栉孔扇贝（♀）×虾夷扇贝（♂）精子入卵过程的电镜观察

采用扫描电镜和透射电镜技术对栉孔扇贝(Chlamys farreri,)×虾夷扇贝(Patinopecten yessoensis,)的精子入卵过程进行观察。结果表明,这2种扇贝杂交与亲本自交的精子入卵过程没有本质的区别。成熟的精卵相遇时,相互激活,产生一系列胞间反应,卵子的激活集中表现为皮层反应、受精膜举起、成熟分裂重新启动;精子激活集中表现为顶体反应和受精锥形成。在16～18℃条件下,精子入卵的时间集中在精卵混合后的第6 min。8 min后,精子的线粒体随精核一起进入卵子中。精子入卵后精核略微膨胀,卵细胞中的线粒体在精核附近出现聚集现象。杂交中有多精入卵现象。本研究目的旨为优化扇贝种间杂交技术及探讨种间受精生物学过程提供基础依据。     

缢蛏受精和早期卵裂过程的细胞学变化观察

采用普通光镜、荧光显微镜和石蜡切片技术,对缢蛏受精和早期卵裂过程中的精子入卵、减数分裂、雌雄原核形成与结合、早期卵裂以及多精入卵等细胞学事件进行了显微观察。结果表明,缢蛏成熟未受精卵多呈圆球形或卵圆形,少数呈梨形,卵径为82～88μm,核相处于第一次成熟分裂中期;精子为典型的原生型,全长55～58μm,头部呈保龄球形,顶体前端的顶体杆呈特别细长的花丝状;在水温21～22℃、盐度10的条件下进行人工授精,精、卵混合后,精子迅速附着于卵子表面,启动卵子发育;受精后4～6 min,精子的头部已进入卵内并明显膨胀,卵子外形变圆,卵外附着的精子量明显减少;在受精后12～15 min、20～25 min,受精卵先后排出第一极体、第二极体,完成两次成熟分裂;第二次成熟分裂结束以后,精、卵核体积迅速膨胀,雄原核的膨胀早于雌原核,核膜重建,在受精后约30 min形成雌、雄原核;雌、雄原核均向卵子中央移动,雄原核旁边的精子星光清晰可见,随后二者在卵子中央以染色体联合的方式结合,联合核的染色体共同排列在纺锤体的赤道板上,形成第一次有丝分裂的中期分裂相;受精后40 min左右,受精卵进行第一次卵裂,染色体在纺锤丝的牵引下向两极移动,结果形成2个大小不等的卵裂球;受精后45～50 min,卵子进行第二次卵裂,核相变化与第一次卵裂相同,在与第一次卵裂垂直的纵轴方向上发生不等全裂,最终形成3小1大4个卵裂球;受精后60～70 min,胚胎进行第三次卵裂,仍为不等全裂,但自此次卵裂起已开始进行螺旋分裂。此外,对实验中发现的缢蛏极少量多精入卵、多极分离等异常细胞学现象进行了分析,并探讨了海洋贝类卵子阻止多精入卵发生的机制。     

菲律宾蛤仔受精及早期胚胎发育过程的细胞学观察

利用HOECHST 33258荧光染料对已固定的菲律宾蛤仔受精卵及早期胚胎样品进行染色的方法,连续观察记录了菲律宾蛤仔受精及早期胚胎发育的细胞生物学过程。结果表明,菲律宾蛤仔的成熟未受精卵子处于第一次成熟分裂中期;精卵混合后精子迅速结合于卵子周围并开始进行顶体反应;精子人卵后去致密并且激发卵子恢复两次成熟分裂,排放出第一及第二极体,完成成熟分裂;受精卵完全排放出第二极体的同时早期的精卵原核形成,随后二者相互靠拢,体积扩散膨大,在细胞中央位置形成各自的染色体组后完成联合;菲律宾蛤仔早期胚胎发育速度进程较快;在受精过程中存在极少数的多精受精现象。     

锯缘青蟹精子入卵过程的扫描电镜观察

利用扫描电镜详细观察了锯缘青蟹精子入卵的过程。精子以其核突起附着在卵膜上，并迅速发生顶体反应。顶体反应时，顶体囊外翻，顶体管前伸，精子核辐射臂收缩，并拖至顶体囊的后部。顶体管迅速穿过卵黄膜，携带核物质一同进入卵子。锯缘青蟹为多精着卵，数精入卵。本文同时探讨了精子顶体反应机制以及受精过程卵子的作用。     

索氏六须鲶受精早期精子入卵的扫描电镜观察

用扫描电镜对索氏六须鲶受精早期精子入卵过程进行系统观察，结果显示，索氏六须鲶在受精后３０－６０ｓ内完成精子入卵过程，在受精后２ｍｉｎ精子开始逐渐解体，直至受精后１５ｍｉｎ左右，受精卵外精子全部解体。通过对精子和卵子的精孔管的测量判定索氏六须鲶精方式为单精受精。     

中国对虾精子入卵过程的观察

利用光镜和电镜对中国对虾精子入卵过程进行了观察。结果表明，精子的核物质籍胞吐作用穿过卵黄膜到达卵膜，其余部分则留在卵黄膜外。只有在卵子激活前到达卵膜的精子才能参与受精作用，其余的精子将被卵子激活所形成的胶质层推离卵子。中国对虾精子激活过程，没有发现顶体丝的形成。精子的入卵开始于卵子的皮层反应后期，此时精卵的接触逐渐密切，首先接触部位的卵膜稍有突起，然后开始下陷，同时这一部位的卵膜变得粗糙不平，随后卵膜解体，精子由此进入卵子。中国对虾精子的入卵位置是随机的，有多精入卵的现象。     

诱导栉孔扇贝雌核发育时精子入卵的扫描电镜观察

取栉孔扇贝 (Chlamysfarreri)精子在 80 0 μW/(cm2 ·s)的紫外线下辐射 ,然后与正常卵子受精 ,每隔 0 .5min取“受精卵”固定。在扫描电镜下连续观察精子的入卵过程 ,然后与正常精子的入卵过程进行比较。结果表明 ,紫外辐射后的精子可以划分为 3种类型 :I类精子 ,基本无明显变化 ,可以激发卵黄膜举起形成受精膜 ,同时诱发卵子发生皮层反应 ,在受精锥的作用下正常入卵 ,但入卵的时间较正常精子晚 ;II类精子 ,顶体膜破裂 ,顶体丝伸出 ;III类精子 ,顶体丝伸出 ,鞭毛脱落。由于II、III类精子在紫外辐射条件下诱发了顶体反应 ,融解卵膜的酶提前释放 ,因而不能入卵。精子鞭毛的脱落 ,使精子丧失了运动能力 ,是导致卵表面附着的精子数量较少的原因之一。无论是正常精子还是辐射后的精子 ,入卵后在卵表面都留下一个类似受精孔的通道。实验组中未发现有多精入卵现象     

中国对虾受精过程的细胞学研究

通过光镜和电镜切片技术，对中国对虾的受挤过程进行了观察。结果表明，中国对虾成熟卵子处于第1次成熟分裂前期，卵子激活后产生胶质层，精子在卵子的诱导下产生顶体反应后进入卵子。中国对虾为多精入卵、单精受精。精子入卵后，卵子完成成熟分裂并举起围卵膜，但精子的存在并非此过程所必需。在卵子进行第1次成熟分裂时，其纺锤体旋转90°。卵子完成成熟分裂后，精卵原核原核化并向卵子中央移动，最后，精卵原核结合形成合子核，卵子完成受挤过程。     

条纹锯鮨精子超微结构及其入卵过程的电镜观察

采用扫描和透射电镜技术对自然成熟的条纹锯精子、卵子及精子入卵过程进行观察。观察结果显示,其精子由头部、中段和尾部三部分组成:头部主要由细胞核构成,无顶体结构;中段由线粒体、中心粒复合体(近端中心粒和基体)、袖套组成;尾部主要由轴丝组成,外部包裹质膜,轴丝为典型的"9+2"结构。卵子表面分布纵横交错的网纹,均匀分布着大小不一的微小孔,在卵壳的动物极精孔区的中央有一个受精孔。在授精后10 s即可见到精子通过受精孔进入卵子,刺激卵子发生形态变化封闭受精孔,阻止其他精子入卵,60 s可见受精孔完全封闭。     

条纹锯精子超微结构及其入卵过程的电镜观察

采用扫描和透射电镜技术对自然成熟的条纹锯精子、卵子及精子入卵过程进行观察。观察结果显示,其精子由头部、中段和尾部三部分组成:头部主要由细胞核构成,无顶体结构;中段由线粒体、中心粒复合体(近端中心粒和基体)、袖套组成;尾部主要由轴丝组成,外部包裹质膜,轴丝为典型的"9+2"结构。卵子表面分布纵横交错的网纹,均匀分布着大小不一的微小孔,在卵壳的动物极精孔区的中央有一个受精孔。在授精后10 s即可见到精子通过受精孔进入卵子,刺激卵子发生形态变化封闭受精孔,阻止其他精子入卵,60 s可见受精孔完全封闭。     

刺参受精及早期胚胎发育过程的细胞学观察

采用HOECHST 33258染色荧光显微方法,对刺参成熟未受精卵以及受精过程中精子入卵、极体排放、雌雄原核的形成与结合、早期卵裂以及多精入卵等细胞学进行了研究。结果显示,刚产出的刺参成熟未受精卵呈圆形,核相处于第一次成熟分裂中期;在水温22~23 ℃、盐度29条件下进行受精,受精后12 min,完成第一次成熟分裂,释放第一极体;受精后20 min,大部分受精卵完成第二次成熟分裂,放出第二极体。受精后35 min,雌、雄原核开始在卵中央发生染色体联合;受精后80 min,部分受精卵完成第一次卵裂,受精后100 min,部分受精卵完成第二次卵裂。刺参在受精过程中存在极少数的多精入卵现象。     

两种颜色栉孔扇贝卵及其早期胚胎磷脂和核酸含量的比较

用钼蓝比色法和紫外分光光度法分别测定栉孔扇贝（Chlamys farrPri）两种颜色的卵子及其早期胚胎中磷脂含量和核酸含量，并进行比较。结果表明，橘红色卵子的RNA含量较浅黄色的略高，而两种颜色卵子的DNA含量却非常相似；在2细胞期，高受精率的受精卵其RNA量迅速增加，DNA和磷脂含量变化不大，但低受精率的受精卵相对未受精卵而言，其DNA、RNA和磷脂含量略有降低；在32～64细胞期，受精率高的胚胎中DNA和磷脂含量增加幅度大，RNA基本保持恒定。磷脂含量与卵子或胚胎的颜色可能有关，核酸、磷脂含量的变化与受精率高低有关。本实验旨为鉴定扇贝卵子的质量提供了科学依据。     

Effects of fertilization and incubation factors on the quality and yield of scallop, Pecten fumatus Reeve, larvae

Variable quality and yield (percentage development from eggs) D-veligers of the scallop, Pecten fumatus Reeve, prompted assessment of fertilization and incubation protocols. Various sperm to egg ratios were tested on eggs suspended in sea water at different densities. Ratios of 1000:1 led to the highest D-veliger yield when eggs were incubated in suspension at one per millilitre. With increasing egg densities, the addition of 1000 sperm per egg led to increasing average numbers of sperm visible at the periphery of each egg, indicating that fewer sperm were necessary for fertilization at higher egg densities. The time period and temperature over which released gametes were stored before fertilization were also found to significantly affect D-veliger yield. Decreasing gamete storage temperature from 26 to 14^oC increased D-veliger yield, as did a reduction in the gamete storage period from 6 to 1 h. The incubation of embryos at densities in the 5-50 ml^-1 range did not affect D-veliger yield. A significant increase in total bacterial counts in the culture water occurred with increasing embryo stocking densities. However, presumptive Vibrionaceae counts did not increase significantly with increasing embryo stocking densities. In a comparison of the viability of self- and cross-fertilized embryos and larvae, fewer self-fertilized embryos developed to D-veliger stage; however, percentage survival, although highly variable, did not differ significantly in subsequent larval rearing. Cross-fertilized larvae had attained a significantly larger size by day 7.     

Swelling of wolffish, Anarhichas lupus L., eggs and prevention of their adhesiveness

Wolffish, Anarhichas lupus L. has internal fertilization. The eggs are released into water before the beginning of cleavage and stick together in clutches. To develop methods for separating eggs for subsequent incubation, changes during egg swelling and egg shell hardening were observed. Uninseminated eggs did not swell in ovarian fluid, but a perivitelline space formed in sea water because of a partial cortical reaction. In inseminated eggs kept in ovarian fluid, a cortical reaction took place and swelling was caused by elevation of the yolk membrane. Shrinkage of the yolk and absorption of water were observed after inseminated eggs were placed in sea water. Eggs swelled in ovarian fluid diluted by less than 30% sea water showed abnormal cleavage during subsequent development. An effective method for preventing egg stickiness after fertilization was to distribute them in trays with stagnant sea water for at least 5-6 h. Milk was effective for loss of egg adhesiveness at 50% concentration, but some eggs cleaved abnormally and subsequent mortality was high. The influences of ovarian fluid and milk on initial egg development with respect to peculiarities of egg swelling are discussed.     

栉孔扇贝（♀）×虾夷扇贝（♂）杂交子代胚后发育过程中遗传构成变化研究

采用RAPD和GISH技术对栉孔扇贝（♀）和虾夷扇贝（♂）杂交子代胚后发育4个重要时期（担轮幼虫期、D形幼虫期、壳顶幼虫期和眼点幼虫期）的遗传构成进行了检测。在RAPD检测中,50条随机引物在亲贝中共扩增出35条栉孔扇贝的特异条带和28条虾夷扇贝特异条带,其中栉孔扇贝特异条带在杂交子代4个时期出现的条数分别为：担轮幼虫期21条、D形幼虫期19条、壳顶幼虫期23条和眼点幼虫期23条;而虾夷扇贝特异条带在杂交子代4个时期出现的条数分别为：17、16、1和1。GISH结果表明,杂交扇贝在担轮幼虫期和D形幼虫期均继承了来自父母本遗传物质,而在壳顶幼虫期和眼点幼虫期未检测到来自父本的遗传物质。结果表明,杂交子代遗传结构在进入壳顶幼虫期时发生重大改变,大部分父本遗传物质从杂交贝基因组中丧失。     

Fertilization strategies for Sea Bass Dicentrarchus labrax (Linnaeus, 1758): effects of pre‐incubation and duration of egg receptivity in seawater

Studying gamete biology can provide important information about a species fertilization strategy as well as their reproductive ecology. Currently, there is a lack of knowledge about how long sea bass Dicentrarchus labrax eggs can remain viable after being activated in seawater. The objectives of this study were to understand the effects of pre‐incubation of fresh and overripe sea bass eggs in seawater and to determine the duration of egg receptivity. Pooled eggs (fresh and overripe) from four females were pre‐incubated in seawater for 0 min (control), 0.5 min, 1 min, 3 min, 10 min and 30 min and then fertilized by pooled sperm from four males. The fresh eggs had a higher fertilization success than overripe eggs. Our results revealed a significant effect of pre‐incubation time for both the fresh (P < 0.01) and overripe eggs (P < 0.01). Fertilization success of eggs significantly declined for both these treatments after 3 min of pre‐incubation, which clearly indicates that sea bass eggs are able to be fertilized by sperm for up to 3 min after release into seawater. This study has particular importance for understanding fertilization strategies, reproductive potential, as well as reproductive ecology of sea bass.     

史氏鲟精子入卵过程的扫描电镜观察

史氏鲟(Acipenserschrencki)隶属鲟形目(Acipenseriformes)、鲟科(Acipenseridae)、鲟属(Acipenser),是黑龙江特产和重要的经济鱼类之一,为淡水定居种类。鲟鱼是古老的生物类型,世界上约有28种,仅分布于北半球。由于自然环境的改变和人类活动的影响,所有鲟鱼均处于不同程度的濒危状态,有的已近灭绝[1,2]。我国有8种鲟鱼,其中黑龙江2种,即史氏鲟和达氏鳇。近年来,随着人工养殖技术的提高和完善,史氏鲟成为国内最主要的鲟鱼养殖种类。有关史氏鲟人工养殖、基因组DNA含量、胚胎发育等国内有较多研究,而对受精生物学方面研究尚未见报道。特殊…