鲫卵黄脂磷蛋白的纯化鉴定及其夹心ELISA的建立

鲫(Carassius carassius)卵黄原蛋白(vitellogenin,Vtg)是检测水体环境雌激素活性常用的生物标志物。本研究利用凝胶过滤结合离子交换层析与选择性沉淀结合离子交换层析2种方法,从鲫卵巢匀浆液中纯化得到了卵黄脂磷蛋白(lipovitellin,Lv),经鉴定该蛋白含有糖、磷、脂基团,天然分子量约为521 kD,SDS变性电泳显示分子量为117 kD和103 kD的2个亚基。Western blot结果显示,金鱼(Carassius auratus)Lv抗体和斑马鱼(Danio rerio)Lv抗体都能与鲫Lv发生很好的交叉反应。利用纯化的鲫Lv与金鱼Lv抗体和斑马鱼Lv抗体建立了2种夹心ELISA,发现金鱼Lv和鲫Lv的结合曲线基本重合,并且利用鲫Lv与金鱼Lv抗体建立的夹心ELISA工作范围为15.6~1000 ng/mL,检出限约为6.8 ng/mL,显著低于利用斑马鱼Lv抗体建立的夹心ELISA,结合此前研究者建立的鲫Vtg竞争ELISA,为鲫Vtg指标的测定提供了可靠方法。     

久效磷对金鱼精巢超显微结构和特征性酶活性的影响

用0.01、0.10、1.00 mg.L-1久效磷暴露金鱼21 d,测定了精巢乳酸脱氢酶(LDH)、酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(ALP)的活性,并观察了精巢显微和超微结构的变化。结果表明:久效磷暴露21 d,精巢小叶基膜断裂,Leydig氏细胞水肿,小叶间质扩大,支持细胞核膜溶解,胞质内脂滴和髓磷脂象数量增多。1.00 mg.L-1久效磷造成了生殖腺指数的显著下降,对精巢发育有一定程度的延迟作用。随着久效磷暴露浓度的升高,LDH,ACP,ALP的活性逐渐下降,0.10、1.00 mg.L-1久效磷暴露组精巢LDH,ACP的活性下降显著,而各暴露组的精巢ALP活性呈现不显著下降趋势。推测久效磷可能通过损伤精巢超显微结构和降低LDH,ACP和ALP活性,干扰精巢能量代谢,造成对雄性金鱼的生殖毒性。     

尼罗罗非鱼卵黄脂磷蛋白的分离纯化与性质鉴定

采用Sephacryl S-300过滤层析和DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析相结合的方法从尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)成熟卵子匀浆液中分离纯化出了一种高分子量的蛋白。该蛋白能被Schiff试剂、甲基绿和苏丹黑B着色,Western blot显示能被金鱼卵黄脂磷蛋白(lipovitellin,Lv)多克隆抗血清特异性识别,在非变性条件下分子量约为560 k D,在SDS变性条件下分子量约为112 k D,结果表明分离纯化的蛋白是一种含有糖、磷、脂基团的蛋白,符合鱼类Lv的性质,且与金鱼Lv有免疫交叉反应,从蛋白的性质和免疫原性以及分子量大小等角度判断,本研究获得的高纯度蛋白为尼罗罗非鱼卵黄脂磷蛋白;纯化的罗非鱼Lv在反复冻融、37℃及60℃处理条件下均未出现降解,表明罗非鱼Lv比鱼类卵黄原蛋白(Vitellogenin,Vtg)更为稳定。研究结果为罗非鱼Lv抗体的制备奠定了基础。     

中国对虾淋巴器官的显微和超微结构研究↑（*）

用光镜和电子显微镜对中国对虾淋巴器官的显微结构和超微结构研究表明,淋巴器官位于虾体胃两侧,呈管状。光学显微镜下,淋巴器官由许多封闭的盲管构成,盲管腔主要是内皮细胞和基质细胞,胞间隙充满大量血细胞;电子显微镜下,内皮细胞非核部分有伸向盲腔的突起,基质细胞中的高尔基体和内质网数量多、结构简单,血细胞大多为颗粒细胞。     

仿刺参基因组大小的测定

仿刺参基因组大小测定采用流式细胞术,以鸡红血细胞DNA含量(2.5 pg/2C)为内标,用夏眠、正常和野生3个群体的仿刺参体腔细胞测定了52只刺参的单倍体基因组含量,其C-值为(0.90±0.06)pg,由此得出仿刺参基因组大小为(880.2±58.68)Mb。其中,夏眠、正常和野生群体C-值分别为(0.93±0.05)、(0.90±0.05)和(0.84±0.02)pg。运用独立样本t检验对比分析显示:(1)夏眠与正常的仿刺参基因组大小之间差异不显著,说明仿刺参基因组大小与夏眠这一生理因子不具有相关性;(2)池塘(围堰)养殖环境下与野生环境下的仿刺参基因组大小之间有显著差异,野生环境下的仿刺参基因组明显小于池塘(围堰)养殖环境下的基因组。据此推测,环境因子的改变可能对仿刺参乃至整个海参类群基因组DNA含量产生影响。实验还对C-值测定的发展和方法作了详尽的描述,同时在综合其他种类海参基因组大小研究的基础上,探讨了C-值与进化地位之间的关系。     

久效磷对中国对虾细胞超微结构的影响：Ⅱ.对肠的毒性效应

１９９４年７－１０月，作者取青岛市水产局养殖公司的平均体长１０．３ｃｍ的中国对虾，在实验室内用０．１０ｍｇ／Ｌ久效磷海水溶液处理，分别在处理４８ｈ、９６ｈ时取尚存活对虾的中肠组织样品，用常规方法固定和制样，利用透射电子显微镜对中国对虾中肠细胞的眼微进行观察。     

久效磷对中国对虾细胞超微结构的影响：Ⅰ.对肝胰脏和肌肉的毒性效应

通过对０．１０ｍｇ／Ｌ久效磷处理的中国对虾细胞超微结构的透射电镜观察，结果表明：１中毒的肝胰脏细胞内质肉严重水肿、扩张、囊泡化，片层结构水肿；线粒体内嵴局部瓦解；肝管微绒毛出空缸区域及经物中毒的退化结构；脂滴电子密度不均。２中毒的肌肉细胞肌原纤维萎缩、间隔增大，肌浆网水肿、扩张、部分肌浆网膜破裂，线粒体内嵴膨胀，细胞质中出现中毒坏死巢。     

久效磷对中国对虾细胞超微结构的影响_I_对肝胰脏和肌肉的毒性效应

通过对０．１０ｍｇ／Ｌ久效磷处理的中国对虾细胞超微结构的透射电镜观察，结果表明：１．中毒的肝胰脏细胞内质网严重水肿、扩张、囊泡化，片层结构水肿；线粒体内嵴局部瓦解；肝管微绒毛出现空缺区域及药物中毒的退化结构；脂滴电子密度不匀。２．中毒的肌肉细胞肌原纤维萎缩、间隔增大，肌浆网水肿、扩张，部分肌浆网膜破裂，线粒体内嵴膨胀，细胞质中出现中毒坏死巢。     

海胆早期多巴胺能神经系统的发育及功能研究进展

早期发育阶段的海胆是海洋生态毒理学研究的重要模式生物。海胆多巴胺(DA)能神经系统发育较胆碱能系统早,也比5-羟色胺能系统更早地调控海胆早期形态发生和游泳行为,因此,以早期发育阶段海胆为模式生物,对 DA 能神经系统发育及功能进行综述。DA 递质及其受体是 DA 能系统发育的重要基础,DA 及其受体合成后,DA 能神经元发育进入 DA 能神经元前体细胞期,该时期 DA 及1型 DA 受体(DRD1)均以直径1–2μm 大小颗粒形式(DA/DRD1-Gs)存在,且从旋转囊胚期至变态阶段在胚胎和幼虫表面均有表达;DA/DRD1-Gs 聚集后,四腕幼虫早期,DA 能细胞开始在下唇神经节和后口腕基部形成且具有轴突联系,八腕幼虫期其数量增至最大;此后,DA 能系统逐步发育直至成熟。海胆早期发育阶段形态发生受多种递质系统共同调控,而游泳行为则在不同时期由 DA 能神经系统单独或联合其他系统共同调控。最后,展望海胆 DA 能系统发育影响因子、DA受体发育调控功能及其功能通路、海胆早期三大递质系统在形态发生和游泳行为调控过程中的主次关系及其上/下调机制、神经毒物对 DA 能系统发育影响等领域的研究前景。     

环境内分泌干扰物对硬骨鱼类甲状腺轴的干扰作用研究进展

甲状腺激素在鱼类的生长、发育、生殖等过程中均起着至关重要的作用,环境内分泌干扰物能够通过不同途径干扰硬骨鱼的甲状腺轴.本研究在介绍硬骨鱼下丘脑-垂体-甲状腺轴调控机制以及甲状腺激素在鱼体内动态变化过程的基础上,从甲状腺激素的合成、转运、转化、代谢以及清除等角度,总结了目前常用于指示鱼类甲状腺轴受干扰的指标,并从甲状腺轴生物标志物的研发、环境内分泌干扰物活体暴露时间和浓度选择、体外/体内相结合评价体系的建立以及微观水平指标与宏观水平指标相结合的角度,展望了该领域今后的研究重点和方向,以期为环境内分泌干扰物对鱼类甲状腺轴干扰作用研究提供更多的参考.