中国对虾受精过程的细胞学研究

通过光镜和电镜切片技术，对中国对虾的受挤过程进行了观察。结果表明，中国对虾成熟卵子处于第1次成熟分裂前期，卵子激活后产生胶质层，精子在卵子的诱导下产生顶体反应后进入卵子。中国对虾为多精入卵、单精受精。精子入卵后，卵子完成成熟分裂并举起围卵膜，但精子的存在并非此过程所必需。在卵子进行第1次成熟分裂时，其纺锤体旋转90°。卵子完成成熟分裂后，精卵原核原核化并向卵子中央移动，最后，精卵原核结合形成合子核，卵子完成受挤过程。     

中国对虾卵子激活过程的形态学研究

报道了对中国对虾卵子激活反应的形态学研究。中国对虾卵子皮层中有由卵黄膜下陷形成的与卵表垂直的皮层囊,内有棒状结构称棒状周边体,其内物质为凝胶前体。对虾卵子的激活并不需要精子的发动,而是在卵子与海水接触后即开始进行。在卵子激活过程中,棒状周边体向外放出形成花冠状的凝胶层,然后从基部开始逐渐消失并向远端扩展,最后完全消失,同时卵子进行成熟分裂放出第一、第二极体,并举起受精膜,完成激活反应。还对中国对虾卵子激活的作用进行了讨论。     

锯缘青蟹精子入卵过程的扫描电镜观察

利用扫描电镜详细观察了锯缘青蟹精子入卵的过程。精子以其核突起附着在卵膜上，并迅速发生顶体反应。顶体反应时，顶体囊外翻，顶体管前伸，精子核辐射臂收缩，并拖至顶体囊的后部。顶体管迅速穿过卵黄膜，携带核物质一同进入卵子。锯缘青蟹为多精着卵，数精入卵。本文同时探讨了精子顶体反应机制以及受精过程卵子的作用。     

中国对虾孵子激活过程的形态学研究

报道了对中国对虾孵子激活反应的形态学研究。中国对虾孵了皮层中有由卵黄膜下陷形成的与卵表垂直的皮层囊,内有棒状结构称棒状周边体,其内物质为凝胶前体。对虾孵子的激活并不需要精子的发动,而是在卵子与海水接触后即开始进行。在孵了激活过程中,棒状周边体向外放出形成花冠状的凝胶层,然后从基部开始逐渐消失并向远端扩展,最后完全消失 ,同时卵子进行成熟分裂放出第一,第二极体,并举起受精膜,完成激活反应。还对中国对     

锯缘青蟹卵膜变化与卵子附着研究

利用光镜和电镜观察了锯缘青蟹成熟卵及其受精后卵膜变化和卵子附着特征。锯缘青蟹成熟卵子卵膜有三层即外层、内层和质膜。卵子产出后，无论受精与否，外层和内层卵黄膜形成壳膜，与卵子附着有关。刚产出的卵子卵膜具有溶胶性和延展性，卵子与刚毛表面之间或卵子之间接触便粘在一起，由于刚毛摆动和卵子的重力作用，形成卵柄或卵索。卵子受精后，发生皮层反应形成受精膜。由壳膜和受精膜构成的孵化膜为初级卵膜，保护胚胎发育，直至     

诱导栉孔扇贝雌核发育时精子入卵的扫描电镜观察

取栉孔扇贝 (Chlamysfarreri)精子在 80 0 μW/(cm2 ·s)的紫外线下辐射 ,然后与正常卵子受精 ,每隔 0 .5min取“受精卵”固定。在扫描电镜下连续观察精子的入卵过程 ,然后与正常精子的入卵过程进行比较。结果表明 ,紫外辐射后的精子可以划分为 3种类型 :I类精子 ,基本无明显变化 ,可以激发卵黄膜举起形成受精膜 ,同时诱发卵子发生皮层反应 ,在受精锥的作用下正常入卵 ,但入卵的时间较正常精子晚 ;II类精子 ,顶体膜破裂 ,顶体丝伸出 ;III类精子 ,顶体丝伸出 ,鞭毛脱落。由于II、III类精子在紫外辐射条件下诱发了顶体反应 ,融解卵膜的酶提前释放 ,因而不能入卵。精子鞭毛的脱落 ,使精子丧失了运动能力 ,是导致卵表面附着的精子数量较少的原因之一。无论是正常精子还是辐射后的精子 ,入卵后在卵表面都留下一个类似受精孔的通道。实验组中未发现有多精入卵现象     

栉孔扇贝（♀）×虾夷扇贝（♂）精子入卵过程的电镜观察

采用扫描电镜和透射电镜技术对栉孔扇贝(Chlamys farreri,)×虾夷扇贝(Patinopecten yessoensis,)的精子入卵过程进行观察。结果表明,这2种扇贝杂交与亲本自交的精子入卵过程没有本质的区别。成熟的精卵相遇时,相互激活,产生一系列胞间反应,卵子的激活集中表现为皮层反应、受精膜举起、成熟分裂重新启动;精子激活集中表现为顶体反应和受精锥形成。在16～18℃条件下,精子入卵的时间集中在精卵混合后的第6 min。8 min后,精子的线粒体随精核一起进入卵子中。精子入卵后精核略微膨胀,卵细胞中的线粒体在精核附近出现聚集现象。杂交中有多精入卵现象。本研究目的旨为优化扇贝种间杂交技术及探讨种间受精生物学过程提供基础依据。     

诱导鲤雌核发育时精子入卵的扫描电镜观察

以雌核发育性成熟鲤(Cyprinuscarpio)卵子和经紫外线照射处理遗传失活的鲫鱼(Carassiusauratus)精子为材料,在再次诱导其雌核发育时,通过扫描电镜和光学显微镜对比观察诱导组和正常受精组精子入卵的情况及鲤鱼成熟卵受精过程中精孔区的外部形态变化。结果表明,无论试验组或对照组在受精后2s精子就能迅速到达精孔区。精子入孔后,受精孔便被絮状物质堵塞;受精后35～40s壳膜表面开始模糊;60s后,精孔区絮状物及精子均消失。     

大菱鲆成熟精子、卵子及精子入卵早期过程的电镜观察

通过人工授精和电镜技术,观察和描述了大菱鲆Scophthalmus maximus成熟精卵的形态、精子入卵的早期过程及精子入卵过程发生的一系列形态结构变化。大菱鲆卵子表面均匀地布满纵横交错的网纹,并整齐地分布许多微小孔,在动物极有一个受精孔。大菱鲆精子为无顶体类精子,由头部、中片和尾部三部分组成,中片有9～14个圆形线粒体。大菱鲆精子入卵速度非常快,授精后0～5s已经有精子通过受精孔(Micropyle)进入卵子。精子入卵过程还伴随着其他一些结构的变化,如精孔管管壁边缘由锯齿状变为平滑的环状等。     

索氏六须鲶受精早期精子入卵的扫描电镜观察

用扫描电镜对索氏六须鲶受精早期精子入卵过程进行系统观察，结果显示，索氏六须鲶在受精后３０－６０ｓ内完成精子入卵过程，在受精后２ｍｉｎ精子开始逐渐解体，直至受精后１５ｍｉｎ左右，受精卵外精子全部解体。通过对精子和卵子的精孔管的测量判定索氏六须鲶精方式为单精受精。     

中国对虾的精子介导外源基因转移的初步研究

用中国对虾的精子作载体,成功地将羊生长激素基因导入中国对虾的受精卵,并获得转基因虾个体。用两种不同的基因溶液处理,即30％的NaCl基因溶液和30％NaCl—40％PEG基因溶液。斑点杂交的结果表明,30％的NaCl基因溶液处理的精子,能够将羊生长激素基因导入中国对虾的卵子中,基因转移比率在1％以上。在另一实验组的个体中,用斑点杂交未检测到阳性信号。经比较,处理后的精子的受精能力未受影响。     

扇贝精子及卵子的受精生物学特性

采用扫描电子显微镜和普通光学显微镜观察方法,结合全光谱扫描分析方法,对栉孔扇贝和虾夷扇贝的精子及卵子的受精生物学特性进行了详细的观察,包括精卵产出后形态学变化、卵水的特性、精子顶体反应、卵子皮层反应以及精子分级分离组分对卵子的作用5个方面.结果表明,这两种扇贝精卵生物学特性没有本质的区别,扇贝精子排入海水中10min以内,外形没有太大的变化,但30min以后约有1/4的精子出现头部膨大变成圆球形的现象,受精能力明显下降;扇贝卵子产入海水中1h以内受精能力没有变化,但2h以后,约1/3的卵子出现卵裂现象,未见极体的排放,且卵裂多停止在2细胞期,少数达到4细胞期,基本属于均等卵裂,并失去受精能力;滴入卵水中的精子极易发生自溶解体,未解体的精子发生凝集,10min之后卵水中基本检测不到完整的精子,卵水和钙离子载体A23187均能诱导精子发生顶体反应;精子分级分离组分分别为精浆、精子头部和精子尾部,这三部分除了少数精子头部能够附着在卵子表面外,其他都不具备激活卵子的作用.对扇贝精子和卵子的生物学特性的研究将为解释不同种扇贝的精卵相互识别并受精的现象提供基础资料.     

缢蛏受精和早期卵裂过程的细胞学变化观察

采用普通光镜、荧光显微镜和石蜡切片技术,对缢蛏受精和早期卵裂过程中的精子入卵、减数分裂、雌雄原核形成与结合、早期卵裂以及多精入卵等细胞学事件进行了显微观察。结果表明,缢蛏成熟未受精卵多呈圆球形或卵圆形,少数呈梨形,卵径为82～88μm,核相处于第一次成熟分裂中期;精子为典型的原生型,全长55～58μm,头部呈保龄球形,顶体前端的顶体杆呈特别细长的花丝状;在水温21～22℃、盐度10的条件下进行人工授精,精、卵混合后,精子迅速附着于卵子表面,启动卵子发育;受精后4～6 min,精子的头部已进入卵内并明显膨胀,卵子外形变圆,卵外附着的精子量明显减少;在受精后12～15 min、20～25 min,受精卵先后排出第一极体、第二极体,完成两次成熟分裂;第二次成熟分裂结束以后,精、卵核体积迅速膨胀,雄原核的膨胀早于雌原核,核膜重建,在受精后约30 min形成雌、雄原核;雌、雄原核均向卵子中央移动,雄原核旁边的精子星光清晰可见,随后二者在卵子中央以染色体联合的方式结合,联合核的染色体共同排列在纺锤体的赤道板上,形成第一次有丝分裂的中期分裂相;受精后40 min左右,受精卵进行第一次卵裂,染色体在纺锤丝的牵引下向两极移动,结果形成2个大小不等的卵裂球;受精后45～50 min,卵子进行第二次卵裂,核相变化与第一次卵裂相同,在与第一次卵裂垂直的纵轴方向上发生不等全裂,最终形成3小1大4个卵裂球;受精后60～70 min,胚胎进行第三次卵裂,仍为不等全裂,但自此次卵裂起已开始进行螺旋分裂。此外,对实验中发现的缢蛏极少量多精入卵、多极分离等异常细胞学现象进行了分析,并探讨了海洋贝类卵子阻止多精入卵发生的机制。     

中国对虾杆状病毒垂直传播途径的初步探讨

中国对虾杆状病毒垂直传播途径的研究对切断病毒的传播途径,培育健康的对虾种质资源,具有重要的理论和实践意义。本文利用电镜技术,对中国对虾亲虾的卵巢,卵细胞和无节幼体,溲状幼体,糠虾,仔虾,幼成虾进行病毒检测,结果发现卵巢和卵细胞中有似病毒粒子,无节幼体,糠虾,仔虾,幼成虾有杆状病毒感染,并初步探讨了中国对虾杆状病毒垂直传播的可能性。     

中国对虾（Penaeus chinensis）精子做载体将生长激素基因导入受精卵的研究

本实验采用卡介苗注射器将羊生长激素基因溶液注射到亲虾纳精囊中，以精子为载体，携带基因导入对虾受精卵，而达到转基因对虾的目的。经ＰＣＲ检测表明：１．经ＳＴＥ（ｐＨ８．０）第一次洗涤精子的洗涤液呈阳性信号；第２－４次的洗涤液呈阴性；２．多次洗涤后的精子抽提的ＤＮＡ呈阳性；３．检测 １０个样品１００尾仔虾中有一个样品呈阳性结果，转基因比率在 １％以上。同时斑点杂交结果也印证了上述结果。     

中国对虾人工受精技术的研究

首次探讨了中国对虾人工受精的方法。干法、湿法、半湿法和滴管法都可获得一定比例的受精卵,其中滴管法的受精效果最佳,最高受精率为77.8％。受精卵经过培养,能够进行正常的卵裂和胚胎发育。通过对这几种方法受精效果的分析和比较,认为,在精卵未丧失受精能力的前提下,尽可能地使精卵充分混合,才能得到较高的受精率。还对这四种方法的人工受精和自然受精对受精率的影响进行了比较和分析。