热胁迫下糙皮侧耳实时荧光定量PCR内参基因的选择

在组成型表达基因和热胁迫转录组数据中选择12个基因作为热胁迫下糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus)实时荧光定量PCR的候选基因。以40℃热处理0.5、1、3、6、12、24、48 h的糙皮侧耳菌丝体为材料,采用候选基因的特异性引物进行实时荧光定量PCR,运用geNorm、NormFinder和BestKeeper 3种软件对结果进行分析,评估12个候选基因的稳定性。结果显示β-微管蛋白基因、β-肌动蛋白基因和丝/苏氨酸蛋白磷酸酶基因可以作为糙皮侧耳热胁迫下理想的内参基因,而丝氨酸蛋白酶基因、磷酸化酶基因和细胞周期蛋白不适合作为糙皮侧耳热胁迫下的内参基因。     

高温胁迫下糙皮侧耳胞内钙离子对热激蛋白基因表达的调控

以糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus)菌株CCMSSC00389为材料,研究高温胁迫(40℃、120 min)下钙离子的响应及其对热激蛋白的调控。在高温胁迫条件下,在培养基中添加胞内钙离子螯合剂、胞外钙离子螯合剂、钙调蛋白抑制剂、质膜钙通道抑制剂、三磷酸肌醇受体拮抗剂,利用钙离子特异性荧光探针检测菌丝体胞内钙离子含量,采用荧光定量PCR检测热激蛋白的基因表达量。结果表明,高温胁迫促进胞内钙离子浓度升高,增加Hsp60、Grp78、Hsp90、Hsp104等4种热激蛋白的基因表达量;培养基中添加钙离子螯合剂或抑制剂会降低胞内钙离子浓度,抑制这些热激蛋白的基因表达。研究结果表明高温胁迫会诱导糙皮侧耳胞内钙离子浓度升高,参与信号转导,从而调控热激蛋白的表达来缓解高温胁迫引起的伤害。     

国内外食用菌增产添加物研究进展

为全面了解食用菌增产添加物的主要成分和应用效果,笔者综述日本、美国和荷兰针对其本土主要栽培食用菌所开发的多种增产添加物以及国内食用菌生产中试验验证的矿质元素和氨基酸类的增产添加物,提出了通过对矿质元素和氨基酸等进行适宜种类、浓度和比例的筛选,制成不同复合型食用菌增产添加物的必要性的建议。     

外源海藻糖对高温胁迫下肺形侧耳氧化损伤的缓解效应

高温胁迫影响食用菌的品质和产量,由高温引起的氧化胁迫是导致损伤的主要原因.以肺形侧耳(Pleurotus pulmonarius)热敏感菌株CCMSSC 00494和耐热菌株CCMSSC 00499为试验材料,研究了外源海藻糖对其菌丝体高温胁迫下氧化损伤的缓解效应.结果表明,高温(40℃)胁迫48 h,热敏感菌株中硫代巴比妥酸反应物(TBARS)含量(代表氧化损伤程度)高于耐热菌株.外源海藻糖处理可以显著降低高温胁迫下菌丝体内O2-产生速率、H2O2含量、脂氧合酶(LOX)活性和TBARS含量水平,缓解高温胁迫所引发的氧化损伤.另外,外源海藻糖对超氧化物歧化酶(SOD)活性有保护和提高的作用,对过氧化氢酶(CAT)和抗坏血酸过氧化物酶(APX)活性有抑制作用,对过氧化物酶(POD)活性影响不明显.外源海藻糖对热敏感菌株的保护效应高于耐热菌株.     

中国野生白灵菇遗传多样性的SCoT 分析

 对来自新疆裕民、托里、青河等3个县的63株野生白灵菇（Pleurotus eryngii var. tuoliensis）的遗传多样性进行了SCoT分析。9条SCoT引物共产生147条带,多态性条带比率为92.52%,平均多态性条带数为15.11。总样本的Nei’s基因多样性指数为0.261,Nei’s遗传一致度0.612 ~ 0.932,平均为0.772,这表明中国野生白灵菇具有丰富的遗传多样性。聚类分析和主坐标分析结果高度相似,几乎将供试样本完全按地理分布划分为3大类群,表明野生白灵菇的遗传多样性与地理分布密切相关。遗传距离分析表明,3个居群中,裕民居群与托里居群的亲缘关系最近,遗传距离为0.086;托里居群与青河居群的亲缘关系最远,遗传距离为0.156。相关性分析表明,遗传距离与直线地理距离和经向地理距离均不存在相关性,而与纬向地理距离存在明显的正相关关系。     

金顶侧耳种质资源的遗传多样性鉴定及农艺性状评价

以20个金顶侧耳(Pleurotus cituinopileatus)菌株作为研究材料,其中8株为栽培菌株,12株为野生菌株。利用ISSR分子标记技术分析金顶侧耳菌株种内遗传多样性,并对其菌丝长速、生物学效率、子实体形态等多个农艺性状进行评价。结果表明:20个金顶侧耳菌株具有丰富的遗传多样性,10条ISSR引物共扩增出92条条带,平均多态性条带频率为98.91%;在相似度0.65水平上绝大部分菌株按照中国北方和南方来源地不同聚为两大类群,显示较强的地域性。金顶侧耳平板上的菌丝长速与生物学效率(产量)不存在显著相关性,而生物学效率(产量)与采收时间显著负相关,菌盖直径、菌盖厚度及菌柄直径三者显著正相关,亲缘关系较远的菌株的农艺性状差异较大。根据评价结果,筛选出采收时间短、生物学效率高的菌株Pc6、Pc7及菌盖大、菌肉厚的菌株Pc13等携带优势性状菌株,可作为下一步育种研究的亲本材料。     

外源海藻糖对高温胁迫下肺形侧耳氧化损伤的缓解效应

 高温胁迫影响食用菌的品质和产量,由高温引起的氧化胁迫是导致损伤的主要原因。以肺形侧耳（Pleurotus pulmonarius）热敏感菌株CCMSSC 00494和耐热菌株CCMSSC 00499为试验材料,研究了外源海藻糖对其菌丝体高温胁迫下氧化损伤的缓解效应。结果表明,高温（40 ℃）胁迫48 h,热敏感菌株中硫代巴比妥酸反应物（TBARS）含量（代表氧化损伤程度）高于耐热菌株。外源海藻糖处理可以显著降低高温胁迫下菌丝体内产生速率、H₂O₂含量、脂氧合酶（LOX）活性和TBARS含量水平,缓解高温胁迫所引发的氧化损伤。另外,外源海藻糖对超氧化物歧化酶（SOD）活性有保护和提高的作用,对过氧化氢酶（CAT）和抗坏血酸过氧化物酶（APX）活性有抑制作用,对过氧化物酶（POD）活性影响不明显。外源海藻糖对热敏感菌株的保护效应高于耐热菌株。     

糙皮侧耳pal2调控低温光照环境刺激下菌丝生长的分子机制

以糙皮侧耳野生型菌株和pal2基因干扰菌株为材料，通过对比菌丝在28℃始终黑暗培养和28℃黑暗培养3 d后进行15℃12 h光照/12 h黑暗培养6 d的环境刺激这两种条件下苯丙氨酸解氨酶（phenylalanine ammonia-lyase,PAL）基因pal2转录水平、酶活性、底物L–苯丙氨酸和产物反式肉桂酸含量的变化，以及分析外源添加不同浓度底物和产物对菌丝表型的影响，初步解释了环境刺激下菌丝生长速度减慢的原因，发现苯丙氨酸解氨酶及其编码基因pal2均能响应环境刺激，但酶活性、产物和底物含量与基因表达量相比存在明显地响应滞后性；阐明环境刺激通过诱导pal2转录水平下调，总酶活性升高，使菌丝胞内L–苯丙氨酸减少，反式肉桂酸含量增加，从而负调控糙皮侧耳菌丝生长的分子通路。     

pH和缓冲作用对香菇菌丝生长的影响

背景香菇是我国栽培规模最大的食用菌,随着栽培规模的不断扩大,栽培模式也在发生转变。菌棒的工厂化生产和液体菌种技术开始广泛应用,对栽培原料、生产工艺和培养条件的要求越来越高。pH是决定香菇菌丝生长和菌种质量的一个重要因素,香菇虽然能在pH 3.0—7.0的范围内生长,但香菇生长的最适pH以及培养料中的缓冲系统对菌丝生长的影响机制尚不清楚。【目的】检测香菇菌丝生长的最适pH,并分析培养料中的缓冲系统对菌丝生长的影响,为香菇生产提供理论依据。【方法】在PDA培养基上,利用HCL和NaOH调节pH,分析香菇生长的最适pH;利用GC-MS和HPLC检测木屑尤其是发酵酸化的木屑中有机酸的种类和含量,在PDA培养基上分别检测有机酸、有机酸钙及其缓冲液对香菇菌丝生长速度的影响;通过测定香菇菌丝生长代谢对PDA培养基pH的调节,最终揭示pH和缓冲作用抑制香菇菌丝生长的机制。【结果】香菇能够在pH 3.0—7.0的范围内生长,但生长最适pH为4.0。当培养基pH＞4.0时,香菇菌丝生长过程中通过代谢降低培养基的pH,最终降低至4.0,以有利于菌丝的生长。当培养基pH＞4.0,并且含有缓冲系统,阻碍香菇对培养基pH的调节时,则抑制香菇菌丝的生长。当缓冲作用达到一定的阈值,可完全抑制菌丝的生长,导致菌种不萌发,如25 mmol?L ^-1的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液在pH 6.0和7.0时可完全抑制香菇菌丝的萌发。【结论】香菇生长最适pH为4.0,当pH＞4.0时,香菇菌丝通过代谢调节培养基pH,缓冲液通过阻碍菌丝对环境pH的调节而抑制菌丝生长。     

中国三省松口蘑遗传多样性分析

采用ITS、mt SSU rDNA的V4和V9区对采自西藏、吉林和云南3个省份30个地区的59个样本进行物种鉴定,并运用IGS1-RFLP和RAPD进行遗传多样性分析。结果表明:所有样本均为松口蘑(Tricholoma matsutake),松口蘑ITS序列存在明显的地域性;IGS1-RFLP分析表明,吉林样本属于A型,西藏和云南样本是2种新类型;聚类分析表明,在相似系数为0.702水平时将供试样本分为3大类群;我国松口蘑具有丰富的遗传多样性,并且自然种群遗传多样性地域性明显。