适于SSR分析的不同生长型桃幼叶基因组DNA提取方法

以6种不同生长型桃幼叶为材料,为适应SSR分析要求,对常规CTAB法、改进CTAB法、常规SDS法以及SDS-CTAB结合法4种基因组DNA提取方法的效果进行了比较研究.结果表明:常规CTAB法所提取的DNA呈黏稠状的浅褐色沉淀,难以溶解;常规SDS法和SDS-CTAB结合法提取的桃基因组DNA浓度较低,在品种间差异较大;而改进CTAB法提取DNA完整性较好,D260nm/D280nm值介于1.8 ～2.0,RNA去除干净,其SSR分析(引物CPPCT26)条带清晰,多态性好,表明此方法提取的不同生长型桃幼叶基因组DNA完全适于SSR分析.     

匀强高压静电场对采后绿芦笋嫩茎贮藏品质的影响研究

为研究匀强高压静电场(uniform high voltage electrostatic field,UHVEF)对绿芦笋嫩茎的保鲜效果,以绿芦笋为原料,探讨UHVEF处理对采后绿芦笋嫩茎贮藏品质指标的影响。经200 k V/m和250 k V/m对采后绿芦笋嫩茎进行持续15 d处理,每隔2 d取样,统计分析不同处理下其失重率、呼吸强度、可溶性糖含量和过氧化物酶(POD)活性等指标变化,试验设置对照组。结果表明:与对照组相比,采用适当的UHVEF处理对采后绿芦笋嫩茎进行处理,具有良好的保鲜效果。在不同匀强高压静电场的处理下,绿芦笋嫩茎的失重率、呼吸强度、可溶性糖含量和过氧化物酶活性等各项生理指标均表现出抑制性,场强越大,抑制效果越明显。失重率增长速度明显减缓;呼吸强度明显减弱,呼吸跃变时间推迟了4 d,到达峰值的时间推迟了9 d;可溶性含糖量存在先上升后下降趋势,后熟过程推迟2～4 d,后期下降速率平缓。POD酶活性呈先上升又下降的趋势,活性达到峰值点推迟了2 d。经UHVEF处理对采后绿芦笋失重率、呼吸强度、可溶性糖含量和POD酶活性的影响均差异性显著。研究结果为UHVEF用于采后绿芦笋嫩茎保鲜贮藏提供了理论依据。     

烟草不同组织总RNA的提取方法初探

【研究目的】寻找烟草各个组织总RNA最佳的提取方法。【方法】以烟草K326的根、茎、叶、蕾、花和种子为材料,分别采用试剂盒法、Trizol法和CTAB法提取烟草6个组织总RNA进行对比。【结果】烟草不同组织总RNA提取方法有所不同,试剂盒法和Trizol法只能提取出根、茎、叶、蕾和花的总RNA,而不能提取种子总RNA;CTAB法能提取出6个组织的RNA。3种方法提取的RNA质量好,均能满足RT-PCR以及后续实验的要求。【结论】试剂盒法较Trizol法和CTAB法简单、快捷,适合于烟草除种子以外其余组织总RNA快速提取,CTAB法适合烟草所有组织总RNA提取。     

高压静电场对冬枣贮藏品质的影响

以冬枣(Amygdalus persica L.)为研究对象,研究了20,60,100 k V·m-1不同高压静电场处理40 min对冬枣果实呼吸强度、乙烯释放量、丙二醛含量、维生素C(Vc)含量、果肉硬度、果实水分、腐烂率的影响。结果表明:不同高压静电处理减缓了冬枣的呼吸强度,抑制了乙烯释放量和丙二醛含量,提高了果实硬度、Vc含量,延缓了水分下降速度,降低了果实腐烂率从而延迟冬枣采摘后的衰老过程。在相同贮藏条件下利用100 k V·m-1的高压静电场处理对冬枣的保鲜效果好于其他高压静电场处理。     

高压静电场处理缓解高粱种子快速脱水伤害的生理机制

以收获期的晋杂30号高粱杂交种、恢复系种子为材料,采用4.0 kV/cm、60 min的高压静电场在种子高温(45℃)快速脱水干燥(24 h)前进行预处理,研究高压静电场预处理对种子萌发、早期幼苗生长以及种胚膜透性、保护酶活性、可溶性糖含量等的影响。结果表明,电场预处理下,高粱杂交种和恢复系种子的发芽势、发芽率、发芽指数、活力指数分别比其高温快速脱水处理高55.11%、37.91%、93.52%、175.00%和69.78%、43.15%、78.06%、101.00%;电场预处理使杂交种和恢复系种胚膜透性分别比高温快速脱水处理降低了16.36%和18.37%;电场预处理可诱导种子萌发和早期幼苗生长过程中种胚和幼苗SOD、POD、CAT活性及可溶性糖含量升高,降低种胚和幼苗MDA和超氧阴离子(O_2·-)含量。电场预处理可有效缓解高温快速脱水对种子的伤害。     

岩白菜幼叶总RNA的提取方法研究

为了筛选出提取岩白菜幼叶总RNA的最佳方法,为岩白菜的转录组测序提供技术支撑,本文采用6种试剂盒法提取岩白菜幼叶的总RNA,通过凝胶电泳和BIO-RAD核酸蛋白检测仪检测提取的RNA样品的质量和纯度,并对提取效果进行了分析。结果表明:用Trizol Kit、Trizol A~+Kit、Transzol Up Kit提取的幼叶总RNA没有28S rRNA和18S rRNA条带;用inun PREP Plant RNA Kit提取的RNA具有28S rRNA和18S rRNA条带,但条带模糊、含量低;用Transzol Plant Kit和Easy Pure Plant RNA Kit提取的RNA具有28S rRNA和18S rRNA这2条清晰的条带,但后者提取的总RNA的得率和纯度更高。综合考虑后认为Easy Pure Plant RNA Kit法是快速提取岩白菜幼叶总RNA的最佳方法。     

胀果甘草发芽率测定及总RNA提取初步研究

以胀果甘草(Glycyrrhiza inflata Batalin)种子为试验材料,通过实验室培养出甘草幼苗,利用Trizol试剂法来获取甘草叶片的总RNA,进一步通过琼脂糖凝胶电泳和测定吸光度(D值)以确定RNA浓度及纯度。试验结果表明,甘草种子的萌发率可达85%以上,采用本研究的方法可得到较纯RNA,紫外灯下可以观察到明显的28S、18S、5S的RNA条带,分光光度计测得的D值均为1.85,由此可以看出本实验室条件下培养的甘草萌发率较高,所获取的RNA完整且纯度较高。     

云南栘［木衣］叶片总RNA提取方法的比较与改进

高质量RNA的提取是开展云南栘［木衣］分子生物学研究的前提。采用OMEGA (Plant RNA Kit 50)试剂盒、TIANGEN(TRNzol-A+Reagent)试剂盒、CTAB法、Trizol法、SDS法及其改良法6种方法提取云南栘［木衣］叶片的RNA,并用琼脂糖凝胶电泳、核酸蛋白检测仪及RT-PCR技术比较了6种不同方法提取的总RNA样品的质量。结果表明，2种试剂盒法和trizol法不适合云南栘［木衣］RNA提取，无法得到28S、18SrRNA条带，CTAB法和SDS法虽能得到RNA的3条带，但拖带现象严重，A₂₆₀/A₂₃₀的比值较低，对SDS法进行改进，提高β-巯基乙醇的量，在缓冲液中增加PVP，使用HiBind RNA Mini柱，有效地抑制多酚多糖的污染，得到了较高质量、可用于RT-PCR扩增的云南栘［木衣］的RNA。对其开展分子生物学研究提供技术支撑。     

甜高粱总RNA提取方法的比较研究

以LTR102甜高粱为材料,比较改良TRIzol法、CTAB法和SDS法提取甜高粱总RNA的效果.利用普通琼脂糖凝胶分析3种不同方法所提取的RNA的完整性,并用紫外分光光度计分析RNA的纯度.结果表明:改良TRIzol法能有效去除多糖和蛋白,提取的RNA中28S rRNA亮度约为18S rRNA的2倍,D260 nm/D280 nm值介于1.8～2.0;CTAB法提取的RNA泳道模糊不清,杂质多,有污染现象;SDS法提取的RNA中28S rRNA有缺失现象,降解严重.改良的TRIzol法适合甜高粱总RNA的提取.     

山葡萄总RNA提取方法的比较

以山葡萄成熟果皮及叶片为材料,对改良CTAB法,SDS法和Trizol法3种不同的总RNA提取方法进行了比较。结果表明,SDS法和Trizol法提取的总RNA均有拖带现象,有部分降解,Trizol法提取的总RNA中有DNA的污染;改良CTAB法提取山葡萄叶片和果皮的总RNA带形完整,28SrRNA和18SrRNA的荧光亮度接近2：1,A260／280值为1．8～2．0,该方法提取的总RNA纯度和提取量最高,提取出的总RNA可用于进行RT-PCR、构建cDNA文库等分子生物学的研究。     

番木瓜果皮和种子总RNA提取方法的研究

CTAB法、SDS法和改良的热硼酸法所提取的番木瓜果皮总RNA产量分别是107.8、90.4和70.4μg/g;种子总RNA产量分别是164.0、204.8和111.2μg/g。用TSSE或TE溶液溶解CTAB法中的LiCl过夜沉淀,得到的总RNA完整性好、纯度高,种子总RNA的产量明显提高,达到300μg/g以上。用CTAB法提取的果皮和种子总RNA已成功用于cDNA合成、文库构建和抑制消减杂交(SSH)等后续分子生物学试验。     

油松成熟胚总RNA的提取方法

[目的]对油松成熟胚总RNA的提取方法进行比较,以期得到完整的高质量油松成熟胚RNA。[方法]以油松成熟胚为材料,用SDS法、Trizol法和CTAB法及改良的SDS法对油松成熟胚总RNA进行提取,以紫外分光光度计测OD值,并用琼脂糖凝胶电泳检验提取效果。[结果]改良SDS法提取的RNA产率高,完整性好,A260/A280为1.97,A260/A230为2.08,28 S、18 S、5 S条带清晰且28 S亮度是18 S的2倍。通过RT-PCR检测,ds cDNA片段的弥散带分布范围在0.3～3.0 kb,进一步验证改良的SDS法可获得高质量的RNA,用于后续的分子生物学研究。[结论]改良SDS法成本低,操作简单,提取时间短,RNA质量好,是多酚多糖植物总RNA提取比较有效的方法。     

辣椒叶片RNA提取方法研究

以经过紫外线诱导处理的辣椒叶片为材料,分别用Trizol试剂快速提取法、尿素提取法和酚 SDS提取法提取其总RNA,比较各RNA产率、纯度及电泳图谱等,结果表明,尿素法提取的RNA28S和18S条带较为清晰,还可得到23S和16S带,较少有降解;而另2种方法所获得的RNA纯度较低,降解严重,琼脂糖电泳图谱通常只出现1条带.     

适于cDNA-AFLP的黄瓜幼叶总RNA快速高效提取方法

为了快速高效地提取黄瓜幼叶总RNA,满足于cDNA-AFLP实验的要求。对Trizol试剂提取总RNA的方法进行了改进,所提RNA经琼脂糖电泳检测,其28S、18S、5S 3条带清晰,完整性好,每0.1g幼叶可获得RNA 100~150μg,产率高;经反转录、双链cDNA合成和cDNA-AFLP检测,证实提取的RNA能满足反转录和cDNA-AFLP对RNA质量和数量的要求。     

高压静电场对荞麦幼苗抗旱能力后效性的影响

为了阐明高压静电场处理对荞麦幼苗抗旱能力的影响以及后效性,用电场强度0、3.0、4.0、5.0、6.0kV/cm分别处理荞麦种子15min后置于光照培养箱培养,待幼苗二叶一心期,用不同含量PEG-6000对根系干旱胁迫48h,测定叶片脯氨酸、丙二醛、可溶性糖的含量。结果表明:4.0kV/cm×15min、5.0kV/cm×15min处理条件下能够增加幼苗脯氨酸和可溶性糖含量,同时降低丙二醛含量,增强了幼苗的抗旱能力。电场生物学效应具有一定的后效性,不同电场处理下的荞麦种子其幼苗抗旱能力不同,适宜的电场处理条件是4.0kV/cm×15min、5.0kV/cm×15min。     

高压静电场对老化水稻种子活力的影响

用高压静电场处理吸水萌动的老化水稻种子,研究了高压静电场对种子活力的影响。结果表明,老化水稻种子经高压静电场处理后,发芽率、发芽指数、幼苗干重、活力指数比对照显著增加;高压静电场处理还显著提高了幼苗根系活力、叶绿素含量、淀粉酶活性;经高压静电场处理后种子浸出液电导率比对照组显著下降。而且高压静电场处理55 min幼苗淀粉酶活性、种子浸出液电导率、叶绿素含量都优于处理30 min。可见适宜的高压静电场处理可以提高老化水稻种子的活力,促进种子的生长发育。     

高压静电场对老化水稻种子幼苗根系的影响

将吸胀萌动后的老化水稻种子随机分为~5个处理组,分别用250,300,350,400,450kV/m的高压静电场处理55min,然后30℃浸种催芽24h,另外设CK1(未老化水稻种子)和CK2(老化水稻种子)2个对照,研究高压静电场对老化水稻种子发芽第4天幼苗根系生长发育的影响。结果表明,适宜的高压静电场处理组幼苗的根系活力、可溶性蛋白质含量均极显著高于对照组(P<0.01);与其他处理组相比,,,处理组蛋白质电泳条带数及条带颜色加深,说明这3个处理组可能影响了老化水稻种子根系中部分蛋白质的表达;与对照相比,~高压静电场处理组有丝分裂指数极显著增加,但未见染色体畸变。可见高压静电场处理不仅促进了老化水稻种子幼苗根系的分裂生长,同时还为其生长提供了充足的营养。     

不同方法提取银杏叶片总RNA及RT-PCR

以银杏叶片为材料,分别采用CTAB法、SDS法和TRIzol法提取银杏叶片总RNA.结果表明:CTAB法、SDS法所提取的RNA经电泳检测,28S rRNA、18S rRNA和5S rRNA 3务带清晰,RT-PCR得到的条带与目的片断大小一致,说明所提取的RNA纯度高、质量好;TRIzol法所得到的RNA降解严重,没有得到完整的电泳条带.CTAB法和SDS法适于富含多糖和多酚等物质的植物总RNA提取.     

适于葡萄不同组织RNA提取方法的筛选

比较了CTAB法、改良CTAB法、Trizol法、SDS-苯酚法和改良SDS法5种RNA提取方法提取葡萄叶片、花序、茎尖、卷须和果实组织RNA的效果。并进一步从总RNA中分离出了高质量的低分子量RNA(LMWRNA),建立了葡萄LMWRNA提取的方法。改进后的改良SDS法能够克服果实中RNA提取难度大的问题,能够从果实中提取到质量和产量都很高的RNA。结果表明,改良SDS法适用于葡萄叶片、花序、茎尖、卷须组织中总RNA的提取,改进的改良SDS法是从果实中提得LMWRNA较佳选择。在总RNA提取的基础上建立的葡萄LMWRNA提取方法能够达到研究的要求。     

草莓不同组织RNA提取方法的改良研究

探讨一种适于草莓不同组织的RNA提取的改良方法。通过增加裂解液震荡强度、离心柱多次吸附、增加去蛋白液温育次数及漂洗次数等步骤对EASYspin RNA提取总RNA操作方法进行改进。结果表明,改良方法提取的草莓根、茎、叶、果实、花中的总RNA,电泳检测都出现清晰的28S和18S两条明显的条带,表明总RNA完整性较好;紫外分光计分析其OD260/OD280值在1.88至2.06之间,OD260/OD230值均大于2.0,RNA浓度含量为310~500μg/mL,表明提取的总RNA纯度好、含量高;基于RNA中mRNA反转录的RT-PCR扩增Actin基因分析结果表明,改良方法提取的草莓不同组织的总RNA质量高。总之,经过电泳、紫外、反转录分析结果证实,改良EASYspin适于草莓果实等不同组织总RNA的提取,是草莓类似果树种类总RNA提取的首选借鉴方法。