雷公藤叶片基因组DNA不同提取方法比较

[目的]比较雷公藤叶片中基因组DNA的提取方法。[方法]采用常规CTAB法、改良CTAB法、常规SDS法、高盐低pH值法和一步法分别提取雷公藤叶片基因组DNA,利用琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度法测定样品OD260与OD280的比值以及RAPD扩增结果,判断所得DNA样品的纯度,并根据OD260值计算不同提取方法的DNA得率。[结果]改良CTAB法提取效果最佳,所提DNA的平均得率为219.3μg/g,OD260/OD280比值在1.869～1.903,用于RAPD-PCR均有较好的扩增结果。[结论]改良CTAB法是雷公藤叶片基因组DNA提取的最佳方法。     

风信子DNA不同提取方法的效果比较

采用简易CTAB法、改良CTAB法、SDS-CTAB法、高盐法和CTAB-硅珠法等5种方法对风信子花蕾、叶片和鳞片基因组DNA进行提取.比较DNA纯度、电泳、得率等指标,结果表明:CTAB-硅珠法没有获得DNA,其他方法均可提出DNA;在纯度方面,简易CTAB法＞SDS-CTAB法＞改良CTAB法＞高盐法;在得率方面,简易CTAB法＞改良CTAB法＞高盐法＞SDS-CTAB法.简易CTAB法提取的DNA纯度较高,OD260/OD280为2.01,OD260/OD230为2.33,浓度为406.8ng·μL-1,得率为175.95ng· μL-1.花蕾、叶片适合风信子基因组DNA的提取.     

保康野生蜡梅花与叶基因组DNA提取方法的研究

[目的]证实从蜡梅花基因组提取DNA等同于从叶基因组提取DNA。[方法]采用CTAB法,对保康野生蜡梅花与叶基因组进行遗传多样性研究。[结果]在用CTAB法提取DNA时,65℃水浴振荡并二次抽提后花基因组DNA在浓度和OD260/OD280上都与叶基因组DNA达到相近的水平。[结论]从性状表现更显著的蜡梅花基因组提取DNA进行遗传性分析能达到叶基因组的水平。     

四倍体菘蓝基因组DNA提取方法的比较

[目的]探讨四倍体菘蓝组培苗高质量DNA的提取方法。[方法]分别采用CTAB法1、CTAB法2、SDS法1、SDS法2和碱裂解法对四倍体菘蓝组培苗DNA进行提取试验,通过紫外分光光度法和琼脂糖凝胶电泳,比较了5种DNA提取方法对四倍体菘蓝组培苗的提取效果。[结果]CTAB法2提取DNA的OD260/OD230值为2.311,OD260/OD280值为1.774,DNA纯度最大,浓度最大,提取率最高,PCR扩增条带清晰,重复性好,所得DNA的质量最好。[结论]CTAB法2是提取四倍体菘蓝组培苗基因组DNA最有效的方法。     

川续断基因组DNA的提取研究

川续断叶片中很有较多的蛋白质、多糖、酚类以及其他一些次生代谢物,采用传统的CTAB法很难得到高质量的DNA。试验以川续断叶片为材料,提出一种改良的CTAB法提取叶片基因组DNA,对提取的基因组DNA进行琼脂糖电泳检测及紫外分光光度计分析。利用中药材条形码ITS2序列的引物对提取的基因组DNA进行PCR验证。结果表明,改良的CTAB法得到的DNA质量较好,其OD260/OD280的值介于1.8~2.0之间,ITS2序列的引物PCR扩增成功率达到100%。改良的CTAB法为较为理想的川续断基因组DNA提取方法,获得的总DNA能够满足下游的PCR试验要求。     

羌活基因组DNA提取方法

[目的]探索一种用于RAPD分析的羌活基因组DNA提取方法。[方法]分别采取CTAB法S、DS法和改良的CTAB法提取羌活基因组DNA,通过紫外分光光度法、琼脂糖凝胶电泳和RAPD分析对提取的DNA进行检测。[结果]3种方法均能有效地从羌活中获得较高产量的DNA,以改良的CTAB法所得的DNA纯度最高,此法提取的羌活基因组DNAOD260/OD280为1.8~2.0,DNA干重得率约为0.235μg/mg。[结论]改良的CTAB法更适于羌活基因组DNA的提取,可以完全满足RAPD扩增的需要。     

观光木基因组DNA提取方法的研究

观光木(Tsoongiodendron odorum Chun)植物体内酚类物质和蛋白质含量较高,影响了基因组DNA提取的产量。采用改良CTAB法对观光木基因组DNA进行提取,经过紫外吸收、琼脂糖凝胶电泳、ISSR标记和双酶切检测,结果表明,改良CTAB法提取的基因组DNA吸光值OD260/OD280为1.80～1.90,DNA无降解现象和杂质污染;ISSR-PCR扩增的条带多而且清晰;基因组DNA双酶切彻底。说明此方法提取的DNA质量较高,符合ISSR和AFLP标记对基因组DNA质量的要求。     

北冬虫夏草DNA提取方法的比较

运用CTAB法、CTAB改良法1、CTAB改良法2、氯化苄法、裂解法、改良SDS法、改良尿素法等7种方法提取北冬虫夏草基因组DNA,发现CTAB改良法2(提纯时加入低浓度乙醇)提取的DNA的OD260/OD280都在1.9以上,能获得清晰的PCR扩增图谱,能被HindⅢ酶切消化.     

北冬虫夏草DNA提取方法的比较

运用CTAB法、CTAB改良法1、CTAB改良法2、氯化苄法、裂解法、改良SDS法、改良尿素法等7种方法提取北冬虫夏草基因组DNA,发现CTAB改良法2(提纯时加入低浓度乙醇)提取的DNA的OD260/OD280都在1.9以上,能获得清晰的PCR扩增图谱,能被HindⅢ酶切消化.     

枸杞DNA的提取方法研究

[目的]寻求高质量枸杞DNA的有效提取方法,为开展我国枸杞种质资源准确的分子鉴定评价提供试验基础。[方法]针对枸杞组织中多糖严重干扰基因组DNA提取质量的问题,比较了常规十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）法和改良CTAB法的处理效果。[结果]常规CTAB法提取DNA难以除去多糖类杂质,溶液极黏稠,致使移液枪吸取困难,取量不准;改良CTAB法提取DNA产率高,无明显降解,杂质少,OD260nm／OD280nm比值在1．80左右,表明DNA纯度高,污染少。通过基因组DNA—AFLP指纹图谱分析,改良CTAB法完全满足试验要求。并对改良CTAB法的关键步骤作了分析讨论。[结论]为枸杞DNA的有效提取提供了方法依据。     

不同方法对石榴果皮总RNA提取效果的影响

比较了3种RNA提取方法提取石榴果皮RNA的效果。结果表明:改良CTAB法提取的总RNAOD值在1.91左右,得率为48μg/g;Trizol法提取总RNAOD值在1.15左右,得率为86μg/g;试剂盒提取得到的总RNAOD值在1.24左右,得率为124μg/g。分别反转录为cDNA,根据不同植物花青素合成关键酶基因保守序列,设计简并引物进行RT-PCR,其中只有改良CTAB法得到的cDNA有扩增条带。表明改良CTAB法比较适合富含多糖和酚类物质石榴果皮总RNA的提取。     

不同方法提取葡萄基因组DNA的比较

本试验采用三种不同的方法提取葡萄幼叶基因组DNA,即:改良的CTAB法、高盐法和SDS法。并通过紫外/可见分光光度计检测、琼脂糖凝胶电泳检测、RAPD-PCR扩增对三种方法提取的DNA进行定量、定性分析和综合比较。结果表明,三种不同的方法提取葡萄幼叶DNA均能满足RAPD扩增要求,扩增效果为:CTAB高盐法SDS法。因此,改良的CTAB法是一种适合新疆葡萄基因组DNA提取的最佳方法。     

滇杨叶芽总RNA提取方法比较研究

 采用改良CTAB法、硼砂/CTAB法、酚/SDS法、皂土法和2种总RNA提取试剂盒共6种方法提取滇杨叶芽总RNA,并通过紫外分光光度计测定RNA样品的纯度,琼脂糖凝胶电泳和cDNA AFLP检测总RNA样品的完整性和质量。结果表明,硼砂/CTAB法和皂土法不适合滇杨叶芽总RNA的提取。改良CTAB法、酚/SDS法和2种试剂盒均能得到清晰的28S和18S条带。其中,改良CTAB法提取的滇杨叶芽总RNA完整性最好,OD260/OD280值在1.8-2.0之间,OD260/OD230值>2.0,经过cDNA-AFLP扩增分析,获得了清晰的条带。结果证明,改良CTAB法提取的滇杨叶芽总RNA能够满足RT-PCR等分子生物学实验。     

神秘果基因组DNA提取方法比较研究

在CTAB法及SDS法的基础上设计了6种提取方法,比较了不同方法对神秘果幼嫩叶片DNA的提取效果。结果表明:改进的SDS法,通过提高提取缓冲液中重要成分的含量,与二次纯化的方法相结合,提取的DNA无明显降解、杂质少,OD260/OD280值为1.62,接近标准值,是有效提取神秘果基因组DNA的方法。     

番茄腺毛总RNA提取方法比较

番茄腺毛与其防御性反应及次生代谢产物的合成密切相关,为了进一步研究腺毛特异性表达基因,试验比较研究了改良的异硫氰酸胍(GTC)法、CTAB 法、Trizol 法对番茄腺毛总RNA 的提取效果。结果表明,改良GTC法提取的总RNA 质量最好,电泳显示条带清晰完整,OD260/OD280比值为1.98。用该法获得的RNA 更适合后续分子生物学研究。     

采用CTAB与SDS法提取白术DNA的研究

[目的]获取白术中高质量基因组DNA。[方法]选取新鲜白术叶片,破碎细胞壁,用经改良的CTAB与SDS法进行DNA分离纯化提取。[结果]改良CTAB法提取的DNA OD值为1.8～1.9,较改良SDS法的OD值(1.5～1.6)高。[结论]改良CTAB法提取的DNA浓度和纯度较高,可作为模板用于后续分子标记的研究。     

改良CTAB法提取益智基因组DNA

益智叶片中多酚和多糖等杂质的含量较高,为获得高质量的益智基因组DNA,试验在传统CTAB法的基础上加以改良,提取益智基因组DNA,并对所得DNA的质量和浓度进行了检测。结果表明,改良后的方法较之传统方法简单高效,所获得的基因组DNA质量较好,OD260/OD280在1.7~2.0之间,RNA消化彻底,DNA无明显降解,进行ISSR分析条带清晰,多态性好。适合于进行以PCR为基础的DNA多态性的研究。