欧洲鳗鲡血清免疫球蛋白纯化及其结构分析

应用亲和层析技术提纯欧洲鳗鲡免疫球蛋白（Ig），并对欧鳗Ig的结构和抗原性进行分析。层析结果表明：Ig蛋白呈现一个锐形曲线，蛋白峰与抗原活性峰高度重叠。SDSPAGE分析表明：欧鳗Ig重链分子量为68 kD，轻链有3条，分子量分别为21 kD、23 kD和26 kD。凝胶电泳结果显示：在非变性非还原条件下，欧鳗Ig有790 kD和350 kD 2条蛋白带，在变性非还原条件下有790 kD、593 kD和350 kD 3条蛋白带。Western-blotting试验证实：兔抗欧鳗Ig能识别欧鳗Ig的多种不同聚合体和Ig的重链，但不能识别Ig的轻链。结论：欧鳗Ig在自然条件下可能以四聚体和二聚体的形式存在，这与其它硬骨鱼的Ig形式有差异。欧鳗Ig链间二硫键不健全,在SDS作用下可解聚产生多种不同分子量的聚合体，首次揭示欧鳗Ig的轻链有3种异型。     

反季节史氏鲟苗种培育技术

史氏鲟隶属于鲟形目鲟科，生存于黑龙江水系，是黑龙江的主要经济鱼类。在我国的8种鲟鱼中，目前只有生存于黑龙江的史氏鲟和达氏鳇还有一定的捕捞价值，年产量不足100t，其他6种鲟鱼在我国的自然水域已是凤毛麟角，不但形成不了产量而且有几种鲟鱼濒临灭绝。鲟鱼具有适应性广、生长速度快、抗病力强等特点，     

中华鲟和达氏鳇血清免疫球蛋白的木瓜蛋白酶水解片段分析

首先采用饱和硫酸氨分步沉淀和Sephadex G-200凝胶层析的方法,获得了非免疫状态下中华鲟(Acipenser sinensis Gray)和达氏鳇(Huso dauricus Georgi)的血清免疫球蛋白(Ig),在此基础上使用木瓜蛋白酶水解对所获得的免疫球蛋白片段进行了酶解,并采用SDS-PAGE和Western-blot等方法分析了所获得的水解片段。结果显示,2种鲟鱼的免疫球蛋白均可被木瓜蛋白酶水解蛋白,通过Sephadex G-100凝胶层析后均可得到两个完全分离的、均一的蛋白峰。SDS-PAGE检测两个水解片段的相对分子量分别为44KD和66KD,West-ern-blot检测结果显示,66KD的片段可以在硝酸纤维素杂交膜上被各自的兔抗鲟IgM多克隆抗体所识别,而44KD片段的检测结果为阴性。这表明,2种鲟科鱼类的木瓜蛋白酶水解特性相同,提示鲟科鱼类的免疫球蛋白在免疫学及生化方面具有较大的相似性。     

史氏鲟、达氏鳇的资源现状与研究进展

史氏鲟（Acipenser schrencki)，达氏鳇（Huso dauricus)属鲟科鱼类，是黑龙江的主要经济鱼类之一。由于近年来过度捕捞，资源遭到一定程度的破坏。本主要通过对黑龙江某江段上的捕捞生产调查统计，评估其现有资源状况，并提出了五个方面的建议。同时介绍了我国目前对鲟鱼研究方面的进展情况。1957年黑龙江水产研究所成功地进行了史氏鲟的人工繁殖试验，以后除了五十年代和七十年代的一些调查工作外，基本上中断了对这条鱼的人工繁殖试验工作。1989年，黑龙江省国营农场总局在勤得利农场建立了第一个史氏鲟放流试验站，当年就进行了人工繁殖和放流工作。四年中，向黑龙江放流鲟鱼苗累计达107万尾。在此期间有关的科研和生产单位利用这一条件开展对鲟鱼的研究，本还介绍了正在进行的“史氏鲟活体取卵手术技术研究”、“鲟幼鱼人工饲料研究”和“人工养殖技术研究”等。     

达氏鳇和施氏鲟生长差异群体肠道菌群特征

同塘生长差异常常导致鲟养殖产量受损, 而肠道菌群是影响鱼类生长性能的关键因素之一。为揭示肠道菌群与鲟科鱼类个体生长差异之间的关系, 本研究对同批次繁育、同条件养殖的生长速率差异大于体重 50%的达氏鳇 (Huso dauricus)和施氏鲟(Acipenser schrencki)群体进行了肠道菌群特征研究。结果表明, 达氏鳇和施氏鲟肠道菌群多样性和组成在种属间及生长差异群体间均具有明显差异。其中, 生长快速达氏鳇群体(LH)肠道优势菌属为鞘氨醇单胞菌属(Sphingomonas, 67.0%), 生长慢速达氏鳇群体(SH)肠道优势菌属为鞘氨醇单胞菌属(29.5%)和狭义梭菌属 1 (Clostridium sensu stricto 1, 54.2%); 而生长快速施氏鲟群体(LA)肠道优势菌属为鞘氨醇单胞菌属(33.5%)和鲸杆菌属(Cetobacterium, 38.1%), 生长中速施氏鲟群体(MA)肠道优势菌属为鞘氨醇单胞菌属(42.6%)、狭义梭菌属 1 (14.3%)和鲸杆菌属(33.0%)。鞘氨醇单胞菌属和梭菌科(Clostridiaceae)细菌是不同生长速率鲟肠道中的主要差异类群。综上可知, 鲟科鱼类肠道菌群的多样性和组成具有种属差异性和群体差异性, 鞘氨醇单胞菌属和梭菌科细菌可能是影响鲟科鱼类生长速率的关键细菌类群。     

四种引进鲟幼鱼的培育及生长特性

为了丰富鲟鱼养殖种类,特引进了闪光鲟（Acipenser stellatus）、欧鳇（Huso huso）、西伯利亚鲟（Acipenserbaerii）和杂交鲟（西伯利亚鲟♂×俄罗斯鲟A.gueldenstaeti♀）受精卵,在直径2m的玻璃钢池中进行驯养和流水养殖,水温16-22℃,溶氧5-7mg·L-1。定期测定了上述4种鲟鱼的体长和体质量,应用计算机软件Excel和SPSS对测量的数据进行处理分析。结果表明：孵出的闪光鲟、欧鳇、西伯利亚鲟和杂交鲟鱼苗平均体质量分别为0.01349g、0.02818g、0.02016g,及0.02416g,经过60d驯化养殖,平均体质量分别达到3.80g、11.22g、7.85g,及4.19g;平均体长分别达10.61cm、13.37cm、12.98cm,及9.78cm。全长与日龄之间均呈线性关系,且R2〉0.9,全长日均增长量的大小顺序为：欧鳇〉西伯利亚鲟〉闪光鲟〉杂交鲟;体质量均与日龄呈指数函数关系,且R2〉0.9,体质量日均增长量大小顺序为：欧鳇〉西伯利亚鲟〉杂交鲟〉闪光鲟;体质量与全长的回归曲线中b〈3,均呈异速生长;肥满度分别变动在0.67～0.30、0.86～0.47、0.58～0.35,及0.71～0.44之间,均呈逐渐降低的趋势,且各个时期欧鳇肥满度最高;驯化期结束后30～40日龄生长离散最明显。     

欧洲鳗皮肤黏膜免疫球蛋白纯化及其结构组成分析

应用亲和层析技术提纯欧洲鳗(Anguilla anguilla)黏膜免疫球蛋白(Ig),并在结构和抗原性上进行分析.柱层析结果表明,欧洲鳗黏膜Ig经亲和层析分离后出现1个锐形的蛋白峰,蛋白主要分布于收集物的第2-6管,蛋白峰和抗原活性峰重叠.凝胶电泳结果显示,在变性还原条件下,欧洲鳗黏膜Ig重、轻链分子量分别为68 kD和26 kD,还有1条分子量约为18 kD的蛋白带;在非变性非还原条件下,黏膜Ig只有1条蛋白带,分子量约为350 kD,略旱扩散拖带现象,这一结果提示自然条件下欧洲鳗黏膜Ig可能以二聚体形式存在;在变性非还原条件下,黏膜Ig有3条蛋白带,分子量约为350 kD、138 kD和135 kD,表明欧洲鳗黏膜Ig在SDS作用下可发生不同程度的解聚.Western-blotting试验证实,兔抗血清能识别欧洲鳗黏膜Ig的二聚体、解聚体、重链和81 kD、84 kD处的蛋白带,显示出黏膜Ig的抗原特异性.欧洲鳗黏膜Ig与血清Ig在结构和抗原性上的差异.为进一步探讨欧洲鳗是否存在相对独立的黏膜免疫系统奠定了基础.     

盐度驯化对史氏鲟鳃Na+/K+ ATP酶活力、血清渗透压及离子浓度的影响

对史氏鲟在盐度驯化过程中鳃Na⁺/K⁺ATP酶活力、血清渗透压及血清离子（Na⁺、K⁺、Cl^-）浓度进行了检测和分析，探讨了史氏鲟驯化过程中血清渗透压调节机制。研究表明：史氏鲟在不同盐度（10、20、25）下经过驯化，鳃Na⁺/K⁺ATP酶活力显著高于对照组鳃Na⁺/K⁺ATP酶活力(P<0.05），其活力是对照组的2～2.5倍。驯化过程中，3种不同盐度阶段下鳃Na⁺/K⁺ATP酶活力首先表现为下降，随着驯化时间的延长，活力逐渐增加，最后下降并趋于平稳。血清渗透压也随盐度的增加而上升，盐度10时最高，达到(328.77±26.78) mmol·kg^-1，此后逐渐下降并稳定在290 mmol·kg^-1左右，略高于淡水中血清渗透压。不同盐度下，血清渗透压和鳃Na⁺/K⁺ATP酶活力的变化趋势相同。3种不同盐度下史氏鲟血清K⁺浓度平均值保持在3.00～3.30 mmol·L^-1之间，与对照组相比无显著差异（P>0.05）。3种盐度下血清Na⁺和Cl^-浓度变化趋势基本一致，随着盐度的增高而增高，盐度20时达到最高。盐度20以下血清Na⁺和Cl^-含量没有显著差异（P>0.05）。史氏鲟血清渗透压调节可以分为3个阶段：一是应激反应阶段，主要表现为鳃Na⁺/K⁺ATP酶活力受到抑制，陡然下降；二是主动调节阶段，鳃Na⁺/K⁺ATP酶被重新激活，且活力逐渐上升；三是适应阶段，鳃Na⁺/K⁺ ATP酶趋于平稳。     

纯天然泉水产美味佳鱼

四川涌泉珍稀鱼养殖有限公司利用川西得天独厚的天然涌泉水开发养殖名贵珍稀鱼类，效益显著。目前，该公司主要养殖品种有鲟鱼（俄罗斯鲟、闪光鲟、史氏鲟、小体鲟、达氏鳇、西伯利亚鲟）、虹鳟鱼，正在开发的品种有加拿大红大麻哈鱼、雅鱼（地方名）、老虎鱼（地方名）、花鱼（地方名）等。该公司现有流水养殖面积3000余平方米，养殖用水全部取自涌泉泉水，泉口水温恒定18℃，属重碳酸钙镁型矿泉水。因此全年均可养殖冷水性鱼类，养殖周期短，所产“涌泉”牌鲜鱼品质高、味道好。日前，全国水产技术推广总站林美娇副站长一行到该公司参观指…     

达氏鳇（♀）&#215;西伯利亚鲟（♂）杂交幼鱼生长特性初步研究

对野生达氏鳇（Huso dauricus）（♀）与人工养殖西伯利亚鲟（Acipenser baerii）（♂）的杂交幼鱼在人工养殖条件下的生长进行研究。结果显示：在水温14.7～16.8℃的条件下,平均全长37.43 cm、平均体重178.9 g的达氏鳇杂交种幼鱼经过80 d培育后,平均全长和平均体重分别达到51.74 cm和533.1 g。其全长与日龄呈线性关系,关系式为L=0.1683t＋10.942（R^2=0.9665）;体重与日龄呈指数函数关系,关系式为W=24.304e^0.0129t（R^2=0.9421）;体重与全长呈幂函数关系,关系式为W=0.0007L^3.4461（R^2=0.9984）,其中b大于3。结果表明：达氏鳇和西伯利亚鲟的杂交种幼鱼为异速生长类型,体重生长快于全长生长。     

人工养殖鲟鱼鱼体质量百分组成

以俄罗斯鲟、史氏鲟、西伯利亚鲟、达氏鳇4个品种的19尾活体鱼为试验材料,按照鱼体质量>10 kg和<5 kg分组进行解剖,得出了13个解剖部位的质量分布情况。试验结果表明,鲟鱼的出肉率约50%,且史氏鲟最高,其他依次为西伯利亚鲟、俄罗斯鲟、达氏鳇。     

长江口中华鲟保护区地方性法规立法研究

《上海市长江口中华鲟自然保护区管理办法》自2005年4月15日实施以来,为科学有效保护中华鲟及其息栖环境提供了强有力的规章制度保障。由于当时时间紧,以及对中华鲟及其栖息地生态环境保护尚处于摸索阶段,在条文内容和规定上就采用宜粗不宜细的原则,对于有些问题采用了一般性处理的形式。随着时空的变迁和中华鲟保护工作不断深入,现有条文内容和规定已不能满足保护区工作的实际需要。2009年,上海市长江口中华鲟自然保护区地方性法规立法已被市人大列入立法规划。在此背景下,本文分析了上海市长江口中华鲟自然保护区法制建设存在的问题和原因,阐述了上海市长江口中华鲟自然保护区立法的可行性,1) 有坚实的法制基础;2) 地方政府规章实施一段时问后将其上升为地方性法规,符合我国立法程序;3) 出台地方性法规是解决《办法》实施中存在的问题,唯一可行的途径。最后对上海市长江口中华鲟自然保护区立法提出的相应对策与建立。首先,应确立保护区立法的四个目标;其次,应坚持两个立法原则,一是基本原则,包括可持续发展原则、预防性原则、生态优先原则、系统性保护原则;第二,地方法规立法的特有原则,包括地方性原则、创制性原则;最后,应建立六项基本制度,包括开放性管理制度、生物资源特性制度、土地权属制度、生态补偿机制、公众参与制度,以及专项救护与驯养繁殖制度。     

施氏鲟、达氏鳇及其杂交子代的分子鉴定

采用39对微卫星引物扩增施氏鲟(Acipenser schrenckii)、达氏鳇(Huso dauricus)及其正反杂交子代[A.schrenckii(♀)×H.dauricus(♂),H.dauricus(♀)×A.schrenckii(♂)]的全基因组。其中5对引物无扩增产物,其余34对引物中,有3对只在施氏鲟中得到扩增产物,有31对能同时在3种鱼中进行有效扩增,其中均呈单态的有7对,均呈多态的有22对,位点LS19和LS22在施氏鲟中呈多态,在达氏鳇中呈单态。34个微卫星位点共得到96个等位基因,大小在80～394bp之间。检测到种间特异位点6个(HLJSX22,HLJSX23,HLJSX37,HLJSX41,HLJSX48,LS54),将这些位点部分组合,可以有效鉴别出施氏鲟、达氏鳇和其杂交子代。同时测定杂交子代的线粒体控制区序列,将测序结果与GenBank中施氏鲟和达氏鳇的同源序列进行比对,根据线粒体母性遗传特性,通过比对序列的差异大小来判断杂交子代的母本来源。结果表明,采用微卫星分子标记结合线粒体控制区同源序列比对的方法,可以很好地鉴别出施氏鲟、达氏鳇及其正反杂交子代。     

中华鲟水族馆驯养研究

以25尾人工繁殖中华鲟(Acipenser sinensis)和1尾捕捞于长江宜昌江段的野生中华鲟为研究材料,对其在水族馆中的驯养方法进行了研究。结果表明,26尾中华鲟已全部开口进食,其中有15尾人工繁殖原进食人工配合饲料的中华鲟开口进食生鲜饲料,且摄食生鲜饲料的品种越来越多;2005年4~8月,25尾人工繁殖中华鲟摄食的饲料数量稳步增加,并呈现出良好的生长态势;野生中华鲟摄食的饲料品种由1种逐渐增加至6种,日摄食量由120 g逐渐增加至2 000 g并逐渐趋于稳定。说明水族馆驯养池的环境适合中华鲟生长。     

奥尼罗非鱼血清免疫球蛋白的纯化及分子量的初步分析

通过饱和硫酸铵盐析结合 Sephadex G-200柱层析的方法,纯化制备了健康非免疫状态下奥尼罗非鱼的免疫球蛋白,进行变性还原条件下的聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹试验对血清的免疫球蛋白进行初步分析,发现SDS-PAGE电泳条件下血清重链分子量为85 kD,轻链分子量为30 kD.如果罗非鱼血清免疫球蛋白在自然状态与其他硬骨鱼类一样也为四聚体,那么其总分子量的理论值应为920 kD.     

史氏鲟及杂交鲟仔鱼消化系统的组织学

史氏鲟(AcipenserschrensckiBrandt),系黑龙江的特产鱼类。我国早在1957年就成功地进行了史氏鲟的人工繁殖,并获得少量鱼苗。后来又在黑龙江建立了史氏鲟增殖放流站。20世纪80年代末90年代初,有关单位还开展了池塘养殖、饵料生物学以及鲟鳇杂交等方面的研究[1]。近年来史氏鲟的人工养殖发展迅速,但在史氏鲟人工饲料的驯化养殖上仍然存在较多问题,了解史氏鲟及其与鳇(Husohuso)的杂交种仔鱼的消化系统发育可为鲟幼鱼的养殖及营养研究提供科学依据和参考。有关鲟类早期生活史的研究,国内外都有过一些报道[2-5],但多是从生态学和形态学角度开…     

Mixed mycobacterial infections in farmed sturgeons

Based on microbiological and histopathological examinations and DNA sequencing, several outbreaks of mycobacteriosis in the reared sturgeons, including Chinese sturgeon (Acipenser sinensis Gray) and Amur sturgeon (Acipenser schrencki), were identified during 2009 to 2010. Forty‐nine isolates of non‐tuberculous mycobacteria(NTM)were isolated from 19 diseased sturgeons. In total, seven species of Mycobacterium were identified, namely, Mycobacterium chelonae, Mycobacterium marinum, Mycobacterium gordonae, Mycobacterium fortuitum, Mycobacterium szulgai, Mycobacterium arupense and Mycobacterium porcinum. Among them, M. marinum was found to be more prevalent (89.5%) compared with the other mycobacterial species. When two molecular biological methods, PCR‐DGGE (denaturing gradient gel electrophoresis) analysis and rpoB gene library sequencing, were used to analyse the mycobacterial DNAs extracted from the diseased fish tissues, mixed infections of two or three mycobacterial species were found being the predominant infection form (94.7%) in sturgeon mycobacteriosis. M. marinum was the only one species that caused sturgeon mycobacteriosis alone. Virulence assay showed that M. marinum possessed stronger pathogenicity to zebrafish killing 100% of fish in 28 days at 10³ cfu/fish than the other species. These results suggested that M. marinum is the major pathogenic bacteria in sturgeon mycobacteriosis. To the best of our knowledge, this study is the first report on mycobacteriosis in farmed Chinese and Amur sturgeons as well as the first isolation of M. porcinum and M. arupense from fish.