杧果组织培养研究进展

对国内外杧果组织培养中外植体的选择、消毒,培养基的选择,不同器官的培养,以及影响杧果组织培养的化学因素、物理因素等方面的研究进行综述,展望杧果组织培养的工作和研究方向:(1)完善不同杧果品种的快繁体系,进一步消除杧果组培中酚害的影响;(2)进行杧果种质资源的离体培养保存的研究;(3)进一步加强和完善杧果原生质体培养和花药培养技术的研究,为杧果种质创新和染色体工程等提供技术平台;(4)建立高效的杧果植株再生体系,为杧果细胞工程和基因工程育种奠定基础;(5)加快杧果遗传转化的研究步伐,特别是抗病基因、抗逆基因等的遗传转化;(6)不断加强杧果组织培养和遗传转化过程中的生理生化、遗传变异的研究。     

利用 SRAP 分子标记分析杧果种质遗传多样性

利用 SRAP 分子标记技术对来自 12 个国家或地区的 54 份杧果种质进行了遗传多样性分析,并对 SRAP 标记 在杧果研究中的效率做了探讨。结果表明,SRAP 标记在杧果种质中具有丰富的多态性,引物多态性条带百分比在 79.31%~100%,平均为 93.10%;引物的有效等位基因数（Ne）、Nei’s 基因多样性指数（H）、Shannon’s 信息指数（I） 和多态性信息含量（PIC）平均值分别为 1.73、0.41、0.60 和 0.87,表明 SRAP 标记具有较高的多态性检测效率。基于 SRAP 标记计算获得的遗传相似系数对杧果种质做聚类分析,54 份杧果种质可被划分为 3 个类群。主成分分析与聚类 分析反映的种质亲缘关系基本一致。     

利用 SRAP 分子标记分析杧果种质遗传多样性

利用 SRAP 分子标记技术对来自 12 个国家或地区的 54 份杧果种质进行了遗传多样性分析,并对 SRAP 标记在杧果研究中的效率做了探讨。结果表明,SRAP 标记在杧果种质中具有丰富的多态性,引物多态性条带百分比在79.31%~100%,平均93.10%;引物的有效等位基因数（Ne）、Nei’s 基因多样性指数（H）、Shannon’s 信息指数（I）和多态性信息含量（PIC）平均值分别为 1.73、0.41、0.60 和 0.87,表明 SRAP 标记具有较高的多态性检测效率。基于SRAP 标记计算获得的遗传相似系数对杧果种质做聚类分析,54 份杧果种质可被划分为 3 个类群。主成分分析与聚类分析反映的种质亲缘关系基本一致。     

新疆布顿大麦(Hordeum bogdanii Wilensky)线粒体DNA的STS分析

为了探讨新疆布顿大麦(Hordeum bogdanii Wilensky)线粒体基因组(mtDNA)的遗传多样性,利用8个线粒体基因组的STS标记对32份新疆布顿大麦进行了扩增检测。结果表明,在这8个线粒体基因组STS标记中,除rpS14-cob不能得到理想的扩增产物外,其余7个标记均能得到1条清晰的扩增产物,且扩增产物直接电泳均无多态性。利用HinfⅠ、HhaⅠ、HaeⅢ和RsaⅠ等4种限制性内切酶对7个标记的扩增产物进行限制性酶切消化后,在28种标记／酶组合中,共有4个标记(占57．1％)的7种酶组合(占25．0%)能检测到多态性。在所有28种标记／酶组合中,共检测到117务酶切片段,其中15条(占12．8％)具有多态性。线粒体STS标记揭圣的32份新疆布顿大麦的遗传距离变化范围为0～0．076,平均值为0．025。利用线粒体基因组STS标记遗传距离系数,采用UPGMA法构建了32份新疆布顿大麦间的遗传关系聚类图,结果表明,利用7个线粒体基因组PCR标记的28种标记／酶组合不能对32份新疆布顿大麦进行有效区分。     

广西主要杧果资源遗传关系的SSR分析

应用SSR技术,对48个杧果品种(系)的遗传关系进行了检测.14个SSR基因座在48个品种(系)中分别扩增出3～6个等位基因,共获得63个等位基因,等位基因数(A)平均为4.50;有效等位基因数(Ne)平均为2.66,各基因座的多态信息含量(PIC)值在0.1929～0.686 3之间,平均0.533 7,平均杂合度观测值(Ho)和期望值(He)分别为0.424 1和0.594 3.品种间的遗传相似系数在0.455 9～0.941 2之间,平均为0.705 3.以桂热杧06-3号与桂热杧06-5号两者之间的相似系数最小,而Keitt与红凯特杧及玉文杧与蜜桃杧之间相似系数最大.UPGMA聚类分析将48个品种分为5大类群.聚类结果表明,在分子水平上,杧果品种间的亲缘关系与胚性无直接关系;且广西本地杧果品种(系)多是象牙杧、青皮杧、吕宋杧或秋杧等的杂交子代或实生后代.     

GFP 标记杧果露水斑病病原菌及其侵染部位的确定

由枝状枝孢霉（Cladosporium cladosporioides）侵染引起的杧果露水斑病是近年杧果上新发生的病害,主要为 害果实。明确该菌能否穿透果皮侵入果肉,可为防治该病害选择合适的药剂提供依据。本 研 究 将 绿色荧光蛋白基因 gfp 和潮霉素抗性基因 hygB 表达盒插入了经定点突变后 Cl. cladosporioides 的 ITS 序列中,成功构建了 pITGH 重组载 体,将其用 PEG 介导方法转化杧果露水斑病菌原生质体,获得了在菌丝、分生孢子、萌发的分生孢子中稳定发出绿色 荧光的 GFP 标记菌株,该标记菌株与野生菌的菌落形态、颜色及致病力无明显差异,生长速度明显慢于野生菌。用该 标记菌株观察侵染过程,发现杧果露水斑病菌可以在杧果果皮上侵染和扩展,但不能扩展至果肉中。该结果为选择农 药类型提供了依据,也为进一步研究该病菌在活体杧果上的生物学、预测病害和通过观察定殖情况确定杧果品种的抗 病性等奠定了良好的材料基础。     

杧果NFU家族基因的克隆、鉴定及其对非生物胁迫的响应分析

从二倍体杧果‘桂热82’中克隆和鉴定了4个Fe-S簇装配所需的NFU支架蛋白编码基因,命名为MiNFU1~ MiNFU4。MiNFU2和MiNFU3拥有全部3个NFU蛋白典型的Motif基序,MiNFU1缺失Motif 3而MiNFU4缺失Motif 1和Motif 2;MiNFU1~MiNFU3拥有相似的三级结构,而MiNFU4的三级结构与其差异较大,极为独特;13种不同科属植物之间的NFU家族成员数目略有差异,拟南芥、盐芥和短柄草3种一年生草本植物基因组中含有更多的支架蛋白,而非功能性支架蛋白在杧果、草莓、桃、苹果、柑橘和葡萄等多年生果树作物中更易发生丢失;植物NFU同源蛋白在系统发育树上可以分为2个亚家族,且在遗传进化关系上差异较大,同为十字花科、禾本科或蔷薇科植物的NFU同源蛋白分别倾向于紧密聚在一起,杧果NFU蛋白与柑橘和番茄相应的同源蛋白紧密聚在一起;杧果NFU家族基因在不同组织/器官中的表达水平差异显著,MiNFU2在所有检测组织中的整体表达表达水平最高,其次是MiNFU4和MiNFU1,而MiNFU3整体表达水平最低,杧果NFU家族基因均在幼苗叶片中的表达量最高,其次是韧皮部和盛开期花朵,在果实（幼果和熟果）中的表达水平相对较低;杧果NFU家族基因在转录水平对缺铁、高铁毒害、NaCl、PEG和低温处理的响应差异明显,虽然MiNFU3的整体表达最低,但却不受5种非生物胁迫的影响,MiNFU1和MiNFU4对高铁处理最为敏感,其表达水平在‘桂热82’幼苗全身组织均受高铁处理的调控而显著增加。此外,NaCl处理显著增加MiNFU1在根部的表达量,缺铁和PEG处理倾向于降低根部响应的NFU基因的表达水平,而低温处理倾向于降低叶片中响应的NFU基因的表达水平。本研究为明确杧果Fe-S簇装配分子机制提供基因资源,并为解析热带作物果树铁素营养和铁代谢奠定理论基础。     

一种茶树新害虫 ——贡山喙蓟马Mycterothrips gongshanensis的鉴定

为明确一种在贵州广泛发生为害的茶树芽叶害虫种类,本文在形态鉴定的基础上,通过提取DNA、PCR扩增和测序获得其线粒体COI序列.结果表明:该害虫种类为贡山喙蓟马Mycterothrips gongshanensis(Li,Li&Zhang,2017),是一种茶树新害虫;实验获得的贡山喙蓟马的15个个体线粒体COI序列种内遗传距离为0.00％ ～0.46％.研究结果可为该害虫的准确鉴定和科学防控提供基础信息.     

扁刺蛾线粒体基因组全序列特征及系统发育分析

扁刺蛾（Thoseasinensis）具有分布广、多食性、危害大等特点，是我国重要的农林业害虫。为报道采自江西的扁刺蛾线粒体基因组，了解其线粒体基因组的多样性与差异，探究刺蛾科昆虫线粒体基因组进化规律。通过Sanger测序后拼接、校正、注释获得扁刺蛾的线粒体全基因组序列，并基于蛋白质编码基因序列构建了鳞翅目17个科26种蛾类昆虫的系统发育树。结果显示，扁刺蛾线粒体基因组是1个大小为15 540 bp的闭合环状双链DNA分子，共编码37个基因，包括13个蛋白质编码基因，2个核糖体RNA基因和22个转运RNA基因，还有1个425 bp的控制区，基因排列与鳞翅目双孔类（Ditrysia）昆虫相同。通过与其他刺蛾的全序列和蛋白质编码基因序列对比相似度，结果显示，扁刺蛾与茶刺蛾（Iragoidesfasciata）的相似度最高，与褐边绿刺蛾（Parasa consocia）相似度最低。系统发育分析结果表明，扁刺蛾与茶刺蛾的亲缘关系最近，其次为龟形小刺蛾（Narosanigrisigna），鳞翅目昆虫各科均聚为一支。本研究为深入研究扁刺蛾的起源、遗传多样性、迁移和分化，以及对农药的抗性提供科学依据...     

基于COI基因的橡胶树六点始叶螨遗传多样性分析

六点始叶螨是橡胶树上的重要害螨之一,具有分布范围广、危害重等特点。为了研究其遗传多样性和遗传分化,本研究利用线粒体COI（mitochondrial cytochrome oxidase subunit I）基因序列对采自海南、云南、越南河内等地区橡胶树上的11个不同地理种群的165头样本进行了种群的遗传多样性分析。获得的六点始叶螨线粒体COI基因片段长度均为658 bp,分析发现可变位点30个,其中简约信息点15个,单变异位点15个,单倍型15种;种群间F_ST值为0.34698,Nm值为0.47,G_ST值为0.19660,表明11个种群的六点始叶螨存在一定的遗传分化。     

主要热带果树煤烟病的为害性及病原菌种类研究

在海南等地的调查、测定结果表明,煤烟病对热带果树有一定为害性。在特别重病的情况下,芒果产量损失９．８％;芒果品种间对煤烟病抗病性有明显的差异。经鉴定,芒果、荔枝、柑桔、人心果、油梨、番石榴的煤烟病有８种;其中Ｍｏｌｉｏｌａ ｓｐｐ。,Ｔｒｉｐｏｓｐｅｒｍｕｍ ｓｐｐ．,Ｃａｐｎｏｄｉｕｍ ｓｐｐ．为优势种群。     

茶黄蓟马在茶梢上的分布调查研究初报

本试验主要调查了茶黄蓟马在茶树1芽7叶茶梢上的分布。结果表明,茶黄蓟马主要在茶树嫩梢芽下2～4叶位的叶片背面取食为害,叶片背面的虫口数量占88.66%,叶片正面的虫口数量仅占9.29%。茶黄蓟马在茶梢各部位上的分布差异达极显著水平（F=14.79,P＜0.01）。     

海南岛热带水果种植结构时空变化分析

热带水果产业是海南农民增收致富的支柱产业,分析海南建省以来热带水果种植结构的演变历程与驱动因素,有助于提出相应的调整优化策略,推动海南岛热带水果产业优化升级。本研究运用重心分析、空间分析及回归分析法,研究海南岛各市（县）1988—2020年热带水果种植结构类型演变、种植比例变化趋势、生产重心迁移及驱动因素。结果表明：（1）海南岛热带水果面积呈现波动上升趋势,主要种植芒果、香蕉、荔枝、菠萝、柑橘橙柚、龙眼等,龙眼生产重心移动距离最大,菠萝生产重心移动距离最小。（2）海南岛热带水果总体种植结构类型为芒果、香蕉、荔枝、菠萝的单一或组合类型,单一水果、2种水果组合、3种水果组合类型数量之比为48∶0∶52;市县热带水果种植结构类型为香蕉、芒果、荔枝、菠萝、龙眼、柑橘橙柚的单一或组合类型,单一、2种、3种水果组合类型数量之比为78∶9∶13。（3）市（县）热带水果种植结构空间集聚特征明显,经历了集聚、分散、再集聚的过程,大部分市（县）已形成稳定的主导种植结构,少部分市（县）仍在不断调整探索;主要水果种植比例变化趋势相同的区域集聚性更显著。（4）海南岛热带水果种植结构演变的驱动因素主要包括自然环境、政策扶持、社会需求、市场行情和农垦改革。应在充分了解当地水果种植结构演变历程及驱动因素的基础上,遵循自然资源条件,以市场需求为导向,综合考虑经济社会发展与生态保护等其他因素,合理调控产业规模,推动当地形成具有地方优势与特色的水果种植结构,促进海南岛热带水果产业整体向稳定、高质量发展。     

78份杧果种质资源AFLP分析

利用AFLP标记技术对78份杧果种质进行遗传多样性分析,结果显示,9对AFLP引物共产生908个等位位点,平均每对引物产生100.89个等位位点,多态性带为794条,共产生42个特异性位点,能区分21份种质,单态带25条,缺失带17条,特异性条带比例为4.63％,多态性比例为87.44％。不同种质间的相似系数范围是0.603~0.913,平均相似系数为0.735。聚类分析结果显示,以遗传相似性系数0.726为阈值,供试的78份种质可分成5个类群。主成分分析结果将供试的78份种质可分成4个类群,通过空间距离更能直观地表现种质间关系远近。     

基于DNA序列的12种粉蚧亲缘关系分析

对菠萝洁粉蚧、新菠萝灰粉蚧、大洋臀纹粉蚧、柑橘臀纹粉蚧、康氏粉蚧、榕树粉蚧、热带蔗粉蚧、扶桑绵粉蚧、湿地松粉蚧等9种粉蚧(14个种群)rDNA 18S、28S进行测序,结合GenBank中同源序列,通过对12种粉蚧的18S、28S序列进行多重排比和聚类,探讨rDNA 18S、28S用于粉蚧系统进化分析及粉蚧分子鉴定的可行性。序列分析结果表明:rDNA18S、28S序列比较保守,适合于菠萝洁粉蚧、新菠萝灰粉蚧、康氏粉蚧、热带蔗粉蚧、扶桑绵粉蚧、湿地松粉蚧、长尾粉蚧等粉蚧种间的分子鉴定;但柑橘臀纹粉蚧、大洋臀纹粉蚧、无花果臀纹粉蚧的rDNA 18S、28S序列具有高度相似性,18S、28S不适合用于这3个近缘种的分子鉴定,其mtDNA COI序列变异率相对较高,可作为其分子鉴定的依据;而榕树粉蚧2个种群rDNA 18S、28S序列遗传距离约0.014,该蚧虫可能是至少含有2个隐存谱系或姊妹种的复合种。该结果为我国粉蚧的遗传进化和分子鉴定提供了参考。     

绿额翠尺蛾对寄主的产卵选择性

通过田间调查和室内试验测定了绿额翠尺蛾（Thalassodes. proquadraria Inouce）的产卵选择性。结果表明：绿额翠尺蛾在荔枝树的四周嫩叶上均能产卵，在东、南、西、北4个方位上产卵量显著高于中位的产卵量；绿额翠尺蛾的卵散产，通常一片叶只有一粒卵；卵主要产在荔枝嫩叶长度为7～36 mm的叶尖上，其中长度为12～21 mm叶上的产卵量最多；雌成虫对不同寄主植物有很强的选择性，在荔枝、龙眼、芒果和莲雾4种寄主植物上，荔枝上的卵量显著多于其余3种寄主植物；绿额翠尺蛾雌成虫产卵对荔枝品种也有很强的选择性，在妃子笑、三月红、无籽、风霜、丁香5个荔枝品种上，最喜产卵于妃子笑和丁香上，而在三月红和风霜上的卵量很少。研究结果可为该虫进一步的监测和防控提供理论基础。     

绿鳞象甲对11种挥发物的EAG反应及对4种寄主的选择性

采用触角电位技术(EAG)测定热带作物主要害虫绿鳞象甲对11种绿叶挥发物组分的触角电生理反应,并以茶树、芒果、柑橘、荔枝等4种绿鳞象甲常见寄主植物为供试对象,对其进行绿鳞象甲的室内选择行为试验。EAG试验结果表明:绿鳞象甲雌雄虫均对反-2-己烯-1-醇表现出最强的EAG反应,对吲哚表现出最弱的EAG反应,两者之间差异显著;从EAG反应值上看,绿鳞象甲雌雄虫对所测定各种化合物的EAG反应强度大小顺序基本一致。室内选择行为试验结果表明:绿鳞象甲对芒果的选择性最强,其次是荔枝和柑橘,选择性最弱的是茶树,说明芒果为其更适宜寄主。     

气象因子对芒果园桔小实蝇种群动态的影响

桔小实蝇[Bactrocera dorsalis (Hendel)]是芒果的重要害虫之一。试验利用性引诱剂对芒果园桔小实蝇的全年种群动态进行监测，分析气象因子与其种群数量变动的相关性。结果表明，芒果园桔小实蝇雄虫种群数量一年有2个明显高峰，2月为短时高峰，3月种群活动有所下降；5月开始数量逐渐升高，至8月达到高峰，9月开始逐渐下降，到12月至1月为发生低谷。经逐步回归分析发现，气象因子显著影响桔小实蝇雄虫的数量，主要受月平均气温、月平均最低气温和月降水量综合影响。     

芒果实生资源遗传多样性的SSR分析

利用18对SSR多态性引物对来自中国4个省份的116份芒果种质资源进行SSR-PCR扩增,共扩增出202条条带,其中多态性条带193条,多态性比率为95.54％,PIC平均值为0.57.UPGMA树状聚类图表明,109份芒果实生材料具有丰富的遗传多样性,相似系数在0.6～1.0之间,可分为4个地域性群组,分别是广东和海南土芒、广西百色土芒、广西南宁土芒以及云南小鸡芒.     

油梨基因组DNA的提取及RAPD分析

用改进的ＳＤＳ法提取油梨基因组ＤＮＡ,即在细胞核被裂解之前,先去除细胞质中的酚类物质和蛋白质,然后用ＳＤＳ裂解细胞核,异丙醇和乙醇沉淀ＤＮＡ,成功地从油梨叶片中提取和纯化了ＤＮＡ。以１０个油梨品种的基因组ＤＮＡ为模板,４０个随机引物进行ＲＡＰＤ分析,结果表明,大部分引物可以在不同模板上扩增出条带,但仅有７个引物可以同时在１０个品种的油梨ＤＮＡ上扩增出条带;用ＲＡＰＤ结果对１０个油梨品种进行聚类分析,基本符合传统分类观点。