春石斛根端染色体制片技术的优化

为优化春石斛染色体制片技术体系,以春石斛组培苗根为材料,研究根端长度、预处理方法和酸解时间对制片的影响,结果表明,春石斛根端染色体制片时取根尖长度为1.0cm,在8-羟基喹啉和饱和对二氯苯的混合液中预处理4h,用1mol/L的盐酸在常温(25℃)下解离18min时制片效果佳,染色体形态清楚,易于观察。     

‘正午’牡丹染色体预处理方法优化和在核型分析中的应用

  目的   染色体核型信息是植物遗传育种研究的重要基础。亚组间远缘杂交育种是现代牡丹育种的重要方向。牡丹组植物染色体形态相似度高,远缘杂种的核型分析需要大量高质量的染色体制片。预处理是影响染色体制片质量的关键环节,通过改良预处理方法,提高染色体制片质量和效率,对获得牡丹远缘杂种准确的核型数据、研究牡丹远缘杂交育种的遗传规律具有重要意义。   方法   本研究以‘正午’牡丹幼嫩花蕾中的雌蕊为材料,量化分析了4 ℃条件下不同预处理液和预处理时间对染色体收缩程度和分散程度的影响,统计了不同预处理效果下核型数据的差异。   结果   用对二氯苯饱和水溶液或对二氯苯-α-溴萘混合液进行预处理,均能取得良好的效果。在4 ℃下用对二氯苯饱和水溶液预处理36 ~ 72 h,或对二氯苯-α-溴萘混合液预处理24 ~ 48 h,可稳定获得大量收缩适度、分散良好的染色体制片。利用大量高质量的染色体制片获得了‘正午’牡丹更多的核型信息:其核型公式为2n = 2x = 10 = 8m（2SAT） + 2st（2SAT）,随体位于第4、8、9、10号染色体短臂上,其中9、10号染色体上的随体比4、8号染色体上的随体更容易观察到。   结论   通过改进预处理效果能有效提高‘正午’牡丹染色体制片质量和效率,获得更加丰富、准确的核型信息。本研究采用的量化方法能从染色体收缩程度和分散程度两个方面有效评价染色体制片质量,筛选出的预处理方法稳定、高效,为远缘杂种牡丹染色体核型分析和进一步遗传学研究奠定了良好的基础。      

利用子房壁鉴定香石竹染色体数目的研究

以香石竹花蕾的子房壁为材料,研究了不同大小花蕾和预处理方法对香石竹染色体制片效果的影响。结果表明:幼嫩花蕾的子房壁中期分裂相细胞多;在3种预处理方法中,用冰水混合物预处理24 h效果最好;与根尖相比,幼嫩子房壁中处于分裂中期的细胞较多,且中期染色体在形态上与根尖中的无明显区别;利用子房壁制片,验证了13个香石竹品种的染色体数目,多数为30(二倍体)。     

植物染色体标本的制备和染色体核型分析研究进展

染色体是遗传物质的载体,植物染色体制片和核型分析技术是细胞遗传学中最基本、最常用的方法,在物种亲缘关系鉴定、染色体变异、杂种分析等方面得到广泛应用.文章从取材、材料预处理、材料固定、材料解离、染色体制片、染色与观察等方面综述了近年来植物染色体制片的改进方法,从传统手工分析、Photoshop软件分析、自动核型分析、流式细胞术等介绍了核型分析技术.并从提高制片技术,以获得更清晰可辨的中期染色体图像;在染色体制片中规范统一标准的仪器设备并建立一套统一的标准,便于比较不同研究者的结果,有利于植物分类和遗传的研究;提高数据统计和分析的方法,以降低实验成本等方面展望了今后植物核型分析的发展方向.     

大麻染色体制片技术

[目的]探究大麻染色体的制片技术。[方法]对大麻染色体制片技术的预处理液、解离时间、染色时间等进行试验研究,并对其进行染色体数目观察。[结果]研究表明:用大麻根尖在常温下用0.003%的8-羟基喹啉溶液预处理2 h或用饱和对二氯苯处理1.5 h,经卡诺固定液固定30 min后,在1∶1的1 mol/L HCl和45%醋酸60℃下恒温水浴中解离30 s,地衣红染液染色8 h压片镜检,能取得良好的制片效果。大麻染色体数目观察表明,大麻染色体数目2n=2x=20。[结论]该研究为大麻细胞学方面的深入研究提供了资料。     

冬凌草染色体制片方法的初步研究

为寻找冬凌草染色体观察的最佳染色制片方法,并确定冬凌草染色体数目,采用丙酸-铁矾苏木精染色方法,对冬凌草的根尖及下胚轴进行染色制片,通过比较不同浓度的预处理液、不同取材时间对制片效果的影响,以探寻适宜于冬凌草染色体制片的有效技术。结果表明:进行冬凌草染色体数目观察适宜选取的材料为下胚轴,且取材时间8:00-9:00为最佳,将下胚轴用0.1%秋水仙碱溶液处理1h,并用丙酸—铁矾苏木精染色方法制片,观察到冬凌草染色体数目为16条。     

用于菊花品种核型分析的根尖压片技术研究

根尖压片技术是研究植物中期染色体数目和形态的一种重要方法。以2个大菊品种的根尖为材料,以典型中期分裂相的数目、中期染色体的分散程度、聚缩程度和中期染色体的清晰性为衡量制片效果优劣的标准,通过对比不同预处理药剂、取材时间、预处理温度、预处理时间长短以及解离时间条件下的制片效果,得出如下结论：当根长至1 cm时,在9：00~10：00取根,用饱和对二氯苯溶液在4℃条件下预处理4 h,然后用卡诺固定液固定22~24 h,用1 mol/L的HCl60℃下解离10 min,能够得到数量较多、染色体分散良好、染色体形态清晰以及染色体长度适中的中期分裂相。     

番木瓜根尖染色体压片技术的研究

<正>目前,有关番木瓜的研究已经拓展到分子水平、细胞学水平,研究内容广泛,但是关于番木瓜染色体方面的研究,仅见汪卫星等[1]有对番木瓜核型分析进行报道,采用的是改良去壁低渗—火焰干燥法进行染色体制片,整个制片过程费时、费力,而采用压片法进行番木瓜染色体观察的并未见报道。本试验参考蝴蝶兰、树莓、短柄草等植物根尖染色体制片方法~([2,3,4]),以番木瓜根尖为研究材料,通过对预处理、酸解和固定等对染色体制片质量有影响的环节进行研     

紫薇属植物染色体制片技术优化

以紫薇属紫薇(Lagerstroemia indica)、屋久岛紫薇(L.fauriei)、福建紫薇(L.limii)为研究对象,从取材、预处理、制片方法等方面比较了常规压片和去壁低渗法两种染色体制片技术的效果,并进行染色体计数。结果表明:利用新萌发的茎尖在改良固定液(无水乙醇∶冰醋酸∶三氯甲烷=5∶3∶2)中-20℃固定过夜后的制片效果最好;常规压片法适用于普通计数、观察,利用火焰干燥法可获得维持染色体原有形态、能用于荧光原位杂交实验的染色体制片。此外,本研究观察到紫薇、屋久岛紫薇和福建紫薇的染色体数目均为2n=48,福建紫薇和屋久岛紫薇的染色体数目均为初次报道。     

速生杨愈伤组织染色体制片技术

[目的]探索速生杨愈伤组织染色体制片的可行措施。[方法]以中林46号速生杨愈伤组织为材料,取2 mm3左右生长旺盛的愈伤组织块,采用不同的预处理方法、解离及染色方法制备永久封片,对比不同方法的制片效果。[结果]在5种预处理方法中,愈伤组织用4℃冰水预处理24 h或用0.05%秋水仙素在8~16℃条件下预处理6 h时,制片效果较好;在2种解离方法中,酸解和酶解愈伤组织效果相当,较理想;在3种染色方法中愈伤组织用吉姆萨染色2 h左右效果较好,改良苯酚品红染色2 h效果次之,醋酸洋红染色较浅,其显微摄影效果不理想。[结论]用4℃冰水或0.05%秋水仙素预处理、用盐酸或含果胶酶、纤维素酶的甘露醇溶液解离、用吉姆萨染色时,速生杨愈伤组织染色体制片效果较好。     

新疆紫草不同材料染色体制片技术研究

[目的]研究新疆紫草不同材料的染色体制片方法,为今后倍性鉴定奠定技术基础.[方法]以新疆紫草根尖及毛状根根尖为试验材料,采用常规制片法,分别考察培养方式及培养时间、取材时间、预处理方法、酸解方法、酸解时间、染色时间对染色体制片效果的影响.[结果]B5固体培养基培养4d的毛状根中期分裂相指数较大,且染色体清晰,制片效果较好;早上08:00取材的毛状根根尖的中期分裂相指数(124.2‰)最高,原植物根尖(115.4‰)在早上10:00取材较为适宜;毛状根根尖采用0.1;秋水仙素、温度15℃、预处理时间4h时的中期分裂指数为97.6‰～124.2‰,室温酸解法、10;盐酸、酸解时间为12 min、染色时间为20 min有利于毛状根根尖的制片.原植物根尖采用0.1;～0.2;秋水仙素、温度4 ～15℃、预处理时间3h、室温酸解法、10;盐酸、酸解时间为15 min时的中期分裂指数为128.6‰～128.9‰.[结论]材料不同则取材时间及秋水仙素预处理时间就有所不同.秋水仙素预处理时间、温度及酸解时间是影响新疆紫草染色体制片效果的关键因素.     

米口袋染色体制片技术优化及其核型分析

以米口袋根尖为供试材料，用常规压片法探讨不同预处理方法和预处理时间对染色体制片的影响，优化染色体制片技术，并对其进行染色体核型分析，旨在为米口袋的分类、种质资源保存和利用及育种提供细胞学依据。结果表明：(1)当预处理时间为3 h时，0.1%秋水仙素溶液预处理效果最好；当预处理时间为6 h时，0.01%秋水仙素溶液预处理效果最好。得到的分裂相多，染色体浓缩程度适宜，分散性较好，形态清晰；(2)米口袋体细胞染色体数目为2n=2x=14,为二倍体植物。核型公式K(2n)=2x=14=10m+4sm,具中部着丝点染色体(m)的为第1、2、3、4、7对染色体，具近中部着丝点染色体(sm)的为第4、5对染色体。染色体相对长度组成为2n=14=2L+8M2+4M1,染色体长度比1.30,没有臂比大于2的染色体，属“1A”类型，为对称型核型，说明米口袋在进化上属于比较原始的类型。     

高质量花生根尖细胞染色体制片方法研究

为了能快速获得用于染色体分带或者荧光原位杂交的高质量花生根尖细胞染色体制片,通过选择适当粗细的花生侧根,经过对二氯苯浸泡预处理,卡诺氏固定液固定后,直接用45%醋酸烘烤压片,得到了细胞平整、染色体分散的根尖细胞染色体制片。与HCl解离压片的方法相比,该方法中试剂对染色体影响微小。与酶解去壁低渗法相比,该方法没有酶解去壁低渗的过程,不需要用果胶酶和纤维素酶等较贵重试剂,节约了时间和成本,提高了制片效率。该方法不仅适用于花生,也适用于芝麻、水稻、玉米、大豆、青豆、番茄等多种植物。     

玉米染色体常规制片技术中关键因子处理效应及优化

利用五因素二次回归旋转组合设计研究玉米染色体常规制片技术中5个关键因子(取材时间、根尖长度、α-溴萘水溶液预处理时间、解离时间和α-溴萘水溶液的体积分数)及其处理效应.回归分析结果表明,除根尖长度外,其余4个处理因子对染色体制片效果有极显著影响.此外,基于回归方程的统计选优方法获得了比较符合实际的各处理因子的适宜范围,即取材时间8:00,根尖长度1.49～1.81 cm,97.62%～99.38%的α-溴萘水溶液预处理4.16～4.66 h和60℃1 mol/L HCl解离11.25～11.55 min,将取得较好的玉米染色体制片效果.     

芝麻染色体常规制片技术关键因子的优化研究

为了探索最佳的染色体制片方法,以芝麻活体种子根尖为材料,研究根尖预处理方法、解离时间、取材长度和染色方法等关键因子对芝麻染色体制片的影响.结果表明,预处理方法为40 mg/L的放线茵酮溶液处理3h、饱和对二氯苯溶液处理4h或0.002 mol/L 8-羟基喹啉溶液处理3h;取材长度为0.5～1.0 mm;在V无水酒精∶...     

百合根尖染色体制片技术研究

以卷丹百合根尖为试材,对其染色体制片技术的取样时间、预处理液、解离时间、染色剂等方面进行了试验研究,并对3个居群的卷丹百合染色体数目进行了观察。结果表明,根尖取样时间以上午8:30~9:30为佳,用0.1%秋水仙碱溶液4℃下预处理24小时,经卡诺固定液固定6h后,在1mol/L盐酸60℃下恒温水浴中解离8 min,改良卡宝品红溶液染色压片镜检,能取得良好的制片效果。卷丹染色体数目观察表明,3个卷丹居群的染色体数目均为2n=3x=36。     

龙葵杂8号向日葵染色体核型分析

为了探索向日葵染色体核型和染色体制片技术,以龙葵杂8号向日葵根尖为试验材料,探讨低温处理向日葵根尖细胞对染色体制片效果的影响.使用Photoshop和Microsoft Excel软件辅助对龙葵杂8号根尖细胞有丝分裂中期染色体图像进行核型分析.结果 表明:低温预处理向日葵根尖细胞容易获得较为理想的可用于核型分析的染色体制片,龙葵杂8号体细胞染色体数目为2n=34,其核型分析公式为:2n=2x=34=24m+6sm+4st.     

平邑甜茶根尖染色体制片技术优化及核型分析

为探讨制备平邑甜茶染色体制片的最佳技术参数,以平邑甜茶根尖为试验材料,比较材料的不同采集时间、预处理方法、酶解时间和后低渗时间对平邑甜茶根尖染色体制片的影响。结果表明:在26℃培养条件下,平邑甜茶最佳取材时间为11:00—11:30; 4℃低温冰水混合物进行预处理能够获得较为分散的染色体标本;酶解采用2. 5%果胶纤维素混合酶在37℃下处理最佳时间为2 h,后低渗最佳时间为20 min。核型分析发现平邑甜茶染色体属于小型染色体,染色体臂比变化在1. 01～2. 46之间,差异不大,核型组成成分为中部着丝点染色体(m)、亚中部着丝点染色体(sm),核型属于2B型。     

穿心莲染色体制片优化及核型分析

采用常规压片法进行穿心莲染色体制片方法及其染色体数量和核型分析的研究。结果表明,08:00—8:30取材较佳,以0.10%秋水仙素溶液作为预处理液,预处理2 h,在1.0 mol/L盐酸溶液中于60℃恒温解离8 min,低渗15 min后,卡宝品红溶液染色25 min压片镜检,所得穿心莲染色体制片效果良好。穿心莲体细胞染色体数量为2n=2x=48。首次报道了穿心莲核型公式为2n=2x=48=14m+22sm+12st,其中中部染色体(m)为7对,近中部着色点染色体(sm)为11对,近端部着色点染色体(st)为6对,核型不对称系数为67.61%,核型属3B型。     

天然四倍体紫花地丁的体细胞染色体观察

[目的]了解药用植物紫花地丁的植物分类及区域分布,为其提供细胞学资料。[方法]分别随机采集50株野生紫花地丁的幼蕾及50株成熟野生紫花地丁的果实,经预处理后,对子房细胞及根尖细胞进行卡宝品红染色及染色体观察并计数。[结果]对50株野生紫花地丁的子房,用8-羟基喹啉溶液预处理,进行子房细胞染色体制片,经光学显微镜镜检后,共得到127个可染色体计数的子房细胞;50株野生紫花地丁的种子经发根培养,8-羟基喹啉溶液预处理,进行根尖体细胞染色体制片后,共得到92个可染色体计数的细胞。这219个可染色体计数的体细胞的染色体数目均为48。[结论]发现了一个紫花地丁的天然四倍体种群,其体细胞染色体数目为48。