海洋产几丁质酶菌株的筛选及发酵条件优化

通过透明圈法初筛、DNS复筛,从大连近海海域的海泥中分离出一株高产几丁质酶的菌株,经初步鉴定为扩展短杆菌(Brevibacterium linens).采用不同碳源、氮源、温度、pH值等对培养条件进行了优化及正交试验.结果表明:该菌产酶最适条件是在28℃、pH7.0、蛋白胨1g/L、胶体几丁质10g/L、NaCl 20g/L条件下,几丁质酶活力可达0.508 U/mL,比优化前其产酶活力提高了9倍.     

产组成型几丁质酶菌株的筛选及产酶条件优化

利用两次平板透明圈筛选,结合液体培养,从土壤中分离出1株产几丁质酶细菌,命名为CCB-1.该菌株产几丁质酶不需要几丁质诱导,而且高浓度的葡萄糖不抑制该菌株产几丁质酶,因此该菌株是组成型产几丁质酶.形态学观察和生理生化测定结果表明CCB-1是浸麻芽孢杆菌(Bacillus macerans).在250 mL摇瓶中研究了氮、葡萄糖浓度、pH值、培养温度、几丁质类型和培养时间对CCB-1生长及产酶的影响.CCB-1菌最适产酶条件为:温度37 ℃;pH 6～pH 7之间;起始葡萄糖浓度8g/L;0.4%的有机氮(如蛋白胨、牛肉膏、酵母膏);0.3%的胶体几丁质或细粉几丁质.CCB-1在优化培养条件下振荡培养60 h产酶最高,达4.23 U/mL.     

哈茨木霉高产几丁质酶菌株的筛选及产酶条件研究

通过氮离子注入法诱变哈茨木霉(Trichoderma harzianum)野生菌,再以透明圈法对平板培养菌进行筛选,用DNS法测定液体培养菌的酶活,从中筛选出1株产几丁质酶能力高的哈茨木霉菌株H-13,并通过单因素试验和正交试验优化该目标菌株的发酵条件.单因素试验结果表明,添加1.0%蛋白胨时产酶量最高,1.0%胶体几丁质对菌体产几丁质酶的诱导性最强,初始pH 5.5、培养96 h时产酶量较高.正交试验表明,H-13以1.0%蛋白胨为氮源、0.5%胶体几丁质为碳源,在初始pH 5.0的培养基中培养96 h时,发酵液中的几丁质酶活可达到731.69 U?mL-1,比同样条件下的野生菌株酶活力提高1倍.     

产组成型几丁质酶菌株的筛选及产酶条件优化

利用两次平板透明圈筛选,结合液体培养,从土壤中分离出1株产几丁质酶细菌,命名为CCB-1.该菌株产几丁质酶不需要几丁质诱导,而且高浓度的葡萄糖不抑制该菌株产几丁质酶,因此该菌株是组成型产几丁质酶.形态学观察和生理生化测定结果表明CCB-1是浸麻芽孢杆菌（Bacillus macerans）.在250 mL摇瓶中研究了氮、葡萄糖浓度、pH值、培养温度、几丁质类型和培养时间对CCB-1生长及产酶的影响.CCB-1菌最适产酶条件为：温度37℃;pH 6-pH 7之间;起始葡萄糖浓度8g/L;0.4%的有机氮（如蛋白胨、牛肉膏、酵母膏）;0.3%的胶体几丁质或细粉几丁质.CCB-1在优化培养条件下振荡培养60 h产酶最高,达4.23 U/mL.     

几丁质降解酶产生菌的分离及其产酶条件的初步研究

从土壤中分离出两株几丁质降解能力较强的细菌,经初步鉴定,分别归于假单胞菌属和短杆菌属,命名为Pseudomonas sp. ww 和Brevibacterium sp. yy.对这两菌株进行的液体摇瓶发酵试验表明,在肉汤培养基中,yy菌株16 h进入稳定期,ww菌株20 h进入稳定期,而在几丁质培养基中两菌株要培养36 h才进入稳定期;在几丁质培养基中对酶活力的测定结果表明:yy菌株培养35 h酶活达最高,为8.3 U/mL,ww菌株培养30 h时酶活最高,达13.3 U/mL.用半量肉汤培养基摇瓶培养10 h后加入0.2%胶体几丁质的补料分批培养方式,可使酶活高峰时间提前5 h,且酶活力也有所增加.yy菌株在30 h酶活达最高,为8.4 U/mL,ww菌株在25 h酶活达最高,为15.6 U/mL,若加入的是2%的胶体几丁质,则对菌体,特别是对yy菌株的生长有抑制作用.实验还发现两菌株的几丁质培养物对金黄色葡萄球菌有明显的抑制作用,对大肠杆菌也有一定的抑制作用,而对黑曲霉和黑根霉几乎没有抑制作用.     

高产几丁质酶高温紫链霉菌的筛选和发酵条件优化

从土壤中筛选得到1株高产耐热几丁质酶的嗜热菌株Z16,对其进行鉴定及产酶发酵条件优化研究.采用分子生物学结合形态学方法鉴定该菌为高温紫链霉菌(Streptomyces thermoviolaceus).通过发酵培养基组分及培养条件的优化,得到了最佳发酵产酶培养基:胶体几丁质5 g/L,粉末几丁质10 g/L,酵母浸粉1.25 g/L,黄豆粉3.75 g/L,吐温20 4 g/L.最佳培养条件为:接种量5％,45℃培养60 h.在优化后的发酵条件下,该菌株最大产酶水平达5.5 U/mL,比优化前产酶量提高了4.2倍,较高的产酶量为进一步研究该菌所产几丁质酶的纯化和性质提供了基础.该菌具有较好的应用前景.     

菊粉酶酶源诱变菌株产酶发酵条件的优化

为提高黑曲霉(Aspergillus niger)A24诱变菌株产菊粉酶的活力,采用单因子试验方法对该菌株的最佳产酶条件进行了优化。结果表明:该菌株在以3%菊芋汁为碳源、2%牛肉膏和0.5%(NH4)2HPO4为复合氮源的培养基中,初始pH值6.0,30℃培养72 h的条件下,所得的发酵液中酶活力最高,达到35.21 U/mL,比优化前提高了18%,表明该菌株有一定的应用潜力。     

凝结芽孢杆菌产β-半乳糖苷酶条件的优化

从土壤中筛选得到1株高产β-半乳糖苷酶的凝结芽孢杆菌,研究该菌产β-半乳糖苷酶的发酵条件。结果表明:产酶适宜的培养基配方为蔗糖10 g/L,麦芽糖5 g/L,可溶性淀粉5 g/L,酵母提取物6.7 g/L,胰蛋白胨13.3 g/L,KCl 1.5 g/L;产酶的最适发酵温度为45℃。培养48 h总酶活力达到7.1 U/mL,60 h胞外酶活力最高为3.0 U/mL。胞外酶的最适pH为6.0,最适温度65℃。该酶能够完全水解乳糖,可适用于无乳糖乳制品的生产。     

爪哇正青霉Q-5产几丁质酶发酵条件的研究

通过单因素试验对爪哇正青霉Q-5产几丁质酶的条件进行了研究。结果表明:0.5%(w/v)几丁质粉末对爪哇正青霉Q-5产几丁质酶诱导性最强;pH值在5.0～7.0的范围内酶活力最稳定,pH值为4.0时,酶活力最低;金属离子Mn2+和Cu2+对爪哇正青霉Q-5产几丁质酶有明显的促进作用,而Fe3+和Ca2+则完全抑制几丁质酶的活性;以蛋白胨为氮源时,酶的活力最高可达24 U;吐温-80作为表面活性剂能显著提高几丁质酶活性。     

产碱性纤维素酶菌株的筛选及酶学性质研究

从采集的造纸厂土样中,筛选出l株产碱性纤维素酶酶活力较高的菌株H-1,经鉴定,该菌株为革兰氏阳性芽孢杆菌属。发酵产酶条件和酶学性质研究表明H-1菌株的适宜发酵条件为:接种量为6%,pH 9.0,温度为37℃,此条件下的酶活力可达8.69 U/mL,是初始酶活力(2.93 U/mL)的3倍。该酶最适反应温度为40℃,最适反应pH 9.0。在25～55℃,pH 7.0～11.0仍能保持60%以上的酶活力,能较好地满足日常洗涤的环境要求。     

培养基组成对金龟子绿僵菌M_(337)菌株稳定性的影响

对金龟子绿僵菌M337菌株进行继代培养,探讨了6种常见培养基、4种碳源和氮源以及6个碳氮组合培养基对菌种稳定性、产孢量、毒力的影响.结果显示,绿僵菌的变异虽然主要受控于菌株自身的遗传特性,但同时也受培养基组成的影响.常见的6种培养基以营养贫乏的CMA和WBA最易使菌种发生变异,PPDA较稳定.动物性氮源较植物性氮源稳定,以麦芽糖和乳糖为碳源的比较稳定.在不同C/N比试验中,供试菌株在C/N比为20/10的培养基上比较稳定.     

美国西部重要害虫摩门螽斯病原真菌的研究

The Mormon cricket (MC),Anabrus simplex (Orthoptera:Tettigoniidae),has a long and negative history with agriculture in the western states of the USA where MC often migrates in large groups and causes significant damage to forage plants and cultivated crops.In this review, virulence to MC of isolates of the insect-pathogenic fungus Metarhizium anisopliae varieties acridum and anisopliae were compared in an effort to identify isolates with promise for use as MC biological control agents.All of the isolates tested induced 100% or nearly 100% mortality by six days post application of the fungal conidia.Searches for new Metarhizium isolates with high heat and UV-B tolerance included isolation fungi from field-caught MC and grasshopper after they died in the laboratory and culturing fungi from soil samples collected from numerous western USA sites.The survey was preceded by development of a dodine based selective medium that,at 0.002% active ingredient,permitted growth of M.anisopliae var.acridum,but inhibited most contaminating fungi.The M.anisopliae var.acridum isolates examined to date have much higher tolerance to heat and UV-B irradiation than M.anisopliae var.anisopliae isolates,and this may be critical to successful field applications.The variety acridum has not yet been found in the USA,so our search for such isolates continues.Several new M.anisopliae var.anisopliae and Beauveria spp.were found,and the Metarhizium isolates are being characterized as to stress tolerance and virulence to insects.Characterization includes comparisons of new and pre-existing Metarhizium isolates by amplified fragment-length polymorphism (AFLP) analysis.Finally, experiments on MC developmental biology were conducted to gather data needed to develop a degree day model and to establish laboratory colonies of MC.     

绿僵菌不同菌株DNA 多态性的RAPD 分析

采用RAPD-PCR 技术分析了4 个绿僵菌菌株的DNA 遗传多态性。从160 条引物中筛选出27 条引物, 对各菌株进行PCR 扩增, 结果4 个绿僵菌菌株共扩增出334 个位点, 其中多态性位点299 个, 占89.5%, 表明各菌株间具有较丰富的遗传多态性。菌株DNA 多态性与原寄主和孢子形态表现出明显的相关性, 但与对松墨天牛幼虫的毒力间未表现出相关性。图2 表4 参7     

绿僵菌不同菌株DNA多态性的RAPD分析

采用RAPD－PCR技术分析了4个绿僵菌株的DNA遗传多态性。从160条引物中筛选出27条引物，对各菌株进行PCR扩增，结果4个绿僵菌菌株共扩增出334个位点，其中多态性位点299个，占89．5％，表明各菌株间具有较丰富的遗传多态性。菌株DNA多态性与原寄主和孢子形态表现出明显的相关性，但与对松墨天牛幼虫的毒力间未表现出相关性。图2表4参7     

高大冷杉温室Strophosoma象甲的微生物防治

In Denmark, the weevils Strophosoma melanogrammum and S.capitatum cause economic damage in Noble fir due to the adult stage feeding on the needles.No chemical treatments of these weevils are allowed in Denmark,so biological control is an attractive solution.We evaluated the potential for microbial control of larvae of Strophosoma spp.based on laboratory bioassays and field applications,taking effect on both target and non-target into consideration,as well as persistence of the applied fungus.In the laboratory Beauveria bassiana,Paecilomyces farinosus and Metarhizium anisopliae were able to infect and cause mycosis in Strophosoma larvae.Among the tested isolates the most virulent isolate was M.anisopliae BIPESCO 5,which resulted in 80 % mortality.In the field experiment M.anisopliae,isolate BIPESCO 5,was applied to the soil as a conidial suspension against larvae of Strophosoma spp.The effect of the fungus on the target population was monitored at a weekly basis by counts of emerging adult weevils during their activity periods.The population of Strophosoma spp.was reduced by up to 60% in treated plots compared to control plots.The non-target effects of M.anisopliae were studied by sampling insects and ticks from both treated and control plots.Seven days after treatment,two sampled insect orders (Hemiptera and Coleoptera) and ticks were found with prevalences of M.anisopliae above 50%,compared to no infection in the insects collected from control plots.Infections in coccinellids were found as long as 277 days after treatment.However,the effect on population level of non-target is still unexplored.The persistence of the fungus was documented by plating a soil suspension onto agar.We documented that conidia of M.anisopliae could persist in the greenery plantation for at least 418 days after application.     

绿僵菌对马尾松毛虫的感染反应分析

通过以金龟子绿僵菌菌株M337和M104系列浓度的分生孢子悬液(1.0×1011-1.0×107个孢子.L-1)对马尾松毛虫幼虫的体表接种试验,测定马尾松毛虫对供试菌株的感染反应。运用时间—剂量—死亡率模型,对死亡率随时间和剂量的变化作了拟合,并与球孢白僵菌(Bb01和Bb02菌株)进行比较。接种后第10-12天绿僵菌M337菌株的LC50分别为1.86×109、1.52×108和1.67×107孢子.L-1,在浓度梯度为1.0×1011-1.0×108孢子.L-1下的LT50为7.69-11.18 d。结果表明M337菌株对马尾松毛虫具有较强的致死作用。     

金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae HN1)几丁质酶与谷胱甘肽S-转移酶GST在大肠杆菌中的高效融合表达

使用RT-PCR方法,从高毒力金龟子绿僵菌Metarhizium anisopliae HN1中,克隆得到一个全长为1275bp的几丁质酶基因,经Blast分析此基因序列与M．anisopliae E6的chil基因（AF02749）同源率为96％。将此基因克隆到pGEX-6p-1载体上,使之与载体上一个约26kD大小的谷胱甘肽S-转移酶（GST）相连,构建pGEX-chi融合表达载体,转化到大肠杆菌（Escherichia coli）BL21中,经SDS-PAGE结果分析显示：表达出的融合蛋白大小为68kD,此目的蛋白占表达总量的64．5％。经破碎处理后可检测到几丁质酶活性。     

表面活性剂产生菌的筛选与优化及其产物性质的分析

从被石油污染的土壤中用蓝色凝胶培养基分离筛选出1株产糖脂类生物表面活性剂的菌株B2。经生理生化试验与16S r DNA序列分析将该菌株鉴定为沙雷氏菌属(Serratia sp.)。经红外光谱与薄层层析分析,结果表明该菌株产生的表面活性剂是一种鼠李糖脂。以发酵液的表面张力为指标,通过正交试验确定最佳发酵条件,即以20 g/L豆油为碳源、5 g/L尿素为氮源、温度34℃、p H 7.0、发酵时间96 h。在此最佳条件下测得表面活性剂的产量为3.746 1 g/L。该菌株所产表面活性剂水溶液在其浓度为临界胶束浓度时的表面张力为180 m N/m。     

rhtB基因过表达苏氨酸工程菌发酵过程的优化控制(英文)

[目的]构建了负责运输苏氨酸至胞外的转运蛋白的关键基因rhtB过表达的苏氨酸发酵菌M122,考察不同的碳源、氮源及pH对该重组菌产L-苏氨酸的影响。[方法]选用不同的碳、氮源对L-苏氨酸生产菌株的发酵过程进行分析,对发酵培养基的碳、氮源及pH进行优化。[结果]定向改造后苏氨酸发酵菌对营养物质的利用效率增加,使用蔗糖作为碳源发酵时,摇床培养L-苏氨酸产量为28.1g/L;以(NH4)2SO4或酵母粉作为氮源发酵时,L-苏氨酸产量分别为27.8和28.2g/L,均优于使用其他氮源时苏氨酸的产量。对发酵的最适pH研究表明,中性条件下更有利于菌体的生长和L-苏氨酸的产生。[结论]确定了苏氨酸发酵菌M122的最佳碳源为蔗糖,最佳氮源为(NH4)2SO4或酵母粉,最适pH为7.0。     

五味子叶枯病菌拮抗放线菌A-25-8的鉴定及发酵条件优化

经五味子根际土中分离获得1株高效拮抗五味子叶枯病菌的放线菌A-25-8,对其进行鉴定并研究其最佳发酵条件。根据菌株的形态与培养特征、生理生化特性、16SrDNA序列分析对其进行鉴定,应用牛津杯法研究A-25-8菌株抑菌活性及最优发酵条件。A-25-8菌株与Streptomyces anulatus(环圈链霉菌)的亲缘关系接近;最佳发酵条件:发酵培养基为马铃薯葡萄糖液体培养基,碳源为葡萄糖,氮源为KNO_3,发酵培养基初始pH为7.5,发酵温度为28℃,发酵时间为3 d,接种量为10%,摇床转速为160 r·min~(-1)。拮抗放线菌A-25-8鉴定为环圈链霉菌(Streptomyces anulatus),优化后A-25-8无菌发酵滤液对五味子叶枯病菌显示出更强的抑菌活性。