总状毛霉(Mucor racemosus)甲壳素脱乙酰酶全长cDNA的克隆及序列分析

用保守的特异引物进行PCR扩增,结合RACE技术,分离和克隆到了总状毛霉(Mucorracemosus)甲壳素脱乙酰酶(CDA)的全长cDNA,并进行了全序列测定,提交GenBank登陆号DQ538514。研究结果表明:(1)总状毛霉CDA基因全长为1506bp,包括67bp5'非翻译区,1344bp阅读框以及95bp3'非翻译区,3'非翻译区包含Poly(A)加尾信号AATAAA。总状毛霉的CDA基因共编码448个氨基酸,在该基因中部还包含一个144氨基酸的多糖脱乙酰酶结构域,约占CDA基因全长的32%。(2)总状毛霉CDA基因与其它相近种米根霉(Rhizopusoryzae)、卷柄根霉(Rhizopuscircinans)的CDA1和CDA2、鲁氏毛霉(Mucorrouxii)、卵形孢球托霉(Gongronellabutleri)、匍枝根霉(Rhizopusstolonifer)、布拉克须霉(Phycomycesblakesleeanus)和酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)的CDA1和CDA2的基因序列同源性分别为:75%、58%、56%、56%、48%、39%、39%、17%和16%;相应的氨基酸序列的同源性分别为:69%、57%、59%、55%、47%、30%、32%、18%和21%。表明CDA基因在不同的真菌中有着不同的亲缘关系。(3)根据总状毛霉CDA基因的氨基酸序列构建的不同真菌的系统树,与采用经典分类法构建的系统树基本一致。(4)通过生物信息学的方法,预测该基因所编码的蛋白质三级结构,验证了该蛋白质具有甲壳素脱乙酰酶完整的功能性结构,并包含一个多糖脱乙酰酶结构域,两者具有相似的空间结构。     

对虾中酚酶特性浅析

本文以日本对虾头部组织为材料提取多酚氧化酶（PP）。通过饱和度为40％的硫酸接沉淀初步纯化后的酶液经非变性聚丙烯酸脸凝胶电泳鉴定，显示出两条酶的邻苯二酚活性带，这表明在虾头部组织中存在两种同工酶（isoZymeh同工酶1为强活性带，相对迁移率则(M_R)0．34；同工酶11为弱活性带，MR为0．57。同工酶1经非变性制备型聚丙烯酸铁凝胶电泳纯化两次后，经十二烷基磺酸钠——聚丙烯酸胶凝胶电泳（SDS－PAGE汾析有两种同工形式，其分子量分别为83和87KD。虾的褐变主要是内源酚类物质L一酷氨酸和L一多巴在酚氧化酶作用下氧化成的多巴色…     

总状毛霉（Mucor racemosus）甲壳素脱乙酰酶全长cDNA的克隆及其系统发生分析

用保守的特异引物进行PCR扩增，并结合RACE技术，分离到了总状毛霉（Mucor racemosus）甲壳素脱乙酰酶(CDA)基因，并进行了全序列测定，并提交GeneBank（DQ538514）。研究结果表明：（1）总状毛霉CDA基因全长为1506 bp，包括67 bp 5’非翻译区，1357 bp阅读框以及82bp 3’非翻译区，3’非翻译区包含Poly (A) 加尾信号AATAAA。总状毛霉的CDA基因共编码448个氨基酸，在该基因中部还包含一个144氨基酸的多糖脱乙酰酶结构域，约占CDA基因全长的32%。（2）总状毛霉CDA基因与其它相近种米根霉（Rhizopus oryzae）、卷柄根霉（Rhizopus circinans）的CDA1和CDA2、鲁氏毛霉（Mucor rouxii）、卵形孢球托霉（Gongronella butleri）、匍枝根霉（Rhizopus stolonifer）、布拉克须霉（Phycomyces blakesleeanus）、酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）的CDA1和CDA2的基因序列同源性分别为：75%、58%、56%、56%、48%、39%、39%、17%和16%；相应的氨基酸序列的同源性分别为：69.0%、57%、59%、55%、47%、30%、32%、18%、21%。表明CDA基因在不同的真菌中有较高的同源性。（3）根据总状毛霉CDA基因的氨基酸序列，构建的不同真菌的系统树，与采用经典分类法构建的系统树基本一致。（4）通过生物信息学的方法，预测该基因所编码的蛋白质三级结构，验证了该蛋白质具有甲壳素脱乙酰酶完整的功能性结构，并包含一个含多糖脱乙酰酶结构域，两者具有相似的空间结构。     

几种霉菌产甲壳素脱乙酰酶活力比较及部分酶学性质

比较了几种霉菌(毛霉、根霉、曲霉和青霉)在对数生长末期和稳定期末期的胞内和胞外甲壳素脱乙酰酶的活力。研究结果表明:(1)各霉菌的胞内和胞外都具有甲壳素脱乙酰酶活力,而且胞外酶的活力普遍大于胞内酶的活力;(2)处于对数生长期末期的毛霉菌株产甲壳素脱乙酰酶活力最高,其胞外酶活力达到了97.2±4.2 U/g干菌丝体。酶学特性研究表明:该酶的最适温度为50℃,最适pH约为7.2,低温保存稳定性较差,每24小时酶活力下降30%以上。     

肌苷酸和肌苷作为评价虾鲜度质量指标的研究

测定了不同温度保藏期间罗氏沼虾肌肉组织中ATP及其降解产物含量变化，并对其鲜度进行感官评定。结果表明肌苷酸和次黄嘌呤的含量怀感官评定的结果之间有良好的相关性；IMP含量在保藏中有一积累过程，达最高值后逐渐下降；当感官评定结果表明沼虾已不可食用时，Hx的含量达0.70μmol/g以上；Hx可作为评定冷藏期间沼虾质量的一个指标。     

诺氟沙星与牛血清白蛋白及卵清蛋白结合物的合成

采用碳二亚胺法制备诺氟沙星与牛血清白蛋白（BSA）的结合物，作为诺氟沙星酶联免疫用的免疫原。经紫外光谱法测定，每分子牛血清白蛋白连接的诺氟沙星分子数为16.1个。分别用碳二亚胺法和混合酸酐法制备诺氟沙星与卵清蛋白（OA）的结合物，作为诺氟沙星酶联免疫测定用的包被抗原。经紫外光谱法测定，每分子卵清蛋白连接的诺氟沙星分子数分别为5.8和1.9个。     

葡萄中β-damascenone前体的初步纯化

本文采用高效液相色谱(HPLC)与气相色谱(GC)和生物分析相结合的方法纯化葡萄中β-damascenone前体。葡萄提取物用乙腈-水(82:18V/V)作流动相,在Lichrosorb NH_2柱上色谱分离,并分部收集柱洗脱物。然后,用气相色谱和生物分析法测定洗脱物水解产物中的β-damascenone,确定它前体的高效液相色谱保留时间。在相同的高效液相色谱条件下,收集前体色谱峰相应的柱洗脱物。经过2～3次纯化后,可得到3.2mg纯度相当高的β-damascenone前体。     

草鱼段气调包装袋内CO2动态变化与鱼体肌肉表面pH值关系

分别测定草鱼段气调包装袋内ＣＯ2 气体动态变化与鱼体的肌肉表面ｐＨ值 ,得出了气体的动态变化与ｐＨ值关系。在草鱼的气调包装中 ,采用ＣＯ2 、Ｏ2 和Ｎ2 作为混合气体 ,其中ＣＯ2 是一种抑菌气体。由于ＣＯ2 溶解度较大 ,因此 ,ＣＯ2 在鱼体中的溶解是产生抑菌效果的重要因素 ,也是引起气体组分变化的重要原因 ,影响鱼的贮藏效果。ＣＯ2 被鱼体表面吸收后 ,水解生成碳酸 ,引起鱼体表面ｐＨ值下降 ,反映了ＣＯ2 被鱼体吸收的量。1　材料与方法1 .1　原料鱼市售活草鱼 ,平均鱼重约 3ｋｇ。1 .2　包装材料Ｋ -ＰＥＳ/ＰＥ复合薄膜 [涂布聚偏…     

海洋生物中毒素的研究进展

在海洋生物中 ,存在一类高活性的特殊代谢成分 ,即海洋生物毒素。海洋生物毒素资源丰富 ,种类多 ,分布广 ,据估计有 1 0 0 0多种 ,其中已确定结构的有几十种。海洋生物毒素是海洋天然产物的重要组成部分 ,亦是海洋生物活性物质中研究进展最迅速的领域 ,海洋生物毒素具有结构奇特 ,活性广泛且活性强等特点。海洋生物毒素具有独特的药理活性 ,是典型的海洋生物药物。多数海洋生物毒素均有较强的神经毒性 ,而且作用于神经离子通道 ,因而对神经系统起重要作用。本文主要报道了河豚毒素、芋螺毒素和海葵毒素这几年的研究进展 ,其它几种毒素做了简…     

总状毛霉甲壳素脱乙酰酶(CDA2)全长cDNA的克隆及原核表达

采用快速扩增cDNA末端(RACE)克隆技术，通过设计甲壳素脱乙酰酶简并引物，从总状毛霉Mucor racemosus菌丝体中克隆了CDA2的基因(EF468349)及其全长cDNA(DQ678929)序列。与已获得的总状毛霉菌 cda1基因相比， cda2基因中不含内含子。总状毛霉 cda2全长cDNA为1 378 bp，包含23-bp 5’端非翻译区、1 254 bp开放阅读框和101-bp 3’端非翻译区，编码一条由418个氨基酸残基组成的多肽链，其N端包含一段21个氨基酸残基组成的信号肽，在150～272氨基酸残基区存在一个多糖脱乙酰酶保守结构域。通过构建pET28a-cda2表达载体和进行原核表达研究，结果显示：原核表达产生的重组蛋白CDA2的分子量约为46 ku，表达形式以包涵体为主，纯化获得的重组蛋白CDA2具有甲壳素脱乙酰酶催化活性。本研究为进一步研究总状毛霉CDA2的结构和功能奠定了基础。