美人指葡萄再生体系的建立

以美人指葡萄为试材,研究了不同外植体类型、激素浓度配比以及暗培养时间等对器官再生的影响。结果表明:叶片、叶柄、茎段外植体均可再生出不定芽,其中叶柄的再生率最高;TDZ对美人指葡萄叶柄再生效果比6-BA好,IBA诱导美人指葡萄叶柄不定芽再生率高于NAA和2,4-D;暗培养3周时,美人指葡萄叶柄的再生率最高。叶片再生的最适培养基为:MS+1.0 mg/L TDZ+0.1 mg/L IBA,再生率为60.71%,增殖系数为5.65;叶柄再生的最适培养基为:MS+1.0mg/LTDZ+0.1 mg/L IBA,再生率为93.10%,增殖系数为5.91;茎段再生的最适培养基为:MS+1.0 mg/L TDZ+0.2 mg/L IBA,再生率为47.37%,增殖系数为5.00。将再生不定芽置于3/4 MS+0.35 mg/L IBA培养基上诱导生根,完整植株培养35~50 d后炼苗移栽,成活率可达90%。     

杏EST-SSR标记的开发

 利用MISA软件对NCBI上杏的15 387条EST序列进行SSR位点查找,发掘出含有SSR位点的序列1 073条,共有1 353个SSR位点,候选SSR位点出现的频率为8.79%。二核苷酸、三核苷酸和四核苷酸重复是最主要的重复类型,分别占23.50%、38.80%和23.43%。设计了50对EST-SSR引物并进行PCR扩增,发现40对引物能扩增出理想的PCR 产物,其中有25对引物能够扩增出多态性带。随机对7对引物的部分杏扩增片段进行了测序分析,发现有57.1%的片段具有相应的SSR位点,对梅DNA指纹中部分谱带的测序结果也证明是杏扩增出的相应的SSR位点。根据推算,从杏EST中开发SSR标记的开发效率为3.98%。进一步选用20对扩增效果最好的引物对24个杏品种,16个花梅品种以及8个果梅品种进行DNA指纹构建与遗传多样性分析,结果表明,来源于杏的EST-SSR引物在梅中有很高的通用性,杏和梅是遗传差异明显的两种植物,果梅与花梅在遗传上是不能分为两类的同种植物。     

6种野生草莓基因组大小估算

【目的】估算野生草苺的基因组大小。【方法】以拟南芥(Arabidopsis thaliana)为内标,利用流式细胞仪测定了6个野生草莓种7个待测样品的基因组大小。【结果】6个野生草莓种的基因组大小分别为:黄毛草莓(274±3.80)Mb,五叶草莓(红果类型)(268±3.73)Mb,五叶草莓(白果类型)(258±5.40)Mb,西南草莓(245±3.28)Mb,东北草莓(241±4.28)Mb,森林草莓(231±3.19)Mb,绿色草莓(230±2.83)Mb。【结论】野生草莓基因组大小的测定为草莓属植物基因组文库的建立及其基因组进化等研究提供了基础数据。     

嘎拉苹果单芽系组培苗的获得

以皇家嘎拉苹果芽为外植体,研究不同消毒方法、消毒时间、不同防褐化措施和不同激素配比对组培苗获得的影响。结果表明:嘎拉芽消毒选择0.1%HgCl2消毒7 min为宜;接种前使用4 g/L PVP、接种后暗培养10 d左右可以较有效地减轻褐变;诱导、增殖培养基是MS+BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L,继代、扩繁培养基是MS+BA 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L;继代周期以28~30 d为宜。     

杏叶片与果实总RNA提取方法研究

以杏叶片及幼果为材料,分别从操作耗时、RNA质量和产量等方面比较了CTAB法、改良CTAB法、Trizol法、SDS-苯酚法和改良SDS法5种不同的RNA提取方法。结果表明:5种方法均能从幼嫩叶片中提取到总RNA;经电泳检测,28S rRNA和18S rRNA两条主带清晰,A260/A280均大于1.8;其中以Trizol法提取效果最佳,改良CTAB法次之,产量分别达到了839.25μg/g和395.21μg/g。在果实RNA提取过程中,改良SDS法以及改良CTAB法能有效减少果实RNA的提取中酚类物质和多糖等杂质的影响,获得质量较高的RNA,二者产量分别为352.65μg/g和361.95μg/g。每种方法提取的叶片和果实的RNA经反转录后形成cDNA,并进行RT-PCR扩增,成功扩出看家基因泛素蛋白UBQ片段,说明了RNA质量能够满足文库构建、基因克隆等研究需要。     

赤霉素对魏可葡萄果穗及果实生长的影响

以魏可葡萄为试材,于开花前13~22 d,使用不同浓度(3、5、7.5 mg/L)赤霉素处理,结合盛花期25 mg/L GA3和花后两周25 mg/L GA3+5 mg/L CPPU处理。研究了不同赤霉素处理对魏可葡萄花穗长度、果实小穗节间长度、无核率和果实品质的影响。结果表明,在花前13~22 d的12组处理中,花前16 d 7.5 mg/L GA3结合盛花期25 mg/L GA3,花后两周25mg/L GA3+5 mg/L CPPU的处理果穗拉长效果最为显著,其果实小穗节间长度增长为对照的128.81%。使用不同赤霉素处理提高了魏可葡萄的无核率,使魏可果形变长,此外,还增加了果实可滴定酸含量,降低了可溶性固形物含量。     

甜柿品种阳丰在江苏新沂的引种表现

2002年引进日本甜柿品种阳丰,在江苏省新沂市试栽。该品种果实扁圆形,平均单果重243.0g,果实橙红色,果面极少有锈斑,可溶性固形物含量19.20%,常温下硬果期15天,抗性强,早果丰产,定植第2年即可结果,第5年进入盛果期,适宜在新沂地区适度发展。     

枳SPL9和SPL13全长cDNA克隆、亚细胞定位和表达分析

【目的】从枳[Poncirus trifoliata(L.)Raf.]中克隆SBP类[SQUAMOSA(SQUA)promoter-binding-like]转录因子基因SPL9和SPL13全长,构建SPL9和SPL13亚细胞定位表达载体验证其是否具有核定位功能,利用荧光定量PCR研究其在枳不同组织的表达特性,初步确定SPL9和SPL13在枳生长发育过程中的作用。【方法】利用生物信息学结合RACE技术以枳花器官的cDNA为模板,克隆出SPL9和SPL13基因全长,分别命名Pt-SPL9和Pt-SPL13,大小分别是1519bp和1824bp,在GenBank的登录号分别是FJ502237和FJ502238;构建Pt-SPL9和Pt-SPL13亚细胞定位载体35S-GW-FJ502237/FJ502238-GFP,基因枪转化洋葱表皮细胞,暗培养24h后激光共聚焦显微镜下观察;利用SYBR Green I实时定量RT-PCR方法检测Pt-SPL9和Pt-SPL13在根、茎、叶、花序、花和果等不同组织中的表达。【结果】生物信息学分析表明,Pt-SPL9和Pt-SPL13的cDNA序列中都有microRNA156的识别位点,Pt-SPL9与金鱼草、拟南芥和玉米SPL9的同源性分别为48.9%、42.5%和41.7%;Pt-SPL13与拟南芥SPL13、水稻的SPL16和玉米的TGA1同源性分别为40.8%、38.1%和35.8%。Pt-SPL9和Pt-SPL13与其它植物的SBP一样有着高度保守的序列,即SBP结构域和一个双向核定位信号KRXXXRRRK。亚细胞定位结果表明,Pt-SPL9和Pt-SPL13均定位于细胞核中。SYBR Green I实时定量RT-PCR结果表明,Pt-SPL9和Pt-SPL13在各个器官均有表达,但表达量不同,Pt-SPL9在茎中的表达量最高,在花和叶中的表达量次之,在根、花芽和幼果中的表达量最低;Pt-SPL13在幼果中的表达量最高,在茎和花芽中的表达量相当,其次为叶,在花和根中的表达量很低。【结论】转录因子Pt-SPL9和Pt-SPL13均具有核定位功能,Pt-SPL9和Pt-SPL13对枳的茎和果实的发育可能有着重要作用。     

山梨醇对李果肉组织总RNA提取的影响

探讨了不同浓度的山梨醇清洗溶液对李果肉组织中RNA提取效果的影响。经琼脂糖凝胶电泳、核酸蛋白分析仪和RT-PCR等方法对RNA质量和产率进行了分析,结果表明:李果肉组织研磨后用山梨醇清洗溶液处理有利于总RNA的提取,而不添加山梨醇的清洗溶液,提取液中检测不到RNA,当清洗溶液中山梨醇浓度为1.10mol/L时,李果肉组织总RNA的产率明显高于山梨醇浓度为0.35 mol/L和3.00 mol/L时的产率;以不同贮藏天数的李果实为试材提取总RNA,其结果是一致的;通过RT-PCR扩增蛋白延伸因子EF-2基因,结果证明本试验提取的总RNA可以用于基因转录表达特性分析。     

吲熟酯和钼酸铵处理对青种枇杷果实糖积累及相关酶活性的影响

以青种枇杷为试材,在果实成熟前50d左右分别喷施100、200、300mg·L-1吲熟酯及0.1%钼酸铵和200mg·L-1吲熟酯+0.1%钼酸铵,研究吲熟酯和钼酸铵对果实生长发育过程中糖积累以及蔗糖与山梨醇代谢相关酶活性变化的影响。结果表明:200mg·L-1吲熟酯处理对增加果实的果糖和葡萄糖积累最为明显。所有处理的果实山梨醇含量均随果实发育呈先下降后上升的趋势。100mg·L-1吲熟酯处理的蔗糖合成酶(SS)和蔗糖磷酸合成酶(SPS)活性在5月21日后呈明显的下降趋势,其他处理的蔗糖代谢相关酶活性均呈上升趋势;山梨醇代谢相关酶活性总体上呈下降趋势。综上所述,200mg·L-1吲熟酯处理对青种枇杷果实糖积累有较显著的促进作用。