环境因子对大黄鱼精子活力的影响

通过观测精子的激活率、活动时间和寿命研究了几种环境因子的变化对养殖大黄鱼精子活力的影响。试验结果表明:精子平均密度为(1.17±0.09)×1010.ml-1,盐度对大黄鱼精子活力影响较大。当海水盐度适宜(19.61~24.87)时,精子的激活率≥90%,活动时间≥9.65 min,寿命≥13.50 min;在pH=4.0~10.0的海水中,精子都能被正常激活(≥70%),适宜的pH值为7.5~8.0;不同浓度的葡萄糖、NaCl和KCl溶液对精子活力的影响不同,不同浓度的EDTA-2Na溶液均不能激活精子;无Ca2 、Mg2 或HCO3-的人工海水对精子的激活率均高达90%,但精子的活动时间却有较大幅度的缩减。     

日本黄姑鱼精子生理特性及超低温冷冻保存研究

对日本黄姑鱼精子部分生理特性及其超低温冷冻保存技术进行了研究。结果表明,日本黄姑鱼精液pH值为7.0~7.5,精子密度为(11.23±2.78)×109/m l,精子寿命(229.33±17.16)s。在盐度为30~35,pH为7.5~8.5时,精子的活力最高,分别达到(88.33±2.89)%和(88±4.33)%。精子在室温(25℃)条件下,可存活24 h;在低温(4℃)条件下可以存活36 h。以D液作为稀释液,20%的乙二醇作为抗冻剂,利用快速降温法对精子进行超低温冷冻保存,38℃水浴快速解冻,解冻后的精子获得最高的活力为(47±5.78)%。     

大口鲇精子生理特性的研究

对大口鲇鲜精在不同水体中、不同浓度的氯化钠溶液中、不同酸碱度溶液中以及离体条件下的生理特性进行了探讨。结果表明 :精子强烈运动时间 ,在江河水体中为最高 (41 1s) ,其次为养鱼池水 (39 s) ,曝气井水中最低 (31 9s) ;精子寿命以养鱼池水为最高 (131 5s) ,其余水体差别不大 (为 96～ 98s)。在低浓度氯化钠溶液 (0 3%～ 0 6 %NaCl)中能够延长精子的寿命 ;高浓度氯化钠溶液 (0 85 %～ 1 2 %NaCl)中精子活动被抑制 ,且能在低温 (0～ 4℃ )下得到保存而不影响其活力。pH影响大口鲇精子的活力与寿命 ,其适宜范围为 6～ 8。在pH 5 5以下酸性溶液中精子扩散性差 ,易发生凝聚现象 ;pH 9以上碱性溶液中精子活力与寿命明显缩短。精子头部为椭圆形 ,长径 2 13± 0 36 μ ,短径 1 14± 0 12 μ ;颈部极短 ;尾部细长 ,鞭毛状 ,长度 4 7 775± 3 32 5 μ。精子密度约 1 34× 10 9尾 /ml,精液pH 7 3～ 7 5 ,精子浓度为 9 1%。     

人工诱导花鳗鲡的精巢发育成熟及其精子的生物学特性

用肌肉注射HCG的处理方式（剂量为500U/㎏•体重，每周注射1次，注射时间为6周）诱导雄性花鳗鲡性腺发育成熟，成熟率达80.0%。对人工催熟花鳗鲡精子的生物学特性研究结果表明：花鳗鲡精子头部长径为3.81±0.69µm，短径为1.24±0.15µm；尾部长度为24.83±3.05µm；精液pH为7.3~7.5，精子密度为1.02×1010尾/ mL。精子的适宜盐度为15~20，其中盐度为15时，精子激活比率最高，快速运动时间以及精子的寿命最长。精子的pH适宜范围为6.0~8.0，pH值过高或过低都会影响精子的活力与寿命。另外,4 种金属离子(Mg2+、Ca2+、Na+和K+)对花鳗鲡精子活力与寿命的影响趋势基本一致，金属离子浓度过高或过低都会抑制精子的活力、缩短快速运动时间和寿命。而MgCl2、CaCl2、KCl、NaCl溶液浓度为0.4~0.6g/mL时，精子活力最好，最高激活比率为3级（41.0%~60.0%）。     

pH、温度和盐度对单环刺螠消化酶和溶菌酶活力的影响

采用L25(56)正交试验法测定了不同pH(6、7、8、9、10)、温度(10、15、20、25、30℃)和盐度(15、20、25、30、35)对体质量为(71.2±8.5)g的单环刺螠肠蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶和脂肪酶活力的影响,以及不同盐度对单环刺螠血液溶菌酶活力的影响。试验结果表明,单环刺螠肠消化酶活力的最适环境条件分别为,蛋白酶:pH 8、温度30℃、盐度35;淀粉酶:pH 9、温度25℃、盐度25;纤维素酶:pH6、温度30℃、盐度35;脂肪酶:pH 6、温度25℃、盐度30。盐度15和20两组单环刺螠血液溶菌酶活力均先降后升再降,而盐度30和35两组则先升后降。至处理第4d,各试验组溶菌酶活力依次为:盐度3025352015,盐度15和20两组溶菌酶活力显著低于盐度较高试验组(P0.05)。盐度25~35、pH 6~9为单环刺螠适宜的环境条件,高温(25~30℃)下其消化酶活力较高,而低盐度(15~20)下其消化酶活力和免疫能力明显降低。     

南方鲇精子保存方法的初步研究

以精子被激活后的活力为指标，对6种精子保存液保存南方鲇的效果进行了评估，并对室温（18－20℃）和低温（0－4℃)状态下保存南方鲇精子的效果进行了比较研究。结果表明，在6种精子保存液中，以添加牛血蛋白和氨基酸等营养物质的F精子保存液效果最好，精子的活力和寿命保持时间最长，6d内可保存80％以上活力，寿命持续12.5d。低温下保存效果绝对优于室温下保存。     

人工养殖西伯利亚鲟精子超低温冷冻保存研究

研究了人工养殖西伯利亚鲟精子的生物学特征及超低温冷冻保存方法。西伯利亚鲟的产精量为113.67±39.86 ml,精子密度为(6.49±3.10)×108/ml,精子活力为(85.4±9.5)%,精子寿命为353±23 s。精子密度与精子快速运动时间、精子寿命之间均存在线性相关,用方程分别表示为:y=1.0384x+1.5089(R2=0.7325);y=2.9069x+74.289(R2=0.6967)。结果表明精子密度可作为一项精子质量评价的标准。通过比较西伯利亚鲟精子在不同稀释液、不同抗冻剂和抗冻剂浓度、降温速率、解冻温度下的保存效果,结果表明:配方2作为稀释液,18%甲醇作为抗冻剂,二步法超低温(-196℃)冷冻保存精子,40℃水浴解冻取得最好的冻后活力,解冻后活力为(51.8±5.8)%。西伯利亚鲟授精的最佳精卵比为106∶1。在此精卵比下用冻精授精分别得到了(72.3±3)%的受精率和(52.9±4.1)%的孵化率,其中受精率与鲜精没有显著性差异,孵化率与鲜精有显著差异(P<0.05)。     

白点鲑(Salvelinus leucomaenis)精子活力的观察

在水和BSS激活剂的激活下,白点鲑(Salvelinus leucomaenis)精子的A、B级快速运动时间分别为34.83±2.15 s和36.70±3.26 s;精子寿命分别为120.26±5.75s和117.45±4.33s,激活比例高于98%,BSS的激活效果更好。在4℃和15℃条件下,白点鲑精子活力、激活比例和精子寿命与保存时间呈负相关性,保存1～2h以内,经保存的精子活力和精液质量较好,不影响人工授精效果。     

解剖采集的珠母贝精子的激活条件

解剖成熟珠母贝（Pinctada margaritifera)并采集其精子，在不同pH、盐度和温度条件下进行激活实验。结果显示，水温25℃、盐度34、pH8.5以下时，珠母贝精子的激活率与活力均很低，pH9.0-10时激活率与活力均较高，pH9.5时的激活率最高；在水温20℃，盐度34时珠母贝精子只能在pH9.5-10激活，且激活率与活力均比25℃时低。在水温25℃，pH9.5时，精子在盐度10-45能激活，盐度25-35时激活率和活力很高；在水温20℃,pH9.5时，精子只能在盐度20-40时激活。当盐度相同，20℃时的激活率与活力比25℃时低，在pH9.5或10的氨海水中，珠母贝精子在水温5-45℃时能激活，在25-30℃时激活率较高。当温度相同，pH9.5时的激活率比pH10.0时高。解剖得到的珠母贝精子的适宜激活pH9.5、适宜盐度为25-35、适宜温度为25-30℃。     

不同稀释液对香港牡蛎精子冷冻保存效果的研究

分别以生理盐水、柠檬酸钠-甘氨酸液、海水、KCl-NaCl溶液、Hank’s液、D-Hank’s液为稀释液,不同浓度二甲基亚砜(dimethylsulfoxide,DMSO)及海藻糖为抗冻剂,研究超低温冷冻保存香港牡蛎(Crassostrea hongkongensis)精子方法及不同浓度含氨海水对复苏精子的激活效果,以筛选出最适宜精子冷冻保存的稀释液和抗冻剂及其浓度。结果显示,柠檬酸钠-甘氨酸液为稀释液复苏后精子成活率最高,为(82.90%±0.19%);其次是生理盐水(77.57%±0.49%)、D-Hank’s液(72.22%±0.36%)、Hank’s液(70.00%±0.28%)。氨海水终浓度为0.0313%时,复苏后精子活力最强,柠檬酸钠-甘氨酸溶液为稀释液精子活力为(61.25%±3.06%),生理盐水为稀释液精子活力为(68.70%±0.74%)。以生理盐水为稀释液、DMSO浓度为14%冷冻保存时,复苏精子存活率最高,含海藻糖精子存活率为(86.91%±3.14%),不含海藻糖精子存活率为(81.81%±3.68%),以柠檬酸钠-甘氨酸液为稀释液、DMSO浓度为12%时,复苏后精子存活率最高,含海藻糖的为(79.62%±1.95%),不含海藻糖的为(70.58%±2.41%)。     

Cryopreservation of carp sperm

About 70% of eggs of Cyprinus carpio reached the eyed stage in fertility tests with 1 ml of cryopreserved semen added to 1 g of eggs. When 1 ml of semen was added to 100 g of eggs, few eggs reached the eyed stage. In two fertility tests with sperm preserved for 342 days, using 5 g of eggs inseminated with 1 ml of semen, percentages of eyed eggs were 31.5 and 25.5, respectively. In a series of fertility tests, the chemical constituency of the medium in which fertilization was attempted influenced the fertility of cryopreserved sperm.     

计算机辅助分析冷冻前后褐牙鲆精子运动特征

观察了褐牙鲆(Paralichthys olivaceus)精子在室温和低温下的活力与寿命,并应用计算机辅助精子分析系统(CASA)对超低温冷冻前后褐牙鲆精子的运动特征进行了分析,结果表明:褐牙鲆精子在室温(25℃)下,可存活4 d,在低温(4℃)下可存活7 d;鲜精的活力为(87. 74±5. 47)%,解冻后,精子的最高活性为(84. 00±3. 67)%;激活0. 5 min时,冻精与鲜精的运动精子占总精子数的百分率(MOT)无显著性差异(P0. 05),但精子平均曲线运动速度(VCL)、平均直线运动速度(VSL)、平均路径运动速度(VAP)和精子运动路线的曲折程度(LIN)都有显著性差异(P 0. 05);激活4min和10min时,冻精与鲜精的MOT、VCL、VSL、VAP和LIN间都有显著性差异(P 0. 05)。鲜精激活0. 5 min后,直线运动、曲线运动、左右摆动和不运动的精子数目占总精子数的百分比分别为(24. 49±3. 87)%、(48. 53±4. 55)%、(24. 72±2. 86)%和(2. 27±1. 22)%;冻精激活0. 5min后,直线运动、曲线运动、左右摆动和不运动的精子数目占总精子数的百分比分别为(18. 58±1. 33)%、(35. 67±3. 00)%、(35. 24±2. 67)%和(10. 51±1. 33)%。随着激活时间的延长,褐牙鲆鲜精和冻精的运动状态均发生了改变,直线运动和曲线运动的精子数目逐渐减少,而不运动和左右摆动的精子数目逐渐增加。     

Cryopreservation of common carp sperm

Experiments were carried out to investigate the effect of five extenders (sucrose, glucose, fructose, KCl and a saline carp sperm extender) and two cryoprotectants (dimethyl-sulfoxide (DMSO) and methanol) on the cryopreservation of common carp sperm. Freezing of sperm using glucose extender and methanol as cryoprotectant resulted in the highest post-thaw motility, fertilization as well as hatching rates (63 ± 9%, 74 ± 15% and 67 ± 17% vs. 87 ± 5%, 84 ± 14% and 69 ± 14% using fresh sperm, respectively). In general, sugar-based extenders combined with methanol as cryoprotectant yielded higher motility, fertilization and hatching rates than ionic extenders in combination with DMSO. The jelly-like agglutination observed after thawing in samples frozen with sugar-based extenders did not reduce fertilization and hatching rates. Frozen–thawed sperm samples were able to successfully fertilize 10 g (8000) eggs.     

黄鳝精子活力检测和精子入卵早期过程观察

采用Olympus3×51相差系统显微镜和SQIAS—1000彩色精液质量图文分析系统检测黄鳝精子活力。结果表明,在NaCl溶液浓度为0～0.3%时,黄鳝精子激活比例随溶液浓度升高而极显著增加(P<0.01);当NaCl浓度达到0.7%时,精子激活比例、直线运动速度和鞭毛摆动频率均显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)降低。扫描电镜观察显示:黄鳝成熟卵卵壳膜上的精孔区呈漏斗状凹陷,其底部中央可见一精孔管外孔,口径约4.22±0.66μm;黄鳝精子入卵速度缓慢,受精过程较长,从精子附着于卵球表面到精孔管完全堵塞,约30s～5min。     

Osmoregulation in fish sperm

Fish Physiology and Biochemistry - In most fish exhibiting external fertilization, spermatozoa become motile after release into water, triggered by differences between intracellular and...     

Cryopreservation of sperm from spotted wolffish

The effects of different concentrations of cryoprotectant (dimethyl sulfoxide; DMSO), cooling rate and straw size on the post-thaw motility of frozen sperm from spotted wolffish, Anarhichas minor, were studied. There was no significant difference in the post-thaw motility of sperm treated with three different concentrations of DMSO (10, 20 and 30%). Similarly, there was no significant difference in the post-thaw motility of spermatozoa when using different freezing rates (i.e. distance of straws from the surface of liquid N₂, 4.7, 5.5 and 7.1°C min⁻¹) and the straw size (0.5 and 1.0 ml) did not affect survival. The cryopreservation of sperm can be used to make up for the frequent lack of sperm and/or the unsynchronised timing of sperm production in spotted wolffish males and the ovulation time in females. The results show that sperm from spotted wolffish can be frozen to secure access to viable sperm, but further experiments are needed in order to reveal the effect of different parameters on the post-thawing mortality and define the optimum conditions for cryopreservation.     

Protease in sturgeon sperm and the effects of protease inhibitors on sperm motility and velocity

In mammals, proteases are present in sperm acrosome and play key role in fertilization. Sturgeon sperm has an acrosome, but its physiology, biochemistry, and potential role in fertilization are unknown. In the present study, we have observed high protease activity in acidic extract of intact sperm compared to that of seminal plasma in sterlet (Acipenser ruthenus). The protease activity was decreased and increased in acidic extract of motility-activated sperm and in the activation medium, respectively. Molecular analysis revealed total protease and serine (acrosin) protease activities in sperm acidic extract which was accumulated in a protein band with relative molecular mass of 35 kDa. Immunoelectron microscopy using an affinity-purified polyclonal antibody for boar acrosin localized the protease at the acrosome region. Moreover, initiation of sperm motility was inhibited after activation in the presence of inhibitors for both trypsin-like and chymotrypsin-like proteases, while the effects of protease inhibitors on sperm velocity were uncertain. Our results indicate similarities in physiology and biochemistry of acrosome between sturgeon and mammals and suggest potential role of protease in the initiation of sperm motility in sturgeon.     

鸭绿沙塘鳢精子生理学特征

为探究鸭绿沙塘鳢(Odontobutis yaluensis)精子生理学特征, 提高精子活力, 测定了其精液浓度、精子密度、 pH 和精子活力, 以精子激活率(activation rate, AR)、快速运动时间(fast movement time, FT)以及精子寿命(life time, LT)作为评价精子活力的指标, 检测了水温、pH、离子(NaCl、KCl、CaCl₂、MgCl₂)、非离子(葡萄糖、Tris、甘油)、 碱度(NaHCO₃)共 10 种单因子条件下的精子活力, 并在此基础上进行 17 组复合因子精子激活液的筛选。结果表明, 鸭绿沙塘鳢精巢前段精子活力、精子密度、精液浓度均高于中后段, 精巢整体精子密度(1.83±0.03)×10⁹ 个/mL, 精液浓度 23.10%, pH 6.9±0.1。单因子精子激活液中, 鸭绿沙塘鳢在水温 20 ℃、pH 6.0、NaCl 68 mmo/L、 KCl 54 mmol/L、CaCl₂ 27 mmol/L、葡萄糖 28 mmol/L、甘油 65 mmol/L 条件下精子 AR, FT 和 LT 均最高, 在 MgCl₂ 11 mmol/L、Tris 4 mmol/L 激活液中精子激活率最高。复合因子精子激活液中, 精子在 KCl 40 mmol/L、甘油 33 mmol/L、Tris 4 mmol/L 条件下 AR, FT 和 LT 均最高, 精子活力最高。综上所述, 在进行鸭绿沙塘鳢人工授精时, 可直接使用精巢前段(生精部), 同时应用复合因子精子激活液(KCl 40 mmol/L、甘油 33 mmol/L、Tris 4 mmol/L)提高精子活力。     

Cryopreservation of sperm in marine fish

Since the first work of Blaxter in 1953, fish sperm cryopreservation has been attempted on about 30 marine species. The present paper reviews the techniques used and the results published in these species. Particular attention is paid to the handling procedure of sperm before freezing, the problems of semen ageing and semen contamination with urine. The quality of frozen–thawed semen was evaluated using previously standardized biotests, such as a two‐step motility activation technique adapted for the different species and fertilization assays using a discriminating insemination technique. Most extenders used in marine fish are saline or sugar solutions. From the investigated cryoprotectants, dimethyl sulphoxide (DMSO) generally leads to the best results. Cooling rates range from 8 °C to 99 °C min^?1; the thawing rate is generally high. Compared with freshwater species, a high percentage of spermatozoa survives cryopreservation. Therefore, and because of the simplicity of the techniques, the cryopreservation of marine fish sperm is suited for application in aquaculture.     

鱼类精子质量评价研究进展

在鱼类人工繁育中,研究者主要关心的是卵子质量,长期以来对精子质量未引起足够重视.而精子质量同样会影响繁育效果的重要因素.鱼类精子质量的评价指标有多种,如精子活力、运动时间、密度、形态、受精率和生理功能等.其中最传统的评价指标是精子活力,其测定方便,能较准确地预测受精率.将精子运动时间和活力综合考虑可更好地反映精子的运动能力.而精子受精率则是精子质量的直接反映,但会受到卵质等因素的影响.质膜完整性、线粒体功能、染色质结构完整性等可体现精子的质量,但测定方法较繁琐.近年来,鱼类精子质量检测技术迅速发展,计算机辅助精子分析(CASA)、流式细胞术(FCM)分析、低渗肿胀(HOS)、单细胞凝胶单泳(SCGE)等技术的建立,使得测定指标更多样、客观、准确.本文逐一介绍了评价精子质量的各种指标,并对各指标的测定方法、测定原理、国内外研究情况进行详细叙述,旨为我国鱼类精子质量评价研究提供背景资料.