pagP基因缺失对禽致病性大肠埃希菌外膜特性的影响

【目的】研究pagP基因缺失对禽致病性大肠埃希菌(Avian pathogenic Escherichia coli,APEC)外膜特性的影响。【方法】采用最低抑菌浓度(MIC)试验探索pagP基因缺失对菌株生物被膜通透性的影响;通过菌体自聚合试验、外膜疏水性试验以及生物被膜形成条件,分析pagP基因缺失对生物被膜形成能力的影响,并在扫描电镜下观察细菌生物被膜形态。【结果】pagP基因缺失后,菌株MIC降低,菌株的外膜通透性增强且菌体自聚合能力显著增强(P0.01),其中红霉素和氨苄西林的MIC分别为7和20μg/mL,菌株自聚合能力为87.89%;pagP基因缺失对菌株外膜疏水性无显著影响,疏水性仅为5.337%;随着细菌在LB培养基中静置培养时间的延长,生物被膜形成量增多;pagP基因缺失株的生物被膜形成能力高于野生株。【结论】pagP基因缺失可使APEC外膜特性发生改变,生物被膜形成能力增强。     

A25Δ43K OMP基因缺失株和亲本株对坏死杆菌生物被膜和耐药性影响的比较与分析

坏死杆菌（Fusobacterium necrophorum,F.necrophorum）是一种严格厌氧的革兰阴性菌，感染动物可引起反刍动物腐蹄病、肝脓肿、犊牛白喉、乳房炎和子宫内膜炎等疾病。生物被膜的存在是造成细菌持续感染的重要原因之一。细菌黏附素在生物被膜形成初期的不可逆附着阶段起重要作用。43K OMP是坏死杆菌重要的外膜蛋白之一，具有介导坏死杆菌黏附的功能，43K OMP对生物被膜形成是否产生影响尚未有人报道。通过对坏死杆菌亲本株A25和缺失株A25Δ43K OMP的生物被膜初期不可逆附着阶段细菌数、生物被膜成熟时间、生物被膜形态和耐药性进行检测。结果显示，坏死杆菌缺失43K OMP基因对生物被膜成熟时间无显著影响，会导致成熟生物被膜含量显著增多，接种24 h不可逆附着阶段细菌含量显著减少，生物被膜形态更早出现聚集性菌落和沟壑状结构，对卡那霉素、庆大霉素、安普霉素和磺胺嘧啶的耐药性减弱。43K OMP基因缺失促进坏死杆菌形成生物被膜，抑制坏死杆菌对氨基糖苷类药物的耐药。为坏死杆菌43K OMP基因的功能研究和坏死杆菌病的治疗提供新的研究思路。     

革兰氏阴性细菌外膜蛋白耐药功能及其抑菌策略研究进展

当前细菌耐药的形势日益严峻,已引起全世界的广泛关注.革兰氏阴性细菌的耐药性普遍比革兰氏阳性细菌强,这与镶嵌或锚定在革兰氏阴性细菌外膜上的蛋白耐药功能密切相关.目前已知外膜蛋白能够阻碍抗生素通过外膜以及将抗生素排出胞外等方式使细菌产生耐药性,但具体的耐药与调控机制还有待进一步研究.近年来,随着现代科学技术的不断发展,特别是结构生物学、分子生物学与蛋白质组学在该领域的充分运用,有关外膜蛋白功能的研究和技术取得了很大的进步.本文对近年来国内外在细菌外膜蛋白的结构与耐药机理、耐药新功能及新机制等方面的研究进展进行了概述,为揭示革兰氏阴性菌耐药形成机制奠定基础.     

土木香提取物对金黄色葡萄球菌分选酶A抑制作用

金黄色葡萄球菌耐药性较为严重,细菌性分选酶A在细菌细胞壁表面毒力蛋白锚定过程中发挥着重要作用,是细菌性感染防治的重要潜在靶点。研究通过酶活抑制试验、细胞外基质黏附试验、生物被膜形成试验和细菌侵袭试验进行了分选酶A抑制剂筛选和活性分析。结果表明:土木香提取物可显著抑制金葡菌分选酶A活性,土木香提取物处理后可显著降低金葡菌与细胞外基质黏附及金葡菌生物被膜形成。在金葡菌与宿主细胞共感染体系内加入土木香提取物后可显著降低细菌对宿主细胞的侵袭作用。说明土木香提取物可通过靶向分选酶从而抑制金葡菌的致病力,是潜在的抗金葡菌感染先导复合物。     

泡菜中产细菌素的乳酸菌分离研究

实验从泡菜中分离出一株有抑制革兰氏阳性细菌、革兰氏阴性细菌作用的菌株,经鉴定为乳酸菌中的肠膜明串珠菌,该抗菌物质对蛋白水解酶敏感,耐热并在较宽的pH值范围内保持活性.在排除是有机酸和过氧化氢后,初步认为该菌产生的抗菌物质为抗菌肽,即细菌素.     

猪凝血酶C端衍生肽抑菌活性和膜作用机制研究

猪凝血酶C末端富含正电荷和疏水性氨基酸残基,通过结构参数分析获得截短肽RD27,测定相应指标。探讨猪凝血酶C末端肽段抑菌活性及作用机制。结果表明,RD27对革兰氏阴性和阳性菌最小抑菌浓度为4~8μmol·L~(-1),对血细胞最小溶血浓度为45.9μmol·L~(-1),显示较强的抑菌活性和较低的溶血活性,治疗指数为10,大于蜂毒素。RD27在模拟膜环境中呈现α-螺旋结构,优先与模拟细菌脂质体作用,使E.coli UB1005膜产生去极化作用,并存在时间和剂量依赖效应。揭示其膜作用机制,拓宽抗菌肽设计方法,探究凝血与免疫系统联系。     

鼠李糖乳杆菌(ATTC 53103)产细菌素的研究

试验对鼠李糖乳杆菌LGG无细胞发酵上清液进行了系统研究,通过中和以及酶解的方法,排除了其中的有机酸以及过氧化氢的干扰,证明了LGG无细胞发酵上清液可以产生细菌素,并研究了LGG无细胞发酵上清液中细菌素的部分特性。该细菌素抑菌广谱,可抑制多种革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌,对热(121℃,30min)和pH值(pH2.0～10.0)稳定,可被多种蛋白酶,如胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、α-糜蛋白酶和蛋白酶K失活,不能被过氧化氢酶失活。     

人源Cathelicidins家族抗菌肽LL-37生物学功能和分子修饰研发进展

抗生素过度或不当使用导致细菌耐药性增强、环境生态恶化等问题日益严重。抗菌肽（Antimicrobial peptides,AMPs）因具有广谱抗菌活性及不易产生耐药性的膜溶解式抑菌机理被广泛研究。作为人体中唯一的Cathelicidins家族AMP,LL-37具有抗菌、抗病毒、抗生物被膜和免疫调节等功能，可帮助机体有效预防炎症、抵御病原体入侵，开发潜力巨大。通过综述LL-37表达和已发现的生物学功能，梳理其产业化进程中的阻碍和分子改造策略，以期为基于LL-37的新药临床、非营养性饲料添加剂创制和表面防腐剂研发提供新思路。     

抗菌肽的分类、作用机制与应用研究

抗生素的不合理使用会导致细菌产生耐药性,寻找传统抗生素的潜在替代品成为当前研究重点。抗菌肽因其独特的抗菌机制,不易产生耐药性,且具有抗细菌、真菌、病毒、寄生虫和肿瘤细胞等广谱生物活性,在多个领域得到应用。本文介绍了抗菌肽的分类、作用机制以及在食品加工等领域的应用情况等,为抗菌肽的相关研究提供参考。     

细菌抗菌肽的研究及其应用前景

随着病原微生物耐药性的增强,许多病原性疾病越来越难以治疗,加上近年来新抗生素的研究进展缓慢,使这一情况更加突出。由于抗菌肽在控制耐抗生素病原体方面具有巨大的潜力,使得抗菌肽成为抗生素的理想替代品。实践表明,微生物法获取抗菌肽用于工农业生产是最科学、最经济的途径。主要概述了细菌来源的抗菌肽的分类、抑菌活性,作用机理及其应用前景。     

家蝇幼虫抗菌肽MDL-2干扰细菌功能的初步研究

研究了家蝇幼虫抗菌肽MDL-2对细菌细胞壁的溶解作用、细胞膜渗透性和代谢的影响.抗菌肽MDL-2在抗菌过程中首先与细菌的细胞壁相互作用,使其破裂.菌肽对革兰氏阴性细菌大肠杆菌的细胞壁的作用有浓度依赖性,而对革兰氏阳性细菌金黄色葡萄球菌,MDL-2在较低的浓度时即具有破坏细胞壁的作用;抗菌肽MDL-2与金黄色葡萄球菌的细胞膜作用曲线呈现典型的S型,有较强的协同效应,并随着作用时间的延长细胞的渗透性增强;抗菌肽对细菌的代谢功能有较强的干扰作用,阻碍菌体的生命活动,加速菌体死亡.     

茶叶抗菌肽粗提物的抑菌活性及其对冷却肉保鲜的影响

为了制备茶叶抗菌肽粗提物并将其应用在冷却肉保鲜上,以龙井茶叶为材料提取茶叶抗菌肽粗提物,采用平板抑菌法检测茶叶抗菌肽粗提物的抑菌活性,通过细胞膜渗透率、磷离子泄漏、DNA结合和透射电子显微镜等指标分析茶叶抗菌肽粗提物对细菌的作用机制,通过微生物菌落数量和pH值两个指标评价茶叶抗菌肽粗提物对冷却肉的防腐保鲜效果。结果表明:提取的茶叶抗菌肽粗提物主要包括分子量小于18.4 ku的多肽,其对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌均具有抑菌活性,可造成细菌细胞膜渗透率增强,引起细菌细胞外磷离子浓度增加,造成细菌细胞膜不完整、出现破损,但不与细菌基因组DNA结合。茶叶抗菌肽粗提物可以显著抑制冷却肉中微生物的生长,延缓pH值上升,延长保鲜时间,对冷却肉具有防腐保鲜作用,具有较高的开发利用价值。     

抗菌肽的研究进展及在农业中的应用

具有广谱高效杀菌活性的小分子多肽类物质———抗菌肽,是机体非特异性免疫系统的重要组成部分。据研究表明,抗菌肽对细菌、部分真菌、原虫、病毒、肿瘤细胞都具有杀伤作用。从目前国内外在抗菌肽研究热点着手,分析阐述了抗菌肽的分类、作用机理、抗菌肽基因工程,及抗菌肽在农业中的应用,并展望了利用植物生物反应器生产抗菌肽的可能性及应用前景。     

抗菌肽的结构特点·作用机理及其应用前景

抗菌肽是一种广泛存在于生物界的抵抗病原微生物入侵的重要防御分子,是生物先天免疫的重要防御物质,不仅具有广谱抗菌活性和抗病毒、抗真菌、抗寄生虫及抗肿瘤等生物活性,还具有随物种适应环境而产生的结构多样性以及区别于传统抗生素杀菌机理的独特性,且不易产生耐药性,是一类极具潜力的肽类抗生素。抗菌肽对靶细胞表现出选择性,有助于设计出活性更高的新型肽类抗生素。从抗菌肽的作用机制、结构特点、新型抗菌肽分子设计、抗菌肽基因工程等方面阐述了抗菌肽研究的新进展。     

鸭抗菌肽Cathelicidin的衍生物设计及抑菌机制研究

鸭抗菌肽Cathelicidin分子[Cath(1-20)]富含疏水性氨基酸及正电荷,通过人工方法设计合成Cath(1-20)的截短肽衍生物,筛选新型安全Cath(1-20)衍生肽,探讨其作用机制。结果表明,与母肽Cath(1-20)相似,三种衍生肽Cath(5-20)、Cath(4-20)、Cath(3-20)均具有明显广谱抑菌活性,MIC值在1~8μmol·L~(-1)范围内,但仅Cath(5-20)溶血及细胞毒性明显降低,治疗指数达19.5,显著高于Cath(1-20)、Cath(4-20)及Cath(3-20)。Cath(1-20)及其衍生肽可破坏E.coli UB1005的内膜完整性,产生去极化作用,并存在时间和剂量依赖效应;透射电镜结果显示Cath(1-20)及Cath(5-20)可破坏细菌细胞膜。研究证实氨基端的色氨酸对鸭抗菌肽Cath(1-20)溶血及细胞毒性起关键作用,其作用靶点主要为细菌细胞膜。     

抗茵肽在畜牧业上的应用研究及问题分析

抗菌肽种类繁多,分布广泛,是生命体先天性免疫应答的产物。抗菌肽的广谱抑菌、杀菌功能使其成为潜在的新型抗菌药物。近年来在我国动物生产中的应用研究表明,抗菌肽能够提高畜禽健康状况和生产性能,同时有益调节畜禽机体的免疫功能,有效预防和治疗畜禽多种疾病。抗菌肽与抗生素的对比研究表明,抗菌肽用量少、无残留。而作为新型抗菌剂开发应用之前,有些问题我们应认真考虑,尤其是抗菌肽有可能出现的细菌耐药性。     

抗菌肽在大肠杆菌中的融合表达策略

抗菌肽抗菌谱广、活性稳定,具有与抗生素不同的抗菌机制,在抑杀病原微生物的同时不易产生耐药性,在免疫调节和抗感染方面具有巨大的发展潜力,能够发展为取代抗生素的新型药剂,在食品、饲料、畜禽养殖等领域也具有重要的应用价值。基因工程技术是降低抗菌肽生产成本的主要方式,其中融合表达在提高抗菌肽产量方面起到了重要作用。综述了抗菌肽在大肠杆菌中融合表达的国内外研究进展,探讨了抗菌肽在大肠杆菌中融合表达的策略,并对高通量融合表达抗菌肽提出了建议。     

黄粉虫不同生长阶段诱导抗菌肽的效果分析

分析黄粉虫不同生长阶段所提取的抗菌肽抗菌活性及抗菌肽组分差异.通过针刺使黄粉虫各虫态感染大肠杆菌产生抗菌肽,经过研磨、离心等步骤提取抗菌肽,用药敏试验检测这些抗菌肽的抗菌效果,并用聚丙烯酰胺凝胶电泳试验分离其蛋白及多肽条带.药敏试验的结果表明处于蛹期和成虫期的黄粉虫所产生抗菌肽的抑茵效果不如处于幼虫期所产生抗菌肽的抑茵效果明显,但差异不显著;电泳图谱显示黄粉虫幼虫有8条带,成虫有5条,蛹有5条,说明黄粉虫蛹期和成虫的抗菌肽种类较幼虫期的少,但是它们都还有更多的小肽段未被分离开.     

22种中草药对畜禽常见肠道病原菌的体外抑菌作用

对22种中草药对常见畜禽肠道病原菌的抗菌活性进行了定量分析.采用水煎法提取中草药有效成分,通过体外抑菌试验检测不同提取成分的抑菌活性,确定其体外最小抑菌浓度(MIC).结果表明:对9种常见肠道病原菌(大肠杆菌(O2、O8、O78、O139)、猪伤寒沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌、鸡伤寒沙门氏菌、鸡白痢沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌)抑菌圈最大的为黄芩、五倍子、乌梅,其抑菌圈直径在15～25mm,其次为诃子、大黄、草河车,其抑菌圈直径在10～20mm;五倍子、诃子、黄芩、乌梅最小抑菌浓度在0.031～0.125g/mL,石榴皮、地榆、黄连、大黄、艾叶最小抑菌浓度在0.031～0.250g/mL.说明22种中草药对上述细菌具有不同程度的抑菌效果,尤以五倍子、诃子、黄芩、地榆、乌梅较其他中草药的抑菌效果更佳(P<0.05).     

抗菌肽及其分子改造研究进展

抗菌肽是一种参与生物体抵抗外界病原体侵染的功能性多肽,从低等细菌到高等动物广泛存在,且表现出较广的抗菌谱,对抗菌肽的功能及相关分子改造进行综述,并展望了其在农业和医药领域的应用前景。