10个菊花品种花粉生活力测定和贮藏方法研究

【目的】筛选菊花花粉离体培养生活力测定的最佳培养基配方,探究花粉贮藏的最适温度和耐贮藏时间,并挑选出较耐贮藏的菊花品种,为菊花新品种选育和种质资源保存提供参考。【方法】以10个菊花品种盛花期花粉为试验材料,通过离体萌发测定法筛选菊花花粉萌发最适培养基,以该培养基测定花粉在4℃、-20℃和-80℃3种温度下进行60 d或120 d贮藏周期的生活力变化趋势观测,每隔15 d取样检测1次;对贮藏120 d的花粉进行授粉,统计结实率。【结果】培养基为ME_3+200 g·L~(-1)PEG 4000+6 g·L~(-1)琼脂的处理,10种花粉都能萌发,且萌发率较其他培养基有显著差异;花粉贮藏60 d后,所有花粉生活力均下降,其中‘5’、‘52’、‘64’和‘85’4个品种花粉生活力下降较缓慢;4种花粉贮藏120 d后,在-80℃贮藏的花粉生活力较高,花粉授粉后均能够结实,且品种‘5’花粉授粉结实率最高,平均每个授粉花序结实8粒。【结论】花粉萌发培养基、植物品种基因型、贮藏温度和贮藏时间都会影响菊花花粉生活力。本文研究表明,菊花花粉最适贮藏温度为-80℃,品种‘5’花粉可贮藏120 d保持较高的授粉结实率,在杂交育种中可优先考虑。     

紫薇花粉的贮藏方法及离体萌发研究

以‘粉娇蓉'(Lagerstroemia indica‘Fen Jiaorong')、‘红红火火'(L.indica‘ Honghong Huohuo’)、‘堇薇’(L.indica‘ Jinwei’)、‘直枝紫’(L.indica‘Zhizhi Zi’)4个常见紫薇(L.indica)品种的混合花粉为材料,采用正交试验对影响紫薇花粉生活力的3个因素(蔗糖、硼酸和CaCl2)进行优化试验,依据正交试验不同组合的花粉萌发率,确定最佳花粉萌发组合.在此基础上,对18种不同贮藏条件下花粉耐贮藏性进行检验.结果表明,用200 g·L-1蔗糖+ 150 mg·L-1硼酸+ 20 mg·L-CaCl2为最佳培养基,3个因素对紫薇花粉萌发率的影响从大到小顺序为蔗糖、硼酸、CaCl2;不同贮藏处理间花粉耐贮藏力存在较大差异,18个处理组合中,室温(28℃)条件下,用变色硅胶干燥的处理生活力保持时间最长;4℃冷藏条件下的对照、遮光、干燥处理保持时间稍短,但贮藏期间能保持较高的萌发率.     

木槿属3种植物花粉萌发及贮藏性探讨

以木槿属3种植物的新鲜花粉为材料,探讨花粉萌发培养液组成、贮藏温度和时间对花粉生活力的影响。结果表明:(1)3种植物花粉萌发的适宜培养基不同,朱槿和木槿适宜培养基为150 g·L~(-1)蔗糖+10 mg·L~(-1)硼酸+10 mg·L~(-1)无水氯化钙,芙蓉葵适宜培养基为200 g·L~(-1)蔗糖+10 mg·L~(-1)硼酸+10 mg·L~(-1)无水氯化钙;(2)3种植物花粉萌发率差别较大,从高到低依次为芙蓉葵79.72%,木槿33.00%,朱槿19.88%;(3)3种植物花粉活力随贮藏时间的延长而下降,不同的贮藏温度对花粉寿命的影响不相同,朱槿和木槿花粉适宜4℃贮藏,均可达12 d,芙蓉葵花粉适宜-20℃贮藏,可达14 d。     

葡萄花粉不同贮藏条件下生活力的鉴定

本试验以有核葡萄品种和无核葡萄品种的新鲜干燥花粉为材料,每个品种分别贮藏在25℃、5℃、0℃、-20℃、-40℃条件下,采用蔗糖200 g/L+硼酸50 mg/L+琼脂8 g/L的同一固体培养基作为营养基质,进行花粉离体培养。结果表明:刚开始贮藏时不同品种之间的花粉生活力存在明显的差异,其中有核葡萄品种的花粉生活力高于无核葡萄品种,并且不同温度下贮藏的花粉其生活力随着贮藏时间的延长均呈下降的趋势,-20℃、-40℃贮藏条件下的花粉生活力下降速度较缓慢,25℃贮藏条件下的花粉生活力下降速度较迅速。     

葡萄胚挽救技术优化及无核和玫瑰香味新种质创制

【目的】研究葡萄玫瑰香味性状,为无核香味葡萄育种提供重要的材料基础,探究亲本基因型、胚发育形态以及生长调节剂对胚萌发的影响,进一步优化无核×玫瑰香味组合胚挽救体系,并结合分子标记技术初步对杂交后代进行无核性状鉴定。【方法】利用顶空固相微萃取结合气质联用方法,对10个玫瑰香味和无玫瑰香味葡萄品种的果实香味物质含量进行测定,从中筛选出浓香型品种作为亲本;结合课题组前期研究结果,以6个玫瑰香味品种为父本,5个欧洲无核品种为母本,配置13个杂交组合;无菌条件下,从幼果中剥离杂种胚珠,离体黑暗培养8周,随后将发育的杂种幼胚接种于添加不同激素浓度和比例的胚萌发培养基中,通过优化胚萌发培养基配方,提高幼胚萌发率和成苗率。幼苗经温室炼苗后,将成活的F1代移栽至大田。利用分子标记早期辅助选择具有无核性状的F1代杂种株系。【结果】萜烯类物质是玫瑰香味的主要呈香物质,8个玫瑰香味品种均能检测到萜烯类物质,其总含量为0.0246—1.3824。筛选出‘亚历山大’‘阳光玫瑰’‘玫瑰香’等玫瑰香味物质含量相对较高的品种,可作为杂交亲本,用于创制兼具无核和玫瑰香味新种质;利用胚挽救技术从13个杂交组合获得杂种株系1 284个,移栽成活697株;以‘红宝石无核’和‘火焰无核’作为母本的后代成苗率较高,以‘阳光玫瑰’‘爱神玫瑰’‘红亚历山大’为父本的胚挽救成苗较好,其中‘红宝石无核’ב爱神玫瑰’杂交后代胚发育率和成苗率相对较高,分别为48.59%和51.71%;幼胚萌发率以WPM为基础培养基,添加1.0 mg·L-1 KT+0.5 mg·L-1NAA+1.0 mg·L-1 ZT的生长调节剂时较高,达11.33%,高于对照的7.41%;分别利用3种无核相关分子标记GLSP1-569、SCF27-2000和SCC8-1018,对101个株系进行无核性状检测,表明使用不同的标记在27个株系均检测到特异性条带,初步确定以上携带无核特异条带的株系为无核株系。【结论】‘亚历山大’和‘阳光玫瑰’的香味物质含量高,并且与欧洲葡萄杂交后其胚挽救效率高,是合适的香味父本材料;而‘红宝石无核’‘火焰无核’适合作为母本。胚萌发培养时,以WPM培养基添加适当浓度的KT及ZT有较好的促生根效果。通过分子标记对杂交F1代无核性状检测率为26.73%。目前开发的玫瑰香味标记较少,本研究获得的杂种后代可为研究玫瑰香味基因标记提供重要的试材。     

贮藏和液体培养条件对文冠果花粉萌发的影响

[目的]优化改善文冠果花粉离体萌发培养基。[方法]以新鲜文冠果花粉为试验材料,采用液体培养法,测定蔗糖、硼酸和钙对文冠果花粉离体萌发特性及花粉管长度的影响,筛选适合文冠果花粉离体培养液体培养基成分的最佳浓度。测定不同贮藏温度(-70、-20、4、25℃)及不同贮藏时间(2、5、10 d)下,文冠果花粉萌发率的变化。[结果]通过控制单一因素变量试验,文冠果花粉离体萌发的液体培养基最佳组分为15%蔗糖+0.02%硼酸+0.01%钙离子(硝酸钙),萌发率达92.5%,花粉管长达1.61 mm;而在花粉管生长过程中需要的钙离子浓度为0.04%。-70℃超低温贮藏花粉有利于保持花粉生活力,-20℃冷冻贮藏次之,4℃低温贮藏不利于保持花粉生活力,25℃恒温贮藏会大大降低花粉生活力。[结论]该研究可为文冠果花粉离体培养的液体培养基最佳组分配方提供参考依据,也为文冠果花粉贮藏研究奠定基础。     

油茶"三华系列"花粉活力测定及花粉保存

【目的】为筛选"三华系列"(‘华硕’、‘华金’、‘华鑫’)花粉活力适宜的检测方法及贮藏条件。【方法】研究采用FDA荧光染色法,I2-KI法以及离体萌发法研究不同贮藏温度(室温,4℃,-30℃,-80℃)条件下"三华系列"(‘华硕’、‘华金’、‘华鑫’)的花粉活力。【结果】(1)3种检测方法所得"新鲜花粉"活力值各不相同,其中I2-KI法检测花粉无活力,采用FDA荧光染色法和离体萌发法测定的花粉生活力值差异显著。‘华鑫’的新鲜花粉活力最高,‘华硕’次之,‘华金’花粉活力最低;(2)低温有利于花粉贮藏,花粉活力随贮藏时间的延长总体呈下降趋势。"三华系列"花粉品种间的适宜贮藏温度基本无显著差异,室温条件下,"三华系列"花粉活力下降速度最快,贮藏时间最短。室温下贮藏至13周后,"三华系列"花粉完全失去活力。4℃贮藏条件下,贮藏至第5周时,"三华系列"花粉活力40%～70%;-80℃适宜于花粉的长期贮藏(26周),其贮藏效果优于-30℃,贮藏至第26周时花粉活力在30%～40%,近似为-30℃贮藏条件下的2倍,花粉活力;(3)在通过对FDA荧光染色法与离体培养基法两种花粉活力检测方法进行相关性分析,发现FDA荧光染色法在4种不同贮藏温度下的测定结果与离体培养法有极显著强相关,相关系数大于0.9。【结论】I2-KI法不适宜作为油茶花粉活力检测方法,而FDA荧光染色法可作为跟踪和测定油茶花粉活力变化的方法来表征油茶花粉潜在活力,是开展授粉工作前快速检测花粉活力的好方法;低温有利于油茶花粉的贮藏,短期内(5周)贮藏"三华系列"花粉最适宜条件是4℃低温贮藏,"三华系列"花粉活力在40%～70%;长期(26周)贮藏"三华系列"花粉的最适宜条件是-80℃低温冷冻贮藏,花粉活力在30%～40%。     

青脆李花粉生活力及贮藏性研究

【目的】探索不同因素对青脆李花粉生活力及萌发率的影响。【方法】以青脆李花粉为试材,通过TTC法研究了不同发育阶段、干燥方式、贮藏条件、贮藏时间4个因素对青脆李花粉生活力的影响,并采用培养基萌发法观察花粉萌发过程及植物生长调节剂对花粉萌发的作用。【结果】青脆李盛花期花粉生活力,明显高于初花期和末花期;室内自然阴干的花粉生活力平均高于干燥器干燥的花粉生活力;常温、0、4及-18℃条件下贮藏的花粉平均生活力随温度降低呈升高趋势;花粉生活力随贮藏时间的增长逐渐减弱,-18℃贮藏30d的花粉生活力可达35.3%;6-BA对花粉萌发有抑制作用,适宜浓度的2,4-D(20mg/L)可促进花粉萌发。【结论】盛花期花粉自然阴干是花粉的最佳采集方式,而长时间贮藏则以低温保存为宜。     

7个茶树品种的花粉形态与生活力研究

为研究不同茶树品种之间花粉的形态特征与生活力变化,以7个茶树品种为试材,进行花粉形态结构观察及其随培养时间增长萌发率的变化趋势研究。结果表明:(1)7个茶树品种花粉均呈左右对称,具有3个萌发沟,长度和宽度差异不显著,萌发沟长度、宽度以及延伸比例呈现多样性,赤道面观呈椭圆形和棱锥形,极面观呈圆形和近三角形;外壁呈现光滑瘤状和粗糙瘤状,且部分品种花粉表面有穿孔。(2)在24 h的培养时间内,7个茶树品种的花粉萌发率均呈"S"型曲线增长,且基本上在1、3和5 h呈现显著性差异增长,到7 h接近萌发峰值。其中,柿大茶黄种、龙井43、福鼎大白茶的花粉萌发率较高,而云抗10号的花粉萌发率均显著低于其他6个品种。对中国种舒茶早(Camellia sinensis var. sinensis ‘Shuchazao’)与阿萨姆种云抗10号(Camellia sinensis var. assamica ‘Yunkang 10’)的花粉在不同贮藏条件下的生活力进行进一步的比较,发现它们在4℃和–20℃温度下的生活力存在显著差异,在180d的贮藏时间内,舒茶早与云抗10号分别在–80℃与–20℃的贮藏温度下对其花粉活力的保存更适宜。     

小叶野决明花粉萌发与低温贮藏研究

用不同方法测定小叶野决明花粉生活力,确定小叶野决明花粉离体萌发的最适培养基、培养时间、培养温度,并在常温(25℃)、4℃和0℃条件下对小叶野决明花粉进行了低温贮藏研究。结果表明,离体萌发法可以有效测定花粉生活力;花粉在10%蔗糖+1%硼酸的培养基上萌发率最高,25℃培养3 h为花粉的最佳萌发条件,随培养温度和培养时间的增加,花粉萌发力降低;贮藏天数增加,小叶野决明花粉生活力下降;贮藏温度越低,花粉生活力下降越缓慢;0℃下贮藏效果最好。     

无核葡萄胚挽救中影响胚发育的因子

 【目的】提高无核葡萄胚挽救育种效率。【方法】以12个无核葡萄品种或株系的自然授粉胚珠和6个杂交组合的胚珠为试材,研究不同配方的培养基、不同培养基相态、低温处理、光照和暗培养对无核葡萄的胚发育率的影响。同时,研究花后不同时间取样,摘取果粒取出胚珠培养的适宜时间。【结果】在供试的8种培养基中,Nitsch＋GA3 0.5 mg?L-1＋IAA 1.5 mg?L-1和MM3培养基最适宜于无核葡萄离体幼胚的发育,其次是ER培养基。在供试的固相、液相和固液双相的3种相态培养基中,以固液双相培养基进行无核葡萄品种底来特离体胚珠培养为最好。在胚珠离体培养阶段进行低温培养,降低了胚发育率。暗培养有利于幼胚的发育,可提高胚发育率。不同无核葡萄品种和组合在花后摘取果粒,取出胚珠进行离体胚挽救的适宜时间不同,无核白为35 d、森田尼无核为40 d、火焰无核为40 d、底来特为60 d、黎明无核为55 d、无核紫为70 d、优无核为50 d、皇家秋天为70 d、奇妙无核为60 d、奥迪亚无核为40 d、红宝石无核×贵妃玫瑰为70 d。【结论】本研究中不同无核葡萄品种进行胚挽救宜选择Nitsch＋GA3 0.5 mg?L-1＋IAA 1.5 mg?L-1、MM3或ER培养基,在（25±2）℃常温下进行固液双相暗培养,有助于提高胚挽救效率。     

木瓜花粉生活力测定及储藏特性

以木瓜Chaenomeles sinensis新鲜花粉为试材,通过培养基萌发试验法、氯化三苯基四氮唑（1TrC）染色法、碘．碘化钾（I-KI）染色法对花粉生活力进行测定,并研究了不同储藏条件及时间对木瓜花粉萌发的影响。结果表明：木瓜花粉萌发的最佳培养基为100mg．L-1蔗糖＋30mg·L-1硼酸＋8g-L-1琼脂,萌发率达75．09％;TTC染色法的染色率为60．64％．适宜作为木瓜花粉生活力的测定;I—KI染色法的染色率仅为17．94％,不宜于其生活力的测定;适宜木瓜花粉储藏的条件依次为-80℃,4℃,-23℃和常温;花粉在-80℃储藏16d后,花粉萌发率仍达到22．9％。图2表2参10     

野生绵枣儿的花粉活力与柱头可授性

以引种的野生绵枣儿(Scilla scilloides)为研究对象,对其进行花粉和柱头形态观察、花粉活力检测方法的筛选,同时研究了花粉活力和柱头可授性,探讨了两者与授粉成功的关系。结果表明:绵枣儿花药暴露于空气中20~40 min便开始开裂,花粉为单粒花粉,有1个萌发沟。最适花粉萌发培养液成分为ME_3+10 g·L~(-1)蔗糖+0.3g·L~(-1)硼酸+0.2 g·L~(-1)硝酸钙,始花期与盛花期的花粉活力在80%左右,末花期仅为20%左右。花粉在4℃条件下存活时间约为3 d,25℃条件下存活时间为2 d,而在35℃条件下存活时间只有1 d。柱头在散粉前就已经具备可授性,在开花后1~2 d可授性最强。有效花粉与柱头可有1 d的相遇期,但相遇期内柱头可授性不是很强,为异花传粉提供了机会。     

不同贮藏温度对小黑麦花粉活力的影响

在室温、4℃、-20℃和液氮(-196℃)下贮藏小黑麦的花粉,研究不同温度对新小黑麦1号、3号、4号和5号花粉活力的影响,结果表明:室温条件下保存3 h,小黑麦花粉活力均在80%左右,3~4 h后花粉活力降低很快,7~8h后花粉活力几乎全无。4℃保存可适当延长花粉活力,保存8 h后,新小黑麦1号、5号花粉的活力降低到60%,而3号和4号降低为80%左右。48 h左右花粉活力降至0%。与4℃相比,-20℃保存下不同品种小黑麦花粉活力降低更快,4 h后花粉活力降低到50%~65%,16 h后花粉活力接近0%。液氮超低温冷冻保存下小黑麦花粉活力相对稳定,保存10天后活力仍然很高,其活力相对保持率在92%左右,理论上可以长时间保存花粉。     

密花石斛花粉的保存方法研究

研究了密花石斛花粉不同保存方法下的花粉寿命,并对密花石斛花粉的超低温保存技术程序进行了研究。 结果表明:1)密花石斛花粉采用室温（(27±2)℃）、冷藏（4℃）、冷冻（-20℃）保存,花粉寿命分别为5、23、17 d,超低温保存(-196℃)的花粉120 d后仍可检测到花粉萌发,且萌发率与新鲜花粉相同,超低温保存方法至少可以保存密花石斛花粉4个月;2)密花石斛花粉超低温保存的程序为新鲜花粉（含水量43.26%）直接投入液氮（LN）保存,需用时采用室温、自来水或水浴化冻即可。      

黄帝陵古侧柏花粉生活力及其保存方法的研究

以黄帝陵千年古侧柏花粉为试验材料,用离体萌发法测定花粉的生活力,研究不同保存方法对花粉萌发率的影响,探讨花粉含水量、投入方式、化冻方式对超低温保存效果的影响。结果表明:古侧柏花粉在9%蔗糖+0.01%硼酸的培养基中离体培养4 d萌发率最高。90 d内,随着保存时间的延长,室温（20℃）保存的花粉迅速失活,低温（0℃、-20℃）保存的花粉萌发率呈逐渐下降趋势,超低温（-196℃）保存的花粉萌发率最高且保持效果最好,为古侧柏花粉长期保存的适宜方法。在超低温保存中,花粉以未经干燥、直接投入液氮、37℃恒温水浴化冻5 min保存效果最好;花粉含水量、投入方式、化冻方式之间交互效应显著。     

芍药花粉超低温保存4年后的生活力检测

为了探讨花粉长期保存的最佳方法,以及为芍药花粉库的建立提供依据,该文比较了冷冻保存（-20℃）和超低温保存（-196℃）芍药花粉的不同效果,检验了17个芍药品种花粉经超低温保存4年后的生活力。结果表明,超低温（-196℃）保存的花粉萌发率普遍高于冷冻保存和对照,而大部分品种花粉经冷冻保存（-20℃）4年后萌发率明显降低。离体萌发试验表明,超低温保存芍药花粉的效果因品种而异,但绝大部分品种（94.1%）花粉保存效果良好（相对保持率＞50%）。初步人工授粉试验表明,超低温保存4年后的芍药花粉仍具有受精结实能力。      

刺槐花粉生活力测定方法及贮藏特性

【目的】探索刺槐花粉生活力测定方法及其贮藏特性,为刺槐生产及育种提供参考依据。【方法】以刺槐花粉为试材,使用培养基萌发试验法测定其生活力,并研究不同浓度Ca2＋、不同贮藏条件及时间对刺槐花粉萌发的影响。【结果】刺槐花粉在琼脂8.0 g/L＋蔗糖20.0 mg/L＋硼酸2.0 mg/L的培养基中萌发率高达30.25%;适当浓度的Ca2＋能促进花粉萌发和花粉管伸长,当Ca2＋浓度为1.6×10-4mg/L时,花粉萌发率高达40.25%,花粉管伸长最快;适宜刺槐花粉贮藏的条件依次为-80℃、4℃、-23℃和常温;花粉在-80℃贮藏32d后,萌发率仍达15.30%。【结论】适合刺槐花粉萌发的培养基为：琼脂8.0 g/L＋蔗糖20.0 mg/L＋硼酸2.0 mg/L;培养基中添加低浓度外源钙能促进刺槐花粉萌发和花粉管生长;于超低温真空冷冻条件下贮藏的刺槐花粉保持活力时间更长。     

金银花花粉生活力测定及贮藏研究

[目的]对不同贮藏条件下金银花花粉生活力进行测定,以期为金银花生产、科研提供参考。[方法]以金银花新鲜花粉为试材,通过I-KI染色法、TTC（氯化三苯基四氮唑）染色法、培养基萌发试验法对花粉生活力进行测定,并研究了不同贮藏条件对花粉萌发的影响。[结果]培养基中添加不同浓度的蔗糖和硼酸对花粉的萌发有促进作用,其浓度分别为150、30mg/L时花粉的萌发率最大值为75.23%和52.78%;I-KI染色法不宜用于金银花花粉生活力测定;采用TTC染色法测定金银花花粉生活力达80.46%。[结论]TTC染色法测定金银花花粉生活力相对准确且简便易行。在金银花花粉贮藏过程中低温贮藏（-80℃）好于冷藏（4℃、-23℃）,不宜常温贮藏。     

雷竹花粉萌发率及贮藏方法研究

为更好地开展竹类植物的杂交育种工作,对雷竹花粉的萌发率及贮藏方法进行了研究。结果表明,利用离体花粉萌发法测定的雷竹花粉萌发率远低于氯化三苯四氮唑(TTC)染色法测定的花粉生活力;添加50 mg.L-1硼酸有利于雷竹花粉萌发;不同发育阶段的花粉萌发率有明显差异,以花药完全露出未开裂的花粉萌发率为最高;花粉采集时间以15:30优于9:30;雷竹花粉不耐贮藏,4℃湿藏有利于保持花粉生活力。