化及其结构分析

应用亲和层析技术提纯欧洲鳗鲡免疫球蛋白（Ig），并对欧鳗Ig的结构和抗原性进行分析。层析结果表明：Ig蛋白呈现一个锐形曲线，蛋白峰与抗原活性峰高度重叠。SDSPAGE分析表明：欧鳗Ig重链分子量为68 kD，轻链有3条，分子量分别为21 kD、23 kD和26 kD。凝胶电泳结果显示：在非变性非还原条件下，欧鳗Ig有790 kD和350 kD 2条蛋白带，在变性非还原条件下有790 kD、593 kD和350 kD 3条蛋白带。Western-blotting试验证实：兔抗欧鳗Ig能识别欧鳗Ig的多种不同聚合体和Ig的重链，但不能识别Ig的轻链。结论：欧鳗Ig在自然条件下可能以四聚体和二聚体的形式存在，这与其它硬骨鱼的Ig形式有差异。欧鳗Ig链间二硫键不健全,在SDS作用下可解聚产生多种不同分子量的聚合体，首次揭示欧鳗Ig的轻链有3种异型。     

黄鳍棘鲷血清IgM的纯化及兔抗血清的制备

分别采用Sepharose-6B凝胶过滤层析、Phenyl Sepharose FF疏水作用层析和rProtein A Sepharose亲和层析技术纯化黄鳍棘鲷（Acanthopagrus latus）血清IgM，并将这3种层析纯化方法进行了比较。纯化产物进行SDS—PAGE，电泳结果扫描后经Band Scan5．0软件分析显示，单独使用Sepharose-6B凝胶过滤层析或Phenyl Sepharose FF疏水作用层析得到的IgM纯度只有56％左右；二者联合使用纯度可以达到69％，而rProtein A Sepharose亲和层析一步就可以达到89％的纯度；纯化得到的黄鳍棘鲷血清IgM的重链和轻链分子量分别为73．6kD和26．5kD。本研究还以rProtein A Sepharose亲和层析纯化的黄鳍棘鲷血清IgM为抗原，制备其兔抗血清，采用Western Blot和双向琼脂扩散检测抗血清免疫学活性，并用间接ELISA检测其效价达到1：25600，为进一步开展黄鳍棘鲷免疫学方面的研究奠定了基础。     

17-β雌二醇对西伯利亚鲟卵黄蛋白原的诱导及检测

以17β雌二醇(E2)诱导西伯利亚鲟幼鱼,取其血清样品后利用凝胶过滤层析进行分析,诱导组鱼血清中较对照组的多出一蛋白峰;收集浓缩该峰后经离子交换两步层析法进行分离,成功分离出西伯利亚鲟卵黄蛋白原(Vtg)。分离出的Vtg于7.5%的Native-PAGE凝胶电泳分析,得出其分子量为390 KDa;对Vtg氨基酸组成检测结果显示,谷氨酸、丙氨酸、赖氨酸、天冬氨酸和亮氨酸含量较高,分别为12.25%、10.15%、8.43%、8.37%和8.11%,但甲硫氨酸和组氨酸含量相比较低,分别为1.56%和2.42%。     

Species Differentiation by Multivariate Analysis of Headspace Volatile Patterns from Canned Pacific Salmon

Multivariate statistical analyses were applied to forty four volatile compounds measured by static headspace gas chromatography with the aim of differentiating between four species of canned Pacific salmon, namely chum (Oncorhynchus keta), coho (O.kisutch), pink (O.gorbuscha), and sockeye (O.nerka). Using principal component analysis as a data reduction technique, the first ten principal components (PC) were retained and explained 87% of the total variation in the data. PC1, PC3, and PC4 regrouped several volatiles important toward separation between salmon species, while PC2 comprised variation accounted for by the loss of chromatographic separation from year to year. In order to generate functions which segregate species into separate groupings, three types of discriminant analyses were carried out based on the scores of the ten principal components. Nonparametric discriminant analysis produced a higher percentage of correct classification in the four respective species groupings (98.4%) than linear (88.7%) and quadratic (80.6%) discriminant analyses. Results indicated that volatile compounds handled by principal component analysis followed by nonparametric discriminant analysis constitute an efficient technique for differentiating salmon species and can prove useful to determine the identity of unknown or doubtful canned samples.     

水中硝基苯的快速检测方法探讨

本文研究了一种快速、简便、有效的测定水中硝基苯的前处理方法,用苯萃取离心分离,处理后样品用气相色谱检测,回收率为84.5%～98.5%,便于样品批量处理,效果较好。     

凝胶渗透色谱-气相-质谱测定鲸皮脂中的多氯联苯

建立了一种测定鲸皮脂中多氯联苯(PCBs)前处理的改良方法,即将皮脂样品分别经超声波萃取、GPC净化和浓缩等处理后,用GC-MS测定.结果显示,该方法加标回收率为73%～118%,精密度为4.1%～9.7%,检出限在0.19～1.07 ng · g-1之间.该方法操作简单,净化效果好、准确性高、重复性强,适合鲸皮脂中PCBs含量的分析测定.     

氨基葡萄糖盐酸盐的制备及其某些性质

采用浓盐酸水解法从甲壳素制备氨基葡萄糖盐酸盐 ,经离子交换柱层析纯化后 ,以吡啶∶乙酸乙酯∶水∶冰醋酸 (5∶5∶3∶1 ,V/V)为展层剂进行纸层析鉴定 ,其Rf 值为 0 .44。氨基葡萄糖盐酸盐重新溶于水后比旋光度随时间而变化 ,从 1 0 0°降至 72°左右 ,2小时后处于稳定 ,[α]2 0D 为 71 .9°。经化学测定 ,氯离子含量为1 6 .74%。红外光谱显示 ,在 330 7.8cm-1、30 98.9cm-1、1 6 1 5 .0cm-1、1 5 34 .1cm-1、1 4 1 7.9cm-1、1 0 93.8cm-1、1 0 33.6cm-1、91 2 .0cm-1和 5 79.1cm-1处有特征吸收峰。     

Confirmation of yessotoxin production by the dinoflagellate <Emphasis Type="Italic">Protoceratium reticulatum</Emphasis> in Mutsu Bay

ABSTRACT:   Yessotoxin (YTX) is a shellfish toxin and its contamination in bivalves has seriously damaged shellfish industries. The biogenetic origin of YTX was identified as the dinoflagellate Protoceratium reticulatum (Claparède et Lachmann) Bütschli collected in New Zealand and Yamada Bay, Iwate in Japan. Scallops cultured in Mutsu Bay, Japan, were frequently contaminated with YTX, however, occurrence of P. reticulatum in this bay and YTX production by the local strains have not been investigated. Eight strains of P. reticulatum , isolated from the bay, were cultured in the laboratory, and analyzed by fluorometric high-pressure liquid chromatography and liquid chromatography/mass spectrometry methods for YTX production and composition. All strains tested were confirmed to produce YTX, and none of them produced known YTX analogs. Toxin amount and composition differed from strain to strain. This result is also confirmation of one of the biogenetic origins of YTX in Mutsu Bay.     

鱼降压肽的酶法制备工艺及其理化性质研究

采用高压液相色谱测定降血压肽的血管紧张素转化酶抑制活性，对碱性蛋白酶水解草鱼蛋白制备鱼降压肽进行研究。结果表明，碱性蛋白酶水解草鱼蛋白制备鱼降压肽的较佳工艺条件为：pH9.0、温度50℃、酶与底物比48AU.kg-1、水解度34.52%。鱼降压肽成分分析结果显示，鱼降压肽中可溶性氮含量为81.26%，肽含量为72.81%，脂肪为0.12%，水分为3.54%，灰分为9.47%。鱼降压肽的血管紧张素转化酶抑制活性为70.35%；体积排阻色谱测定鱼降压肽的相对分子质量在124～10581之间，主要集中在124～1062之间；溶解度的测定结果表明，鱼降压肽在pH3.0～11.0时溶解度为96.0%左右，可广泛应用于食品中。 关键词：草鱼； 降压肽；碱性蛋白酶；高压液相色谱；相对分子质量；体积排阻色谱     

气相色谱法测定水产品中氯霉素残留

介绍了水产品中氯霉素残留量测定的气相色谱法。样品中的氯霉素用乙酸乙酯提取,正己烷去脂肪,过Sep-C18柱进行净化,用BSTFA-TMCS衍生后进带有微电子俘获器的气相色谱仪检测。该方法的线性范围为0.5～500μg·L-1,相关系数r=0.999,最低检测限为0.1μg·kg-1,相对标准偏差为4.3%～11.0%,向样品中分别添加1μg·kg-1、10μg·kg-1和20μg·kg-13个浓度水平的氯霉素,回收率分别为62.0%、88.2%和96.4%。方法灵敏度高,准确可靠,适合水产品中氯霉素残留量的检测。     

气相色谱法测定水产品中7种拟除虫菊酯的残留量

建立了水产品中联苯菊酯、甲氰菊酯、三氟氯氰菊酯、氯氰菊酯、氰戊菊酯、溴氰菊酯、氯菊酯7种拟除虫菊酯残留量同时测定的气相色谱（GC-ECD）法。样品中的菊酯用环己烷和乙酸乙酯提取，乙腈饱和的石油醚去脂肪，过LC-Florisil柱净化，正己烷定容，用带电子俘获器的气相色谱仪检测。该方法在1～100μg• L-1浓度范围内线性关系良好，相关系数r＞0.992；在5、10、20μg•kg-1三个添加浓度水平下的回收率在70.0%～114.8%之间，日内精密度为1.2%～9.8%（n＝5）,日间精密度为3.8%～11.2%（n＝3）；根据2倍信噪比计算，联苯菊酯、甲氰菊酯、三氟氯氰菊酯、氯氰菊酯的最低检测限为1μg•kg-1，氯菊酯、氰戊菊酯、溴氰菊酯的最低检测限为2μg•kg-1。     

南海8种低值小杂鱼脂肪含量和脂肪酸组成分析

采用氯仿-甲醇法提取南海盛产的8种低值小杂鱼肌肉、鱼头、内脏中的粗脂肪,利用气相色谱分析其脂肪酸的组成。结果表明,低值小杂鱼头部粗脂肪含量为2.7%～9.7%,内脏粗脂肪含量为2.9%～6.2%,肌肉部分粗脂肪含量为2.0%～8.5%;不同低值小杂鱼的脂肪酸组成基本相同,但其含量有所差异,饱和脂肪酸含量最高,都在40%以上,内脏粗脂肪中的饱和脂肪酸含量较头部和肌肉中的含量高;多不饱和脂肪酸含量差异较大,粗脂肪含量较高的鱼中多不饱和脂肪酸的含量较低;不同鱼种不同部位的粗脂肪中EPA、DHA含量有所差异。蓝圆鲹的头部粗脂肪中DHA和EPA最高,含量达到28.4%,而双带海鲱鲤内脏粗脂肪中的EPA和DHA含量仅为7.26%。