用牛血清白蛋白改善荸荠基因组DNA的RAPD扩增

在荸荠基因组ＤＮＡ的ＲＡＰＤ（随机扩增多态性ＤＮＡ）扩增中，具合适浓度和片段长度的ＤＮＡ常常在适宜条件下无法扩增。这种现象常在干燥叶状茎ＤＮＡ的扩增中发生。提取的ＤＮＡ中存在一些ＲＡＰＤ（或ＰＣＲ）抑制剂可能是ＲＡＰＤ扩增失败的原因。多糖、多酚和其他...     

葡萄无核基因RAPD标记的序列分析

报道了用Ｑｉａｇｅｎ Ｋｉｔ纯化ＲＡＰＤ遗传标记，用细菌质粒ｍ１３克隆ＲＡＰＤ标记的ＤＮＡ片段，采用自动荧光ＤＮＡ测序仪（型号３７３Ａ）测定了该ＤＮＡ片段的核苷酸组成及其排列顺序。无核白ＲＡＰＤ标记由５１９对核苷酸及其特定序列组成。因为无核白是无核基因的原始供体，作者认主所获无核白ＲＡＰＤ标记的ＤＮＡ序列，可以作为合成探针的基础，用于检测无核葡萄育种和无核品种的无核性。     

国外RAPD技术在果树上的研究进展

国外ＲＡＰＤ技术在果树上的研究进展福建农业大学园艺系丁晓东ＲＡＰＤ（ＲａｎｄｏｍｌｙＡｍｐｌｉｆｉｅｄＰｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃＤＮＡ）即随机放大多态性ＤＮＡ,是１９９０年由美国杜邦公司的Ｗｉｌｉａｍｓ等人首推出来的。其原理是根据ＤＮＡ聚合酶反应技术（Ｐ...     

家蚕Y,Nl基因和Z染色体的RAPD分子标记研究

利用ＲＡＰＤ技术，对转座黄血（Ｗ＾Ｙ）系统Ｙ０１０，Ｘ射线诱发染色缺失的第１无半月纹Ｍｌ系统，伴性赤蚁油蚕（Ｚ＾ｓｃｈｏｄＺ＾ｓｃｈｏｄ）与７８２（Ｚ＾＋＋Ｗ）的Ｐ１，Ｐ２及Ｆ１，ＲＦ２进行了多态性分析，结果表明，通过６０、１２０和２０５个随引物的扩增，获得了与Ｗ＾Ｙ连锁的ＯＰＧ－０３６５０与Ｎｌ＾ｌ连锁的ＯＰＡ－０８４８０和Ｚ＾＋＋连锁的３个ＲＡＰＤ标记，初步讨论了ＲＡＰＤ技术在家蚕分子标记寻找     

DNA提纯方法对6种甘蔗亚族植物RAPD的影响

甘蔗植物组织内的多酚类、色素类等物质是干扰ＲＡＰＤ扩增反应的主要成分。本研究以ＣＡＴＢ法和ＳＤＳ法为基础,着重对抗氧化剂（ＰＶＰ等）、酶（蛋白酶Ｋ、ＲＮａｓｅＡ）和酚抽提等因素对提取ＤＮＡ的质量及其ＲＡＰＤ的影响进行了比较筛选。结果表明：①甘蔗ＤＮＡ提取质量和纯度与ＲＮａｓｅＡ、抗氧化剂等处理直接相关,蛋白酶Ｋ、ＣＡＴＢ和ＳＤＳ的处理无明显差异;②对于甘蔗ＲＡＰＤ反应,模板ＤＮＡ中含有一定量的ＲＮ     

葡萄无核基因RAPD标记的序列分析

报道了用ＱｉａｇｅｎＫｉｔ纯化ＲＡＰＤ遗传标记，用细菌质粒Ｍ１３克隆ＲＡＰＤ标记的ＤＮＡ片段，采用自动荧光ＤＮＡ测序仪（型号３７３Ａ）测定了该ＤＮＡ片段的核苷酸组成及其排列顺序。无核白ＲＡＰＤ标记由５１９对核苷酸及其特定序列组成。因为无核白是无核基因的原始供体，作者认为所获无核白ＲＡＰＤ标记的ＤＮＡ序列，可以作为合成探针的基础，用于检测无核葡萄育种和无核品种的无核性。     

苹果PAPD反应体系的研究

对苹果基因组ＤＮＡ的ＲＡＰＤ扩增体系各参数进行筛选比较,建立的最佳反应体系为：模板ＤＮＡ １．０ｍｇ／Ｌ,引物１．５ｍｇ／Ｌ,ＴａｑＤＮＡ聚合酶０．１ｎｏｌ／Ｌ（Ｌ．ｎｉｎ）,Ｍｇ＾２＋２．５ｍｍｏｌ／Ｌ,ｄＮＴＰｓ０．４ｍｍｏｌ／Ｌ。     

RAPD标记在大豆品种鉴定中的应用初探

以十六烷基溴化铵（ＣＴＡＢ）选择性沉淀ＤＮＡ的方法，提取大豆种子、新鲜叶片或冷冻干燥叶片的总ＤＮＡ，所得ＤＮＡ纯度好，降解少，分子量大，完全可以用于ＲＡＰＤ分析。本文就ＲＡＰＤ标记手段在大豆品种鉴定中的应用作一简报，仅ＯＰＡ－０４就能将供试的１７份大豆品种区分开，表明ＲＡＰＤ用于种子纯度鉴定及品种鉴定是可行的。     

褐飞虱不同生物型基因组DNA的RAPD分析

试验了两种ＤＮＡ提取方法抽提褐飞虱基因组ＤＮＡ的效果及其用所获得的ＤＮＡ进行ＲＡＰＤ扩增的技术条件,结果发现,采用蚜虫ＤＮＡ的提取方法（略有改进）来抽提高飞虱基因组ＤＮＡ,并用Ｓ系列的随机引物、ＲＡＰＤ的通用反应体系及９４℃变性,３６℃退火和７２℃延伸的扩增条件来对其进行随机扩增,可获得满意的效果,不同致害类群的群体间和同一致富类群的个体间的ＲＡＰＤ多态性均有差异,单雌纯化只能将个体间的差异缩小,     

DNA分子标记鉴定蔬菜作物种子纯度的原理分析

对ＤＮＡ分子标记鉴定蔬菜作物种子纯度的原理进行了分析。结果认为,鉴定种子纯度以ＲＡＰＤ技术为宜。ＲＡＰＤ标记鉴定常规品种种子纯度研究中,应选择目标品种Ａ的ＲＡＰＤ图谱中出现而其它常规品种（一般５￣１０个为宜）中不出现的ＤＡＮ谱带作为鉴定纯度用的特异谱带;鉴定杂交Ｆ１品种时,应将母本有,父本无、,Ｆ１有的ＤＮＡ谱带和母本元,父本有,Ｆ１有的ＤＮＡ谱带作为特异谱带,并且在实践鉴定中二者必须联合使用。     

红花基因组DNA的提取及RAPD体系的优化

用多种方法提取红花老叶及嫩叶DNA,进行比较,最后确定老叶DNA的提取用高盐低pH法,嫩叶用Michael等的方法.设计两次正交实验来确定红花RAPD体系中各成分的浓度,最终确定了一个既稳定又能扩增出最多条带的适合红花的RAPD最优体系,即25 μL反应液中,dNTP 200 μM, Mg2+1.5 mM,引物0.8 μM,Taq酶1U,模板30～60 ng.     

芸香科药用植物ISSR-PCR反应体系的建立及优化

[目的]建立和优化芸香科药用植物的品种的ISSR反应体系,为芸香科药用植物的资源评价、品种鉴定提供依据。[方法]以象头山芸香科植物柚、山油柑、3个品种为研究对象,从DNA提取、退火温度、循环次数、引物筛选等方面研究ISSR反应及优化条件。[结果]选用的20个引物中有3种引物扩增效果较好,以柚为代表的优化结果表明,引物826对芸香科植物扩增的最适退火温度为52.0℃,最佳循环次数为35个循环。[结论]ISSR适合于芸香科药用植物的品种的鉴定。     

SRAP分子标记用于苦荞分析中的条件优化

[目的]研究SRAP分子标记用于苦荞分析中的条件优化。[方法]采用交互正交设计L27（313）对苦荞SRAP-PCR反应体系进行了5因素（Mg2＋、dNTP、Taq酶、模板DNA和引物）3水平优化筛选,比较了非变性和变性PAGE检测方法,并进行了DYCZ-24F与DYCZ-20C2种电泳操作系统的对比试验。[结果]4个单因素（Mg2＋、dNTP、Taq酶和引物）和2个交互作用（Mg2＋×dNTP、Mg2＋×Taq酶）对苦荞SRAP-PCR有极显著影响;最佳反应体系为：20μl总体积,Mg2＋1.5mmol/L,dNTP0.2mmol/L,Taq酶1.5U,模板DNA40ng,引物0.25μmol/L,10×缓冲液2μl。运用该体系对7份苦荞材料进行扩增,扩增条带清晰、多态性高、重复性好。将扩增产物进行非变性与变性PAGE和2种电泳操作系统检测,结果显示非变性PAGE、DYCZ-24F操作系统更适合于SRAP的分析。[结论]为今后构建苦荞SRAP遗传图谱奠定了基础。     

槟榔SSR反应体系的建立

以鸡心槟榔为试材,用QIAGEN公司的DNeasy Plant Mini Kit提取基因组DNA,对SSR反应体系进行建立与优化,探讨了槟榔SSR技术中PCR体系的主要成分对扩增结果的影响。最终确定了引物C7549的最佳退火温度为56℃,在PCR反应体系中最佳条件:Mg2+浓度为3.0 mmol/L,dNTPs浓度为0.1 mmol/L,Taq酶量为1.5 U,引物浓度为0.8μmol/L,DNA模板为2.0 ng/μL。利用此反应体系对部分槟榔品种进行PCR扩增并Page胶电泳检测,扩增结果清晰且有较高的多态性,表明该体系适合槟榔的亲缘关系分析。     

利用ISSR分子标记分析44份红麻种质资源的遗传多样性(英文)

[Objective] This study was to reveal the genetic diversity and genetic relationship of the kenaf(Hibiscus cannabinus L.) resources from different origins, thus providing basis for genetic improvement and molecular marker-assisted breeding of kenaf. [Method] Ninety one ISSR molecular markers were used for amplification on 44 shares of kenaf germplasm resources, of which 21 showing good diversity and clear bands were chosen for PCR amplification. Based on amplification results, the genetic similarity coefficients among kenaf germplasm resources were calculated by using analytic software NTSYSpc-2.10e, and phylogenetic tree was then established via UPGMA. [Result] Totally 169 bands were amplified using the 21 screened primers, averagely 8.05 bands were amplified from each primer. Of them, 141 bands were polymorphic, accounting for 83.4%. When genetic similarity coefficient 0.887 was used as criterion L1, these 44 shares of kenaf germplasm could be classified to be 32 shares of cultivars and 12 shares of wild type or half-wild type varieties. When genetic similarity coefficient 0.897 was used as criterion L2, these 32 shares of cultivars could be further grouped into four sub-clusters. The genetic diversities between cultivars and wild type or half-wild type varieties were between 0.46-0.91, showing huge hereditary difference; while that among 32 cultivars were between 0.85-0.97, suggesting that genetic relationships among cultivars are relatively close and their genetic similarities are rather narrow. [Conclusion] ISSR could well determine the genetic similarities among kenaf germplasm resources and provide valuable molecular information for selecting parents of hybrid cross, which can lay a good foundation for DNA mapping of kenaf germplasm resources.     

利用ISSR分子标记分析44份红麻种质资源的遗传多样性

[目的]揭示不同地区来源红麻材料的遗传多样性及亲缘关系,为红麻遗传改良和分子标记辅助育种提供依据。[方法]用ISSR分子标记方法分析44份不同地区来源红麻种质资源的遗传多样性和亲缘关系,从91个ISSR引物中筛选出多态性较好、条带最清晰的21个引物对其进行PCR扩增,采用NTSYSpc-2．10e分析软件计算样品间的遗传相似系数,同时用UPGMA进行聚类分析,构建聚类图。[结果]21条引物共扩增出169条带,平均每个引物扩增出8．05条,其中多态性条带共141条,多态性条带比率为83．4％;当在遗传相似系数为o．887处作切割线L1时,可将44份红麻材料中的32份栽培品种与12份野生半野生材料分开;当在遗传相似系数为o．897处作切割线L2时,可将32份栽培种进一步细分为4个亚群;栽培种与野生半野生种间的遗传相似系数在o．47～0．91之间,表现出较大的遗传差异性,而32份栽培种材料中,遗传相似系数在o．85～0．97之间,表明栽培种材料间的亲缘关系较近,遗传多样性较为狭窄。[结论]ISSR可以较好地确定红麻种质资源的遗传多样性的亲缘关系,能够为杂交育种亲本选择组配提供有价值的分子水平上的信息,可为开展红麻核心种质DNA图谱研究奠定基础。     

光皮桦木质部cDNA-AFLP 技术体系的建立及应用

为了挖掘光皮桦材性相关基因,本研究以光皮桦木质部为材料,通过对RNA 的提取、cDNA 的反转录及纯化 的对比分析,以及选扩体系优化等,建立了相应的cDNA-AFLP 体系。结果表明:采用CTAB 和RNAiso 试剂相结合 的方法得到的RNA 质量较好,cDNA 经纯化后选扩效果明显变好。选扩体系为:4.0 μL 预扩产物(稀释40 倍)、1.6 μL 的引物(10.0 mmol/ L)、0.2 μL 的dNTP(2.5 mmol/ L)、0.4 μL 的Mg2 + (25.0 mmol/ L),以及0.2 μL 的Taq DNA 聚合酶(5 U/ μL)。进一步以来自不同木质化茎段的cDNA 为模板,筛选出31 对扩增效果较好的引物组合,同时分 离出一些差异表达的基因片段,经测序后探讨了其在木质化发育过程中可能的功能。      

中国李原生质体培养及植株再生

对中国李（ＰｒｕｎｕｓｓａｌｉｃｉｎａＬｉｎｄｌ．）原生质体分离和培养的有关因素进行了研究。以悬浮培养物为材料,在适宜的酶解液中酶解１２ｈ,原生质体产量和活力分别达到３×１０７个／ｇ和９５％．以改良ＭＳ为基本培养基,在培养初期加２,４－Ｄ１．０ｍｇ／Ｌ,ＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ,培养３０ｄ后将ＢＡ调至１．０ｍｇ／Ｌ,以０．５５ｍｏｌ／Ｌ葡萄糖调节渗透压,在２×１０５个／Ｌ的植板密度下液体浅层培养５０ｄ后形成了微愈伤组织。微愈伤组织转至固体培养基上继代培养,在分化培养基上分化出不定芽,在生根培养基上生根形成完整植株。     

不同郁闭度林地种植中药材的药用成分与产量分析

[目的]不同林地因其郁闭度差异,为了判断林下种植的中药其指标性成分含量是否能够达到中华人民共和国《药典》要求.[方法]在林下不同郁闭度(0.2、0.5、0.7)种植几种中药植物,测定不同郁闭度下药材的指标性成分含量和药材产量.[结果]结果表明:林地不同郁闭度对中药指标性成分含量和药材产量有明显的影响,穿龙薯蓣、苍术、菘蓝、知母适应0.7郁闭度的林下环境;牛蒡、射干适应0.5郁闭度的林下环境;紫苏适应0.2郁闭度的林下环境;红花在0.2、0.5、0.7郁闭度下,两种指标性成分含量均未达标.[结论]北京林下中药材大部分可以在郁闭度0.5～0.7的林下种植较为适宜,红花、紫苏耐荫性差,适宜种植在低郁闭度林地或种植在林缘.