云南田头菇属两个物种遗传多样性的AFLP分析

利用扩增片段长度多态性(AFLP)技术分析了田头菇属的茶树菇(Agrocybe aegerita)及杨柳田头菇(Agrocybe.salicacola)基因组DNA的多态性,使用11对引物组合建立了18个供试菌株的指纹图谱。结果表明:通过聚类分析,18个供试菌株聚为两大类,彼此关系得到很好的分辨。AFLP技术可用于茶树菇和杨柳田头菇2个形态上非常相似物种的DNA分子指纹图谱构建。     

疑似松茸菌株Z-s、R-b、H-c的DNA指纹鉴定

以松茸子实体为DNA参照样品,对疑似松茸菌株Z-s、R-b、H-c进行亲菌鉴定。运用RAPD-PCR技术,采用筛选的5个随机引物对1个供试松茸子实体及3个疑似松茸菌株Z-s、R-b、H-c进行RAPD(Random Amplified Polymorphic) -PCR鉴定,获得DNA指纹图讲;分析菌株Z-s、R-b、H-c间及其与松茸子实体间DNA同源性及遗传相似度,以鉴定疑似松茸菌株Z-s、R-b、H-c是否是目的松茸菌株。实验结果其相似系效分别为:Ssz 35.7%;Sbz 74.1%;Scz 76.9%,可以看出疑似菌株Z-s与松茸子实体DNA指纹图谱差异比较明显,相似系数只有Ssz 35.7%,而疑似菌株R-b和H-c则和松茸子实体的DNA指纹图谱比较相近,相似系数分别为Sbz 74.1%,Scz 76.9%。在分离菌株的形态及生物学特征进行表型鉴别的基础上,初步判定疑似菌株R-b和H-c-很可能是目的松茸菌株。     

菠萝DNA的提取及AFLP反应体系的建立

为了应用AFLP分子标记对菠萝种资源进行种质鉴定、分类及亲缘关系等方面的研究,最重要的是要获得高质量的DNA,菠萝叶片革质化程度较高,且纤维、多糖、多酚等次生代谢物质含量较多,严重干扰DNA的抽提或影响其后的AFLP双酶切及其扩增反应,本研究以菠萝叶片为材料,利用改良CTAB法得到了39个高质量的菠萝分类群的DNA基因组,并进行了AFLP分析,得到了条带清晰、多态性好的菠萝品种指纹图谱,这为菠萝基因库的建立、优良品种选育以及亲缘关系的系列研究提供理论依据。     

草菇基因文库的构建(英文)

应用基因重细技术,我们建立丁一个草菇总DNA的部分基因文库。通过限制性内切酶Sau 3AI部分酶切纯化的草菇总DNA,得到小于4kb的DNA片段。这些DNA片段插入到经Bam HI酶切及碱性磷酶酯酶处理的pUC18质粒,转化感受态细胞DH5α。在此研究中。我们比较了两种转化方法(氯化钙转化法和电转化法)的转化效率,电转化法的转化效率高于氯化钙转化法数千倍,达到2×10(2)CFU/μg DNA。在此实验中DNA重组率是64%,这个草菇总DNA的部分基因文库由8000个克隆组成,平均每个克隆含有1.5kb的草菇DNA。此基因文库含有15%的草菇总DNA。可作为分子标记用于DNA指纹图谱分析及作为遗传学标记用于RFLPs的遗传图谱分析。     

马铃薯栽培品种‘合作88’细菌人工染色体文库的构建与评价

以四倍体马铃薯栽培品种‘合作88’培养12 ~ 15 d苗龄的幼嫩叶片为试材,提取高分子量基因组DNA,利用限制性内切酶HindⅢ部分酶切后回收100 ~ 300 kb片段,连接到载体CopyControlTM pCC1BACTM的HindⅢ位点上,构建了细菌人工染色体（BAC）文库。该文库约由850 000个克隆组成,空载率约2.08%,保存在1 700个混合池中,克隆插入片段平均大小约为90 kb,覆盖单倍型马铃薯基因组约85倍。随机挑取6个BAC克隆连续培养5 d,提取DNA进行HindⅢ完全酶切检测,确认不同培养时间的BAC克隆的指纹图谱完全一致,表明文库较好的稳定性。BAC文库的构建为马铃薯重要农艺性状基因克隆、基因组测序以及比较基因组研究等奠定了基础。     

RAPD在枇杷品种鉴定中的应用

运用RAPD(RandomAmplifiedPolymorphicDNA,即随机扩增多态性DNA)分析技术,对16个枇杷品种的基因组DNA进行RAPD分析,从几个随机引物中筛选出2个随机引物能从各个品种的基因组DNA扩增出DNA片段,在16个枇杷品种中2个引物扩增出19个DNA片段,其中3个为公共,16个为多态性或单态性DNA片段,表明不同枇杷品种基因型间存在着极为丰富的遗传多样性,扩增的DNA指纹图谱可将16个品种一一区分,为枇杷品种鉴定提供了新的方法,同时也为分子标记辅助育种提供了依据。     

猕猴桃雌雄性别的AFLP鉴别中DNA模板的制备

基因组DNA的成功制备和避免降解是AFLP成功的关键。描述了猕猴桃AFLP研究中的DNA模板制备方法，尤其是DNA的提取和纯化，以及基因组DNA的酶切中常见的问题及其相应的解决措施。应用这些方法得到了猕猴桃清晰的AFLP指纹图谱。     

草莓品种亲缘关系的AFLP分子标记分析

 利用AFLP技术对我国国家草莓资源圃内保存的107个草莓品种进行了DNA多态性分析。从64对“2 + 2”引物中筛选出10对引物应用于扩增基因组DNA, 共获得清晰可辨的581条带, 其中412条为多态性带。UPGMA方法聚类分析结果显示, AFLP分子鉴定结果与其系谱关系非常一致, 表明AFLP指纹图谱分析能很好地鉴别草莓品种之间的遗传关系。     

牡丹AFLP荧光反应体系的建立和优化

以牡丹的叶片为材料,通过对扩增长度多态性(AFLP)反应体系中几个关键参数进行优化,建立了牡丹的AFLP荧光反应体系,首次在牡丹DNA提取、酶切连接、预扩增、选择性扩增等试验过程取的成功,得到了清晰的部分牡丹品种的指纹图谱.为牡丹品种指纹图谱的绘制、亲缘关系的研究等奠定基础.     

湖南地区柱状田头菇的AFLP分析

采用扩增片段长度多态性(AFLP)技术对湖南地区8株柱状田头菇(Agrocybe cylindracea)栽培品种进行了遗传多样性分析。指纹图谱结果显示:8对引物组合均能够对酶切的供试菌株基因组DNA片段获得稳定的条带,915条位点条带中,861(94.10%)条具有多态性,多态性较好;扩增片段大小在70～500 bp之间,每个引物组合的多态性片段条数为94～120,平均107.6条。UPGMA聚类分析表明,在相似性系数为0.49时,可将8株柱状田头菇分为3类,遗传距离最大为0.7394,最小为0.3716。AFLP指纹图谱清晰地显示出不同品种的多态性差异。     

中国三省松口蘑遗传多样性分析

采用ITS、mt SSU rDNA的V4和V9区对采自西藏、吉林和云南3个省份30个地区的59个样本进行物种鉴定,并运用IGS1-RFLP和RAPD进行遗传多样性分析。结果表明:所有样本均为松口蘑(Tricholoma matsutake),松口蘑ITS序列存在明显的地域性;IGS1-RFLP分析表明,吉林样本属于A型,西藏和云南样本是2种新类型;聚类分析表明,在相似系数为0.702水平时将供试样本分为3大类群;我国松口蘑具有丰富的遗传多样性,并且自然种群遗传多样性地域性明显。     

基于全产业链视角的松茸产业经济效益分析

为推动松茸产业的经济发展,提出基于全产业链视角的松茸产业经济效益分析方法,分别从松茸的原生地保护扩繁、加工、销售等多个环节构建松茸全产业链;设置松茸产业经济效益的分析指标,并从投入和收益2个方面得出估算结果,通过计算投入与收益之间的比值得出松茸产业经济效益的分析结果。将设计的分析方法应用到实际产业经营工作当中,与往年相比年收益额提高了约27.21%。     

Assessment of clonal genetic variability in Olea europaea L. ‘Cobrançosa’ by molecular markers

Olive tree is mainly vegetatively propagated; therefore a small level of polymorphism is expected among clones of the same cultivar. In order to access the level of intra-varietal genetic variability within a collection of 120 clones of the Portuguese olive ‘Cobrançosa’ DNA fingerprinting was performed. Ten random amplified polymorphism DNA (RAPD) primers amplified 150 fragments, of which 75 were polymorphic, while 10 inter-simple sequence repeats (ISSR) primers amplified 179 fragments of which 98 were polymorphic. ‘Cobrançosa’ clones were compared and analysed using Jaccard's coefficient with unweighted pair group mathematical averages, using the RAPD data, the ISSR data and both markers simultaneously. The data indicates a wide intra-varietal genetic variability among the clones. It was possible to cluster some clones according to geographical provenance. Analysis of molecular variance revealed greater variation within clones than among different geographical origins. Significant genetic diversity among the ‘Cobrançosa’ olive cultivar, even though the clones came from a limited geographical area, was also detected.     

Assessment of diversity in Podophyllum hexandrum by genetic and phytochemical markers

For successful conservation and domestication of a species, evaluation of its genetic diversity by different markers is important. Morphological characteristics, phytochemical variation and random amplified polymorphic DNA (RAPD) profiles were generated in different accessions of Podophyllum hexandrum in order to determine the genetic diversity. Random amplified polymorphic DNA (RAPD) analysis revealed a high degree of genetic diversity among the accessions used in the study. There was also high diversity in the concentration of marker compounds in the collected samples as revealed by HPLC analysis. It is shown that the approaches used in the work successfully discriminate between the accessions of this species and thus they constitute interesting tools to analyze molecular, biochemical and phenotypic diversity within this species. Similarity measurement using UPGMA followed by cluster analysis resulted in formation of many groups based on geographical distribution that generally reflected expected trends between the genotypes. There were also some important exceptions like PW-S, an accession from Wastoorwan, Khrew showing close resemblance to PG-S and PG-B collected from Gulmarg but grown at two different gene banks at Srinagar and Bonera. Further an accession PSH-B from Keller was significantly diverse from the rest of the native genotypes phytochemically, morphologically and at molecular level. RAPD data analysis was found to be significant predictor of phytochemical markers in cultivated P. hexandrum germplasm. Twelve accessions grown in gene bank repository were subjected to RAPD analysis and were assessed for content of podophyllotoxin and podophyllotoxin β-d-glycoside by HPLC. Individual regressions of podophyllotoxin and podophyllotoxin β-d-glycoside by RAPD analysis against HPLC has been found to determine linear values. Strong correlation and a strong association of values of the phytochemical variables and the DNA polymorphism data has been recorded.     

松口蘑菌丝分离及其RAPD—PCR鉴定

采用组织分离法,对东宁县的松口蘑进行了分离培养。通过显微观察及RAPD—PCR技术对松口蘑子实体及其相应的培养物之间进行了亲缘关系鉴定。结果表明,菌褶为松口蘑组织分离的最适宜部位,其最佳分离培养基为冈叮,即PDA＋黑木耳二级种浸出液＋麦麸。RAPD—PCR结果显示,松口蘑子实体与分离物之间的DNA指纹相似系数在0．97～1．00之间,表明松口蘑子实体与其相应的培养物在种质上是一致的。     

分子标记技术在西瓜甜瓜上的应用

近十几年来,AFLP、RAPD和SSR等分子标记技术的应用,加速了瓜类作物遗传和育种的步伐。根据有关文献介绍了分子标记技术在西瓜甜瓜遗传图谱构建、遗传多样性和物种亲缘关系、分子标记辅助选择、品种(系)指纹图谱构建及杂种纯度鉴定等研究领域的应用进展,其中,RAPD技术是一种高效的基因组DNA多态性分析技术,有快速、简便、高效等优点,主要综述了RAPD技术在西瓜、甜瓜遗传育种研究中的广泛应用,并探讨了该技术在使用中存在的问题及应用前景。     

大白菜和紫菜薹自交系染色体组DNA的RAPD分析

用８个随机引物（１０ｂｐ）对２个紫菜薹自交系的３个单株和４个大白菜自交系的４个单株的染色体组ＤＮＡ进行ＰＣＲ扩增，共有４０条带分离清晰、明亮，其中引条带在７个单株中表现出差异，可作为遗传标记（ＲＡＰＤ标记）。４个大白菜自交系之间的平均差异条带数为１２．３，２个紫菜薹自交系之间为９．５，大白菜与紫菜薹之间平均有１５．５条带的差异。用７个引物在９３Ｗ０５－７（紫菜薹）和９３Ｗ５８－５（大白菜）之间检测出对个ＲＡＰＤ标记。从同一自交系的不同单株抽提的染色体组ＤＮＡ扩增出较一致的ＤＮＡ谱带，而不同自交系间扩增出的ＤＮＡ谱带差异很大，这表明此方法也可以象ＲＦＬＰ一样，用于大白菜和紫菜薹的分子标记。     

松口蘑及其活性物质研究进展

详细论述了松口蘑的生物学特性，菌丝生长的营养需求，分离鉴定方法，栽培技术及深层发酵技术，同时综述了松口蘑的生物学特性及活性物质的研究进展，并讨论了松口蘑的研究方向和发展前景。     

分子生物学技术在菇类研究中的应用

本文报道了应用ＲＦＬＰｓ和ＲＡＰＤ技术分析香菇类缘关系，鉴别品系及分析木耳杂交后人攻原体质体融合子的结果，发现供试的３２个香菇菌株的总ＤＮＡ限制性内切酶片段长度存在多态性；木耳杂交后代、融合子及其亲株间ＤＮＡ ＰＣＲ扩增产物谱带型出现差别，这充分说明ＲＦＬＰｓ和ＲＡＰＤ技术在分析遗传变异、鉴别品系、鉴定杂种和融合子研究中的重要作用。     

适于AFLP分析用的桃成熟叶片DNA提取方法

以多个野生桃秋季成熟叶片为材料,采用改进CTAB法对其基因组总DNA的提取进行了研究,并与其相应幼叶DNA的提取效果进行了比较分析。结果表明,从野生桃成熟叶片提取的DNA除产量低于幼叶外,DNA的纯度和完整性都较好,D260nm/D280nm的比值均为1.8～2.0,无降解现象,RNA去除干净,能被限制性内切酶完全消化;其AFLP分析(引物EcoRI-TA/MseI-CTT)条带清晰,多态性好,说明此方法提取的野生桃成熟叶片基因组总DNA完全适于AFLP分析。