柑橘原生质体总RNA提取方法研究

以悬浮培养的椪柑愈伤组织为材料,通过酶解分离原生质体;采用Trizol法、改良Trizol法、改良CTAB法和TaKaRa RNA提取试剂盒等4种方法提取原生质体的总RNA,通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度计和RT-PCR检测其质量和产量。结果表明:4种方法皆能提取出总RNA,其中Trizol法提取的总RNA有降解现象,其他方法所提取的总RNA完整性较好,且D260nm/D280nm和D260nm/D230nm值都在正常范围内;在产量方面,改良Trizol法提取的总RNA产量最高,106个原生质体达43.06μg,分别是改良CTAB法和TaKaRa RNA提取试剂盒的7.74和4.31倍;RT-PCR验证表明,以改良Trizol法提取的RNA为模板所扩增出的目的条带最清晰明亮,且与目的片段大小一致。因此,改良Trizol法是柑橘原生质体总RNA提取的最佳方法。     

一种高质量天门冬基因组DNA提取方法

针对天门冬[Asparagus cochinchinensis(Lour.)Merr.]成熟叶片富含多糖、多酚、蛋白质及其他次生代谢物质的特点,采用改良CTAB法对其基因组总DNA进行提取,并对DNA进行质量检测。结果表明,改良CTAB法可从天门冬成熟叶片中获得纯度高、完整性好的总DNA,其OD260 nm/OD280 nm为1.86,OD260 nm/OD230 nm为2.36,浓度为390μg/mL,产率达11.7μg/g,多糖、多酚和RNA杂质被去除干净,无降解现象,说明该方法提取的天门冬基因组总DNA质量较高。     

盐肤木叶片总RNA提取方法的比较研究

比较了Trizol法、异硫氰酸胍法、CTAB法、SDS法以及改良CTAB法和改良SDS法等方法提取盐肤木叶片总RNA,琼脂糖电泳和紫外检测结果表明:改良SDS法提取的盐肤木总RNA没有降解,28S和18SrRNA条带清晰,D260nm/D280nm和D260nm/D230nm分别为2.05和2.12,虽然其产量只有59.87μg/g,但是综合判断改良SDS法是适宜盐肤木总RNA提取的一种有效方法.     

菊花叶片总RNA提取方法的比较研究

以菊花C008的叶片为试材,分别采用CTAB法、Trizol法、改良Trizol法和试剂盒法等进行总RNA提取试验,并对提取质量进行分析比较。结果表明:CTAB法提取的总RNA存在DNA污染。Trizol法提取的总RNA条带复杂,有蛋白等杂质污染。改良Trizol法提取的总RNA条带清晰,但RNA存在降解。试剂盒法提取的总RNA条带清晰,纯度更高,D_(260nm)/D_(280nm)为1.889,浓度为144.000μg/m L,是适于菊花叶片总RNA提取的简单、高效的方法。     

发菜总RNA提取方法的比较与优化

发菜是一种具有丰富胶质鞘、色素、多糖的陆生蓝藻。采用Omega RNA提取试剂盒、Trizol RNA提取法、天根试剂盒及优化后的Omega RNA提取试剂盒、Trizol法、天根试剂盒法从发菜藻体中提取RNA,并用核酸浓度测定仪和琼脂糖凝胶电泳检测提取的总RNA质量。结果表明,优化前后的Trizol法均无法提取到发菜总RNA;利用Omega试剂盒获得发菜总RNA已降解;利用天根试剂盒可获得发菜总RNA,进一步改进和优化天根试剂盒的提取程序,获得的发菜总RNA 23S、16S条带清晰,D260 nm/D280 nm、D260 nm/D230 nm分别为2.06、2.08。研究结果为深入开展发菜转录组研究奠定了基础。     

利用改良CTAB法提取卷丹百合鳞叶基因组DNA

为了获得高质量卷丹百合鳞叶基因组DNA,在传统CTAB法的基础上进行了改良和优化,筛选出较理想的DNA提取方法.结果表明:用改良CTAB法提取的卷丹百合鳞叶基因组DNA电泳条带清晰,无降解现象,D260 nm/D280 nm为1.6 ～1.9,用于ISSR-PCR扩增时其稳定性和可重复性都很好,说明DNA纯度和产率完全满足PCR扩增分析的要求.     

一种果梅休眠枝韧皮部DNA提取方法

以5个果梅品种的休眠枝韧皮部为材料,采用改良CTAB法提取其基因组总DNA,并与其相应幼叶的DNA提取效果进行比较.结果表明:该方法从5个果梅品种的休眠枝韧皮部中均能提取出基因组总DNA,且DNA具有较高的纯度和完整性,5个品种的D260nm/D280,nm比值为1.8～2.0,无降解现象,RNA去除干净,能被限制性内...     

三色堇花瓣总RNA 3种提取方法的比较

分别采用TransZol plant法、改良Trizol法和改良CTAB法提取三色堇花瓣的总RNA,并用琼脂糖凝胶电泳和紫外光谱对其提取效果进行检测.结果表明,TransZol plant法提取的总RNA浓度低,且杂质较多;改良Trizol法和改良CTAB法提取的总RNA纯度较高.3种总RNA提取方法中,以改良Trizol法提取的总RNA浓度和纯度最高,D260nm/D280nm在1.83 ～2.03之间.以改良Trizol法提取的总RNA反转录合成的cDNA为模板,能扩增出预期长度的基因片段,说明改良Trizol法提取的总RNA质量高,可用于后续的分子生物学试验.     

5种提取三七基因组DNA方法的比较

用高盐低pH值法、尿素法、CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)法、SDS(十二烷基磺酸钠)法、PVP(聚乙烯吡咯烷酮)法提取一年生三七叶的基因组DNA,用紫外分光光度法测定提取的DNA浓度,用琼脂糖凝胶电泳法测定提取的DNA质量。结果表明:用CTAB法提取的基因组DNA含量、得率最高,分别为41.434 3~43.233 6μg/mL、114.829 5~127.282 4μg/g,且D260 nm/D280 nm均在标准值范围内,D260 nm/D230 nm小于1.9,有RNA污染;SDS法、PVP法、尿素法也可以提取基因组DNA,但含量较低;高盐低pH值法提取的DNA浓度最低,电泳图基本看不到明显条带。将这5种方法进行对比,最终确定CTAB法为三七基因组DNA的最佳提取方法。     

陈山红心杉基因组DNA提取方法的比较与分析

采用尿素法、柠檬酸钠法、改良的CTAB法和SDS法4种方法提取陈山红心杉基因组DNA,并对提取效果进行比较和分析。结果表明,改良的CTAB法较适合陈山红心杉基因组DNA提取,其提取的DNA纯度高、质量好,具有典型的天然DNA分子的标准紫外吸收光谱特点,A₂₆₀/A₂₈₀比值在1.8左右,且凝胶检测条带整齐清晰,杂质少、无明显降解。而尿素法和柠檬酸钠法难以提取基因组DNA,SDS法因提取的DNA有蛋白质、多糖等杂质污染均不太适用陈山红心杉基因组DNA提取。酶切分析也证明,改良的CTAB法提取的DNA适用于进行后续分子生物学分析。采用改良的CTAB法能够提取得到陈山红心杉幼叶、老叶、嫩芽和幼茎的基因组DNA产率不同,分别为158.4μg/g、129.6μg/g、177.6μg/g和98.40μg/g。考虑到幼叶样品的采集要比嫩芽方便,因此,可以直接采用幼叶进行陈山红心杉基因组DNA提取。     

草坪植物RNA提取方法的比较研究

用CTAB法、SDS法、快速SDS法、异硫氰酸胍法、Tris-硼酸法和Trizol一步法等6种方法．分别从草坪植物草地早熟禾（Poapratensis L．）、高羊茅（Festuca arundinacea Schreb．）以及马蹄金（Dichondra repens Forst．）叶片中提取总RNA．并比较各种方法提取RNA的质量。结果表明，由异硫氰酸胍法、SDS法和Tris-硼酸法3种方法获得的RNA纯度较低，存在降解和弥散现象，或混杂的DNA、蛋白质较多，效果均不理想；而用CTAB法、快速SDS法和Trizol试剂盒提取的RNA很少有降解．所得的28SrRNA和18SrRNA条带十分清晰．且D260／D280在1．871至2．021之间。快速SDS法是一种从草坪植物中有效提取高质量RNA的方法．在完整性、纯度、产率上均优于其他几种方法。     

番茄果实RNA提取方法比较

从富含多糖、多酚的番茄果实中提取高质量的总RNA,对进行下一步分子生物学研究至关重要。采用CTAB-LiCl法和Trizol法分别对番茄果实的总RNA进行提取和分析。结果表明,CTAB-LiCl法提取的总RNA产量低,而且有基因组DNA的污染;Trizol方法提取的RNA产量相对较高,很少有基因组DNA污染。     

鹅掌楸属植物总RNA提取方法的比较与分析

以中国鹅掌楸、北美鹅掌楸、杂种鹅掌楸的幼芽为材料,利用Trizol、CTAB、SDS和异硫氰酸胍法提取鹅掌楸植物总RNA,结果表明,(1)用Trizol法提取的中国鹅掌楸、北美鹅掌楸、杂种鹅掌楸的RNA具有28S、18S、5S rRNA 3条较清晰的条带,很少有降解,其完整性很好;(2)用Trizol法获得的3种鹅掌楸RNAD260/280值为1.724-1.801,D260/230值为2.154-2.341,说明其纯度也很好;(3)比较4种方法对提取鹅掌楸植物总RNA的得率发现,用Trizol法提取的RNA得率为219.2-256.7μg.g-1,是其它2种方法的1-9倍。因此,Trizol法可获得较高质量与产量的鹅掌楸植物总RNA,可满足下一步的研究。     

美洲南瓜种皮RNA提取方法的比较

为探索提取高质量RNA的方法,采用改良CTAB法、SDS法、异硫酸氰胍法和Trizol法从美洲南瓜种皮中提取总RNA.结果表明:改良CTAB法提取的RNA中28 S rRNA和18 S rRNA 2条带清晰,且28 S rRNA在亮度约为18 S rRNA的2倍,两条带之间无弥散现象;OD260/OD280值为1.996 5,OD260/OD230为2.235 7,RNA产率为161 μg/g.异硫酸氰胍法提取的总RNA纯度较高,但产量较低;SDS法和Trizol法提取的总RNA产量较低,且纯度不高.改良的CTAB法从种皮中提取的RNA质量好、产率高、完整性强,是从富含次生代谢物质的种皮中提取高质量总RNA的有效方法.     

黄瓜白粉菌基因组DNA 提取方法比较

以黄瓜白粉病菌为试验材料,比较分析了改良CTAB法、SDS法和真菌试剂盒法对黄瓜白粉病菌基因组DNA提取的效果。结果表明,CTAB法提取的黄瓜白粉菌基因组DNA在纯度(R=A_(260 nm)/A_(280 nm))和产量上均优于SDS法和真菌试剂盒法,且杂质少。CTAB法提取的黄瓜白粉菌基因组DNA产率为204.3μg/g,而SDS法和真菌试剂盒法分别为147.7、117.7μg/g,且方法产率之间差异极显著。采用CTAB法提取的DNA纯度较高,为1.969 6;SDS法和真菌试剂盒法提取的DND纯度较低,分别为1.832 2和1.507 9。     

不同方法提取吴茱萸叶片基因组DNA和RNA的比较

分别研究对比了3种不同方法提取吴茱萸叶片基因组DNA和RNA的质量,以确定适合吴茱萸叶片基因组DNA和RNA的提取方法。采用紫外分光光度法和普通电泳检测法比较了常规CTAB法、SDS法和改良CTAB法提取吴茱萸叶片基因组DNA的效果;采用紫外分光光度法和非变性电泳检测法比较了酚-SDS法、Trizol法和改良异硫氰酸胍法提取吴茱萸叶片RNA的效果。结果表明,分别采用不同方法提取的吴茱萸叶片基因组DNA和RNA的质量差异较大。常规CTAB法和SDS法无法提取出高质量的吴茱萸叶片基因组DNA,而改良CTAB法提取效果较好;酚-SDS法和Trizol法不适合高质量吴茱萸叶片RNA的提取,而改良异硫氰酸胍法的提取效果良好。     

一种适合MSAP分析谷物干种子的DNA提取方法

甲基化敏感扩增多态性(MSAP)是DNA甲基化的主要研究技术,获得高质量的DNA是MSAP分析的基础。针对玉米Zea mays(L.)等干种子富含多糖、蛋白质且与核酸结合紧密等特点,采用改良的CTAB-SDS法对其基因组总DNA进行提取,对DNA进行质量检测,使用限制性内切酶Eo RI和Hpa II酶切,进行MSAP分析。结果表明,改良CTAB法可从玉米等干种子中获得纯度高、完整性好的总DNA,其OD260 nm/OD280 nm处于1.86,OD260nm/OD230大于2.00,产率达1.8μg/mg,多糖、蛋白质和RNA等杂质被去除干净,无降解现象,所提取的DNA可被等限制性内切酶完全双酶切,进行MSAP分析得到大量清晰稳定的多态性条带。结果表明改进的CTAB-SDS法更适合于干玉米种子高质量总DNA的提取。     

适合于全长cDNA文库构建的猪苓菌核及菌丝体总RNA提取方法比较

[目的]筛选出适合于c DNA文库构建的猪苓菌核及菌丝体总RNA的提取方法。[方法]采用Trizol改良法和EASY Spin植物快速提取试剂盒法(简称试剂盒法)对猪苓菌丝及菌核的总RNA进行提取。[结果]经紫外分光光度计对所得总RNA的均一性及1%琼脂糖凝胶电泳对所得总RNA的完整性检测后发现,2种方法均可提出完整的总RNA,试剂盒法相较于Trizol改良法其所提取的总RNA质量和纯度都较好,但Trizol改良法所提取的总RNA产率比较高。[结论]LD-PCR成功合成了猪苓菌核和菌丝体的c DNA产物,呈弥散状分布在1 0005 000 bp和7502 500 bp,满足c DNA建库的要求。     

枣叶绿体基因组DNA提取方法研究

提取高质量的叶绿体基因组DNA是叶绿体基因组测序分析的重要环节。研究以冬枣、晋枣成熟叶片为材料,采用高盐-低pH法和改良的高盐-低pH法比较研究枣叶绿体分离和叶绿体DNA(cpDNA)提取。结果表明,高盐-低pH法提取的cpDNA,其OD260nm/OD280nm值均为1.28,质量低,不能满足后续测序要求;改良高盐-低pH法提取的cpDNA产量明显得到提高,且cpDNA结构完整、质量高、纯度好,OD260nm/OD280nm值介于1.8~2.0,无降解现象,RNA消化完全,能满足后续测序要求。     

人心果DNA提取方法比较

采用SDS法、CTAB法及其改进的各种方法提取人心果基因组DNA,并对提取的DNA进行质量比较。结果表明:改良CTAB方法二提取的DNA产率高,无明显降解,杂质少,OD260/OD280接近1.80,是有效提取人心果基因组DNA的方法。