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1.
蜘蛛毒素(ω-ACTX-Hv2a)是最理想研制成为无公害杀虫剂的昆虫毒素肽之一,但由于其cDNA至今还未被克隆出来;为了进行后续研究工作,笔者选用人工合成的办法进行基因克隆等工作.化学合成4对(Al-、Al ,A2-、A2 ,H3-、H3 和H4-、H4 )单链寡核苷酸片段,然后,将片段Al-、Al 、A2-、A2 和片段H3-、H3 、H4-、H4 分别混合后退火连接,形成A和H片段,再将A和H片段在连接酶的作用下,合成全基因Hv2a.经测序可知,合成的Hv2a有5个碱基缺失;利用"循环延伸"的方法,经2次定点突变后,通过克隆测序证明Hv2a全基因序列完全正确,说明这种定点突变的方法是可行的.  相似文献   
2.
从巴西橡胶树Hevea brasiliensis差减cDNA文库中筛选到一个与SNARE蛋白同源性较高的基因片段,根据其序列信息设计特异引物, 采用cDNA末端快速扩增技术RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)进行差异片段的5’和3’端的扩增,获得了长度为1 070 bp的全长cDNA克隆R295。序列分析表明该基因包含600 bp的开放阅读框,5’-UTR为93 bp, 3’-UTR为377 bp,编码199个氨基酸。该基因编码的蛋白具有一个SNARE coiled-coil保守区、一个典型的VAMP基元及一个羧基端的CAAX基元。同源分析表明该蛋白属于一类特殊的longins蛋白。RT-PCR检测表明它在胶乳中特异表达,在叶中没有表达。  相似文献   
3.
本文从巴西橡胶树(Hevea brasiliensis)差减cDNA文库中筛选到一个与磷脂酰肌醇转移蛋白(phos-phatidylinositol transfer protein)同源性较高的基因片段,并根据该基因片段序列信息,设计特异性引物,采用cDNA末端快速扩增技术RACE(rapid amplification of cDNA ends)进行差异片段的5'和3'端的扩增,并获得长度为1081bp的全长cDNA克隆R291(GenBank登陆号:AY589690)。序列分析表明,该基因包含702bp的开放阅读框,编码234个氨基酸,推测其蛋白质的分子量为26.8kD,等电点为6.51,有一个的跨膜螺旋区(氨基酸位点为83~103)。R291基因含有一个脂质结合保守区(Sec14p-like lipid-binding domain),具有CRAL-TRIO脂质结合结构域,推测该基因是一个磷脂酰肌醇转移蛋白基因。该基因的克隆将为橡胶树磷脂酰肌醇代谢的研究奠定了基础,将有助于进一步了解磷脂酰肌醇代谢与胶乳再生之间的关系。  相似文献   
4.
用抑制消减杂交法分离巴西橡胶树胶乳特异表达基因   总被引:5,自引:0,他引:5  
采用巴西橡胶树常割树胶乳的Poly(A )RNA为Tester,叶片Poly(A )RNA为Driver,通过抑制消减杂交法(suppressive subtractive hybridization,SSH)构建了一个胶乳特异表达基因差减文库,通过菌落PCR及反式Northern Dot-Blot筛选鉴定阳性差异片段,获得79个胶乳特异表达阳性克隆,部分阳性克隆还通过Northern Blot杂交及RT-PCR进一步验证.随机挑选部分阳性克隆序列比较分析,结果表明有部分克隆与巴西橡胶树中已知的基因相同,而多数克隆在巴西橡胶树中是新发现,它们与橡胶生物合成、物质代谢运输、信号传导和形态建成等相关.  相似文献   
5.
提取春季海南五指山美洲商陆叶片总RNA,利用RT-PCR技术获得c DNA,再根据Genbank上公布的PAP-Ⅰ基因序列设计引物扩增PAP-Ⅰ基因,并连接到p~(ET)-30a载体上进行表达,表达的产物以不溶的包涵体形式存在,经过变性、镍柱亲和层析纯化,纯化后的重组蛋白经过Western Blot验证表明该基因得到了正确表达,利用柱上循环复性后的重组PAP-Ⅰ蛋白经麦胚提取物转录/翻译偶联系统验证具有抑制蛋白质合成的活性。  相似文献   
6.
SNAREs(soluble-N-ethyl-maleimide-sensitive factor attachment protein receptor,可溶性N-乙基马来亚酰胺敏感因子附着蛋白受体)参与囊泡运输,在植物中具有非常广泛和重要的生物学功能。我们从橡胶树胶乳消减cDNA文库中筛选获得橡胶树的SNARE基因,命名为hbYKt。为进一步研究该基因功能,构建了以绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)为报告基因的融合植物表达栽体pCAMBIAl304h-bYKt,通过农杆菌介导法分别转化洋葱表皮细胞和烟草表皮细胞。荧光显微镜检测结果表明hbYKt定位在洋葱表皮细胞和烟草表皮细胞的细胞质膜中。  相似文献   
7.
昆虫杆状病毒杀虫剂研究与应用综述   总被引:1,自引:1,他引:0  
综述了对野生型昆虫杆状病毒和重组昆虫杆状病毒杀虫剂的研究进展,以及我国昆虫杆状病毒杀虫剂的应用研究现状。  相似文献   
8.
邓柳红  罗明武 《安徽农业科学》2009,37(32):15711-15712
[目的]诱导橡胶树茎段腋芽分化增殖,为橡胶树栽培提供大量优良的新型无性系种植材料。[方法]以橡胶树优良单株带芽茎段作外植体,以MS为基本培养基,研究不同激素配比的培养基对橡胶树腋芽分化增殖的影响。[结果]以多茵灵2.0g/L+青霉素400.0mg/L预处理+O.1%HgCl2表面消毒,污染率降至29%;以MS+6一BA2.0mg/L为启动培养基,腋芽萌动率达85%。以MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.1mg/L为生长增殖培养基,萌动腋芽生长发育正常。[结论]多菌灵和抗生素预处理,可以明显降低外植体污染率和死亡率。6-BA对腋芽的萌动和生长起重要作用,而添加2,4一D则抑制腋芽萌发及生长。  相似文献   
9.
包涵体蛋白的复性研究进展   总被引:1,自引:0,他引:1  
介绍了包涵体的洗涤、变性溶解和传统的复性方法,详细阐述了包涵体蛋白的层析复性方法以及复性过程中的添加剂效果。  相似文献   
10.
椰心叶甲是近年来传入我国的危险性有害生物。1994年,我国内陆将椰心叶甲列为禁止入境的二类植物检疫危险性害虫。目前椰心叶甲在我国海南省、广东省、台湾省和香港地区危害严重并有蔓延趋势,严重危害了椰子、槟榔等棕榈科植物。针对椰心叶甲的危害特征,在实际防治应用中,化学防治,物理防治等方法不能起到很好的效果,生物防治是比较重要的防治方法。本文综述了对于椰心叶甲生物防治常用的几种防治方法:释放寄生蜂、病源微生物和生物农药等。椰心叶甲的生物学防治措施,关键是开发新的防治措施和提高现有方法的防治技术,达到持续有效控制。  相似文献   
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