褐飞虱类酵母共生菌菌体蛋白质提取方法的比较

为了筛选出适合褐飞虱Nilaparvata lugens类酵母共生菌蛋白质提取的细胞破碎方法,选择超声波破碎法、反复冻融法和液氮研磨法等3种细胞破碎方法提取共生菌吡虫啉敏感菌株和抗性菌株蛋白质。结果表明:菌体显微形态观察发现,使用超声波破碎法和液氮研磨法处理类酵母共生菌的细胞破碎效果均优于反复冻融法,处理后菌体分布均匀,破碎彻底;72 h是提取菌体蛋白质的最佳培养时间。定量分析表明:用超声波破碎法提取蛋白质质量浓度最高,液氮研磨法次之,反复冻融法提取蛋白质质量浓度的效果最差,各方法所提蛋白质质量浓度差异显著(P0.05)。培养72 h后,超声波破碎法、液氮研磨法和反复冻融法提取的蛋白质质量浓度分别为2.82 g·L-1,2.62g·L-1和2.12 g·L-1(敏感菌株)及2.64 g·L-1,2.53 g·L-1和2.05 g·L-1(抗性菌株)。十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳分析发现:超声波破碎法获得的蛋白质不仅得率高,且条带清晰,丰度好。液氮研磨法虽得率高,但蛋白质部分降解,条带不清晰;而反复冻融法获得的蛋白质得率最低。超声波破碎法更适合于褐飞虱类酵母共生菌的蛋白质提取,该研究为后续蛋白质的双向电泳实验和分离差异蛋白质提供技术支撑。     

茉莉清茶中咖啡因的测定

[目的]建立一种快速、简单、准确的茉莉清茶中咖啡因的测定方法。[方法]用三氯甲烷萃取茉莉清茶中的咖啡因,在276.5 nm波长下有最大吸收,其吸收值的大小与咖啡因浓度成正比,从而可定量。[结果]不必沉淀蛋白质,直接测定茉莉清茶中的咖啡因,咖啡因含量在0～20μg/mL浓度范围内有良好的线性关系,相关系数r=1.000 0,相对标准偏差（RSD）为1.11%,回收率为94.8%～95.9%。[结论]不必沉淀蛋白质,直接用三氯甲烷萃取茉莉清茶中咖啡因的方法,操作简单,能满足分析要求。     

中国兰ISSR-PCR反应体系优化及引物筛选

[目的]优化中国兰的ISSR-PCR反应体系,并筛选适用于中国兰ISSR分析的候选引物,为ISSR分子标记在中国兰的辅助育种及亲缘关系和遗传多样性分析等提供技术参考.[方法]以6个中国兰品种为材料,采集其叶片样品,分别用研钵法和研磨仪法进行破碎研磨,比较两种方法提取DNA的效果,利用L25(53)正交试验和单因素试验对DNA模板量、引物浓度、2×Taq Master Mix添加量、循环数和退火温度进行优化,建立最佳ISSR-PCR反应体系,并从ISSR分子标记通用引物中筛选适用于中国兰的ISSR分析候选引物.[结果]研磨仪法提取的DNA浓度明显高于研钵研磨法,但二者提取的DNA质量均较好(OD260/OD280为1.7~2.0).对ISSR-PCR反应体系扩增结果的影响程度排序为DNA模板量>引物浓度>2×Taq Master Mix添加量.综合考虑成本和DNA模板量,最佳ISSR-PCR反应体系(20.0μL):DNA模板10.0 ng、引物0.8μmol/L和2×Taq Master Mix 9.0μL.最佳循环数为35,最佳退火温度为49.6℃.基于上述优化结果,从100条引物中共筛选出42条适用于中国兰的ISSR候选引物.[结论]研磨仪法可有效提高中国兰基因组DNA的提取率和质量,且利用优化后的ISSR-PCR反应体系和扩增程序及筛选出的引物,扩增获得的条带清晰、稳定,多样性好,可用于中国兰的遗传多样性和亲缘关系等分析研究.     

4种高梁基因组DNA快速提取方法的比较

[目的]寻找快速、简单、成本低的高粱基因组DNA提取方法。[方法]首先,分别使用液氮研磨法、缓冲液研磨法、烘干研磨法和直接研磨法这4种方法从高粱叶片中提取基因组DNA,然后,通过凝胶电泳、SSR分析和SRAP分析检测所提DNA的浓度和纯度。[结果]采用4种方法提取高粱基因组DNA时的产量相差不大;采用前2种方法提取的DNA降解少、纯度高,可进行有效的SRAP-PCR和SSR-PCR,但缓冲液研磨法的SRAP-PCR结果稍差;而采用后2种方法提取的DNA降解严重、纯度低,但可进行有效的SSR-PCR。[结论]采用4种方法均可在短时间内提取到足够几十次PCR反应的高粱基因组DNA,液氮研磨法和缓冲液研磨法所提取的DNA应用范围更大,而烘干研磨法和直接研磨法所提取的DNA只能用于对片段较小的目的DNA进行特异性PCR。     

4种高粱基因组DNA快速提取方法的比较

[目的]寻找快速、简单、成本低的高粱基因组DNA提取方法。[方法]首先,分别使用液氮研磨法、缓冲液研磨法、烘干研磨法和直接研磨法这4种方法从高粱叶片中提取基因组DNA,然后,通过凝胶电泳、SSR分析和SRAP分析检测所提DNA的浓度和纯度。[结果]采用4种方法提取高粱基因组DNA时的产量相差不大;采用前2种方法提取的DNA降解少,纯度高,可进行有效的SRAP-PCR和SSR-PCR,但缓冲液研磨法的SRAP-PCR结果稍差;而采用后两种方法提取的DNA降解严重,纯度低,但可进行有效的SSR-PCR。[结论]采用4种方法均可在短时间内提取到足够几十次PCR反应的高粱基因组DNA,液氮研磨法和缓冲液研磨法所提取的DNA应用范围更大,而烘干研磨法和直接研磨法所提取的DNA只能用于对片段较小的目的DNA进行特异性PCR。     

快速小量提取小麦叶片DNA的一种简易方法

[目的]寻求少量、快速提取小麦幼叶DNA的方法。[方法]以小麦幼叶（只要是健康的绿叶,老叶也可）为试验材料,用改良的CTAB法小量快速提取转基因小麦总DNA。具体步骤为：①直接用已灭菌的1．5ml离心管夹取小麦叶片（无需称量）,然后在液氮中快速冷冻后用玻璃棒研磨成细粉（研磨直接在离心管中进行,不必先在研钵中研磨然后再转移到离心管里,能够有效减少材料损失）,加入600山预热（65℃）的2％CTAB提取缓冲液,快速振荡摇匀。置于65℃的水浴锅中温育30min,期间温和混匀几次。②取出离心管,冷却至室温,加入600m氯仿：异戊醇（24：1）充分混匀,于4℃下12000r／min离心8min（只抽提1次）。③取上清,加入等体积预冷的异丙醇,缓慢混匀,至有絮状DNA析出,-20℃放置30min以上。④4℃下12000r／min离心8min。弃上清液,将沉淀用700μl70％乙醇清洗2次,离心,弃乙醇,室温下挥发乙醇,加入适量ddH：O或0．1×TE溶解沉淀（DNA）,-20℃保存。所提取的DNA以0．8％琼脂糖凝胶电泳检测。[结果]改良的CTAB法提取小麦基因组DNA所提取的DNA纯度高、无降解现象,适用于进行常规PCR扩增,并且需要材料量少、成本低,还可缩短操作周期、节省时间。[结论]该研究为小麦DNA的提取提供了一种所需材料量少、简便、快速的方法。     

一种快速简便的浓核病毒DNA的制备方法

利用家蚕浓核病毒感染蚕中肠组织,建立了一种快速、简便、高效的浓核病毒DNA的制备方法.将感染蚕的中肠组织研磨后,10000 g离心10 min,上清液经过细菌过滤器过滤,滤液直接用蛋白酶K消化,再用酚/氯仿抽提,即可高效获得家蚕浓核病毒DNA.     

一种快速简便的浓核病毒DNA的制备方法

利用家蚕浓棱病毒感染蚕中肠组织,建立了一种快速、简便、高效的浓棱病毒DNA的制备方法。将感染蚕的中肠组织研磨后,10000g离心10min,上清液经过细菌过滤器过滤,滤液直接用蛋白酶K消化,再用酚／氯仿抽提,即可南效获得家蚕浓核病毒DNA。     

一种简易有效的提取真菌DNA化学改良方法

[目的]探索适合真菌基因组DNA提取的有效方法。[方法]以酵母茵（Hansenula sp.HS07A）和青霉菌（Penicillium sp.HS07）为供试菌株,分别采用煮沸裂解法、石英砂研磨法、研磨和反复研磨冻融法和化学改良法提取其基因组DNA,比较这4种方法的提取效果。[结果]化学改良法提取基因组DNA,除去了机械破壁过程,减少了机械力对DNA造成的破坏,运用阴离子去污剂SIB提取DNA安全、价廉,能有效、完整地提取高质量的基因组DNA,凝胶电泳条带清晰、无弥散,以此基因组DNA作为目的片段的PCR扩增模板,扩增效果优于改良前的方法,并且这种方法也适合多种真菌和细菌基因组DNA的提取。[结论]化学改良法是提取真菌基因组DNA的有效方法。     

酵母废水的厌氧生物可降解性及分子量分布的研究

[目的]测定酵母废水的厌氧生物可降解性,讨论厌氧处理对不同分子量范围有机物的去除效率。[方法]采用普通血清瓶培养法与UV254分光光度法。[结果]酵母废水经厌氧降解,COD去除率达到78.4%,BD为80.6%,表明利用厌氧生物法处理废水能取得较好的效果。厌氧降解后分子量0～1、1～3、3～10、10～30、〉30k的废水中有机物去除率分别为85.9%、71.4%、56.7%、83.5%和68.6%。[结论]焦糖色素、大分子蛋白质是酵母废水中难降解的主要物质。     

不同温度下蓝舌病病毒的毒价变化研究

[目的]为蓝舌病病毒的长期保存奠定基础。[方法]在70、-20、4和20℃下保存蓝舌病病毒1个月后,测定其毒价变化,研究不同温度对蓝舌病病毒毒价的影响。[结果]在室温和4℃下保存1个月后蓝舌病病毒毒价保持不变。在-70℃下保存1个月后蓝舌病病毒毒价从原来的5.5降至4.2。在-20℃下保存1个月蓝舌病病毒毒价变化最大,从原来的5.5降至2.8。[结论]长期保存时,应将蓝舌病病毒在-20℃下保存。     

不同冻结温度对山药片营养品质的影响

[目的]研究不同冻结温度对山药片营养品质变化的影响,为速冻山药产品的加工提供理论指导。[方法]将山药片分别在不同速冻温度(-20、-25、-30、-35℃)下进行速冻,研究速冻前后山药细胞结构、质构、维生素C含量和失水率的变化。[结果]不同冻结温度对山药片细胞破坏程度不同。-20和-25℃冻结的山药片,其细胞内形成的冰晶较大,破坏了细胞的结构,解冻后细胞形态受破坏;-35℃冻结的山药,冻结速度较快,形成的冰晶小,对细胞结构的破坏较小。解冻后产品不仅硬度损失少,而且维生素C的损失以及失水率都最小,营养品质变化也最少。[结论]-30℃速冻是冻结山药片较适宜的温度。     

酶解生产鲜罗汉果速溶粉工艺研究

[目的]研究酶解生产鲜罗汉果速溶粉工艺。[方法]以无籽罗汉果鲜果为原料,采用湿法超微粉碎、酶解、喷雾干燥等技术研究鲜罗汉果速溶粉的生产工艺。[结果]酶解生产鲜罗汉果速溶粉的最佳工艺为：鲜果粗破碎并经胶体磨研磨,添加0.10 ml/L植物蛋白酶和0.25 ml/L果胶酶,在50℃下酶解60 min,最后采用进风温度160℃、入料流量15 ml/min、喷头转速20 000 r/min的操作条件进行喷雾干燥,得到水分含量低于3%,总苷含量达9.96%,甜苷V含量达5.42%的鲜罗汉果速溶粉。[结论]研发的产品醇香甘甜,既可作为直接冲饮型产品,也可作为食品和饮料产品中甜味剂的代用品。     

不同冻藏温度对速冻冬枣品质的影响

[目的]为研究冻藏期间冬枣品质的变化。[方法]利用-70℃对冬枣进行速冻后,采用-40℃、-18℃、-10℃和-4℃进行冻藏,就不同冻藏时期冬枣的品质特性变化进行研究。[结果]-70℃速冻后,合适的冻藏温度为-18℃和-40℃,-40℃冻藏能使冬枣的保鲜期10个月以上,而-18℃冻藏能保鲜冬枣6个月以上。[结论]速冻冻藏能有效维持冬枣的品质特性,如延缓含水量、可溶性糖、维生素C和有机酸含量的下降,保持较高的硬度和延缓花青素含量的升高。     

草莓低醇饮料发酵工艺优化研究

[目的]研究草莓低醇饮料生产工艺并优化其参数,为我国草莓深加工产品的开发及草莓产业化发展提供理论依据.[方法]以速冻草莓为原料,利用酵母对酶解获得的草莓汁进行厌氧发酵,并对发酵温度、酵母用量、含糖量、发酵时间、初始pH、振荡频率等工艺参数进行优化.[结果]优化后的最佳草莓低醇饮料发酵工艺参数为:草莓汁初始pH 3.5,含糖量9.0%,葡萄酒活性干酵母添加量0.05%,发酵温度20℃,发酵时间60 h.[结论]在最佳发酵工艺条件下发酵获得的草莓低醇饮料色泽亮丽、醇厚甘冽、果香浓郁、风味独特,其糖度3.4%、pH 3.55、酒精度3.26%vol、感官质量评分95.0分.     

天牛基因组DNA提取方法和标本保存方式的比较研究

[目的]为天牛的分子系统学研究奠定基础。[方法]采用不同提取方法(饱和NaCl法、CTAB法、SDS-蛋白酶K消化法)从不同保存条件下天牛标本中提取基因组DNA,进行RAPD扩增,比较不同保存条件和不同DNA提取方法对DNA提取质量的影响,探索天牛标本的最佳保存方式和最佳DNA提取方法。[结果]不同方法提取的DNA质量有明显差异。CTAB法和SDS-蛋白酶K消化法提取的DNA质量较好,条带清晰完整,无降解和RNA污染。但饱和NaCl法的提取效果较差。天牛标本的最佳保存条件为在-80℃条件下无水乙醇浸泡。CTAB法提取的天牛基因组DNA能扩增出稳定清晰的多态性片段。[结论]CTAB法提取的天牛DNA质量最好,可直接用于PCR扩增。     

秋季施肥对油松容器苗生长·氮吸收和抗寒性的影响

[目的]研究秋季施肥对油松容器苗生长、氮吸收和抗寒性的影响。[方法]对在生长期经过不同指数施肥水平10、40、80和120mg/株处理过的油松容器苗进行秋季施肥,设置4个处理水平0(对照)、12、24和48 mg/株,苗木在温室培育一个生长季并在翌年进行造林试验。[结果]秋季施肥24 mg/株为最佳处理,在40E-24处理下,N含量相比对照增加了15.9%,抗寒性在-20℃下更提高了95.2%,造林效果最佳。[结论]秋季施肥可有效提高苗木体内养分含量,抗寒性及翌年造林效果。但过量的秋季施肥(48 mg/株)并不促进苗木生长甚至有抑制或者损害作用。     

沙枣果酒加工工艺研究

[目的]优化沙枣果酒加工工艺。[方法]以沙枣为原料,经加水浸提后,调糖、调酸并添加酵母进行发酵;利用单因素试验和正交试验设计研究二氧化硫的添加量、酵母用量、沙枣汁初始糖度及主发酵温度对发酵的影响。[结果]结果表明,沙枣果酒的主发酵最佳工艺条件为：SO2添加量为80 mg/L,主发酵温度在22.5℃,初始糖度18%,酵母接种量0.25%;在该最佳工艺条件下,发酵的沙枣酒酒度为10.0%（V/V）。[结论]该加工工艺研究为沙枣果酒的生产提供了理论依据。     

贺氏399对低温胁迫下小麦幼苗的影响

[目的]研究贺氏399对低温胁迫下小麦幼苗生长发育的影响。[方法]以农科1号小麦种子为材料,待第2片叶完全展开后喷施贺氏399,3 d后在-2℃下处理12 h,测定叶片光合总量,然后正常培养,每5 d进行一次株高、叶色、干重的测量。[结果]喷施399对低温胁迫条件下小麦的生长发育保护作用明显。[结论]贺氏399可以缓解低温胁迫对小麦幼苗的影响。     

桑椹酒发酵关键技术研究

[目的]通过对桑椹酒发酵专用酵母的筛选和多酚氧化酶钝化2项关键技术进行研究,为桑椹酒稳定发酵工艺的建立提供技术支持。[方法]分别对桑椹及桑园土壤中的酵母进行富集、培养与筛选,考察了pH、温度对桑椹多酚氧化酶活性的影响。[结果]获得2株桑椹酒发酵专用菌株,一株来自桑椹发酵汁,一株来自桑园土壤;在pH 3.0~7.0时,多酚氧化酶活性随pH的增大而升高,在pH为7.0时相对活性达到最大,之后随pH的增大其活性又逐渐减小。在pH低于5.0的环境中,酶活性会低于40%;在温度为40℃时活性达到最大,80℃时活力丧失。[结论]在pH低于5.0的条件下,将桑椹汁在70℃加热20 min或在80℃加热5 min,即可达到使桑椹多酚氧化酶的活性钝化失活的目的。