葡萄无核基因RAPD标记的序列分析

报道了用Ｑｉａｇｅｎ Ｋｉｔ纯化ＲＡＰＤ遗传标记，用细菌质粒ｍ１３克隆ＲＡＰＤ标记的ＤＮＡ片段，采用自动荧光ＤＮＡ测序仪（型号３７３Ａ）测定了该ＤＮＡ片段的核苷酸组成及其排列顺序。无核白ＲＡＰＤ标记由５１９对核苷酸及其特定序列组成。因为无核白是无核基因的原始供体，作者认主所获无核白ＲＡＰＤ标记的ＤＮＡ序列，可以作为合成探针的基础，用于检测无核葡萄育种和无核品种的无核性。     

用RAPD分析鉴定葡萄属远缘杂种

用随机扩增多态型ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）技术，在幼苗期鉴定了圆叶葡萄和真葡萄亚属杂交的杂种。结果表明，以两个杂交组合后代及其亲本ＤＮＡ作模板，用随机引物ＵＢＣ２５０－ＵＢＣ－２６６和ＵＢＣ－２７２可以分别扩增出１４００，１４００，３５０６ ５００ｂｐ的多态性片段，作为来自无核亲本的分子标记。     

用RAPD分析鉴定葡萄属远缘杂种

用随机扩增多态型ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）技术，在幼苗期鉴定了圆叶葡萄和真葡萄亚属杂交的杂种。结果表明，以两个杂交组合后代及其亲本ＤＮＡ作模板，用随机引物ＵＢＣ－２５０，ＵＢＣ－２６６和ＵＢＣ－２７２可以分别扩增出１４００，１４４０，３５０和５００ｂｐ的多态性片段，作为来自无核亲本的分子标记     

葡萄无核基因的RAPD遗传标记

报道了用随机引物和混合分离分析（ＢＳＡ）方法检测葡萄无核基因连锁的遗传标记。ＤＮＡ混合样来自Ｂ７２－２１６×Ｂ４５－１８７的杂交后代。两个混合样分别由９个表现型为无核和有核杂种组成，除有核与无核性状外，其他性状是随机的。用１０碱基随机序列的１００个引物筛选混合样以期获得多态型ＤＮＡ片段。结果在引物ＵＢＣ－２６９扩增后，５００对碱基的ＤＮＡ多态型片段出现在无核样，而有核样不出现该多态型片段。进一步用杂种、父本及其无核基因的供给者无核白（ＴｈｏｍｐｓｏｎＳｅｅｄｌｅｓｓ）和百乐葡萄（Ｐｅｒｌｅｔｅ）作模板，用引物ＵＢＣ－２６９扩增，一些杂种、亲本及无核基因的供给者也拥有５００对碱基的多态型片段。据此分析，葡萄的无核性是由多基因控制的，这些基因有主效和微效之分；本研究获得的分子标记ＵＢＣ－２６９５００与葡萄无核基因之一有连锁关系，而且与主效基因之一有连锁     

用牛血清白蛋白改善荸荠基因组DNA的RAPD扩增

在荸荠基因组ＤＮＡ的ＲＡＰＤ（随机扩增多态性ＤＮＡ）扩增中，具合适浓度和片段长度的ＤＮＡ常常在适宜条件下无法扩增。这种现象常在干燥叶状茎ＤＮＡ的扩增中发生。提取的ＤＮＡ中存在一些ＲＡＰＤ（或ＰＣＲ）抑制剂可能是ＲＡＰＤ扩增失败的原因。多糖、多酚和其他...     

葡萄无核基因的RAPD遗传标记

报道了用随机引物和混合分离分析（ＢＳＡ）方法检测葡萄无核基因连锁的遗传标记。ＤＮＡ混合样来自Ｂ７２－２１６×Ｂ４５－１８７的杂交后代。两个事样分别由９个表现型为无核和有核杂种组成，除有核与无性状外，其他性状是随机的。用１０碱基随机序列的１０９个引物筛选混合样以期获得多态型ＤＮＡ片段。结果在引物ＵＢＣ－２６９扩增后，５００对碱基的ＤＮＡ我态型片段出现在无核样，而有核样不该多态型片段，进一步用杂种、父     

RAPD标记检测与肉鸡肥度性状关联的QTLs——肉鸡个体间RAPD指纹变异

采用随机扩增多态ＤＮＡ（ＲＰＡＤ）技术分析了肉鸡群个体间ＲＡＰＤ指纹的变异程度。１０个随机引物在３６只公鸡中共扩增出８３个片段,其中有６７个是多态性片断,多态率为８０．７２％,１１个随机引物在３６只母鸡中共扩增了９９个片段,其中有８６个是多态性片段,多态率为８６．８７％,公、母鸡群体内个体间遗传相似系数分别为０．７８５８、０．７３２８。结果表明：ＲＡＰＤ标记的多态性明显,作为一种ＤＮＡ标记,它可以     

RAPD技术及其在动物育种中的应用

建立在ＰＣＲ基础上的ＲＡＰＤ标记，是一种可被广泛应用于动植物遗传作图、基因定位、特殊染色体区段的鉴定与分离、动物性别鉴定以及群体遗传变异检测等研究领域的ＤＮＡ多态性标记。本文系统地论述了ＲＡＰＤ的技术原理及研究概况，比较了ＲＡＰＤ与ＲＦＬＰ及同工酶技术，并探讨了这一新的分子标记在动物育种中的应用及其局限性和发展前景。     

用RAPD和RFLP定位水稻香味基因（I）

本文用ＣＴ９９９３／ＫＤＭＬ１０５的Ｆ２分离群体为材料，以香味和非香两类混合集群核ＤＮＡ为模板进行ＲＡＰＤ分析，结果表明，在检测过的３００个随机引物中，只找到１个引物在香味与非香群体之间扩增出多态性产物，这个只在非香九体中扩增到１．５ｋｂ片段表现与香味性状紧密连锁，就该引种对亲本，Ｆ２个体和其它不同品种的ＲＡＰＤ分析，进一步证明了这种多态的可靠性，该分子标记的ＲＡＰＤ分析可直接应用于水稻育种实践。     

RAPD标记在大豆品种鉴定中的应用初探

以十六烷基溴化铵（ＣＴＡＢ）选择性沉淀ＤＮＡ的方法，提取大豆种子、新鲜叶片或冷冻干燥叶片的总ＤＮＡ，所得ＤＮＡ纯度好，降解少，分子量大，完全可以用于ＲＡＰＤ分析。本文就ＲＡＰＤ标记手段在大豆品种鉴定中的应用作一简报，仅ＯＰＡ－０４就能将供试的１７份大豆品种区分开，表明ＲＡＰＤ用于种子纯度鉴定及品种鉴定是可行的。     

不同基质和光照对无核白葡萄光合特性的影响

为研究无核白(Thompson Seedless)葡萄在不同栽培基质与光照条件下的光合特性,以3年生无核白葡萄为材料,测定了不同栽培基质和不同光照条件下的叶片光合指标和叶绿素含量。结果表明：(1)在遮光条件下,生长前期配方土栽培的无核白表现出较高的光合特性;生长后期配方土栽培的无核白净光合速率低于园土;配方土栽培的无核白总叶绿素含量变化与净光合速率变化趋势一致,配方土不利于无核白生长后期光合产物的累积。(2)相同的配方土栽培条件下,遮光处理导致植物光合作用下降,不利于无核白光合产物的累积。综上所述,引种栽培无核白葡萄需选用合适的栽培基质,保持充足的光照,生长后期需注意延长叶片功能期。     

葡萄无核基因的SCAR标记及Southern blot分析

根据无核基因特异RAPD标记的序列进行分析,合成1对特异引物P1+P3(序列分别是P1:5′CTCATCTTCTTGATGGTGAT3′;P3:5′AAGTGAAGAACATCATTAAGAAC3′),对30个葡萄材料进行PCR扩增,成功地将RAPD标记转换成SCAR标记。并对含有该标记序列的重组质粒进行Hind 和Spe 双酶切,获得的310bp片段回收后制成探测葡萄无核基因存在与否的杂交探针,成功地对7个葡萄品种进行Southernblot分析,实现了分子标记检测葡萄无核基因的目的。     

无核葡萄胚挽救中影响胚发育的因子

 【目的】提高无核葡萄胚挽救育种效率。【方法】以12个无核葡萄品种或株系的自然授粉胚珠和6个杂交组合的胚珠为试材,研究不同配方的培养基、不同培养基相态、低温处理、光照和暗培养对无核葡萄的胚发育率的影响。同时,研究花后不同时间取样,摘取果粒取出胚珠培养的适宜时间。【结果】在供试的8种培养基中,Nitsch＋GA3 0.5 mg?L-1＋IAA 1.5 mg?L-1和MM3培养基最适宜于无核葡萄离体幼胚的发育,其次是ER培养基。在供试的固相、液相和固液双相的3种相态培养基中,以固液双相培养基进行无核葡萄品种底来特离体胚珠培养为最好。在胚珠离体培养阶段进行低温培养,降低了胚发育率。暗培养有利于幼胚的发育,可提高胚发育率。不同无核葡萄品种和组合在花后摘取果粒,取出胚珠进行离体胚挽救的适宜时间不同,无核白为35 d、森田尼无核为40 d、火焰无核为40 d、底来特为60 d、黎明无核为55 d、无核紫为70 d、优无核为50 d、皇家秋天为70 d、奇妙无核为60 d、奥迪亚无核为40 d、红宝石无核×贵妃玫瑰为70 d。【结论】本研究中不同无核葡萄品种进行胚挽救宜选择Nitsch＋GA3 0.5 mg?L-1＋IAA 1.5 mg?L-1、MM3或ER培养基,在（25±2）℃常温下进行固液双相暗培养,有助于提高胚挽救效率。     

有机无机复混肥对无核白葡萄产量和果实品质的影响

[目的]研究不同配比的有机无机复混肥对吐鲁番无核白葡萄产量、品质的影响,为该地区无核白葡萄的科学施肥提供理论技术依据.[方法]材料为11年生的无核白葡萄,实验设4个因素,16个处理,测定产量和几项品质指标,确定效果最佳的有机无机复混肥配方.[结果]施用不同配比的有机无机复混肥时,处理8～11的单产高于其它处理,其中处理10和11的产量显著高于其它处理,而处理1和16的产量相对较低;处理9～12改善无核白葡萄品质的效果较突出,尤其是配方10和11的效果最佳.施用处理10和11复混肥后,无核白葡萄果粒百粒重、纵横径、VC、可溶性糖和糖酸比都显著高于其它配方,而可滴定酸含量显著低于其它处理,硬度也保持较高的水平.[结论]试验设置的有机无机复混肥配比配方10和11能显著提高无核白葡萄的产量和品质,在该地区具有推广价值.     

欧洲葡萄品种‘无核白’不同营养系果实的酚类物质

 【目的】更有效地发挥欧洲葡萄品种‘无核白’不同营养系鲜食或制干的用途,筛选‘无核白’系列大粒与白藜芦醇含量较高的鲜食品系,酚类物质浓度与多酚氧化酶活性较低而适宜绿色葡萄干制备的制干品系。【方法】以‘无核白’葡萄为对照,以其性状上有变异的10个营养系成熟果实为材料,取样测定其果粒重,用折光仪测定可溶性固形物含量,HPLC法测定果皮与全果白藜芦醇含量、酚类物质,比色法测定多酚氧化酶活性。【结果】大粒无核白和W3等营养系浆果单粒重为对照的1.3286—1.4682倍;W2、W8、长穗无核白和W7等营养系果实白藜芦醇含量为对照的110.65%—128.41%;‘无核白’葡萄营养系果实中总酚含量具有明显差异,含量较低的有长粒无核白、W8、W3和大粒无核白等;不同营养系果皮中多酚氧化酶活性是全果的1.06—13.19倍。【结论】与对照相比,供试10个‘无核白’葡萄营养系中,单粒重、可溶性固形物含量、果皮与全果的白藜芦醇含量较高的有W3、大粒无核白、长粒无核白和W5等;酚类物质总量较低的营养系有大粒无核白、长粒无核白、W3等;多酚氧化酶活性较低的营养系有W7、长穗无核白、W3、W8。本研究结果为‘无核白’系列无核葡萄品种选育提供了部分依据。     

抗寒无核葡萄杂种胚挽救及分子标记辅助选择

【目的】利用胚挽救技术创制抗寒无核葡萄新种质,为选育抗寒无核葡萄新品种奠定基础。【方法】分别以抗寒欧美杂交无核葡萄品种‘Jupiter’和欧山杂种有核优系‘00-1-5’（‘玫瑰香’ב山葡萄黑龙江实生’）为父本,5个欧亚种无核品种‘Ruby Seedless’‘秦红1号’‘秦红2号’‘Crimson Seedless’和‘秦秀’为母本杂交,在各母本最佳胚珠取样时期取样,以固-液双相培养基MM3和ER分别作为胚发育培养基进行胚珠培养,比较不同母本和2种培养基对胚发育率、萌发率、成苗率及畸形苗率的影响;以WPM+0.2 mg?L^-1 6-BA+0.1 mg?L^-1 IAA固体培养基作为胚萌发培养基,获得胚挽救后代,经炼苗后移栽至田间;分别在2MS+0.2 mg?L^-1 6-BA+0.1 mg?L^-1 IAA培养基中添加0、1.0和1.6 mg?L^-1 ZnSO₄进行畸形苗转化正常苗培养,以筛选最适宜转化培养基;利用无核基因分子标记SCF27-2000对胚挽救后代进行无核性状分子检测。【结果】5个杂交组合的胚珠接种至MM3培养基的数量为2 158个,获得发育胚175个和胚挽救苗118株;接种至ER培养基的胚珠数为894个,获得发育胚74个和胚挽救苗58株。以‘00-1-5’为父本的2个杂交组合中,‘秦红2号’比‘秦秀’更适合作为母本,其杂种胚的发育率和成苗率最高,分别为17.04%和7.41%;以‘Jupiter’为父本的3个杂交组合中,‘Ruby Seedless’בJupiter’效果最好,胚发育率和成苗率分别为13.71%和10.67%,其次是‘秦红1号’בJupiter’,胚发育率和成苗率分别为14.39%和4.71%,而‘Crimson Seedless’בJupiter’胚发育率和成苗率最低,分别为9.55%和1.76%。接种至MM3培养基的胚珠,获得的胚发育率和成苗率均高于ER培养基。畸形苗率最高的是‘秦红1号’בJupiter’,而‘Ruby Seedless’בJupiter’未出现畸形苗,ER培养基比MM3培养基形成的畸形苗率高。‘秦红2号’ב00-1-5’组合畸形苗接种至2MS+1.6 mg?L^-1 ZnSO₄+0.2 mg?L^-1 6-BA+0.1 mg?L^-1 IAA转化培养基效果最好,转化率为40.00%。利用无核标记SCF27-2000对5个杂交组合176株杂种后代检测表明,159个株系拥有无核基因分子标记。【结论】‘Ruby Seedless’‘秦红1号’和‘秦红2号’适宜作为胚挽救育种的母本,而‘Crimson Seedless’和‘秦秀’不适合作为胚挽救育种的母本,培养基MM3比ER更适宜作为胚发育培养基,拥有无核基因分子标记的159株胚挽救苗为培育抗寒无核葡萄新品种提供了种质基础。     

假单性结实无核葡萄胚败育时期的研究

以布朗无核和无核白2个假单性结实无核品种为试材,对其胚和胚乳的发育进行细胞学观察．结果表明,无核白和布朗无核胚乳败育的时期分别为授粉后第32天和34天;无核白和布朗无核胚败育的时期分别为授粉后第38天和42天．     

葡萄胚挽救技术优化及无核和玫瑰香味新种质创制

【目的】研究葡萄玫瑰香味性状,为无核香味葡萄育种提供重要的材料基础,探究亲本基因型、胚发育形态以及生长调节剂对胚萌发的影响,进一步优化无核×玫瑰香味组合胚挽救体系,并结合分子标记技术初步对杂交后代进行无核性状鉴定。【方法】利用顶空固相微萃取结合气质联用方法,对10个玫瑰香味和无玫瑰香味葡萄品种的果实香味物质含量进行测定,从中筛选出浓香型品种作为亲本;结合课题组前期研究结果,以6个玫瑰香味品种为父本,5个欧洲无核品种为母本,配置13个杂交组合;无菌条件下,从幼果中剥离杂种胚珠,离体黑暗培养8周,随后将发育的杂种幼胚接种于添加不同激素浓度和比例的胚萌发培养基中,通过优化胚萌发培养基配方,提高幼胚萌发率和成苗率。幼苗经温室炼苗后,将成活的F₁代移栽至大田。利用分子标记早期辅助选择具有无核性状的F₁代杂种株系。【结果】萜烯类物质是玫瑰香味的主要呈香物质,8个玫瑰香味品种均能检测到萜烯类物质,其总含量为0.0246—1.3824。筛选出‘亚历山大’‘阳光玫瑰’‘玫瑰香’等玫瑰香味物质含量相对较高的品种,可作为杂交亲本,用于创制兼具无核和玫瑰香味新种质;利用胚挽救技术从13个杂交组合获得杂种株系1 284个,移栽成活697株;以‘红宝石无核’和‘火焰无核’作为母本的后代成苗率较高,以‘阳光玫瑰’‘爱神玫瑰’‘红亚历山大’为父本的胚挽救成苗较好,其中‘红宝石无核’ב爱神玫瑰’杂交后代胚发育率和成苗率相对较高,分别为48.59%和51.71%;幼胚萌发率以WPM为基础培养基,添加1.0 mg·L^-1 KT+0.5 mg·L^-1 NAA+1.0 mg·L^-1 ZT的生长调节剂时较高,达11.33%,高于对照的7.41%;分别利用3种无核相关分子标记GLSP1-569、SCF27-2000和SCC8-1018,对101个株系进行无核性状检测,表明使用不同的标记在27个株系均检测到特异性条带,初步确定以上携带无核特异条带的株系为无核株系。【结论】'亚历山大'和'阳光玫瑰' 的香味物质含量高,并且与欧洲葡萄杂交后其胚挽救效率高,是合适的香味父本材料;而‘红宝石无核’‘火焰无核’适合作为母本。胚萌发培养时,以WPM培养基添加适当浓度的KT及ZT有较好的促生根效果。通过分子标记对杂交F₁代无核性状检测率为26.73%。目前开发的玫瑰香味标记较少,本研究获得的杂种后代可为研究玫瑰香味基因标记提供重要的试材。     

无核白与红地球葡萄落粒因子的细胞学分析

【目的】 研究影响无核白葡萄落粒的相关因子,为无核白葡萄落粒防控提供理论依据。【方法】 以易落粒的无核白葡萄与耐落粒的红地球葡萄为研究对象,测量无核白和红地球成熟期的果梗拉力与果梗木质素与纤维素含量;对成熟期无核白与红地球的离区、离层与果刷部位进行染色切片观察;测量离区、离层厚度及细胞截面积、离区及离层细胞纵横径;无核白经2,4-D、PCPA及环剥处理后,测量其脱断率与脱断力。【结果】 红地球果梗拉力(6.7±3.2)N,无核白果梗拉力(2.1±0.5)N,红地球葡萄果梗木质素和纤维素含量比无核白高;无核白离区范围较大,红地球离区范围较窄,红地球果刷宽大,离层细胞排列紧密,无核白果刷细小,离层细胞排列疏松,两种葡萄在果蒂离区、离层细胞形态上差异不大,但在离层和离区细胞的厚度上存在显著差异;无核白与红地球的果梗维管束直接通过离区,在离区细胞中呈现放射状分布,红地球离区中的维管束细胞显著较无核白多而密,较无核白拥有较厚的维管束细胞群;无核白的脱落方式比例有所改变,果梗拉力也大大增加,其中,环剥处理效果最为明显。【结论】 在红地球与无核白的综合比较分析中发现,果梗拉力大的葡萄具有果梗维管束发达,维管束与果肉连接紧密,离区范围小,果梗木质素与纤维素含量多的特点。