马立克氏病毒感染鸡的端粒酶活性及其病毒血症的动态研究

1日龄非免疫鸡分别人工感染马立克氏病病毒(MDV)I型国际标准强毒GA株、I型MDV疫苗毒CVI988株后,从第5日起,定期采血,用本实验室改进的Trap法和Bandscan软件测定、分析并计算感染过程中其外周血液单核细胞(PBMC)的端粒酶活性变化;同时用抗MDV囊膜糖蛋白B(gB)单克隆抗体介导的间接免疫荧光试验检测MDV在外周血液单核细胞中的感染状况。结果表明,自接种I型强毒GA株后,端粒酶在没有临床症状和可视病变出现之前就可检测到,并且随着MDV感染后日龄的增加逐渐升高,在25日龄时其相对活力达到最高值;而接种CVI988后,整个生长过程端粒酶活性均呈阴性。从感染第5日到鸡发病死亡前,都能检出GA株引起的病毒血症,并于18～22 d左右达到高峰;而接种CVI988株后第5日到第20日止,能检出病毒血症,并于第10～12天左右达到高峰。     

马立克氏病鸡组织中PRNP基因表达量分析

【目的】探明PRNP基因表达量与鸡马立克氏病发病之间的关系.【方法】从甘肃省康乐县某养鸡场采集马立克(MD)病鸡组织样品,通过RT-PCR检测MDV致瘤相关基因Meq和pp38以及病理组织学观察将样品分为MD肿瘤病变鸡、MD无病变鸡与健康鸡,最后通过荧光定量PCR方法分析3组中PRNP基因mRNA水平的相对表达量的差异.【结果】MD无病变鸡中PRNP基因的表达规律与健康鸡基本一致,但与MD肿瘤病变鸡完全不同;除脑外,MD病鸡组织PRNP基因的表达量均高于健康鸡,其中肿瘤病变组织PRNP基因的表达量显著高于无病变组织(P0.05),而且PRNP基因在MD病鸡肿瘤病变组织与健康鸡组织的表达差异与肿瘤病变程度有关.【结论】PRNP基因的表达量与MDV感染存在相关性,PRNP基因在MD肿瘤组织中过表达,且PRNP基因的差异表达与肿瘤病变程度有关.     

马立克氏病鸡血清中端粒酶、SOD活性与MDA含量变化的研究

对人工感染MDV诱发肿瘤过程中血清端粒酶、超氧化物歧化酶活性(SOD)和丙二醛(MDA)含量进行了试验研究。结果表明：MDV感染后第8天，临床症状和剖检可视症状出现前。血清开始出现端粒酶活性；相关性分析显示。血清端粒酶与总SOD活性和MDA含量之间具有一定的相关性，并且端粒酶活性与总SOD活性变化之间呈显正相关关系。这一结果为弄清病毒性肿瘤的形成提供了有用的信息。     

马立克氏病毒京-1株对不同日龄SPF鸡的致病力试验

将60羽SPF鸡随机分为3组,选取马立克氏病毒标准毒株京-1株分别对10日龄组和21日龄组鸡进行人工感染试验,对照组注射同等剂量的稀释液。结果显示：两组攻毒组试验鸡均于接种病毒后18d开始发病,并于20～25d出现死亡高峰,26d开始逐渐缓解。两组鸡的死亡率分别为80%和60%,肿瘤发生率分别为80%和65%,肿瘤主要出现在心脏、肝脏、脾脏、肾脏和坐骨神经等组织,其中10日龄攻毒组2～3个器官发生肿瘤的个体占65%,4个及以上器官发生肿瘤的个体仅占5%,21日龄攻毒组2～3个器官发生肿瘤的个体仅占35%,4个及以上器官发生肿瘤的个体达到20%。由此说明,10日龄SPF鸡对京-1株MDV敏感,而21日龄该品系鸡对之敏感性略低。     

如何科学防治鸡马立克氏病

1鸡马立克氏病的分类 马立克氏病（MD）是鸡的一种常见和重要的肿瘤性疾病,由血清1型疱疹病毒（MDV）引起,根据其临床表现和病变发生的部位,可分四种类型：神经型、内脏型、眼型和皮肤型。     

马立克氏病肿瘤表面抗原的免疫荧光测定及其应用

用马立克氏病(MD)肿瘤细胞系 MDCC-MSB-1免疫家兔制成的高免血清,经正常的来杭鸡淋巴细胞完全吸收后,获得针对 MD 肿瘤表面抗原(MASTA)的特异性抗血清,它与 MSB-1反应的间接免疫荧光效价为1∶32。以MD 京-1强毒株接种1日龄雏鸡诱发的实验性肿瘤和某鸡场疑似马立克氏病的内脏肿瘤制成细胞悬液,用 MASTA 特异性抗血清进行间接免疫荧光染色,测得内脏肿瘤细胞的 MASTA 阳性率分别为2%和15%,并从疑似 MD 的病鸡血液内分离出 MD Ⅰ型病毒。羽囊和血清琼扩 MD 阳性,但无肿瘤病变的鸡未能测出MASTA 阳性的肿瘤细胞。用荧光抗体染色检查 MASTA 抗原的 MD 诊断方法切实可行。     

马立克氏病病毒囊膜糖蛋白I原核表达产物单克隆抗体的制备

以重组质粒 p GEX-MDg I在大肠杆菌 BL2 1中表达马立克氏病病毒 (MDV)特超强毒 64 8A株的囊膜糖蛋白 I(g I)完整基因 ,通过 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离相应的蛋白条带 ,切下并碾碎后作为免疫原免疫小鼠 ,用以制备针对MDV64 8A g I糖蛋白的杂交瘤细胞株。以 MDV感染的鸡胚成纤维细胞 (CEF)为检测抗原 ,用间接免疫荧光抗体反应(IFA)筛选到 9株杂交瘤细胞株 ,选其中 3株 2 H7、6F1 0、2 H3制备腹水 ,其 IFA效价均达到 1∶ 1 50 0以上 ;与 I型 MDV不同致病型的毒株 CVI988/ Rispens、GA、RB1 B、Md1 1株感染的 CEF测 IFA,均呈现特异性荧光 ,但反应强度不同。腹水经 PBS稀释后与 MDV感染的 CEF做斑点酶联免疫吸附试验 ,呈特异性显色。对 MDV感染的 CEF裂解物做 West-ern-blotting,可检测出 1条特异性条带     

马立克氏病病毒囊膜糖蛋白I原核表达产物单克隆抗体的制备

以重组质粒pGEX-MDgI在大肠杆菌BL21中表达马立克氏病病毒（MDV）特超强毒648A株的囊膜糖蛋白1（gI_完整基因，通过SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳分离相应的蛋白质条带，切下并碾碎后作免疫原免疫小鼠，用以制备针对MDV 648A gI糖蛋白的杂交瘤细胞株，以MDV感染的鸡胚成纤维细胞（CEF）为检测抗原，用间接免疫荧光抗体反应（IFA）筛选到9株杂交瘤细胞株，选其中3株2H7，6F10，2H2制备腹水，其IFA效价均达到1：1500以上，与I型MDV不同现型的毒株CVI988／Rispens,GA,RB1B,Md11株感染的CFF测IFA，均呈现特异性荧光，但反应强度不同，腹水经PBS稀释后与MDV感激的CEF做斑点酶联免疫吸附试验，呈特异性显色，对MDV感染的CEF裂争物做Westernblotting，可检测出1 条特民性条带。     

马立克氏病病毒河南分离株Meq基因的克隆与序列分析

【目的】了解马立克氏病病毒(Marek’s disease virus,MDV)河南分离株Meq基因的分子特性,为中原地区MDV流行情况提供较详细的信息,为更好地防控MD奠定基础。【方法】应用PCR方法分别扩增了17株MDV河南省野毒分离株的Meq基因片段,克隆测序后,将各毒株Meq基因序列与vv+MDV 648A株、vvMDV RBIB株、vMDV GA株、mMDV疫苗株CVI988株和814株的Meq基因序列进行比对分析。【结果】17株分离株中除HNGS201和HNLC503的Meq基因扩增产物较预期稍大外,其余15个的片段长度为1 020bp,与预期长度相符;MDV河南分离株之间及其与参考毒株Meq基因的核苷酸同源性为99.0%~100%,部分毒株Meq基因的氨基酸序列有10个位点的氨基酸存在规律性突变;MDV河南分离株和参考株共组成3个进化分支,其中强毒株GA、RB1B和648A位于一个分支,分离株HNGS201、HNLH304、HNLC503与mMDV毒株CVI988和814位于同一分支,其余14株分离株位于另一个较大的分支。【结论】河南省可能流行着不同毒力的MDV,一些mMDV毒株的Meq蛋白存在59个或60个氨基酸的插入。     

顺铂对鼻咽癌细胞株端粒酶活性和凋亡的影响

目的：研究抗癌药顺铂对5株鼻咽癌细胞端粒酶活性和凋亡的影响．以探讨端粒酶活性水平与鼻咽癌的关系及顺铂诱导鼻咽癌细胞凋亡的可能机制，为端粒酶可能成为一种很好的鼻咽癌治疗靶点提供实验依据。方法：用TRAP—ELISA的方法定量检测5株鼻咽癌细胞在顺铂处理前后的端粒酶活性水平，观察细胞形态及生长状态．以流式细胞仪分析细胞周期的改变并检测凋亡。结果：5株鼻咽癌细胞端粒酶均呈阳性，其中LTRs—LMP细胞株端粒酶活性水平最高，高分化细胞株CNE—1端粒酶活性水平低于低分化细胞株CNE—2Z、HNE—2。经顺铂处理后5株鼻咽癌细胞端粒酶活性明显受抑制、细胞形态发生明显改变，出现细胞凋亡。结论：端粒酶的活化与鼻咽癌密切相关。临床常用化疗药物顺铂可能是通过在S期抑制端粒酶活性并诱导鼻咽癌细胞凋亡而发挥杭癌作用的。因此我们认为端粒酶可以作为鼻咽癌的一个治疗靶点。     

云南昭通天麻共生蜜环菌优良菌株筛选

研究了自云南昭通本地分离获得的4株天麻共生蜜环菌的生长特性,并与1株外地优良天麻共生蜜环菌京-234进行对比。结果显示：各菌株间存在明显差异,菌索平均生长速度依次为京-234〉SNA04〉SNA02〉SNA03〉SNA01 菌丝萌发速度、菌索分枝状况、荧光强度及暗培养18 d后菌索生物量等生长特性表现最好的为SNA04,其次为京-234,SNA01和SNA02较差。4株昭通天麻共生蜜环菌中,菌株SNA04性状最优,SNA03菌株次之。     

牛体细胞中端粒酶组分的表达及端粒酶活性的研究

端粒酶是一种能够以自身的RNA组分为模板在染色体末端添加端粒重复序列的核酸蛋白复合体酶，主要由端粒酶RNA组分（TERC）与端粒酶逆转录酶组分（TERT）构成。通过对成年牛组织中端粒酶的这两种组分的表达情况及端粒酶活性状态进行检测，探讨牛端粒酶组分的组织特异性表达以及与端粒酶活性之间的关系。应用RT-PCR检测了成年牛的心脏、肾脏、肝脏及睾丸中TERC和TERT基因的mRNA表达情况，利用TRAP银染法检测各组织中的端粒酶活性状态。结果表明砸RC基因在这4种组织中均有表达，但转录水平在各组织之间有差异；TERT基因仅在睾丸中表达，在其他3种组织中均没有表达，端粒酶活性同样只在睾丸中检测到。由此可见牛端粒酶活性在体细胞中普遍受到抑制，仅在生殖腺中具有活性。端粒酶两种组分的转录是相互独立的，逆转录酶TERT组分是端粒酶活性的关键成分。     

高产纤维素酶的黑曲霉菌种的选育

[目的]为纤维素的进一步开发利用奠定理论基础。[方法]选取菌落直径较大的黑霉菌株W1作为出发菌株进行紫外线诱变,检测诱变菌株在不同发酵时间的纤维素酶活力。[结果]黑曲霉W1经紫外线诱变10 min达到92%致死率。在试验检测的108 h范围内,随着培养时间在一定范围内延长,出发菌株W1菌株和从中筛选出的高产纤维素酶菌株NW1的酶活均有不同程度的提高,NW1在28℃100r/min培养84 h后酶活最高达到1.515 U/ml,W1培养84 h酶活达到0.958 U/ml,较出发菌株W1提高了1.58倍。之后2者的酶活都随着培养时间的延长稍有降低。利用0.1%刚果红染液初步检测诱变10 min的黑曲霉分泌纤维素酶情况,结果发现诱变菌株NW1分泌纤维素酶能力最强。[结论]黑曲霉诱变菌株具有较强的分泌纤维素酶的能力。     

GA3对快速生长期亚麻POD同工酶影响的研究

为了研究生长调节物质在亚麻生产中的应用，本试验使用不同浓度的赤霉素（GA3）在快速生长期对亚麻进行喷施，并研究其对亚麻过氧化物同工酶的影响。在亚麻快速生长期喷施GA3后一周取样，进行酶活性测定及同工酶电泳分析表明：在快速生长期喷施不同浓度GA3使亚麻POD活性产生明显的变化，当GA3浓度300mg·kg^-1时，亚麻POD酶活性最高。     

人乳腺良恶性病变组织中端粒酶活性的检测

目的：探讨端粒酶活性与人乳腺良、恶性病变组织之间的关系。方法：用ＴＲＡＰ－ＥＬＩＳＡ检测法,对１５例乳腺良性病变和７种乳腺癌组织进行端粒酶活性水平检测。结果：７例乳腺浸润性导管癌中,５例端粒酶阳性,而１５例乳腺良性疾病中仅２例端粒酶阳性,两组差异有显著性（Ｐ〈０．０５）。此外,有淋巴结转移与无淋巴结转移的乳腺癌组织中端粒酶活性水平差异无显著性（Ｐ〉０．０５）。结论：端粒酶的激活在人类乳腺癌的发生过     

外源赤霉素对桃的成花效应及其作用机制

 【目的】揭示赤霉素对桃成花的影响及其可能的作用机制。【方法】在桃花诱导期叶面喷施100 mg?L-1 GA3,运用解剖学、免疫组织化学及半定量RT-PCR方法,研究‘八月脆’桃花芽分化过程中顶端分生组织赤霉素的原位分布及成花关键基因表达变化。【结果】‘八月脆’桃在7月10日前处于成花诱导期（北京）;成花诱导期叶面喷施100 mg?L-1GA3显著抑制了桃花诱导及进一步的正常分化,处理后成花率仅为11.67%;顶端分生组织中GA1的分布随花芽分化进程而变化,6月13日－7月25日,花芽中GA1主要分布在芽基部的维管组织中,顶端分生组织中没有检测到信号。GA3处理后,GA1的分布在6月13日－7月3日与正常花芽相同,在7月13日顶端分生组织中检测到了GA1信号,且芽基部维管组织中的GA1信号增强,但至7月25日顶端分生组织和芽基部维管组织中的GA1信号明显减弱;GA3处理后,芽中PpLEAFY 及MADS6基因仅在10月10日低量表达,其它时期几乎检测不到。【结论】在北京,‘八月脆’桃成花诱导期在7月10日之前;成花诱导期100 mg?L-1 GA3处理能显著抑制花诱导和进一步正常分化;赤霉素家族中GA1 类在桃成花过程中起抑制作用,并且具有一定的时期性;GA3处理抑制了成花关键基因PpLEAFY及MADS6的正常表达。     

感染鸭源小鹅瘟病毒QH-L01株樱桃谷雏鸭病理学研究

探究人工感染条件下,鸭源小鹅瘟病毒QH-L01株对樱桃谷雏鸭各器官组织病理学变化的影响,以期阐明QH-L01的病理发生规律及特征。实验组以每只0.2 mL(10^6.54 ELD₅₀)的剂量肌肉接种30只2日龄樱桃谷肉鸭鸭源小鹅瘟病毒,对照组的鸭接种等量的灭菌生理盐水,分别在1、3、6、9 d观察各组织器官的病理变化。感染后1 d,先出现肺点状出血,部分肺小叶扩张,十二指肠、回肠和盲肠等肠道组织绒毛上皮细胞坏死脱落。感染后3 d,脑、肾、胸腺、法氏囊出现病理变化,十二指肠、回肠和盲肠等肠道组织绒毛和黏膜层轻度坏死、脱落。感染后6 d,脾脏淋巴细胞增多,十二指肠、回肠和盲肠等肠道组织绒毛和黏膜层中度坏死、脱落。感染后9 d,各组织病变减轻或者恢复正常。整个感染期死亡率为20%。     

IBA与GA3调控百合鳞片扦插繁殖的“淀粉-蔗糖”代谢机制

 【目的】研究IBA与GA3 促进百合鳞片扦插繁殖的碳水化合物代谢机制,为调控鳞片繁殖技术、深入研究小鳞茎形成发育的生理机制奠定基础。【方法】以亚洲系‘精粹’百合为试材,设计200 mg?L-1 IBA浸泡鳞片2 h和200 mg?L-1 GA3浸泡鳞片8 h两个处理,以同体积清水浸泡鳞片2 h为对照,测定母鳞片不同部位和小鳞茎中淀粉、蔗糖含量及相关酶活性。【结果】施用IBA与GA3促进了母鳞片的淀粉降解、蔗糖合成以及鳞片上、中部的糖类物质向基部的运转,加快了小鳞茎的形态建成。母鳞片的淀粉降解部分受淀粉磷酸化酶(starch phosphorylase, SP)调控,蔗糖含量与蔗糖合成酶(sucrose synthase, SS)、蔗糖磷酸合成酶(sucrose phosphate synthase, SPS)活性极显著正相关。IBA促进鳞片淀粉降解、可溶性糖利用或运转的效用高于GA3,且IBA有利于母鳞片蔗糖的尽早合成;GA3在培养前期抑制了鳞片上部和中部的淀粉降解,并促进母鳞片合成较多的蔗糖。【结论】IBA和GA3促使母鳞片内淀粉以及蔗糖的代谢,相关酶活性提高,从而提高繁殖系数或获得最佳小鳞茎个体。     

多粘类芽胞杆菌分离鉴定及其对甘薯蔓割病的防治效果

【目的】筛选对甘薯蔓割病病原菌具有拮抗作用的芽胞杆菌,为甘薯蔓割病的生物防治提供菌种资源。【方法】通过平板对峙法从玉米根际土壤中筛选对甘薯蔓割病病原菌具有拮抗作用的芽胞杆菌;通过生物学特征和16S rDNA序列分析对拮抗菌株进行分类鉴定;通过盆栽试验进行拮抗菌株对甘薯蔓割病的防效试验,并检测拮抗菌株对甘薯叶片脱落酸(ABA)和赤霉素(GA)含量,超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化物酶(POD)活性及可溶性蛋白含量的影响。【结果】从玉米根际土壤中分离获得1株乳白色且具有拮抗作用的芽胞杆菌,命名为HAAS05,通过16S rDNA鉴定及系统发育进化树比对分析,将HAAS05菌株鉴定为多粘类芽胞杆菌(Paenibacillus polymyxa)。盆栽试验结果显示,HAAS05菌株对甘薯蔓割病有明显的拮抗效果;OD_{600 nm}=0.20和OD_{600 nm}=0.40的HAAS05菌悬液处理第10 d后,甘薯叶片中ABA含量较仅接种病原菌处理(201.94 ng/g)显著降低(P<0.05,下同),分别为52.29和107.10 ng/g,而GA含量较仅接种病原菌处理(7.05 ng/g)显著升高,分别为8.10和10.31 ng/g,甘薯叶片SOD活性和可溶性蛋白含量均较仅接种病原菌处理显著升高,而POD活性变化无明显规律。【结论】多粘类芽胞杆菌HAAS05菌株对甘薯蔓割病有较好的拮抗作用,具有一定的开发应用潜力。     

Effect and Functional Mechanism of the Action of Exogenous Gibberellin on Flowering of Peach

This study was conducted to assess the effect of gibberellin and its possible mechanism of action on peach flower formation. At flower induction, 100 mg L^-1 of gibberellic acid 3 （GA3） was sprayed on the leaves of peach [Prunus persica （L.） Batsch.] cv. Bayuecui. Using anatomy, immunohistochemistry, and semi-quantitation, the in situ distribution of GAs and the expression of the key genes involved in peach flower formation in the apical meristem were studied during flowering differentiation. The results showed that induction of flowering in the Bayuecui peach occurred prior to 10 July in Beijing, China. Flower induction and further differentiation of the peach flower organs were significantly inhibited by leaf-spraying of GA3 at a concentration of 100 mg L^-1 during the induction stage. The flowering rate was only 11.67% after treatment. The distribution of GA1 in the apical meristem varied during the process of flower bud differentiation. From 13 June to 25 July, the GA1 signal from control plants was detected mainly in the vascular bundles at the base of the flower buds. No GA1 signal was detected in the apical meristem. After treatment with GA3, the distribution was similar to that of the control from 13 June to 3 July. On 13 July, a GA1 signal was detected in the apical meristem accompanied by an increase in the GA1 signal in the vascular bundles at the base of the flower buds. The GA1 signal weakened significantly in both the vascular bundles and the apical meristem on 25 July. The expression of the genes PpLEAFY and MADS6 in flower buds could be detected only on 10 October in the GA3-treated plants. The critical period for flower induction of Bayuecui peach in Beijing was in early July, during which time, leaf-spraying with 100 mg L-1 GA3 could effectively inhibit flower induction and further differentiation of the flower buds. GA1 in the gibberellin family was the suppressor for flower induction in peach. Its action was affected by the stage of flower bud differentiation. Expression of the key gen