中国毛虾ACE抑制肽的初步研究

对以中国毛虾为原料酶法制备具有抑制血管紧张素转换酶(ACE)活性的酶解产物的方法作了探讨。以体外活性(ACE抑制率)为指标,通过正交试验确定胃蛋白酶的最佳酶解条件为pH2.4、温度41℃、酶量900U·g-1底物、底物浓度8%;酶解产物的IC50为0.65mg·mL-1,再分别利用SephadexG 25和SephadexG 15对其进行进一步分离提纯,IC50降至0.084mg·mL-1和0.046mg·mL-1,活性组分中的疏水性氨基酸含量增高,最终活性产物的分子量分布在700～1900。     

贻贝蛋白酶解降血压肽的降压活性及相对分子质量与氨基酸组成

以贻贝（Mytilus coruscus）为原料制取降血压肽，采用均匀设计试验探讨了不同酶解条件对其ACE( angiotensin converting enzyme) 抑制活性的影响，利用高效液相色谱分析了其相对分子质量分布，以氨基酸自动分析仪分析其氨基酸和游离氨基酸组成；并利用自发性高血压大鼠（SHR)饲喂试验检测其降血压活性。结果表明，对于P1酶来说, 酶量从25~175 IU• mL-1，酶解时间从2~7 h，随着酶解程度的提高，其ACE抑制率下降；其最高的ACE抑制率为88.08%，对应的最佳酶解条件为：酶量25 IU•mL-1，酶解时间2 h，pH 7.0，酶解温度60 ℃。此外发现降血压肽的相对分子质量在1.6 ku以下，其中10肽以下的短肽约占50.4%，证实了降血压肽主要以分子量较小的短肽组成。降血压肽游离氨基含量为8.8 g•（100g）-1，水解氨基酸总量为59.6 g•（100g）-1，疏水性氨基酸含量为24.86 g•（100g）-1，氨基酸组成比例平衡，必需氨基酸含量丰富,其中含量最高的氨基酸是谷氨酸,占8.57%。此外以3.0 g•kg-1体重的降血压肽样品剂量饲喂SHR，在饲喂后2～6 h降压效果显著，平均降低幅度为18～28 mmHg（P＝0.05）。研究表明以贻贝等水产蛋白为原料可开发具有高ACE抑制活性和显著降血压作用的降血压肽。     

罗非鱼肉双酶分步控制酶解制备血管紧张素转化酶抑制肽的研究

本实验以罗非鱼肉为材料，利用Trypsin、Alcalase2．4L、Pratamex两两复合后，分步控制酶解制备血管紧张素转化酶抑制肽（ACEIP）。以ACE抑制率（Ⅰ值）、氨基酸态氨含量（Cn值）、和TCA可溶性蛋白（短肽）含量（Cp值）为指标对酶解过程进行分析，说明双酶分步控制酶解过程以及产物的特点，指出以单酶控制酶解为基础的双酶分步控制酶解法优于单酶控制酶解法。Trypsin与Alcalase2．4I．、Trypsin与Protamex及Alcalase2．4L与Protamex双酶分步控制酶解产物经稀释40倍后对ACE的最大抑制率分别可达到82．9％、82．9％和91．91％，具有较好的抑制效果。     

血管紧张素转换酶抑制肽的分离

采用截留分子量分别为30 ku、10 ku、6 ku、3 ku的中空纤维超滤膜对扇贝酶解产物进行分级分离,并结合凝胶柱层析分离技术测定了各分离组分的分子量分布,同时还测定了各分离组分对血管紧张素转换酶(ACE)的抑制活性。实验结果表明,不同截留分子量超滤膜可以实现酶解产物按其分子量大小的分级分离,不同分离组分的ACE抑制力活性差异较大,总趋势是截留分子量相对较小的超滤膜透过液的ACE抑制活性较强。其中,截留分子量为3 ku超滤膜的透过液具有最强的ACE抑制活性,其ACE抑制率I(%)=96.17%,半抑制浓度IC_(50)= 0.078 mg·mL~(-1)。通过对截留分子量为3 ku超滤膜的透过液依次经过Sephadex G-25及Sephadex G-15凝胶柱层析分离纯化后,分离出了ACE抑制活性最强的2个组分活性肽,其平均分子量分别为1 300 u和900 u左右,其IC_(50)分别为0.026 mg·mL~(-1)和0.012 mg·mL~(-1)。     

紫菜降血压肽酶法制备工艺的优化

摘要：降血压肽又称为血管紧张素转化酶抑制肽，是具有降血压活性的生物活性肽，对高血压患者有显著疗效。为探讨从紫菜中制备降血压肽的酶法工艺，本实验选用AS．1398中性蛋白酶、胰蛋白酶、复合酶、木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、风味蛋白酶等6种蛋白酶分别对紫菜进行酶解，通过对其酶解液的ACE抑制活性和水解度的比较，发现采用AS．1398中性蛋白酶酶解的产物ACE抑制活性最高。对AS．1398中性蛋白酶的酶解工艺进一步优化，确定其最佳酶解工艺为：温度50℃、pH值7．5、加酶量E／S10000U·g^-1。在此条件下，酶解4h和10h的酶解产物抑制活性最高均达70％以上，并发现紫菜酶解液的ACE抑制率与水解度的增长不成显著的线性关系。     

虾头自溶产物中ACE抑制肽的分离鉴定

虾头在一定的条件下发生自溶作用,其所含蛋白质以肽和氨基酸等形式释放出来,有些肽产物具有ACE抑制活性.实验采用8000、5000和3000 u的超滤膜分级分离虾头自溶产物,活性检测结果表明,ACE抑制肽主要分布在3000 u超滤组分中;3000 u超滤组分进一步经Sephadex G-25葡聚糖凝胶层析、SP Sephadex C-25离子交换层析及Sephadex G-15葡聚糖凝胶层析纯化,ACE抑制活性提高将近8倍(IC50 =0.19 mg/mL);Sephadex G-15葡聚糖凝胶层析收集的高活性成分再经两次RP-HPLC纯化,分离纯化得到两条ACE抑制肽,质谱分析推测其氨基酸序列为Tyr-Pro和Leu-Pro/Ile-Pro,分子量分别为279和229 u.     

3942中性蛋白酶酶解中国毛虾蛋白制备血管紧张素转移酶抑制肽

采用3942中性蛋白酶酶解中国毛虾(Acetes chinensis)蛋白，制备具有抑制血管紧张素转移酶(ACE)活性的多肽。采取正交实验研究料水比、酶量、反应温度、反应时间4个因素对酶解中国毛虾蛋白产物的ACE抑制活性的影响。结果显示，在料水比1：3(体积比)，酶量0．5％，温度45℃，时间8h的水解条件下得到的酶解产物F7的ACE抑制活性最高，其抑制率达到92．86％。用层析柱Sephadex G-25、SP-Sephadex C-50对F7进行分离纯化，选取ACE抑制活性最高的峰进一步用反相高压液相色谱进行纯化，得到单一组分FⅠ。经飞行时间质谱和碰撞诱导裂解分析确定，FⅠ为新型的ACE抑制肽Ser-Pro，IC50值为272μmol／L。     

鳄鱼血蛋白酶解产物抗氧化特性和血管紧张素转化酶抑制活性研究

研究了鳄鱼血蛋白酶解产物的抗氧化特性和对血管紧张素转化酶（ ACE）的抑制活性。利用木瓜蛋白酶酶解鳄鱼血浆蛋白和血球蛋白,用分光光度法测定了酶解产物的抗氧化能力和用高效液相色谱（ HPLC）测定其ACE的抑制率。结果显示：鳄鱼血浆和血球蛋白酶解产物的亚铁离子螯合能力差异性不显著（ P＞0．05）;在0～5 mg/mL的浓度范围内,血球蛋白酶解产物清除ABTS自由基的能力大于血浆蛋白酶解产物,且在浓度为1 mg/mL时,两者清除ABTS自由基的能力差异性极显著（ P＜0．01）;血浆蛋白酶解产物清除DPPH自由基的能力在0～5 mg/mL的浓度范围内随着蛋白浓度的增加而升高,血球蛋白酶解产物在蛋白浓度为4 mg/mL处达到最大清除率,之后下降;在0～20 mg/mL的浓度范围内,两种酶解产物的还原力随着蛋白浓度的提高显著升高,但两者还原力的差异性不显著（ P＞0．05）;鳄鱼血浆和血球蛋白酶解产物对ACE具有良好的抑制力,其最大抑制率可分别达到75．56％和86．42％。研究表明,鳄鱼血蛋白酶解产物在体外具有抗氧化和抑制ACE的活性。     

22种海水鱼中ACEI的制备及其化学修饰

以取自中国黄海的22种鱼类为研究对象，测定其鱼肉组织上清液的酶解物对血管紧张素转化酶（ACE）的抑制作用。从6种商业用酶和1种新型海洋低温碱性蛋白酶（MLAP）中，筛选出MLAP作为酶解制备ACEI的理想水解酶。以该酶水解上述22种海水鱼鱼肉组织上清液，并将水解液经Sephadex G-25凝胶层析和DEAE Sepharose阴离子交换层析，得到ACEI纯品。测定各类ACEI体外抑制ACE的活性发现，这22种海水鱼中以缇鱼（Engraulis japonicus）所产ACEI活性最高，其余鱼类无显著差异。以缇鱼制备血管紧张素转化酶抑制剂（ACEI-22），并对ACEI-22作进一步研究，结果发现，ACEI-22对自发性高血压大鼠（SHR）有降压效果，但不显著；ACEI-22经聚乙二醇化学修饰后，修饰率为68％，且给药SHR后，大鼠收缩压显著降低，与相同条件下同剂量的卡托普利的降压效果相当。故聚乙二醇修饰的ACEI-22可有效地降低SHR的血压。     

“鱼虾宝“对南美白对虾免疫相关酶的激活作用

将含有人参皂苷和黄芪多糖的渔用新药"鱼虾宝"定量注射到南美白对虾(Penaeus vannamei)体内后,通过定时测定供试虾血清、肌肉和肝胰腺提取液中的酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(ALP)和过氧化物酶(POD)的活性,探讨了"鱼虾宝"作为免疫刺激剂对南美白对虾免疫系统的免疫刺激效果.试验结果表明,南美白对虾经注射"鱼虾宝"刺激后,肝胰腺中的ACP和ALP活性明显上升,在注射后72h,ACP活性由对照组的0.0813 U/mL提高到0.0946 U/mL,ALP活性由0.1072 U/mL提高到0.1245 U/mL,而在血清和肌肉中ACP和ALP的活性没有明显变化.与对照组虾相比,试验组虾的血清、肌肉和肝胰腺提取液中POD活性均没有明显变化.     

具有结合胆酸盐作用卵形鲳鲹蛋白酶解物的制备和分子量分布研究

以卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)鱼肉为原材料,以酶解产物与胆酸盐的体外结合率为指标,从5种常用食品用蛋白酶中筛选最优蛋白酶。进而采用正交法优化酶解条件,以提高酶解产物的胆酸盐结合率,并采用GPC法分析产物中蛋白肽的分子量分布情况。结果表明,胰蛋白酶酶解产物(100 mg·m L~(-1))与胆酸钠、甘氨胆酸钠和牛磺胆酸钠等3种胆酸盐的体外结合能力均好于其他4种蛋白酶,结合率分别达到42.1%、33.5%和30.1%,分别相当于降血脂药物考来烯胺散(20 mg·m L~(-1))的78.3%、74.4%和76.8%;经过正交试验优化的制备卵形鲳鲹蛋白肽的工艺条件为酶解时间2 h,加酶量2 000 U·g~(-1),料液比1∶4(g·m L~(-1)、p H 8、37℃)。该条件下酶解产物(20 mg·m L~(-1))对甘氨胆酸钠体外结合率达到同浓度阳性对照物(考来烯胺散)的48.3%,酶解产物中相对分子量3 k D以下的肽类组分占总蛋白水解物的77.30%。     

大眼金枪鱼头蛋白酶解物1 ku超滤组分的抗氧化活性及其理化性质

研究大眼金枪鱼头蛋白酶解物1 ku超滤组分体外的还原力、自由基清除能力及对衰老小鼠体内抗氧化能力的影响,分析1 ku超滤组分的一般成分、氨基酸组成及分子量分布,为进一步分离纯化金枪鱼头抗氧化肽提供基础。体外结果显示,1 ku超滤组分对羟基自由基、超氧阴离子和DPPH自由基的清除活性随浓度的增加而增强,IC50分别为1.38、0.73与0.93mg/mL,还原力也随浓度的增加而增大,在浓度为12.5 mg/mL时为0.763;体内结果显示,灌胃30 mg/kg的1 ku超滤组分连续42 d,D-半乳糖致衰老小鼠肝组织的超氧化物歧化酶(SOD)活性、肝组织和血清的谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性显著提高(P<0.05),血清丙二醛(MDA)含量显著降低(P<0.01);理化分析结果显示,1 ku超滤组分(干基计)蛋白质含量为96.40%,脂肪0.11%,灰分4.86%,疏水性氨基酸占氨基酸总量的35.8%,活性组分分子量在1 802~2 519 u和422~922 u。     

凡纳滨对虾虾肉和虾头中风味物质的比较

为充分利用和开发虾头资源从而提高对虾经济附加值,同时探讨熟制对虾类风味产生的影响,以凡纳滨对虾生、熟虾肉和生、熟虾头为研究对象,利用氨基酸自动分析仪、高效液相色谱法(HPLC)和气相色谱—质谱联用法(GC/MS)分别对氨基酸、呈味核苷酸、挥发性物质和营养成分的含量进行检测。结果显示,虾头中的蛋白质含量显著高于虾肉,熟制会使粗蛋白的含量下降,但变化差异不显著;虾头中必需氨基酸(EAA)含量和游离氨基酸总量(TFAA)显著高于虾肉,二者主要游离氨基酸种类相同(甘氨酸、精氨酸、脯氨酸、丙氨酸和苏氨酸),对虾头呈味有贡献的游离氨基酸种类更丰富;虾头和虾肉中肌苷酸(IMP)含量最高,腺苷酸(AMP)次之,二者的味道强度值(TAV)均大于1,对鲜味贡献较大。GC/MS共检测出88种挥发性物质,虾肉和虾头中分别特有29种和18种,挥发性物质种类和含量的差异形成虾肉和虾头的特殊气味,熟制产生大量的醛类、酮类和芳香类物质。研究表明,凡纳滨对虾虾肉和虾头中营养物质、游离氨基酸、呈味核苷酸、挥发性物质的组成和含量对风味的贡献存在显著差异。     

益生菌对凡纳滨对虾生长和全虾营养组成的影响

研究了芽孢杆菌制剂（Bacillus sp．，10^9CFU·g^-1）对凡纳滨对虾Litopenaeus vannamei（初始体重0．03g·尾^-1）生长性能、全虾营养成分和氨基酸的影响。7种试验饲料中芽孢杆菌制剂的添加量分别为0，0．5，1．0，1．5，2．0，2．5和3．0g·kg^-1饲料。芽孢杆菌制剂对凡纳滨对虾的成活率没有显著影响。摄食添加益生菌1．0和1．5g·kg^-1饲料的凡纳滨对虾的增重率高并且饲料系数低于对照组，特别是添加量为1．0g·kg^-1时，差异显著；然而，其它添加量并不存在显著性差异。添加益生菌对凡纳滨对虾全虾的水分、蛋白质和灰分含量的影响不显著；投喂添加益生菌1．0和1．5g·kg^-1饲料，脂肪含量高于对照组。饲料中添加益生菌可以改变凡纳滨对虾全虾中部分氨基酸的含量。     

Effect of shrimp head protein hydrolysates on the state of water and denaturation of fish myofibrils during dehydration

ABSTRACT:   To utilize fisheries waste products as food materials with functional properties, shrimp head protein hydrolysates (SHPH) from three species of shrimp, that is, Northern pink shrimp ( Pandalus eous ), Endeavour shrimp ( Metapenaeus endeavouri ) and Black tiger shrimp ( Penaeus monodon ), were produced by enzymatic hydrolysis using endopeptidase derived from Bacillus subtilis and exopeptidase derived from Aspergillus oryzae at a level of 0.1% (w/w). SHPH were rich in protein (90–91%) and amino acids (71–84%) but little fat (0.01–0.02%). The average molecular weight of SHPH was 300–1400. The effect of 5% SHPH (dry basis) addition on the state of water and denaturation of lizard fish myofibrils (Mf) during the dehydration process was evaluated by the desorption isotherm and the Ca-ATPase activity, and compared with the effect of sodium glutamate (Na-Glu). SHPH decreased the water activity and the Ca-ATPase inactivation, and increased monolayer sorbed water and multilayer sorbed water of Mf, although these effects of SHPH were smaller than those of Na-Glu. These findings suggest that the SHPH suppressed dehydration-induced denaturation of myofibrillar protein by stabilizing the hydrated water surrounding myofibrils.     

Taste Compounds and Biofunctional Activities of the Sandy Beach Clam Hydrolysate for the Shellfish Flavoring Condiment

ABSTRACT

Sandy beach clam meat was hydrolyzed with proteases (Alcalase and Flavozyme) for the manufacture of a natural flavoring condiment. The optimal conditions for the enzymatic hydrolysis of the shellfish meat via the response surface methodology were: temperature, 54.7°C; pH, 5.9; time, 45 h. The total amino acid content of the shellfish hydrolysate was 9,218.8 mg/100 g and consisted mainly of glutamic acid, aspartic acid, glycine, arginine, lysine, and leucine. Nucleotides and their related compounds of the shellfish hydrolysate consisted mainly of adenosine diphosphate (0.86 mg/100 g), adenosine monophosphate (11.24 mg/100 g), and inosine (49.03 mg/100 g). The shellfish hydrolysate resulted in three protein peaks in the Bio-Rad P2 gel chromatography pattern. The antioxidant activity was highest at Peak 1 (64.67%), followed by Peak 2 (27.48%) and Peak 3 (16.67%); whereas the angiotensin I-converting enzyme inhibitory activity was highest at Peak 3 (67.27%), followed by Peak 2 (6.14%). Antitumor activity was highest at Peak 1 (18.77%), followed by Peak 2 (8.75%). All the sensory attributes of the shellfish condiment were scored highly. Therefore, the sand beach clam hydrolysate can be commercialized as an ingredient of a natural flavoring condiment or seasoning.     

双酶法在鲨鱼肉水解液制备中的工艺改良研究

采用同时添加枯草杆菌中性蛋白酶与木瓜蛋白酶的改良酶解技术，对鲨鱼肉进行水解。正交试验结果表明，上述二酶同时水解的最适条件为：温度45℃，pH7．0，时间3h，酶浓度200U／ml（枯草杆菌中性蛋白酶及木瓜蛋白酶各100U／ml），原料：水＝1．5。蛋白质水解率达83．5％，所得水认的氨基酸含量为45．4mg/ml，其中必需氨基酸总量为19．8mg/ml。     

Apparent digestibility of selected feed ingredients for white shrimp Litopenaeus vannamei,Boone

Apparent digestibility coefficients of dry matter (DM), crude protein, crude lipid, gross energy, phosphorus and amino acids in Peruvian fish meal (FM), fermented soybean meal, extruded soybean meal, soybean meal, peanut meal, wheat gluten meal, corn gluten meal, shrimp byproduct meal, meat and bone meal (MBM), poultry meat meal and plasma protein meal (PPM) were determined for white shrimp (Litopenaeus vannamei). A reference diet (RF) and test diets (consisting of 70% RF diet and 30% of the feedstuff) were used with 0.5% chromic oxide as an external indicator. A total of 1440 shrimp (initial mean body weight 1.05 ± 0.01 g) were randomly stocked into thirty‐six 500‐L fibreglass tanks with 40 shrimp per tank and three tanks per diet. Faeces were collected from triplicate groups of shrimp by a faecal collection vessel attached to the shrimp‐rearing tank. The shrimp were fed to apparent satiation four times a day and the feeding experiment lasted for 6 weeks. Statistics indicate that apparent DM digestibilities for white shrimp (L. vannamei) were the highest for FM, ranged 52.83–71.23% for other animal products and 69.98–77.10% for plant products. The protein and lipid from plant and animal sources were well digested by white shrimp. Apparent protein and lipid digestibility were in the range 87.89–93.18% and 91.57–95.28%, respectively, in plant products, and 75.00–92.34% and 83.72–92.79%, respectively, for animal products. The white shrimp demonstrated a high capacity to utilize phosphorus in the ingredients. The apparent phosphorus digestibility ranges of animal feedstuffs and plant feedstuffs were 58.90–71.61% and 75.77–82.30% respectively. Amino acid availability reflected protein digestibility, except that in MBM, for which the availability of some amino acid was lower, possibly due to protein damage during processing. Digestibility information could promote the use of ingredient substitution in least‐cost formulated diets for white shrimp.     

刺参肠、性腺酶解多肽体外抗氧化作用研究

刺参（Apostichopus japonicus）肠和性腺是刺参加工过程中的副产物,为丰富其高值化利用的基础理论,研究了刺参肠、性腺酶解过程中可溶性蛋白和氨基酸态氮质量浓度变化,分析了酶解多肽对11-二苯基苦基苯肼（DPPH·）、羟基自由基（·OH）和超氧阴离子自由基（O2^-·）的体外清除效果。结果显示,刺参肠和性腺经生物酶水解后,水解度分别为53.63%和63.40%,酶解液中可溶性蛋白质量浓度分别为4.62 mg·mL-1和5.01 mg·mL-1,氨基酸态氮质量浓度分别为0.43 mg·mL-1和0.56 mg·mL-1。刺参肠和刺参性腺酶解多肽清除DPPH·的半抑制质量浓度（IC50）分别为3.31 mg·mL-1和0.88 mg·mL-1,清除·OH的IC50分别为9.53 mg·mL-1和8.81 mg·mL-1,清除O-2·的IC50分别为6.42 mg·mL-1和3.22 mg·mL-1。刺参肠和刺参性腺酶解多肽具有一定的体外抗氧化效果,应用前景广阔。     

氨氮胁迫下白斑综合征病毒对凡纳滨对虾的致病性

为了评价养殖水环境中氨氮(NH_4-N)对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)的危害性,开展了NH_4-N胁迫对凡纳滨对虾感染白斑综合征病毒(WSSV)后的死亡率、WSSV增殖速率和对虾主要免疫相关酶活性影响的实验。在NH_4-N胁迫质量浓度为15.6 mg·L-1,分别注射2×105和2×106个WSSV粒子,结果显示,NH_4-N胁迫下注射2×105个WSSV粒子的凡纳滨对虾第144小时死亡率达到53.3%,显著高于无胁迫组(40.0%)。对虾鳃组织WSSV荧光定量PCR检测结果显示,NH_4-N胁迫下凡纳滨对虾鳃组织内WSSV的增殖加快。此外,免疫相关酶活性结果显示,NH_4-N浓度突变会促使对虾血清中酚氧化酶(PO)、酸性磷酸酶(ACP)和碱性磷酸酶(AKP)活性短暂升高后持续降低。由此可见,NH_4-N胁迫会加快WSSV在患病凡纳滨对虾体内的增殖,导致更高死亡率,这可能是因为胁迫造成了对虾免疫相关酶活性降低和抗病原感染能力下降。