内蒙古绒山羊CRABP I基因的克隆及表达

【目的】克隆内蒙古绒山羊视黄酸结合蛋白Ⅰ（cellular retinoic acid binding proteinⅠ,CRABPⅠ）基因的cDNA,进行蛋白结构的预测和表达分析,为绒山羊毛和绒形成的分子机理奠定基础。【方法】利用RT-PCR方法克隆内蒙古绒山羊CRABPⅠ基因序列,利用生物信息学方法预测其蛋白结构,采用实时荧光定量PCR探讨该基因在绒山羊4个胎儿日龄皮肤中的表达。【结果】内蒙古绒山羊CRABP I基因cDNA长679 bp（JN936490）,其开放阅读框为414 bp,氨基酸序列与其它物种相比具有较高的序列相似性。CRABP Ⅰ蛋白无明显的信号肽和跨膜区域,不存在N糖基化位点和O糖基化位点;蛋白二级结构主要由α 螺旋、β折叠和少量的转角及无规则卷曲构成。胎儿皮肤中CRABPⅠ基因在 90 d 的表达量明显高于100、120和130 d（P<0.05）。【结论】绒山羊的CRABPⅠ基因cDNA中的开放阅读框（open reading frame,ORF）在不同物种间较为保守,但种属特异性集中表现在第33和123氨基酸残基处,该基因在胎儿期的90 d表达量最大。     

胰岛素样生长因子及其受体mRNAs在绵羊生殖系统中的表达和分布

为检测胰岛素样生长因子（IGFs）及其受体（IGFR）mRNAs在绵羊发情周期早期卵巢、子宫和输卵管中的表达,探讨绵羊胚胎早期发育过程中其发育环境——生殖道中生长因子的表达、分泌及其作用,取绵羊发情周期早期卵巢、子宫和输卵管,经固定、切片、免疫染色,观察IGFs mRNAs的表达和分布情况。同时用RT-PCR技术研究了各组织中IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ、IGF-ⅠR、IGF-ⅡR mRNAs的表达情况。结果表明,IGFs mRNAs在绵羊发情周期早期的卵巢、子宫和输卵管中都有表达,4种因子表达模式相似：在卵巢中,IGFs主要定位于卵泡颗粒细胞,间质细胞亦有少量表达。在输卵管中,上皮细胞免疫染色呈阳性;在子宫中,腺细胞及上皮细胞的阳性信号强于固有层。RT-PCR检测表明IGFs mRNAs在3种组织中均有表达。     

IGF-1毛囊特异表达载体的构建以及转染绒山羊胎儿成纤维细胞的研究

本研究旨在构建绵羊胰岛素样生长因子1(IGF-1)毛囊特异表达载体pCDsR-KI,并转染绒山羊胎儿成纤维细胞,最终获得稳定表达红色荧光并可用于核移植的转基因细胞克隆.通过RT-PCR方法获得IGF-1 cDNA,其与KAP6-1基因启动子片段以及红色荧光蛋白表达元件连接构成IGF-1毛囊特异表达载体pCDsR-KI(大小7.4 kb).以组织块贴附法分离和培养绒山羊胎儿成纤维细胞,外源性表达载体以lipofectamineTM 2000介导转染所培养的第2代成纤维细胞,在DMEM/F12+10%FBS、37℃、5%CO2中培养,并添加G418筛选,获得了表达红色荧光蛋白的细胞克隆.经PCR法鉴定证实外源基因已经整合在细胞基因组中.通过分析转基因体细胞的生长曲线和染色体核型证明转基因细胞的生长状态良好、各项参数趋于正常.为下一步通过体细胞核移植技术获得转基因克隆绒山羊准备了核供体细胞.     

内蒙古白绒山羊的养殖现状调查报告

为了解和分析内蒙古白绒山羊的养殖现状与生产性能，评估近十年来的改良效果及存栏增数与草场承载力之间的平衡，并为制定未来发展对策提供科学依据，笔者于2004年10月-2006年初在内蒙古白绒山羊中心产区鄂尔多斯市、巴彦淖尔市与阿拉善盟进行了内蒙古白绒山羊养殖现状调查。调查结果表明，目前内蒙古中心产区白绒山羊的总存栏数为997．03万只，其中鄂尔多斯市、乌海市存栏数约536．77万只，巴彦淖尔市272．05万只，阿拉善盟188．21万只，总存栏数由1980年的200万只增加约4．99倍，占全区山羊总头数的49.37％，已成为内蒙古畜牧业的支柱（优势）产业。     

内蒙古绒山羊皮肤毛囊差异表达序列标签的筛选及分析

旨在筛选和分析内蒙古绒山羊与毛和绒生长相关的差异基因,本研究采用mRNA差异显示技术(DDRT-PCR)研究内蒙古绒山羊胎儿期不同日龄皮肤中控制初级毛囊和次级毛囊不同分化的差异表达序列标签。结果,共筛选了15条差异表达序列标签(dbEST登录号JK711022-JK711036),其中3条ESTs与毛囊发育有关,5条ES-Ts与次级毛囊和皮脂腺的发育有关。生物信息分析显示,JK711036与甲状腺激素受体相互作用蛋白12(TRIP12)基因有关,其他ESTs功能未知。结果表明,胎儿期初级毛囊和次级毛囊在多种代谢途径上都存在差异表达的基因,这将为进一步研究山羊毛和绒的形成分子机制奠定基础。     

精子受精抗原-1(FA-1) mRNA在绵羊睾丸和附睾中的表达

本研究通过RT-PCR检测了该基因在绵羊睾丸和附睾中的表达情况。首先,提取绵羊睾丸组织、附睾头、体、尾部组织总RNA,以此为模板,反转录合成cDNA,自行设计引物,PCR扩增出462 bp的目的DNA。然后,将目的片断克隆入T载体,通过菌液PCR和重组质粒酶切,鉴定重组质粒中的目的DNA。再经序列分析鉴定目的片断。同时,以β-actin为内参照物,进行RT-PCR半定量分析,比较精子受精抗原(FA-1)在睾丸、附睾头、体、尾组织中的表达量。结果表明,FA-1在绵羊睾丸和附睾中均表达。     

黑毛和牛在内蒙古呼和浩特地区的繁育

黑毛和牛肉质在日本肉牛中占绝对优势，是世界闻名的独特肉牛品种。通过胚移在内蒙古呼和浩特繁育，表现良好，生长发育指标已达到日本国内品种标准。同黑白花奶牛杂交，其杂种经育肥，32月龄体重达624．8kg，屠宰率为56．3％，净肉率为49．9％；高档肉占净肉的11．6％，优质肉占净肉的22．7％，大理石花纹等级为1、2等级牛占76％。肉的品质均高于我国地方良种。     

屠宰母牛卵巢卵母细胞体外受精与发育的研究

将从屠宰母牛卵巢采得的卵母细胞用含有LH或hCG的M199培养24～26小时,然后用经钙离子载体Ionophore A23187诱导获能的牛新鲜或冷冻精子进行授精处理。授精6～7小时后再用含有乳酸钠和EDTA的M199培养至48～60小时后观察受精及受精卵的发育情况。结果表明,卵子的受精率及受精卵的发育率与卵母细胞成熟用培养基、授精用精子(新鲜或冷冻)以及供卵牛的品种均有关系。将用含有hCG的M199培养成熟的卵子,以获能处理过的新鲜精子授精后,其受精率和受精卵子中单精子受精并发育为2～8细胞期胚的比率在蒙古牛为91.4％(265/200)和19.6％(52/265),在黑白花奶牛为69.7％(62/89)和4.8％(3/62)。     

绵羊体外受精卵冷冻解冻后的移植

以含有10％乙二醇的磷酸缓冲液对体外受精的绵羊桑椹胚及囊胚进行防冻和冷冻处理后保存于液氮中。解冻后将胚胎分别以去除防冻剂后移植和连同防冻剂直接移植两种方法,将30枚桑椹胚和19枚囊胚先后以外科手术法移植到28只受体母羊子宫内。结果共有8只受胎,其中4只足月妊娠后产羔4只(♀1,♂3),另外4只分别在移植后2～3个月妊娠中断,其原因尚不清楚。解冻后连同防冻剂直接移植后的受胎率为50％(4/8),明显高于去除防冻剂后移植的结果20％(4/20),(P<0.05)。受体的发情同步化程度不同(-1～+1日)对受胎率无明显影响。