番鸭小肠碱性磷酸酶的分离纯化及部分性质研究

分离纯化番鸭小肠中碱性磷酸酶,并对其酶促动力学性质进行研究.结果表明:该酶催化磷酸苯二钠水解反应时最适温度为45℃,最适pH为9.72,米氏常数(Km)为4.76 mmol.L-1.Mg2+对碱性磷酸酶活性有明显激活作用;Cd2+浓度小于0.4 mg.L-1时对碱性磷酸酶有激活作用,而浓度高于0.4 mg.L-1时则有抑制作用;Cu2+对碱性磷酸酶活性有明显抑制作用.     

金属离子对蜜蜂球囊菌几丁质酶活力的影响

探讨了不同金属离子对蜜蜂球囊菌几丁质酶活力的影响.结果表明:在0-100 mmol.L-1范围内,一价金属离子Na+、K+随离子浓度的增大,对几丁质酶活力的影响表现为先促进后抑制;在1-10 mmol.L-1范围内,二价金属离子Mg2+、Mn2+起抑制作用,Zn2+基本没有影响,Ca2+、Fe2+起促进作用;在1-10 mmol.L-1范围内,三价金属离子A l3+起促进作用,Fe3+基本没有影响.     

酵母菌碱性磷酸酶的分离及部分性质研究

提取酵母菌中的碱性磷酸酶,并对其性质做出分析.结果显示酶促反应最适pH值为10.3,初速度 V0=0.01367μmol/L·min,以对硝基苯磷酸二钠(pNPP)为底物测得Km=0.535mmol/L、Vm=0.01429μmol/L.较低浓度的Mg2 对酶有较强的促进作用,2mmol/L时达到641%,磷酸氢二钠对碱性磷酸酶有竞争性抑制作用.     

体外氧化μ-钙激活酶对牛肉肌原纤维蛋白降解的影响

在体外,将μ-钙激活酶用不同浓度的氧化剂(0μmol·L-1H2O2+0μmol·L-1Fe2+、300μmol·L-1H2O2+600μmol·L-1 Fe2+、400μmol·L-1 H2O2+800μmol·L-1 Fe2+、500μmol·L-1 H2O2+1 000μmol·L-1 Fe2+)氧化,并用其孵育分离纯化的牛肉肌原纤维蛋白,通过SDS-PAGE和Western blotting分析氧化的μ-钙激活酶对肌原纤维蛋白降解的影响。结果表明:随着氧化剂浓度的升高,μ-钙激活酶降解肌间线蛋白和肌钙蛋白T的能力减弱,同时相对分子质量为30×103肌钙蛋白T降解的产物减少。表明,μ-钙激活酶的氧化抑制其对部分肌原纤维蛋白的降解。     

根结线虫天敌真菌1号分离物碱性磷酸酶的功能团分析

为进一步了解碱性磷酸酶的特性,为深入研究DFRKN-1侵入线虫的机理及开发利用提供借鉴,研究了金属离子、有机溶剂和化学修饰剂对根结线虫天敌真菌1号分离物(Destroying fungi of root-knot nematode-1,DFRKN-1)碱性磷酸酶酶活力的影响.结果表明:Mg2+、Ba2+、K+在一定浓度下对该酶有明显的激活作用,Zn2+对该酶有抑制作用;甲醇、乙醇、乙二醇对该酶均有明显的抑制作用,且抑制程度相当;酶的必需功能团有组氨酸残基、赖氨酸残基等;半胱氨酸的疏基不是酶活性的必需基团,但二硫键在维持酶活性构象中有重要作用.     

黄牛肉中钙激活酶系统的动力学性质

【目的】阐明牛肉中钙激活酶系统的主要动力学特征。【方法】通过温度、时间、Ca2+浓度、反应时间、酶量、底物浓度等的变化,分析μ-钙激活酶,m-钙激活酶和钙激活酶抑制蛋白的动力学特性。【结果】随冷冻温度的升高和贮存时间的延长,钙激活酶系统活性都逐步降低,但冷冻处理可以显著降低钙激活酶抑制蛋白的活性,而钙激活酶对冷冻处理不太敏感;μ-钙激活酶达到最大活性一半时所需的Ca2+浓度为50μmol·L-1,m-钙激活酶为320μmol·L-1;在测定钙激活酶活性时,反应时间应控制在60min以内,酶活单位应小于0.45;在以酪蛋白为底物时,m-钙激活酶的Km值为3.185mg·mL-1,Vmax为0.015U·min-1,而μ-钙激活酶的Km值为5.320mg·mL-1,Vmax为0.017U·min-1。【结论】钙激活酶系统活性受贮藏温度和时间、Ca2+浓度、酶促反应时间、酶量、底物浓度影响明显。     

正交设计优化日本落叶松SRAP-PCR反应体系

利用正交设计L16(45)对日本落叶松SRAP-PCR反应体系的模板DNA、Mg2+、dNTPs、引物、Taq酶浓度五因素在四个水平上进行优化试验,PCR结果采用统计软件SPSS13.0进行分析,结果表明:各因素的不同水平对PCR反应结果都有显著的影响,其中模板DNA影响最大;筛选得到日本落叶松SRAP-PCR反应的最佳体系(20μL)为模板DNA浓度为120ng·20μL-1,dNTPs的浓度为0.15mmol·L-1,引物浓度为0.3μmol·L-1,Mg2+浓度为1.5mmol·L-1,Taq酶浓度为0.SU·2μL-1.这一优化体系的建立为今后利用SRAP标记技术对日本落叶松遗传多样性的研究奠定基础.     

金属离子·有机溶剂对黄鳝碱性磷酸酶的影响

[目的]探讨ALP的作用机理,促进黄鳝水产养殖。[方法]研究多种金属离子、有机溶剂等效应物对黄鳝内脏碱性磷酸酶(ALP)活性的影响。[结果]Na+、K+离子对酶活力影响不大,Mg2+和Ca2+离子对ALP有激活作用,Li+、Cu2+、Zn2+对ALP的酶活力则有抑制作用;酶催化磷酸苯二钠的产物HPO42-及产物类似物WO43-对酶均有较强的抑制作用,其中9.5 mmol/L的HPO42-使酶活力降低13%,而9.5 mmol/L的WO43-使酶活力降低34%,它们对酶活性的抑制类型均为竞争性抑制;有机溶剂甲醇、乙醇、乙二醇、异丙醇对ALP均有一定抑制作用,其抑制作用强弱顺序为异丙醇>乙醇>甲醇>乙二醇。[结论]该研究从动力学角度探讨各种效应剂对黄鳝内脏ALP活性的影响,为进一步阐明ALP作用机理提供了依据。     

金属离子对4PCA饲料酶中木聚糖酶活性的影响

[目的]为酶制剂的稳定性研究及其在饲料工业中的应用提供依据。[方法]选取K+、Na+、Ca2+、Mg2+、Zn2+、Mn2+、Cu2+和Fe2+8种金属离子,浓度设计为1×10-4、1×10-3、1×10-2mol/L,研究金属离子对4PCA饲料复合酶中木聚糖酶活性的影响。[结果]浓度为1×10-4mol/L时,8种金属离子对木聚糖酶活性无明显影响。浓度为1×10-3mol/L时,Cu2+使木聚糖酶活增至125.8%,Mn2+使木聚糖酶活降至54.5%。浓度为1×10-2mol/L时,Zn2+使木聚糖酶活增至121.5%,Mn2+、Cu2+、Fe2+分别使木聚糖酶活降至40.6%、67.7%、88.9%。[结论]K+、Na+、Ca2+、Mg2+对木聚糖酶活性无特别影响,Zn2+有激活作用,Mn2+、Fe2+有抑制作用,Cu2+随着浓度的增加有先激活后抑制作用,3种离子的抑制作用由大到小依次为:Mn2+>Cu2+>Fe2+。     

DFRKN-1碱性磷酸酶的提取纯化和主要理化性质研究

[目的]提取纯化根结线虫天敌真菌-1(Destroying fungi of root-knot nematode-1,DFRKN-1)的碱性磷酸酶,并对其主要理化性质进行研究。[方法]以DFRKN-1为提酶材料,经正丁醇提取,硫酸铵分级沉淀分离,透析获得酶的粗提取液,用SephadexG-150凝胶过滤柱层析纯化,获得纯化碱性磷酸酶,并测定纯化碱性磷酸酶的理化性质。[结果]酶纯度达到电泳纯,提纯倍数达到15.7倍,比活力达5333 U/mg;该酶的最适pH值为8.9,最适温度为43℃,米氏常数为6.82 mmol/L;K+、Ba2+、Mg2+对该碱性磷酸酶的活性均有激活作用,甲醛、草酸、酒石酸对该碱性磷酸酶均有抑制作用。[结论]试验结果可为进一步深入研究DFRKN-1提供参考。     

普通菜豆SSR反应条件的优化

在作物育种中,SSR是主要农艺性状分子标记及标记辅助育种的一项重要技术。以紫花、八月绿、将军、73-8、96-9、9z622等6个普通菜豆品种为试材,采用改良的SDS法提取了高质量的基因组DNA。为建立适宜的SSR反应体系,对影响SSR-PCR扩增的模板DNA浓度、Mg~(2+)的用量、Taq DNA聚合酶浓度、dNTPs浓度、退火温度等因素进行了优化。结果表明,在25μLPCR反应体系中,DNA模板的最适浓度为0.8ng·μL~(-1),Mg~(2+)的优化浓度为1.5mmol·L~(-1),Taq DNA聚合酶的最适浓度为0.05μmol·(μL·min)~(-1),dNTPs的最适浓度为0.2mmol·L~(-1)。     

离子选择电极直接连续测定No_3~--N和NH_4~+-N的研究——Ⅲ 植物分析

提出离子选择电极直接连续测定植物中的 NO_3~-—N 和 NH_4~+—N 的新方法。研究了此法的检测下限、线性范围和共存离子的干扰及消除方法;并成功地用一种提取液同时定量地提取了植物中的 NO_3~-—N 和 NH_4~+—N,分析测定了8种蔬菜和8种树叶中的含量。本法检测下限:NO_3~-:1.26×10~(-6)mol·L~(-1),NH_4~+:4.47×10~(-7)mol·L~(-1)。线性范围:NO_3~-:10~(-1)—10~(-6)mol·L~(-1),NH_4~+:10~(-1)—10~(-7)mol·L~(-1)。干扰离子主要有(?),Br,Cl~-,HCO_3~-,NO_2~-:和 Hg~(2+),Mg~(2+),引起干扰的最低浓度依次为:10~(-7),10~(-6),10~(-4),10~(-3),和10~(-5)mol·L~(-1)。当 Cl~-,NO_2~-,HCO_3~-,浓度等于10~(-3)mol·L~(-1)时,干扰顺序为:(?)>Br~->NO_2~->Cl~->HClO_3~-,而当 Cl~-,NO_2~-,HCO_3~-小于10~(-3)mol·L~(-1)时,则干扰顺序为:I~->Br~->Cl~->HCO_3~(-1)>NO_2~-。在本实验条件下,加入 Ag_2SO_4(1.0×10~(-3)mol·L~(-1)),可消除1000倍的 Cl~-,HCO_3~-,100倍的 NO_2~-,0.1倍 I~-,Br~-,对 NO_3~-的干扰,加入 EDTA(2.0×10~(-2)mol·L~(-1)),可消除10倍的 Mg~(2+),Hg~(2+)对 NH_4~+的干扰,并使阴离子干扰减弱。本法标准样分析结果相对误差 NO_3~-<2.2%,NH_4~+,-2.0%～2.2%;变动系数(n=4)NO_3~-:<1.7%NH_4~+:<1.7%;16种植物样分析结果平均回收率(n=2)NO_3~- 96.5%～103.5%,NH_4~+:96.0%～103.2%。     

黄藤ISSR反应体系的条件优化

在利用ISSR技术对黄藤进行分子生物学研究过程中,对影响PCR扩增效果的一些因素,如模板DNA浓度、Mg2+浓度、dNTPs浓度、Taq DNA聚合酶浓度、引物浓度以及退火温度等指标进行筛选和优化,获得用于黄藤ISSR-PCR分析最适宜的PCR反应条件:20μLPCR反应体积中含有1×缓冲液,20 ng模板DNA,2 mmol.L-1MgC l2,100μmol.L-1dNTP,1.5 U TaqDNA聚合酶,0.4μmol.L-1引物,2%甲酰胺,0.5 mmol.L-1亚精胺.扩增程序为:94℃预变性5 m in;再35个循环:94℃30 s,52℃45 s和72℃1.5 m in;最后72℃延伸7 m in.     

矿质元素对北虫草继代培养中菌落形态的影响

研究矿质元素对北虫草继代培养中菌落类型的影响,旨在探讨优型菌落保持代数最长的矿质元素配方.采用正交试验,将北虫草优良菌株L_(20)在不同矿质元素培养基上进行12次继代培养.结果表明:菌株L_(20)在不同培养基中继代培养后形成7种菌落类型,有子实体形成能力的菌落为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅴ型,其中Ⅰ型菌落产量最高,Ⅲ型居中,Ⅱ型最低,Ⅴ型形成子实体均为畸形:Ⅳ、Ⅵ、Ⅶ型无子实体形成能力.各类型菌落在不同培养基中的分布规律是:子实体产量较高的Ⅰ、Ⅲ型菌落主要分布在前10代;产量较低的Ⅱ型菌落分布存前4代;子实体为畸形的Ⅴ型和无子实体形成能力的Ⅳ、Ⅵ、Ⅶ型菌落主要分布在4代以后.保持优型菌落--Ⅰ型最为稳定的矿质元素配方为1.0g·L~(-1)k、0g·L~(-1)Mg~(2+)、0.02g·L~(-1)Ca~(2+)、0μg·L~(-1)Mn~(2+)、25μg·L~(-1)或375μg·L~(-1)Zn~(2+).可见,Ⅰ型菌落产量最高,为北虫草优型菌落.其主要形态特征为:菌落颜色较深呈橘黄色、菌丝气生性中等、菌落质地为致密绒毛状,有同心纹、存继代培养中有角变现象.1.0g·L~(-1)K~+、0.02g·L~(-1)Ca~(2+)、250μg·L~1或375μg·L~(-1)Zn~(2+)对Ⅰ型菌落起到延缓退化的作用,而Mn~(2+)、Mg~(2+)会促进其退化.     

渗透胁迫下钙对小麦胚芽鞘和根系生长的影响

 以精选冬小麦(Triticum aestivum L.)4185种子为试验材料，采用CaCl2、EGTA、LaCl3及Verapamil配制的溶液处理萌发24 h的小麦根系，研究其胚芽鞘及根系对渗透胁迫的不同反应。结果表明，PEG-6000（20%）诱导的渗透胁迫下，低浓度Ca2+（10-6～10-3 mol·L-1）处理小麦根系时，不同浓度处理间胚芽鞘及根系的生长无显著差异，10-2 mol·L-1的Ca2+则抑制胚芽鞘和根系的生长；EGTA（1、5、10 mmol·L-1）、LaCl3（0.5、1 mmol·L-1）和Verapamil（250、500 μmol·L-1）处理根系时，均抑制了胚芽鞘和根系的生长，这种抑制效应与提高过氧化物酶（POD）活性有密切关系。表明在渗透胁迫下，小麦对缺钙更敏感，高浓度Ca2+以及减少细胞外Ca2+和阻断Ca2+的运转，均对生长有抑制作用。     

黄麻DNA提取与RAPD反应体系的建立

以假黄麻、假长果、越南圆果 (圆果种黄麻 )等为材料 ,研究了黄麻 DNA的提取方法以及对 RAPD分析的影响因素 ,包括模板浓度、Mg2 + 、d NTP、引物和 Taq酶等 ,建立了适于黄麻种质 RAPD分析的 PCR反应体系 .即在 2 5μL反应体积中 ,Tris- HCl(p H8.0 )、KCl、Mg Cl2 、d NTP、随机引物的浓度分别为 10 mmol· L-1、5 0mmol·L-1、2 .5 mmol· L-1、15 0 μmol· L-1、0 .2 μmol· L-1,并含有 30 - 60 ng DNA与 1.5 U Taq DNA聚合酶 .扩增程序为 :94℃预变性 5 min;然后 94℃ 30 s,37℃ 1.5 min,72℃ 1min,4 1个循环 ;最后 72℃延伸 7mi     

健康鸵鸟(1～6月龄)38项血清生化参数的测定

建立健康鸵鸟（Ｓｔｒｕｔｈｉｏｃａｍｅｌｕｓ）的血清全套生化参数,采用日本岛津ＣＬ ７２００型全自动生化分析仪,对３０只１～６月龄健康鸵鸟３８项血清生化参数进行测定．结果如下：（１）血清蛋白参数／ｇ·Ｌ－１：ＴＰ３１．８２,ＡＬＢ１５．４１,ＧＬＯ１６．１８（ＡＬＢ／ＧＬＯ０．９５）,Ａｐｏ Ａ１０．１２,Ａｐｏ Ｂ０．１４（Ａｐｏ Ａ１／Ａｐｏ Ｂ０．８０）;（２）血清酶参数／ｕ·Ｌ－１：ＡＬＴ１４．３,ＡＳＴ４５６．８（ＡＬＴ／ＡＳＴ０．３８）,ＧＧＴ３．４,ＬＤＨ１６０３．１,ＣＫ３９３６．８,ＣＫ ＭＢ１４３０．８,ＡＭＹ３４１５．１,ＡＫＰ５７１．７,ＨＢＤＨ３７３．３;（３）血清糖、蛋白质、脂类及其代谢产物参数／ｍｍｏｌ·Ｌ－１：ＧＬＵ９．４１,ＴＲＩ１．９７,ＢＵＮ０．９４,ＬＤＬ２．１９,ＨＤＬ１．５４,ＣＨＯ３．５８（ＨＤＬ／ＣＨＯ０．４１）;ＣＲＥ１２．６５μｍｏｌ·Ｌ－１（ＢＵＮ／ＣＲＥ０．０６３）,ＵＡ５０５．２４μｍｏｌ·Ｌ－１,ＴＢＡ３７．１μｍｏｌ·Ｌ－１,ＴＢＩＬ５．３２μｍｏｌ·Ｌ－１,ＤＢＩＬ３．２１μｍｏｌ·Ｌ－１,ＩＢＩＬ２．０８μｍｏｌ·Ｌ－１,ＴＴＴ４．１２ｕ;（?     

芽孢杆菌L4菌株角蛋白酶的酶学性质研究

采用室内实验方法,对芽胞杆菌L_4菌株产生的角蛋白酶进行了系列的酶学性质研究.结果表明,以角蛋白溶液为底物时该酶的最适酶促反应温度为40℃,最适酶促反应pH为7.0,其Km值为1.88 mmol·L~(-1),Vmax为2.72×10~(-2)mmol·L~(-1)·s~(-1).利用不同的蛋白酶抑制剂进行酶活性抑制实验,发现该酶受邻啡罗啉和EDTA的抑制,推测该酶可能是一种含Zn~(2+)的金属蛋白酶.微量元素对该酶活力的影响显著,Ca~(2+)和Mg~(2+)对酶活力有促进作用,高浓度的Fe~(2+)和Cu~(2+)明显抑制角蛋白活力.     

圆果黄麻成熟叶片总DNA提取及SRAP扩增体系的建立与优化

采用改良的CTAB法从圆果黄麻成熟叶片中提取基因组DNA,对DNA进行电泳检测、含量测定和SRAP分析,并对黄麻SRAP-PCR反应体系中主要影响因子进行了优化,建立了最佳反应体系.结果表明,改良的CTAB法能够提取高质量的DNA,DNA纯度和完整性都较好,经紫外分光光度计测定,D260nm/D280nm均在1.7-1...