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蜘蛛毒素(ω-ACTX-Hv2a)是最理想研制成为无公害杀虫剂的昆虫毒素肽之一,但由于其cDNA至今还未被克隆出来;为了进行后续研究工作,笔者选用人工合成的办法进行基因克隆等工作.化学合成4对(Al-、Al ,A2-、A2 ,H3-、H3 和H4-、H4 )单链寡核苷酸片段,然后,将片段Al-、Al 、A2-、A2 和片段H3-、H3 、H4-、H4 分别混合后退火连接,形成A和H片段,再将A和H片段在连接酶的作用下,合成全基因Hv2a.经测序可知,合成的Hv2a有5个碱基缺失;利用"循环延伸"的方法,经2次定点突变后,通过克隆测序证明Hv2a全基因序列完全正确,说明这种定点突变的方法是可行的. 相似文献
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从巴西橡胶树Hevea brasiliensis差减cDNA文库中筛选到一个与SNARE蛋白同源性较高的基因片段,根据其序列信息设计特异引物, 采用cDNA末端快速扩增技术RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)进行差异片段的5’和3’端的扩增,获得了长度为1 070 bp的全长cDNA克隆R295。序列分析表明该基因包含600 bp的开放阅读框,5’-UTR为93 bp, 3’-UTR为377 bp,编码199个氨基酸。该基因编码的蛋白具有一个SNARE coiled-coil保守区、一个典型的VAMP基元及一个羧基端的CAAX基元。同源分析表明该蛋白属于一类特殊的longins蛋白。RT-PCR检测表明它在胶乳中特异表达,在叶中没有表达。 相似文献
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本文从巴西橡胶树(Hevea brasiliensis)差减cDNA文库中筛选到一个与磷脂酰肌醇转移蛋白(phos-phatidylinositol transfer protein)同源性较高的基因片段,并根据该基因片段序列信息,设计特异性引物,采用cDNA末端快速扩增技术RACE(rapid amplification of cDNA ends)进行差异片段的5'和3'端的扩增,并获得长度为1081bp的全长cDNA克隆R291(GenBank登陆号:AY589690)。序列分析表明,该基因包含702bp的开放阅读框,编码234个氨基酸,推测其蛋白质的分子量为26.8kD,等电点为6.51,有一个的跨膜螺旋区(氨基酸位点为83~103)。R291基因含有一个脂质结合保守区(Sec14p-like lipid-binding domain),具有CRAL-TRIO脂质结合结构域,推测该基因是一个磷脂酰肌醇转移蛋白基因。该基因的克隆将为橡胶树磷脂酰肌醇代谢的研究奠定了基础,将有助于进一步了解磷脂酰肌醇代谢与胶乳再生之间的关系。 相似文献
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用抑制消减杂交法分离巴西橡胶树胶乳特异表达基因 总被引:5,自引:0,他引:5
采用巴西橡胶树常割树胶乳的Poly(A )RNA为Tester,叶片Poly(A )RNA为Driver,通过抑制消减杂交法(suppressive subtractive hybridization,SSH)构建了一个胶乳特异表达基因差减文库,通过菌落PCR及反式Northern Dot-Blot筛选鉴定阳性差异片段,获得79个胶乳特异表达阳性克隆,部分阳性克隆还通过Northern Blot杂交及RT-PCR进一步验证.随机挑选部分阳性克隆序列比较分析,结果表明有部分克隆与巴西橡胶树中已知的基因相同,而多数克隆在巴西橡胶树中是新发现,它们与橡胶生物合成、物质代谢运输、信号传导和形态建成等相关. 相似文献
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SNAREs(soluble-N-ethyl-maleimide-sensitive factor attachment protein receptor,可溶性N-乙基马来亚酰胺敏感因子附着蛋白受体)参与囊泡运输,在植物中具有非常广泛和重要的生物学功能。我们从橡胶树胶乳消减cDNA文库中筛选获得橡胶树的SNARE基因,命名为hbYKt。为进一步研究该基因功能,构建了以绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)为报告基因的融合植物表达栽体pCAMBIAl304h-bYKt,通过农杆菌介导法分别转化洋葱表皮细胞和烟草表皮细胞。荧光显微镜检测结果表明hbYKt定位在洋葱表皮细胞和烟草表皮细胞的细胞质膜中。 相似文献
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[目的]诱导橡胶树茎段腋芽分化增殖,为橡胶树栽培提供大量优良的新型无性系种植材料。[方法]以橡胶树优良单株带芽茎段作外植体,以MS为基本培养基,研究不同激素配比的培养基对橡胶树腋芽分化增殖的影响。[结果]以多茵灵2.0g/L+青霉素400.0mg/L预处理+O.1%HgCl2表面消毒,污染率降至29%;以MS+6一BA2.0mg/L为启动培养基,腋芽萌动率达85%。以MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.1mg/L为生长增殖培养基,萌动腋芽生长发育正常。[结论]多菌灵和抗生素预处理,可以明显降低外植体污染率和死亡率。6-BA对腋芽的萌动和生长起重要作用,而添加2,4一D则抑制腋芽萌发及生长。 相似文献
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椰心叶甲是近年来传入我国的危险性有害生物。1994年,我国内陆将椰心叶甲列为禁止入境的二类植物检疫危险性害虫。目前椰心叶甲在我国海南省、广东省、台湾省和香港地区危害严重并有蔓延趋势,严重危害了椰子、槟榔等棕榈科植物。针对椰心叶甲的危害特征,在实际防治应用中,化学防治,物理防治等方法不能起到很好的效果,生物防治是比较重要的防治方法。本文综述了对于椰心叶甲生物防治常用的几种防治方法:释放寄生蜂、病源微生物和生物农药等。椰心叶甲的生物学防治措施,关键是开发新的防治措施和提高现有方法的防治技术,达到持续有效控制。 相似文献