大豆籽粒尿囊素酶的变性和化学修饰

大豆籽粒尿囊素酶对十二烷基磺酸钠、尿素、盐酸胍变性处理较不敏感。十二烷基磺酸钠、尿素变性处理的尿囊素酶可通过解释而恢复活力，但一经盐酸胍变性后却难以通过解释而恢复活力。酶蛋白质氨基酸残基化学修饰结果表明，巯基、赖氨酸残基、酪氨酸残基不是构成酶分子活力中心的必需基因，色氨酸残基是酶活性中心的必需基团。甘油醛、异烟肼不影响酶反应，而乙酰氧肟氧肟酸抑制酶活力３９．６％。     

罗非鱼碱性磷酸酶的化学修饰

采用PMSF、PCMB、NBS、TNBS、SUAN、DTT、IAc、BrAc等化学修饰剂在一定的条件下选择性修饰罗非鱼ALP,研究罗非鱼ALP分子中氨基酸侧链基团与酶活性中心的关系.结果表明:PMSF、NBS等两种化学修饰剂能显著抑制酶的活力,而PCMB、TNBS、SUAN、DTT、IAc、BrAc等对酶的活力影响不大.说明对丝氨酸残基、色氨酸残基的化学修饰后对酶的活力影响很大,而酶分子中的其他功能基团不在酶的活性中心,修饰后对酶的活力影响不大.     

黄鳝内脏碱性磷酸酶功能基团的初步研究

经Tris—HCl缓冲液（pH8．6）抽提,正丁醇脱脂,硫酸绥分级沉淀分离,DEAE—Sepharose Fast Flow和Sephacryl S-200柱层析,从黄鳝内脏中提取出电泳纯的碱性磷酸酶。用PCMB,NBS,PMSF,TNBS,SUAN,DTT及IAA在一定条件下选择性修饰该酶的各种氨基酸残基,并对酶活力的变化作出测定。结果表明,PMSF,NBS,TNBS,SUAN和DTT的修饰能显著抑制酶的活性,且酶活力降低程度与修饰别的浓度相关;IAA和PCMB的修饰不表现对酶的抑制作用。初步认为,Ser,Lys和Trp残基为黄鳝碱性磷酸酶的必需功能基团,部分二硫键对保护酶的催化能力是必需的。     

番麻蛋白酶活性中心基团的初步研究

在不引起酶变性的条件下,用半胱氨酸(Cys)专一性化学修饰试剂碘乙酸、对氯汞苯甲酸(?)(CMB),5,5′-二硫双硝基苯甲酸(DTNB)对酶分子进行化学修饰后,酶活性显著下降。发现酶的失活程度与修饰剂浓度间存在着化学计量关系,同时底物(酪蛋白)对酶活性有明显的保护作用。说明被修饰的部位(Cya残基)是酶的活性中心基团。Cys对酶有明显的激活作用;同时,(?)CMB、DTNB、碘乙酸对酶活性有明显的抑制作用(?)CMB抑制或O_2氧化而失活的酶溶液,又可被Cys重新激活,而恢复其活力,进一步证明其活性中心存在着Cys残基。以上事实均与典型的植物巯基蛋白酶——木瓜蛋白酶一致,说明番麻蛋白酶是一种巯基蛋白醇,其活性中心存在着Cys。     

黄鳝内脏碱性磷酸酶功能基团的初步研究

经Tris-HCl缓冲液(pH 8.6)抽提,正丁醇脱脂,硫酸铵分级沉淀分离,DEAE-Sepharose Fast Flow和Sephacryl S-200柱层析,从黄鳝内脏中提取出电泳纯的碱性磷酸酶.用PCMB,NBS,PMSF,TNBS,SUAN,DTT及IAA在一定条件下选择性修饰该酶的各种氨基酸残基,并对酶活力的变化作出测定.结果表明,PMSF,NBS,TNBS,SUAN和DTT的修饰能显著抑制酶的活性,且酶活力降低程度与修饰剂的浓度相关;IAA和PCMB的修饰不表现对酶的抑制作用.初步认为,Ser,Lys和Trp残基为黄鳝碱性磷酸酶的必需功能基团,部分二硫键对保护酶的催化能力是必需的.     

蛋白质变性剂和金属离子对中华皮蝇单体乳酸脱氢酶活力的影响

为了分析蛋白质变性剂和金属离子对从中华皮蝇(Hypoderma sinense)幼虫中纯化的单体乳酸脱氢酶(LDH)活力的影响,分别用3种蛋白质变性剂[尿素、盐酸胍、十二烷基硫酸钠(SDS)]以及8种二价金属离子在体外处理纯化的中华皮蝇LDH,再测定其酶活力。结果表明,中华皮蝇LDH对蛋白质变性剂尿素有一定的耐受性,对SDS敏感;在1~20 mmol/L浓度范围内,大多数二价金属离子对LDH活力有不同程度的抑制作用,但3 mmol/L的Co2+对LDH活力有很强的促进作用,这不同于其他来源的LDH。该研究结果提示中华皮蝇LDH具有较高的抗变性能力,对高浓度Co2+的需求可能是其重要特征之一。     

薄荷蔗糖酶的化学修饰

采用NBS、PMSF、IAc、BrAc、SUAN、TNBS、PCMB、DTT以及金属离子和相关试剂在一定条件下选择性修饰蔗糖酶．结果表明：0．5mmol／L的PMSF使酶活性丧失95％,10／μmol／L的NBS使酶活性丧失93％0．5mmol／LNPCMB使酶活性降至12％,酶修饰呈一级反应,推测Trp、Ser的残基可能是薄荷叶片蔗糖酶的活啦必需基团,而His、Lys的残基不在薄荷蔗糖酶的活性中心．     

根结线虫天敌真菌1号分离物碱性磷酸酶的功能团分析

为进一步了解碱性磷酸酶的特性,为深入研究DFRKN-1侵入线虫的机理及开发利用提供借鉴,研究了金属离子、有机溶剂和化学修饰剂对根结线虫天敌真菌1号分离物(Destroying fungi of root-knot nematode-1,DFRKN-1)碱性磷酸酶酶活力的影响.结果表明:Mg2+、Ba2+、K+在一定浓度下对该酶有明显的激活作用,Zn2+对该酶有抑制作用;甲醇、乙醇、乙二醇对该酶均有明显的抑制作用,且抑制程度相当;酶的必需功能团有组氨酸残基、赖氨酸残基等;半胱氨酸的疏基不是酶活性的必需基团,但二硫键在维持酶活性构象中有重要作用.     

饥饿对日本沼虾生长和部分免疫功能的影响

在25．0±1℃范围条件下，对日本沼虾进行了不同时间的饥饿处理后再投饵的恢复生长实验。对照组连续饱食投喂18d，处理组分别饥饿2,4、8d，再分别饱食投喂16，14，10d。实验结果如下：在恢复生长时期，处理组的特殊生长率、摄食率、食物转化率明显高于对照组，超氧阴离子是随着饥饿时间的延长而增加，而超氧化物歧化酶和过氧化氧酶的酶活力则是随着饥饿实验先稍微增加，后又下降。在恢复投饵后，超氧阴离子、超氧化物歧化酶和过氧化氢酶又恢复至对照组水平。实验结果表明，日本沼虾继饥饿后再恢复喂食出现完全或部分补偿生长效应不仅由于增加食欲，提高摄食水平，同时改善了食物转化率。因此，补偿生长是这两种生理因素共同作用的结果。     

饥饿对日本沼虾生长和部分免疫功能的影响

在25．0±1℃范围条件下，对日本沼虾进行了不同时间的饥饿处理后再投饵的恢复生长实验。对照组连续饱食投喂18d，处理组分别饥饿2,4、8d，再分别饱食投喂16，14，10d。实验结果如下：在恢复生长时期，处理组的特殊生长率、摄食率、食物转化率明显高于对照组，超氧阴离子是随着饥饿时间的延长而增加，而超氧化物歧化酶和过氧化氧酶的酶活力则是随着饥饿实验先稍微增加，后又下降。在恢复投饵后，超氧阴离子、超氧化物歧化酶和过氧化氢酶又恢复至对照组水平。实验结果表明，日本沼虾继饥饿后再恢复喂食出现完全或部分补偿生长效应不仅由于增加食欲，提高摄食水平，同时改善了食物转化率。因此，补偿生长是这两种生理因素共同作用的结果。     

黄麻DNA提取与RAPD反应体系的建立

以假黄麻、假长果、越南圆果 (圆果种黄麻 )等为材料 ,研究了黄麻 DNA的提取方法以及对 RAPD分析的影响因素 ,包括模板浓度、Mg2 + 、d NTP、引物和 Taq酶等 ,建立了适于黄麻种质 RAPD分析的 PCR反应体系 .即在 2 5μL反应体积中 ,Tris- HCl(p H8.0 )、KCl、Mg Cl2 、d NTP、随机引物的浓度分别为 10 mmol· L-1、5 0mmol·L-1、2 .5 mmol· L-1、15 0 μmol· L-1、0 .2 μmol· L-1,并含有 30 - 60 ng DNA与 1.5 U Taq DNA聚合酶 .扩增程序为 :94℃预变性 5 min;然后 94℃ 30 s,37℃ 1.5 min,72℃ 1min,4 1个循环 ;最后 72℃延伸 7mi     

金属离子及脲对中华蜜蜂工蜂碱性磷酸酶的影响

通过提纯中华蜜蜂工蜂体内的碱性磷酸酶,研究金属离子及脲对碱性磷酸酶的影响.结果表明:Na+、K+和L i+等正一价金属离子浓度为1.0-10.0 mmol.L-1时,对酶活力没有影响;Mg2+、Ca2+、Ba2+浓度为0-5.5 mmol.L-1时,对酶均有激活作用;N i2+、Mn2+、Co2+、Zn2+浓度为0-200μmol.L-1时,对酶有激活作用,而Cu2+在该浓度下对酶有抑制作用;Hg2+、Ag+及Cd2+浓度为0-150μmol.L-1时对酶有抑制作用;脲浓度低于3 mol.L-1或高于3 mol.L-1时,对碱性磷酸酶有变性失活作用.     

甘薯品种鉴定中指纹图谱的建立和应用

应用RAPD分析技术体系,构建了甘薯品种的指纹图谱.结果表明,在20μLPCR反应体积中,含有10mmol·L-1Tris-HCl(pH8.3)、50mmol·L-1KCl、2.5mmol·L-1MgCl2、100μmol·L-1dNTP、0.3μmol·L-1引物、40ng模板、1.5UTaq酶的反应体系适合甘薯RAPD分析.利用上述甘薯RAPD分析的指纹图谱,鉴定了10个供试品种.     

凤尾菇(Pleurotus sajor-caju)漆酶Lac4基因在黑曲霉中表达研究

研究将凤尾菇漆酶基因Lac4(Gene Bank登录号AJ507327.1)cDNA克隆到表达载体pSZHG10-6-2上,通过农杆菌介导法导入黑曲霉CICC2462中,筛选得到糖化酶基因glaA位点发生同源重组的黑曲霉转化子。摇瓶发酵后取上清液作SDS-PAGE检测、酶活测定及酶学性质和酶稳定性分析,研究重组漆酶对染料脱色影响。结果表明,成功分泌表达重组漆酶r Lac4,其活性在第9天时达酶活最高峰1 211 U·L~(-1);酶学性质研究发现,其最适反应温度为60℃、pH为4.5,且在10~30℃及pH 5.0~6.0稳定性较好。最适反应条件下,重组漆酶对ABTS的Km为0.142 mmol·L~(-1),最大反应速率Vm为0.693 mmol·L~(-1)·min~(-1)·mg~(-1);通过重组漆酶研究4大类染料脱色能力,发现ABTS为介体时该漆酶对三苯基甲烷类孔雀绿脱色可达44%,杂环类中性红、偶氮类甲基橙脱色率分别13%和11%,而对蒽醌类活性亮蓝(RBBR)降解作用不明显,重组漆酶对孔雀绿的脱色效率具有较大应用价值潜力,对含三苯基甲烷染料废水处理应用前景良好。     

亚硫酸钠、过氧化氢和尿素对河蟹N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活力的影响

以亚硫酸钠(Na2SO3)、过氧化氢(H2O2)和尿素为效应物,研究它们对河蟹N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)活力的影响.结果表明,Na2SO3、H2O2和尿素对酶活力有不同程度的抑制作用.Na2SO3和H2O2对酶的抑制均表现为可逆反竞争性类型,它们对游离酶的抑制常数(KI)分别为254.00和136.78 mmol.L-1;尿素对酶的抑制表现为可逆的混合型抑制,它对游离酶的KI和对酶—底物复合物的抑制常数(KIS)分别为379.02和1182.00 mmol.L-1.     

盐胁迫对柚、福橘种子萌发和幼苗生长的影响

通过水培和沙培试验,研究了盐胁迫对柚、橘种子萌发和幼苗生长的影响.结果表明:(1)20-40mmol·L-1NaCl胁迫不影响坪山柚和福橘种子萌发率、芽及胚根生长,但发芽时间延长.(2)NaCl浓度≥60mmol·L-1,显著降低坪山柚和福橘种子萌发率、芽及胚根长度,种子相对盐害率显著升高;相同浓度NaCl胁迫,坪山柚种子相对盐害率低于福橘,芽及胚根受抑制程度比福橘低.(3)NaCl浓度≥80mmol·L-1,坪山柚和福橘幼苗株高、叶面积、地上部干重、根部干重和根冠比(坪山柚根冠比在NaCl浓度为120mmol·L-1时)显著下降;同一浓度NaCl胁迫,坪山柚幼苗生长受抑制程度比福橘小.(4)坪山柚地上部及根部较低的Na+和Cl-含量及保持较高的根冠比是坪山柚幼苗耐盐胁迫的主要原因.     

金属离子对蜜蜂球囊菌几丁质酶活力的影响

探讨了不同金属离子对蜜蜂球囊菌几丁质酶活力的影响.结果表明:在0-100 mmol.L-1范围内,一价金属离子Na+、K+随离子浓度的增大,对几丁质酶活力的影响表现为先促进后抑制;在1-10 mmol.L-1范围内,二价金属离子Mg2+、Mn2+起抑制作用,Zn2+基本没有影响,Ca2+、Fe2+起促进作用;在1-10 mmol.L-1范围内,三价金属离子A l3+起促进作用,Fe3+基本没有影响.     

南林‘895’杂交杨组培苗对NaCl胁迫的生理响应

以南林‘895’杂交杨( Populus delotides × P. euramericana cv. ‘Nanlin895’)组培苗为试验材料,采用CK、25、50、75和100 mmol·L^-1 5种盐处理,研究盐胁迫对于‘895’杨叶片生理特性的影响。结果表明：(1) 25 mmol·L^-1盐处理可以促进‘895’杨的生长,100 mmol·L^-1盐处理抑制了‘895’杨的生长。(2)盐处理增加了过氧化氢(H₂O₂)与丙二醛(MDA)含量,在100 mmol·L^-1时处理20 d时最为显著。(3)随着盐浓度的升高,超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)、抗坏血酸过氧化物(APX)呈先增加后下降的趋势,APX的峰值出现在25 mmol·L^-1盐处理时,SOD、POD及CAT的峰值出现在50 mmol·L^-1盐处理时。在100 mmol·L^-1盐处理时,SOD、POD、CAT和APX活性显著低于对照。(4)随着盐浓度的升高,谷胱甘肽还原酶(GR)活性、还原型抗坏血酸(AsA)含量呈增加的趋势,100 mmol·L^-1盐处理时,GR活性、AsA含量显著高于对照。谷胱甘肽(GSH)含量在1 d与10 d处理时随着盐浓度的上升而增加,20 d处理时,GSH含量在100 mmol·L^-1盐处理较75 mmol·L^-1盐处理微微下降。(5)根长、茎长和MDA、H₂O₂、GSH和AsA呈负相关关系;MDA、H₂O₂与SOD、CAT、APX呈负相关关系,与POD、GR呈正相关关系;SOD、CAT、APX3种酶互为正相关关系,POD与GR、SOD、CAT呈正相关关系。由此可见,低盐浓度(25 mmol·L^-1)处理刺激了 ‘895’杨的生长,其通过提升抗氧化酶活性与抗氧化物质含量来维持活性氧平衡,避免受到毒害;高盐浓度(100 mmol·L^-1)处理抑制了抗氧化酶与非酶抗氧化物质的作用,‘895’杂交杨受到了伤害;APX是 ‘895’杂交杨叶片内抵御膜脂过氧化最为关键的酶。     

基因组DNA的提取及RAPD条件优化

提取了木奈基因组 DNA,并以其为模板对影响 RAPD扩增的重要参数进行优化试验 ,以期建立木奈 RAPD反应的优化体系 .结果表明 ,PCR扩增体系最佳条件是 :2 0 μL体积中 ,2 0 0 μmol·L- 1 d NTP、2 .5 mmol· L- 1 Mg Cl2 、0 .2 μmol· L- 1随机引物、2 5 .0 ng·μL- 1 DNA模板、1 -2 U Tag酶     

濒危植物七子花ISSR反应体系的优化

以濒危植物七子花基因组DNA为研究对象,测试了ISSR-PCR反应体系的最适退火温度,并利用单因素试验测试了镁离子浓度,dNTP浓度,模板DNA含量,Taq DNA聚合酶量、BSA浓度、引物用量、甘油浓度对反应结果的影响,可知七子花ISSR分析较适宜的扩增条件是:10μL PCR反应体积,1×Taq酶配套缓冲液(10 mmol.L-1Tris.HC l pH 9.0,50 mmol.L-1KC l,0.1%Triton X-100),2.0 mmol.L-1MgC l2,0.75 U Taq酶(上海华美公司),10 ng模板DNA,6 pmol引物(上海Sangon公司);dATP、dCTP、dGTP、dTTP各0.2 mmol.L-1.