双孢蘑菇三种类型菌株的RAPD扩增研究

用７２个随机引物,对三种类型双孢蘑菇菌株２７９６（杂交型）,８２１１（优质型）,０１（高产型）等进行了ＲＡＰＤ扩增,发现２６个引物均产生三种不同的带型。用该２６个引物进一步作三种类型９株双孢蘑菇白色菌株的ＲＡＰＤ扩增,发现引物Ｕ１６,Ｕ２０,Ｂ１,Ｈ４,Ｈ５,Ｍ７能很好地区分三类菌株,尤以Ｕ２０和Ｈ５为佳,其产生的三种带型稳定整齐,差异带明显,为双孢蘑菇菌株特性的早期预测提供了ＤＮＡ水平的标记。     

西瓜花叶病毒2号外壳蛋白基因克隆及其在大肠杆菌中的表达

以郑州地区西瓜花叶病病叶分离物──西瓜花叶病毒２号（２－ＷＭＶ－）为毒源，从繁殖寄主西葫芦病叶中分离、鉴定了病毒。以病毒基因组ＲＮＡ为模板，逆转录合成ｃＤＮＡ，通过多聚酶链式反应（ＰＣＲ），从ｃＤＮＡ中扩增和克隆了病毒外壳蛋白（ＣＰ）基因，其中包括３’端非编码区，完成了全部核苷酸序列分析。ＣＰ基因全长１０９９个苷耷酸，其中编码区长９０３个核苷酸，编码３０１个氨基酸，３’端非编码区长１９６个核苷酸。Ｚ－ＷＭＶ－２ＣＰ基因的编码区比Ａ－ＷＭＶ－２，Ｕ－ＷＭＶ－２两株系的ＣＰ基因编码区分别长出６０个核耷酸，多编码２０个氨基酸。与两个株系相比，编码区的核昔酸序列同源性分别为８８．５％和８７．０％，氨基酸序列同源性分别为９０．０％和８８．７％，３，端非编码区的同源性分别为６８．３％和７１．８％。若不考虑Ｚ－ＷＭＶ－２多出的６０个核苷酸及２０个氨基酸，则上述同源性依次为９５．４％、９３．７％、９６．４％、９５．０％、８８．８％和９３．４％。构建了含ＷＭＶ－２ＣＰ基因的大肠杆菌表达载体，经聚丙烯酰胺凝胶电泳分析，表达出了与天然病毒外壳蛋白分子量相同的蛋白。     

基于InDel 标记的大白菜育种材料分子身份证构建

以105 份大白菜育种材料为试材，精选20 对均匀分布于大白菜基因组、且只能检测出2 个等位基因的共显性InDel 标记引物进行分子标记检测，构建分子身份证。结果表明：20 对引物中有16 对引物在所有材料中均扩增出单一条带，另外 各有2 对引物在部分材料中存在缺失和加倍现象。将所有标记引物按其所处染色体编号由小（A01）到大（A10）排列，同 一染色体上的标记则按照物理位置从小到大排列，按顺序对标记赋值，构建了105 份大白菜材料的分子身份证。所筛选的 20 对引物对未知新种质的身份证构建具有通用性和兼容性，表明InDel 标记技术可以作为大白菜鉴定和分子身份证构建的有 效技术手段。     

PEG渗调引发处理对菜薹老化种子DNA损伤的修复作用

利用ＲＡＰＤ技术对菜薹人工老化种子ＤＮＡ的损伤及ＰＥＧ渗调引发处理的修复作用进行了研究。在６１种引物中，有６种在菜薹人工老化的种子上获得了基因组ＤＮＡ指纹图谱，平均每种引物扩增的总ＤＮＡ带数为２．１６，多态性ＤＮＡ带数为１．１７，有１１种引物在ＰＥＧ渗调引发的菜薹老化种子上获得了基因组ＤＮＡ指纹图谱，平均每种引物扩增的总ＤＮＡ带数为３．９１，多态性ＤＮＡ带数也是３．９１。人工老化对菜薹种子基因组Ｄ     

中国枣种质资源的RAPD分析

利用ＲＡＰＤ技术对枣６４个品种及类型的遗传变异进行了研究。从１２０个１０ｂｐ随机引物中筛选出４０个多态性引物用于正式扩增，共扩增出４９２条ＤＮＡ带，其中多态性ＤＮＡ带２９３条，占５９．５５％，平均每个引物扩增的ＤＮＡ带的数目为１２．３１条。有１３个品种及类型扩增出了１个以上的特有ＲＡＰＤ标记，据此可以进行品种鉴定或早期性状预选。利用ＤＮＡ扩增结果进行聚类分析，把供试的６４个品种及类型分为８类，并对     

厚皮甜瓜亲缘关系及纯度的RAPD标记

利用２０个随机引物对厚皮甜瓜８个亲本与４个杂交种进行ＲＡＰＤ分析。１０个引物的扩增ＤＮＡ谱带具有多态性,亲本具有各自的特异谱带,绝大部分Ｆ１的扩增带型是双亲的互补带。各试材的相似系数范围为６３．６％－９６．５％。遗传距离聚类分析图表明,Ｆ１易与双亲或其一聚在一起。上述结果说明,可以利用ＲＡＰＤ标记在ＤＮＡ水平上进行厚皮甜瓜的亲缘关系及纯度的鉴定。     

番茄种子宇宙飞行后的过氧化物同工酶及RAPD分析

番茄种子经搭载返地卫星宇宙飞行３５５ｈ,回收后地面种植,选择３个同工酶有差异的宇宙飞行处理群体植株进行ＲＡＰＤ检测。结果表明：在５０个供试引物中,有１８个扩增出了ＤＮＡ带,共有１６６条,其大小在２００～２０００ｂｐ之间。与地面对照相比,宇宙飞行处理植株的ＤＮＡ在５个引物出现差异,其突变的程度分别为４．５％、１．３％和３．２％。     

大白菜—结球甘蓝1号染色体二体异附加系自交后代InDel标记分析和染色体数鉴定

在进行异附加系鉴定和相应连锁群In Del标记筛选的基础上,利用In Del标记和细胞学方法对大白菜—结球甘蓝1号染色体二体异附加系自交后代46个单株进行了鉴定分析。结果表明:结球甘蓝C03连锁群相对于大白菜特异的67个In Del标记,均至少在1份后代单株中扩增出了甘蓝的特异条带;在46个后代单株中,3个单株为染色体数22条的二体异附加系,6个单株为染色体数21条的单体异附加系,1个单株为染色体数20条的大白菜二体代换系,28个单株为染色体数20条的附加了结球甘蓝染色体片段的大白菜易位系,还有3个单株染色体数为22条,2个单株染色体数为21条,推断其分别为易位了结球甘蓝染色体片段的大白菜非整倍体易位系,还有3个单株没有检测到甘蓝特异条带。本研究结果为这些材料的进一步研究和应用奠定了基础。     

厚皮甜瓜亲缘关系及纯度的RAPD标记

利用２０个随机引物对厚皮甜瓜８个亲本与４个杂交种进行ＲＡＰＤ分析。１０个引物的扩增ＤＮＡ谱带具有多态性,亲本具有各自的特异谱带,绝大部分Ｆ１的扩增带型是双亲的互补带。各试材的相似系数范围为６３．６％－９６．５％。遗传距离聚类分析图表明,Ｆ１易与双亲或其一聚在一起。上述结果说明,可以利用ＲＡＰＤ标记在ＤＮＡ水平上进行厚皮甜瓜的亲缘关系及纯度的鉴定。     

甘蓝显性雄性不育基因的延长随机引物扩增DNA(ERPAD)标记

获得了一个与甘蓝显性雄性不育基因连锁的延长随机引物扩增ＤＮＡ（ＥｘｔｅｎｄｅｄＲａｎｄｏｍＰｒｉｍｅｒＡｍｐｌｉｆｉｅｄＤＮＡ，ＥＲＰＡＤ）标记ＥＰＴ１１９００。ＥＰＴ１１９００是在与甘蓝显性雄性不育基因连锁的ＲＡＰＤ标记ＯＴ１１９００的基础上，通过逐步筛选３’端延长的随机引物的方法转化而成的稳定性和特异性都得到增强的新标记。这种标记的稳定性和特异性接近ＳＣＡＲ标记，但不需要克隆和测序。该方法首先根据ＯＰＴ１１的序列合成３’端添加Ａ、Ｔ、Ｃ、Ｇ４种碱基的４个引物，组成１０个引物对。以不育池为模板筛选出ＯＴ１１Ｃ＋ＯＴ１１Ｇ为唯一能够扩增长度与ＯＴ１１９００相同的一个片段的引物对。在此引物对基础上，又添加４种碱基得到８个新的引物，相互组合成１６个引物对。进一步以不育池为模板筛选出ＯＴ１１ＣＴ＋ＯＴ１１ＧＡ，在严格条件下，它可特异扩增长度与ＯＴ１１９００相同的一个片段ＥＰＴ１１９００。通过分离群体分析证实这一片段与ＯＴ１１９００处于同一位点。     

用于白菜和大白菜品种鉴定的EST-SSR复合标记的建立

 为了有效和全面鉴定白菜和大白菜品种, 研制了由3个引物对组成的6套EST-SSR复合标记 组合, 并形成了多重SSR的最佳实用试验条件。经由这6套标记组合完全鉴别了43个白菜和大白菜品种差异的检测, 并在3个大白菜杂交种个体之间的表现一致, 比较了单引物标记与复合标记的鉴定效率, 验证了这套技术和组合可以表达白菜和大白菜品种间多态性、品种内一致性及稳定性和重复性, 确认其可以高效准确和全面地鉴别白菜和大白菜品种的真实性和杂交种纯度。     

大白菜品种鉴定的SSR核心引物筛选及其应用

为筛选出一套大白菜（Brassica rapa L. ssp. pekinensis）简单重复序列（Simple sequence repeat,SSR）的核心引物,以54份大白菜骨干自交系为材料,从已发表的2 129对白菜SSR引物中,初步筛选出分布于白菜整个基因组、具有唯一扩增位点、扩增稳定性及重复性好的多态性SSR引物51对。进一步根据引物的多态性信息量（PIC）、等位基因数量、位点的物理位置和主成分分析（PCA）等分析结果,确定了一套包含28对SSR引物的核心引物组合。比较核心引物组合、51对多态性SSR引物和123个标记（72个SNP标记与51对多态性SSR引物）对54份大白菜骨干自交系的聚类分析结果,三者具有较高的一致性;该套引物可将262份大白菜高代自交系区分开,具有较好的鉴别能力。利用这套核心引物构建了242份大白菜品种的指纹图谱。该研究获得的28对SSR引物可以用于大白菜的遗传多样性分析和品种核酸指纹库构建等研究,可为大白菜新品种的特异性、一致性、稳定性检测体系的建立和新品种保护提供技术支持。     

菜薹(菜心)亲本材料的创制及新品种18A1菜心的选育

为了拓宽菜薹(菜心)种质资源,筛选优良亲本材料,进而选育菜心雄性不育系杂交种,本试验利用菜心与大白菜亚种间杂交、菜心与芥菜种间杂交及自然突变体筛选等3种途径,创制和鉴定优良的菜心育种材料,并广泛转育菜心CMS96细胞质不育系和配制CMS96细胞质不育系组合。结果表明,菜心与大白菜杂交、菜心与芥菜杂交及自然突变体筛选等方法是创制菜心种质资源的有效途径。利用亚种间杂交,获得菜心CMS96细胞质不育系、菜心瓣化型萝卜胞质Ogu CMS,叶片深紫色菜心,叶片塌地菜心;利用种间杂交,获得圆叶锯齿菜心,叶色翠绿菜心和叶片浅紫色菜心;基于自然突变,筛选到橘红色花菜心,乳白色花菜心和隐性核雄性不育系突变体。同时,以菜心细胞质不育系CMS96.农家菜心8与新西兰50天自交系杂交,成功选育出菜心新品种18A1菜心,中熟,叶色深绿,菜薹油绿,臺质脆嫩,口感好,适合广州等南方地区秋冬季和菜场基地种植。     

种芽春化和绿体春化对大白菜现蕾及开花时间的影响

以100个大白菜品种的高代自交系为试验材料,研究了种芽春化和绿体春化两种春化方式对大白菜现蕾时间、开花时间的影响。结果表明:种芽春化处理的100个大白菜品种的平均现蕾时间、开花时间比绿体春化处理分别提前了15.0d和11.5d。其中春泉大种芽春化不能使其现蕾和开花,而绿体春化则可以使其现蕾,这可能是因为参与两种春化方式调控的分子机制不同。不同冬性的大白菜品种在两种春化处理方式下,其现蕾时间、开花时间的变化趋势一致,说明两种春化方式对大白菜不同品种的影响具有通用性和一致性。     

15个樱桃品种的RAPD分析

利用RAPD技术,用104条随机引物对甜樱桃的14个品种和中国樱桃的1个品种进行遗传多样性分析,其中有14条引物的多态性较好。用任意一条能出现扩增带的引物,能明显区分开中国樱桃和甜樱桃,RAPD标记能够准确地进行种间的区分;而用一个引物或两个引物的组合只能鉴定出甜樱桃的一个品种。聚类结果显示,中国樱桃和甜樱桃的遗传距离最远;黄色果肉的养老和其他红色果肉的品种遗传距离较远。RAPD分析基本能够反映甜樱桃品种间的遗传多样性,但效果不理想,鉴定品种较为困难。     

小白菜和菜薹细胞质雄性不育类型的分子鉴定

通过检索NCBI核苷酸数据库获得orf 138和orf 224开放阅读框序列,依据其保守序列设计2对引物,对几种来源不同的小白菜和菜薹细胞质不育系及其保持系进行PCR扩增.orf 138引物在小白菜和菜薹细胞质雄性不育系中均扩增出573 bp的片段,orf224引物只在一个菜薹雄性不育系中扩增出653 bp的片段.同源...     

白菜类蔬菜亲缘关系的AFLP分析

 利用AFLP 分子标记技术对白菜类蔬菜间的亲缘关系进行了研究。使用10 对选择性引物组合, 扩增出4 173 条扩增带, 并对其进行聚类分析。结果表明: 芜菁与结球白菜和不结球白菜亲缘关系远; 而结球白菜与鸡冠菜和毛白菜亲缘关系较近, 与其它不结球白菜亲缘关系较远。从分子水平上分析了薹菜、菜薹、柴乌、箭杆白、马耳朵白等不结球白菜类蔬菜之间的亲缘关系。     

大白菜（大白菜×紫色小白菜）叶片紫色性状的遗传分析

以大白菜（叶片绿色）和紫色小白菜（叶片紫色）为亲本进行杂交、回交和自交,研究大白菜叶片紫色的遗传规律。结果表明,大白菜和紫色小白菜杂交F1的叶片均为紫色,但其叶片色泽较亲本紫色小白菜浅。在F2群体中,叶片颜色分离比例接近3紫色：1绿色,BC1群体为1紫色：1绿色,而BC2群体叶片全部为紫色。χ2检测结果进一步证明：大白菜和紫色小白菜杂交后代叶片紫色对绿色受1对遗传基因控制,紫色对绿色为显性,决定叶片紫色的基因具有累加效应。     

芸薹属异源六倍体CGMCCNo.2553多类型再生植株的获得

应用游离小孢子培养技术对兼具有A,B,C染色体组的芸薹属异源六倍体CGMCC No.2553(AABBCC,n=27)材料进行游离小孢子培养.结果表明,供试材料具有胚胎发生能力,并获得DH再生植株.220份驯化后的再生植株定植于日光温室中自交留种,其中12株获得白交种子.分别将DH植株与3份大白菜品种正、反交授粉杂交,得到4份杂交种F1代.经田间植物学鉴定,获得的杂交种为真正的杂种.目前,4份杂交种的染色体组成、倍性、育性等正在研究中.所获得的DH植株为今后构建遗传图谱,标记和定位重要的基因等后续研究奠定了基础.     

大白菜耐热性QTL定位与分析

 应用352个标记位点的大白菜AFLP和RAPD图谱，采用复合区间作图的方法对控制大白菜耐热性的数量性状基因位点(QTL)进行定位和遗传效应研究。用苗期热害指数进行耐热性表型鉴定，共检测到5个耐热性Q几位点，分布于3个连锁群上。ht-1、ht-3和ht-5表现为增效加性效应，ht-2和舡4表现为减效加性效应。ht一2对大白菜耐热性的遗传贡献率最大，其次是ht-5。发现了与5个 I8紧密连锁的侧连分子标记，它们与Q几间的距离为0．1 2．4 cM。这为大白菜耐热性分子标记辅助选择提供了理论基础。关键词：中图分类号：