猪精液常温保存稀释液配方筛选试验

猪精液常温保存技术是实现猪人工授精的重要环节,研究适宜的常温保存稀释液配方,有效延长猪精液保存时间并维持其有效活力在0.5级以上,对降低生产成本,大力推广猪人工授精具有重要意义。试验在葡柠液基础上设计了8个猪精液常温保存的稀释液配方,通过测定精子有效存活时间、总存活时间、存活指数等项目筛选出3号、9号稀释液配方,14～18℃恒温下精子0.5级保存时间分别达93.0±19.0h和101.0±11.0h、总存活时间为126.0±12.0h和134.8±18.2h、生存指数为70.4±11.2h和76.8±15.0h,极显著优于对照组P<0.01。     

不同冷冻保护剂在猪精液冷冻中的作用分析

本实验采用一定浓度的甘油、EG、DMA、DMSO及其两两组合物作为冷冻保护剂。用含冷冻保护制的稀释液将精液稀释后,常温保存,观察精子活率,比较精子生存指数。结果表明：在常温下对精子毒害作用最大的是DMSO,其次是甘油,EG和DMA对精子毒害作用最小。以一定浓度的10种冷冻保护剂将对精液冷冻后观察解冻活率,发现EG和DMA混合保护剂解冻后精子活率最高。     

几种不同稀释液对公猪精液保存效果的影响

试验研究4种稀释液对精子稀释效果的影响,结果表明,自配液Ⅰ液的存活时间为147h,显著高于其他组(P<0.05);生存指数、精子形态和输精结果反映,稀释液Ⅰ液为试验效果最佳组。     

圆口铜鱼精子超低温冷冻保存

为建立圆口铜鱼(Coreius guichenoti)精子超低温冷冻保存方法,采用计算机辅助精子分析系统(CASA)评价了4种稀释液(D15、D20、L1、D1), 3种抗冻保护剂[二甲基甲酰胺(DMF)、二甲基亚砜(DMSO)、甲醇(METH)]在3种体积浓度(7.5%、10%、12.5%, V/V)下对圆口铜鱼精液的冷冻保存效果,并比较了150 mOsm/kg NaCl与超纯水作为激活剂对精子活力的影响。结果表明,D1组稀释液的精子活率(MOT)最高,为(74.64±13.17)%,与鲜精无显著差异(P0.05);以10%甲醇作为抗冻保护剂的圆口铜鱼精子经超纯水激活后,测得MOT最高,达到(78.11±14.74)%,与鲜精无显著差异(P0.05),精子运动速度达最大,平均曲线运动速度(VCL)、平均直线运动速度(VSL)、VAP(平均路径运动速度)分别达到(50.28±12.46)μm/s、(35.06±10.82)μm/s、(39.44±12.46)μm/s,精子快速运动时间和寿命分别为(8.67±1.15) s、(33.33±5.00) s,显著低于鲜精(P0.05); 7.5%甲醇组和7.5%二甲基甲酰胺组的MOT次之,分别为(77.71±17.74)%、(76.42±12.49)%,抗冻剂二甲基亚砜组的MOT显著低于甲醇组、二甲基甲酰胺组(P0.05)。12.5%的3种抗冻保护剂中,几乎无精子存活;在不同种类不同浓度的抗冻剂保护下,10%甲醇组,相较于使用超纯水激活,用150 mOsm/kg NaCl激活后的精子活率和寿命更高,说明Na~+有延长冻精寿命,提高精子活率的作用。研究表明, D1+10%METH (7.8 g/L NaCl+0.5 g/L KCl+15 g/L葡萄糖+10%METH)可用于圆口铜鱼精液超低温冷冻保存,为圆口铜鱼的繁育工作和种质资源保护奠定了基础。     

大鳍鳠精子生物学特性及几种环境因子对其活力的影响

为探究大鳍鳠(Mystus macropterus)精子生物学特性及环境因子对其精子活力的影响, 提高精子活力, 本研究对其精液 pH、渗透压、精子密度、精子运动参数进行测定, 对精子的结构进行观察, 同时设定 pH、葡萄糖和离子(NaCl、KCl、CaCl₂)浓度梯度, 应用计算机辅助精子分析系统(CASA)观察其对精子活力的影响。结果表明, 大鳍鳠精子由头部、颈部和尾部组成, 无顶体, 有侧鳍。大鳍鳠平均精子密度为 2.50×10⁹ 个/mL, 精液 pH 为 7.0~7.2, 精浆渗透压为(634.16±6.66) kPa。精浆中离子成分以 Na⁺ 含量最高, 其次是 K⁺ , 之后依次为 Mg²⁺、Ca²⁺、Fe³⁺、Zn²⁺, 未检测出 Cu²⁺。精浆水解氨基酸总量为 169239.21 μmol/L, 其中以亮氨酸含量最高, 蛋氨酸含量最低。大鳍鳠精子经去离子水激活后, 运动率、快速运动时间和寿命分别为(48.61±14.85)%、(34.00±4.00) s、(396.50±9.50) s, 直线运动速率、曲线运动速率及平均路径运动速率分别为(11.50±6.26) μm/s、(24.21±8.68) μm/s、(14.00±5.99) μm/s。精子在 pH7.0~9.0 的偏碱性水中活力较强, 最适 pH 为 8.0; 精子在 NaCl、KCl、CaCl₂ 浓度为 1 g/L、5 g/L、6 g/L 时, 运动率达到峰值; 葡萄糖浓度为 7 g/L 时精子活力达到最高。研究表明, 大鳍鳠精子适宜 pH 为 7.0~9.0; 适宜浓度的 NaCl、KCl、CaCl₂ 和葡萄糖对大鳍鳠精子活力具有较好的促进作用。     

鸭绿沙塘鳢精子生理学特征

为探究鸭绿沙塘鳢(Odontobutis yaluensis)精子生理学特征, 提高精子活力, 测定了其精液浓度、精子密度、 pH 和精子活力, 以精子激活率(activation rate, AR)、快速运动时间(fast movement time, FT)以及精子寿命(life time, LT)作为评价精子活力的指标, 检测了水温、pH、离子(NaCl、KCl、CaCl₂、MgCl₂)、非离子(葡萄糖、Tris、甘油)、 碱度(NaHCO₃)共 10 种单因子条件下的精子活力, 并在此基础上进行 17 组复合因子精子激活液的筛选。结果表明, 鸭绿沙塘鳢精巢前段精子活力、精子密度、精液浓度均高于中后段, 精巢整体精子密度(1.83±0.03)×10⁹ 个/mL, 精液浓度 23.10%, pH 6.9±0.1。单因子精子激活液中, 鸭绿沙塘鳢在水温 20 ℃、pH 6.0、NaCl 68 mmo/L、 KCl 54 mmol/L、CaCl₂ 27 mmol/L、葡萄糖 28 mmol/L、甘油 65 mmol/L 条件下精子 AR, FT 和 LT 均最高, 在 MgCl₂ 11 mmol/L、Tris 4 mmol/L 激活液中精子激活率最高。复合因子精子激活液中, 精子在 KCl 40 mmol/L、甘油 33 mmol/L、Tris 4 mmol/L 条件下 AR, FT 和 LT 均最高, 精子活力最高。综上所述, 在进行鸭绿沙塘鳢人工授精时, 可直接使用精巢前段(生精部), 同时应用复合因子精子激活液(KCl 40 mmol/L、甘油 33 mmol/L、Tris 4 mmol/L)提高精子活力。     

史氏鲟精子超低温冷冻保存研究

比较了史氏鲟精子在3种不同配比浓度稀释液的保存效果。试验结果表明,配方Ⅲ作为稀释液,8%甲醇作为抗冻剂,二步法超低温(-196℃)冷冻保存,5h后取出,38℃水浴解冻取得最好的冻后激活率,解冻后激活率为(52.3±3.5)%。解冻精子分别采用井水和激活液D(10mmol/L Tris+10mmol/L NaCl+25mmol/L Glu,pH 8.0)激活,进行人工授精。结果显示配方Ⅲ冻精采用激活液D激活授精获得最高受精率为68.56%,最高孵化率为52.91%。本次试验表明,1～2mmol/L范围内,低浓度K+比高浓度K+对史氏鲟精子保存有利;52～82mosmol/kg范围内,高渗稀释液有利于史氏鲟精子的保存;且激活授精方法是影响冻精受精率和孵化率的关键因素之一。     

不同硒水平对种公牛精液品质的影响

试验研究不同水平的硒对种公牛精液品质的影响。试验选取9头种公牛,随机分成3组,分别饲喂不同硒水平的日粮,硒的添加水平为0.2、0.6、1.0mg/kg,结果表明:不同硒水平对种公牛的精子活率、畸形率和顶体完整率影响显著(P〈0.05),精液的采精量和精子密度差异不显著。综合上述结果,种公牛饲粮硒的添加量以0.6mg/kg较为适当。     

鲤、鲢、鳙精子低温短期保存研究

本文对鲤(Cygrinus carpio)、鲢(Hypophthalmichthys molitrix)和鳙(Aristichthys nobilis)精液在2—4℃的短期保存进行了实验研究。筛选出了几种较为理想的稀释保护液配方;确定了精液与稀释液的适宜稀释比例为1:1;研究了抗冻剂二甲亚砜(DMSO)对低温保存条件下精于活力的影响,确定了DMSO的适宜添加浓度为6％左右。鲤精在2—4℃保存10天,活力仍高达70％,少数精子存活时间长达12天;鲢和鳙精子在2—4℃保存7天后活力仍高达60％,达到了生产应用的水平。为水产养殖和鱼类育种研究提供了一种简便易行的精液短期保存技术。     

条纹锯精液超低温冷冻保存研究

为建立条纹锯精液超低温冷冻保存方法,实验采用计算机辅助精子分析系统（CASA）分析了采用6种抗冻保护剂（GLY[甘油]、DMSO[二甲基亚砜]、PG[丙二醇]、EG[乙二醇]、METH[甲醇]、DMA[二甲基乙酰胺]）在4种浓度（5%、10%、15%、20%,v/v）下对条纹锯精液的冷冻保存效果。结果发现,以HBSS为稀释液,采用程序降温仪分步降温冷冻保存条纹锯精液,37℃水浴解冻后的精子中,15% PG 作为抗冻保护剂的精子运动率最高,达到（93.1±0.9）%,与鲜精差异不显著（P>0.05）,15% PG 作为抗冻保护剂的精子水浴解冻后精子的运动速度最高,平均直线速度、平均曲线速度、平均路径速度分别达到了（88.3±0.3）μm/s、（76.2±0.5） μm/s、（86.7±0.7） μm/s,与鲜精差异不显著（P>0.05）。在不同种类及不同浓度抗冻保护剂保护下,15% PG 作为抗冻保护剂的精子解冻后 1 min内运动率变化与鲜精差异不显著（P>0.05）。研究表明,15% PG为条纹锯最佳抗冻保护剂,可用于条纹锯精液的超低温冷冻保存。     

条纹锯鮨精液超低温冷冻保存研究

为建立条纹锯鮨精液超低温冷冻保存方法,实验采用计算机辅助精子分析系统(CASA)分析了采用6种抗冻保护剂(GLY[甘油]、DMSO[二甲基亚砜]、PG[丙二醇]、EG[乙二醇]、METH[甲醇]、DMA[二甲基乙酰胺])在4种浓度(5%、10%、15%、20%,v/v)下对条纹锯鮨精液的冷冻保存效果。结果发现,以HBSS为稀释液,采用程序降温仪分步降温冷冻保存条纹锯鮨精液,37℃水浴解冻后的精子中,15%PG作为抗冻保护剂的精子运动率最高,达到(93.1±0.9)%,与鲜精差异不显著(P0.05),15%PG作为抗冻保护剂的精子水浴解冻后精子的运动速度最高,平均直线速度、平均曲线速度、平均路径速度分别达到了(88.3±0.3)μm/s、(76.2±0.5)μm/s、(86.7±0.7)μm/s,与鲜精差异不显著(P0.05)。在不同种类及不同浓度抗冻保护剂保护下,15%PG作为抗冻保护剂的精子解冻后1 min内运动率变化与鲜精差异不显著(P0.05)。研究表明,15%PG为条纹锯鮨最佳抗冻保护剂,可用于条纹锯鮨精液的超低温冷冻保存。     

棘头梅童鱼精子超低温冷冻保存研究

为保护和利用棘头梅童鱼种质资源,以常用无机盐及葡萄糖配制的5种溶液(依次编号A、B、C、D、E)作为稀释液,不同体积分数的DMSO作为抗冻剂,采用2 mL冻存管和两步降温的方式,对棘头梅童鱼精子的超低温冷冻保存技术进行了研究,并利用人工养殖黄姑鱼的成熟卵子对冻存3年的棘头梅童鱼冷冻精子的授精能力进行检验。结果表明,以E溶液为稀释液、10%DMSO为抗冻剂、两步降温方式冷冻保存的棘头梅童鱼精子在37℃水浴解冻后复活率较高,为(76.67±10.41)%^82.33±4.62%;以上述方法冻存3年的棘头梅童鱼冷冻精子与人工养殖黄姑鱼的成熟卵子杂交,受精率达到(20.26±4.12)%。     

温度和溶解氧对金乌贼精子能量代谢和活性的影响

为了解金乌贼(Sepiaesculenta)精子对外界环境变化的响应和存活机制,分析测定了不同温度(16℃、20℃、24℃)和不同溶解氧(1 mg/L、3 mg/L、6 mg/L)条件下保存36 h后精荚能量物质含量、糖脂代谢关键酶活性以及精子激活后的活力变化。结果显示,温度和溶氧处理36h后精荚糖原和甘油三酯含量均显著低于未处理组(P<0.05),但蛋白质含量与未处理组无显著差异(P>0.05)。当温度从16℃升高至24℃时,精荚糖原含量逐渐下降,甘油三酯的含量则先降后稳;己糖激酶(HK)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙酮酸脱氢酶(PDH)和琥珀酸脱氢酶(SDH)活性随温度升高而升高,脂肪酶(LIP)活性先升后稳;精子激活初期运动速度和不运动率随温度升高无显著变化,而快速运动率则先稳后降。当海水溶解氧从1 mg/L升至6 mg/L时,精荚糖原含量逐渐下降,甘油三酯含量先稳后降; HK、PDH、SDH活性随溶解氧上升呈逐渐上升趋势, LDH先升后降, LIP则先稳后升;精子激活初期运动速度和快速运动率随溶解氧升高呈先升后稳的变化趋势,而不运动率则呈先降后稳趋势。上述结果表明,精荚中的糖原和甘油三酯是精子的主要供能物质,精子较低的能量物质消耗为其长期存活提供了保障,低温和低氧环境可抑制精子的耗能,更利于其在精荚中长期存活。     

人工诱导花鳗鲡的精巢发育成熟及其精子的生物学特性

用肌肉注射HCG的处理方式（剂量为500U/㎏•体重，每周注射1次，注射时间为6周）诱导雄性花鳗鲡性腺发育成熟，成熟率达80.0%。对人工催熟花鳗鲡精子的生物学特性研究结果表明：花鳗鲡精子头部长径为3.81±0.69µm，短径为1.24±0.15µm；尾部长度为24.83±3.05µm；精液pH为7.3~7.5，精子密度为1.02×1010尾/ mL。精子的适宜盐度为15~20，其中盐度为15时，精子激活比率最高，快速运动时间以及精子的寿命最长。精子的pH适宜范围为6.0~8.0，pH值过高或过低都会影响精子的活力与寿命。另外,4 种金属离子(Mg2+、Ca2+、Na+和K+)对花鳗鲡精子活力与寿命的影响趋势基本一致，金属离子浓度过高或过低都会抑制精子的活力、缩短快速运动时间和寿命。而MgCl2、CaCl2、KCl、NaCl溶液浓度为0.4~0.6g/mL时，精子活力最好，最高激活比率为3级（41.0%~60.0%）。     

鹿茸对昆明小鼠精子质量的影响

目的本试验旨在探究鹿茸对昆明小鼠精子质量的影响。方法雄性昆明小鼠48只随机分为空白对照组以及3mg/kg低剂量组、6mg/kg中剂量组和12mg/kg高剂量组,连续经口灌胃鹿茸14d。结果灌胃给雄性昆明小鼠6mg/kg鹿茸和12mg/kg鹿茸时精子活动率、精子数量和精子成活率显著高于对照组;高、中、低三个剂量组对精子畸形率均无显著影响。结论灌胃给药6mg/kg和12mg/kg鹿茸时,可提高雄性昆明小鼠的精子质量。     

盐度对七带石斑鱼胚胎发育和卵黄囊仔鱼生长的影响

观察比较了8个盐度梯度[10、15、20、25、30(自然海水)、35、40和45]下七带石斑鱼Epinephelus septem fasciatus受精卵的孵化周期、孵化率和畸形率及卵黄囊仔鱼的畸形率,并在上述条件下对七带石斑鱼进行了耐饥饿试验,测定其生存活力指数(SAI).结果显示,受精卵孵化的最适盐度范围为30～35,盐度高于35,孵化率随着盐度的升高而降低,仔鱼畸形率随之升高;盐度低于25,孵化率随盐度的降低而降低,仔鱼畸形率随之升高.仔鱼的最适生存盐度为30～35,此盐度下的仔鱼存活系数为24.7±0.36和23.27土3.01.     

PI/Rh123双染和流式细胞术作用下不同盐度对葡萄牙牡蛎精子质量及受精的影响

以葡萄牙牡蛎精子为对象,采用碘化丙啶(PI)/罗丹明123(Rh123)双染与流式细胞术(FCM),研究了不同盐度胁迫(10、15、20、25、30、35)对精子质量的影响,并对受胁迫精子进行授精实验。结果显示,随着盐度升高,精子的存活率、运动时间和活力先升高后降低;葡萄牙牡蛎精子的适宜盐度为20～35,活力较高的盐度范围为25～35;通过双染和FCM检测了精子质膜完整性和线粒体活性,发现盐度胁迫先对精子质膜造成损伤,后对线粒体活性造成伤害;低盐胁迫(10、15)对精子损伤严重,胁迫15 min时质膜受损比例高达67.26%±2.35%。人工授精结果显示,低盐胁迫下精子受精率和卵裂率显著降低,且卵裂阶段出现畸形及分裂停止等现象,表明精子质量不仅严重影响了受精过程,还对卵裂造成一定影响。本实验不仅探究了PI/Rh123双染和FCM检测牡蛎精子质膜完整性和线粒体活性的可行性,还结合显微观察全面评价了精子质量,为牡蛎精子质量的研究提供了理论基础。     

单环刺螠虫精子生物学特性和环境因子的关系

解剖成熟的单环刺虫(Urechis uniconctus)成体,直接从肾管中取出新鲜精子进行实验。结果显示,单环刺虫精子为鞭毛型,头部最前端为顶体,呈奶嘴状;细胞核近似杯状,核内有核泡。中段由一个大环状线粒体组成。尾部轴丝为典型的“9+2”型结构。精液的pH值为6.5±0.2;精子密度为(4.2±0.2)×109/mL;新鲜精子经过滤海水(10 cm厚的脱脂棉过滤)的激活率为86.4%±6.3%,涡动时间为(17.0±6.9)min,寿命为(24.4±7.8)min。室温(20±1)℃下,精子保存12 h活力无显著变化,但至24 h活力明显下降;低温(4℃)可明显延长精子活力的保存时间,可保存21 d;盐度和酸碱度对精子的激活率、涡动时间和寿命都有较大的影响,精子适宜的盐度为20~30,最佳盐度为25;适宜的酸碱度为7~9,最佳为8。因此,低温可以较长时间的保存单环刺虫的精子,在盐度稍低或偏碱性的海水中精子活力较高。     

氟离子对西伯利亚鲟胚胎发育的影响

本试验在水温17±1℃的条件下,采用半静态式生物毒性试验方法,探讨了氟离子(F-)对西伯利亚鲟胚胎发育的影响。结果表明,100~600 mg/L氟暴露会导致胚胎孵化延迟,氟暴露组半数孵化时间(MHT)比对照组推迟9~22 h。氟暴露同时导致胚胎死亡率显著增加(P<0.05),出膜仔鱼活力减弱、存活时间缩短、畸形率显著升高(P<0.05),出现卵黄囊畸形、脊椎畸形、眼部充血等畸形症状。试验得出F-致西伯利亚鲟胚胎144 h半致死浓度(LC50)为447.61 mg/L,孵化安全浓度(SC)为4.48 mg/L,导致仔鱼畸形的半数效应浓度(EC50)为536 mg/L。氟对西伯利亚鲟胚胎的安全质量浓度低于我国部分高氟地区地下水、地表水及人为氟污染水域中氟含量,提示天然水体中氟可能会对鱼类胚胎产生负面影响,应引起重视。     

扇贝精子及卵子的受精生物学特性

采用扫描电子显微镜和普通光学显微镜观察方法,结合全光谱扫描分析方法,对栉孔扇贝和虾夷扇贝的精子及卵子的受精生物学特性进行了详细的观察,包括精卵产出后形态学变化、卵水的特性、精子顶体反应、卵子皮层反应以及精子分级分离组分对卵子的作用5个方面.结果表明,这两种扇贝精卵生物学特性没有本质的区别,扇贝精子排入海水中10min以内,外形没有太大的变化,但30min以后约有1/4的精子出现头部膨大变成圆球形的现象,受精能力明显下降;扇贝卵子产入海水中1h以内受精能力没有变化,但2h以后,约1/3的卵子出现卵裂现象,未见极体的排放,且卵裂多停止在2细胞期,少数达到4细胞期,基本属于均等卵裂,并失去受精能力;滴入卵水中的精子极易发生自溶解体,未解体的精子发生凝集,10min之后卵水中基本检测不到完整的精子,卵水和钙离子载体A23187均能诱导精子发生顶体反应;精子分级分离组分分别为精浆、精子头部和精子尾部,这三部分除了少数精子头部能够附着在卵子表面外,其他都不具备激活卵子的作用.对扇贝精子和卵子的生物学特性的研究将为解释不同种扇贝的精卵相互识别并受精的现象提供基础资料.