用RAPD分析鉴定葡萄属远缘杂种

用随机扩增多态型ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）技术，在幼苗期鉴定了圆叶葡萄和真葡萄亚属杂交的杂种。结果表明，以两个杂交组合后代及其亲本ＤＮＡ作模板，用随机引物ＵＢＣ－２５０，ＵＢＣ－２６６和ＵＢＣ－２７２可以分别扩增出１４００，１４４０，３５０和５００ｂｐ的多态性片段，作为来自无核亲本的分子标记     

葡萄无核基因的RAPD遗传标记

报道了用随机引物和混合分离分析（ＢＳＡ）方法检测葡萄无核基因连锁的遗传标记。ＤＮＡ混合样来自Ｂ７２－２１６×Ｂ４５－１８７的杂交后代。两个混合样分别由９个表现型为无核和有核杂种组成，除有核与无核性状外，其他性状是随机的。用１０碱基随机序列的１００个引物筛选混合样以期获得多态型ＤＮＡ片段。结果在引物ＵＢＣ－２６９扩增后，５００对碱基的ＤＮＡ多态型片段出现在无核样，而有核样不出现该多态型片段。进一步用杂种、父本及其无核基因的供给者无核白（ＴｈｏｍｐｓｏｎＳｅｅｄｌｅｓｓ）和百乐葡萄（Ｐｅｒｌｅｔｅ）作模板，用引物ＵＢＣ－２６９扩增，一些杂种、亲本及无核基因的供给者也拥有５００对碱基的多态型片段。据此分析，葡萄的无核性是由多基因控制的，这些基因有主效和微效之分；本研究获得的分子标记ＵＢＣ－２６９５００与葡萄无核基因之一有连锁关系，而且与主效基因之一有连锁     

葡萄无核基因的RAPD遗传标记

报道了用随机引物和混合分离分析（ＢＳＡ）方法检测葡萄无核基因连锁的遗传标记。ＤＮＡ混合样来自Ｂ７２－２１６×Ｂ４５－１８７的杂交后代。两个事样分别由９个表现型为无核和有核杂种组成，除有核与无性状外，其他性状是随机的。用１０碱基随机序列的１０９个引物筛选混合样以期获得多态型ＤＮＡ片段。结果在引物ＵＢＣ－２６９扩增后，５００对碱基的ＤＮＡ我态型片段出现在无核样，而有核样不该多态型片段，进一步用杂种、父     

鸡传染性贫血病毒ORF2基因的扩增及酶切分析

根据鸡传染性贫血病毒ＣＵＸ－１标准毒株ＤＮＡ序列中ＯＲＦ２基因片段设计一对引物，对ＣＵＸ－１进行扩增，得到参小为６８４ｂＰ的片段，符合设计目的。以疑似ＣＩＡＶ的分离物ＳＲ４３感染鸡马立克氏病淋巴瘤细胞，提取全细胞ＤＮＡ，用该引物进行扩增，也得到同样大小的片段。     

家蚕核多角体病毒Lef—1和DA26基因的克隆及部分序列分析

ｌｅｆ－１和ＤＡ２６基因分别位于ｅｇｔ基因的上游和下游．从ｐＵＡｃ－ｅｇｔ中分离出ＥｃｏＲＩ－ＸｂａＩ１．１ｋｂ的ｅｇｔ基因片段，进行缺口平移标记，获得探针。与ＢｍＮＰＶＤＮＡ经ＨｉｎｄⅢ酶切、电泳、转移至ＮＣ膜的ＤＮＡ进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交，发现ＢｍＮＰＶＤＮＡ的ＨｉｎｄⅢＤ片段呈阳性。从ＢｍＮＰＶ基因组中分离出１０．４ｋｂ的ＨｉｎｄⅢＤ片段，用ＥｃｏＲＩ酶切得到ＨｉｎｄⅢ－ＥｃｏＲＩ２．２ｋｂ、ＥｃｏＲＩ１．４ｋｂ和ＥｃｏＲＩ－ＨｉｎｄⅢ６．８ｋｂ３个片段，分别克隆于ｐＵＣ１９中，命名为ｐＵＨＥ２．２、ｐＵＥ１．４和ｐＵＥＨ６．８。经双链测序并与ＡｃＮＰＶ相关基因序列进行比较，发现ｌｅｆ－１基因被克隆于ｐＵＨＥ２．２中，ＤＡ２６基因克隆于ｐＵＥＨ６．８中。从所测定的ｌｅｆ－１和ＤＡ２６基因的启动子及５＇端部分序列来看，它们在ＡｃＮＰＶ和ＢｍＮＰＶ之间有极高的同源性。     

TMV蚕豆株系CP基因及3‘端非编码区序列分析与表达

根据烟草花叶病毒Ｕ１株系ＴＭＶ－Ｕ１序列，人工合成引物，通过ＰＣＲ扩增并克隆了烟草花叶病毒蚕豆株系（ＴＭＶ－Ｂ）的外壳蛋白（ＣＰ）基因和３＇端非编码区。ＤＮＡ全序列测定结果表明，外壳蛋白基因全长４５９个碱基，编码１５１个氨基酸，３＇端非编码区全长２２４个碱基。与ＴＭＶ－Ｕ１株系相比，ＴＭＶ－Ｂ仅在ＣＰ基因上有一个碱基缺失，并导致ＣＰ基因提前终止，使其编码的氨基酸少７个。将ＣＰ基因及３＇端非编码区插     

用RAPD技术对4种螺原体菌DNA多态性的初步研究

用随机扩增的多态性ＤＮＡ技术对螺原体３个血清组中的４个菌株进行ＤＮＡ多态性研究。ＰＣＲ扩增引物选自Ｏｐｅｒｏｎ随机引物试剂盒中Ｉ、Ｊ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、组的１２０个引物。４个菌株为２３－６，ＣＲ－１和ＣＨ－９１－１，ＣＣＨ。     

玉米大斑病菌的RAPD分析Ⅰ.应用CTAB法提取玉米大斑病菌DNA

用采自河北、辽宁、黑龙江、山东、吉林等５省的１４个玉米大斑病菌菌株为试材进行液体培养，然后采用ＣＴＡＢ法从菌丝中提取ＤＮＡ，通过７５２型紫外光栅分光光度计检测，最后将所提取的ＤＮＡ在热循仪ＰＥ－４８００上进行随机引物多态性扩增。结果发现，所提取的ＤＮＡ的ＯＤ２６０／ＯＤ２８０比值介于１．７３０－１．８４７之间，扩增产物经琼脂糖凝胶电泳后得到了较清晰的扩增图谱，从而证明了采用的ＣＴＡ法是提取玉米大斑病菌ＤＮＡ并用于分子生物学研究的一种行之有效的玉米。     

瓠瓜枯萎病抗性导入西瓜的遗传研究与利用

为了培育抗枯萎病的西瓜良种,用感病品种蜜宝作母本,分别与高抗枯萎病材料Ｄ３－１和Ｄ３－２杂交,Ｆ１代表现高抗枯萎病,Ｆ２代及与感病亲本蜜宝回交的ＢＣ１代群体抗感分离比例分别符合３：１和１：１,说明枯萎病抗性遗传是受基因或单ＤＮＡ片段控制的显性遗传,用抗性材料为亲本,用抗性材料为亲本,选育出了５个性状优良的杂交组合,其中３个高抗枯萎病,２个中抗枯萎病。     

大肠杆菌焦磷酸酶基因的克隆和序列分析

按ＣＴＡＢ法提取大肠杆菌Ｋ－１２的ＤＮＡ,应用ＰＣＲ技术获得目的基因片段（ＰＰａｓｅ基因）,低熔点胶回收后,在Ｔ４ＤＮＡ连接酶的作用下,将目的基因克隆到ｐＵＣｍ－Ｔ载体上,并转化ＪＭ１０９感受态菌中。转化获得的克隆提取质粒ＤＮＡ,０．８％琼脂糖凝胶电泳分析,并进行ＰＣＲ扩增鉴定、序列分析证明插入片段确为ＰＰａｓｅ基因。本文用ＰＣＲ技术扩增并克隆大肠杆菌焦磷酸酶基因,为导入甜菜选育高含糖量品种奠定基     

鸡痘病毒282E4株基因组BamHⅠ片段的克隆及酶切图谱分析

本研究用ＰＵＣ１８质粒作载体，采用鸟枪法克隆ＦＰＶ基因组ＢａｍＨＩ部分片段，用ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ－ｄＵＴＰ标记的ＦＰＶ２８２Ｅ４ＢａｍＨＩ片段探针打点杂交，证实２２个克隆插入了ＦＰＶ２８２Ｅ４ＤＮＡ的ＢａｍＨＩ片段，２２个阳性克隆提取的质粒经琼脂糖凝胶电泳，选取具有代表性的大小不同的６个质粒ＰＵＡ、ＰＵＢ、ＰＵＣ、ＰＵＤ、ＰＵＥ、ＰＵＦ。６个质粒插入的片段Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ分别为７．３ｋｂ     

中国野生葡萄抗白粉病基因的RAPD标记

利用随机扩增多态性 DNA ( RAPD)技术 ,对抗病×感病的葡萄种间杂交组合白河 - 35 - 1×佳利酿的亲本及其 F1 代的 2 4株杂种进行了抗白粉病的遗传分析 ,从 196个随机引物中获得了 1个与中国野生葡萄抗白粉病基因连锁的 RAPD标记 OPV0 3- 1380 ,并在中国野生葡萄华东株系和欧洲葡萄品种中进行了分析验证。     

RT-PCR和Digoxigenin标记的核酸探针检测鸡传染性支气管炎病毒试验研究

用２对已发表的引物和１对自行设计的引物对同一ＩＢＶＨ１２０株进行ＲＴ－ＰＣＲ，分别获得了Ｓ１基因上与引物设计相一致的１７２０ｂｐ，２２８ｂｐ，６０２ｂｐ，的扩增片段。用自行设计的引物对７个毒株（Ｈ１２０，Ｈ５２，Ｍ４１，Ｃｏｎｎ，Ｇｒａｙ，Ｔ，Ｈｏｌｔｅ）和５个分离株（宜毒，上毒，云毒，ＨＫ，１１８）的含毒尿囊液或纯化病毒进行ＲＴ－ＰＣＲ。结果除Ｈｏｌｔｅ株，２个分离株（宜毒，云毒）外，其余均被成功地扩增出６０２ｂｐ的片段。将ＩＢＶＨ１２０株０６ｋｂＰＣＲ产物用Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ标记为探针，分别与上述各ＩＢＶ毒株的核酸及其扩增产物进行核酸杂交，均呈现阳性反应，而该探针不与ＩＢＤＶ和ＮＤＶ的ＤＮＡ，ＥＤＳ－７６病毒的ＤＮＡ及正常鸡胚尿囊液抽提物反应。ＲＴ－ＰＣＲ和核酸杂交技术提供了直接从尿囊液中快速检测出病毒，作为诊断ＩＢＶ的新方法。     

籼型细胞质雄性不育和可育水稻线粒体DNA多态性的初步分析（英文）

以籼型细胞质雄性不育系珍汕９７Ａ、保持系珍汕９７Ｂ、恢复系明恢６３和两个Ｆ１杂种为对象分析了线粒体ＤＮＡ间的多态性．用６个线粒体ＤＮＡ探针对５种来源的线粒体ＤＮＡ进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹分析．用ＣｏｘⅡ、ａｔｐＡ、２６ｓｒＲＮＡ为探针进行杂交时，不育系、保持系和恢复系之间具有相同的杂交结果，而用ＣｏｘⅠ、ＣｏｘⅡ、ａｔｐ６和６３０ｂｐｍｔＤＮＡ片段为探针杂交时，不育系和可育系之间出现了不同的杂交带，表明不育系和可育系的ｍｔＤＮＡ存在结构上差异，杂交结果也表明杂种Ｆ１的细胞质来源于母本、而恢复基因对不育细胞质ｍｔＤＮＡ的结构不产生直接影响．当用ＣｏｘⅢ为探针杂交时，杂种Ｆ１显示了一特异的同源片段，它不存在于不育系的ｍｔＤＮＡ，而存在于保持系和恢复系的ｍｔＤＮＡ上，这可解释为在不育系和恢复系杂交形成Ｆ１杂种时，恢复系的ｍｔＤ－ＮＡ有可能渗漏到了Ｆ１杂种（Ｐａｔｅｒｎａｌｌｅａｋａｇｅ）．     

一种适合枣合酸枣基因组DNA的提取方法

研究比较了ＣＴＡＢ法和ＳＤＳ法在枣和酸枣基因组ＤＮＡ提取中的效果，并分析了取样时间、部位、样品状况、抗氧化剂和不同纯化处理等对所提ＤＮＡ质和量及其ＲＡＰＤ扩增效果的影响。结果表明：用改良后的ＣＴＡＢ法优于ＳＤＳ法，可有效地去除多糖，所提ＤＮＡ的质和量均能满足ＰＣＲ扩增要求。取样时间与部位对所提基因组ＤＮＡ的质量无影响，但与产量有关，以旺盛生长期的幼叶或嫩梢尖为佳。样品采用液氧处理－７０℃低温保存，     

欧洲油菜花粉cDNA文库的构建

从欧洲油菜（Ｂｒａｓｓｉｃａｎａｐｕｓ）成熟花粉中提纯出ｍＲＮＡ．ｐｏｌｙ（Ａ）＋ｍＲＮＡ在ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）引导下，用反转录酶合成ｃＤ－ＮＡ第一链，用大肠杆菌ＲＮＡ酶Ｈ和大肠杆菌ＤＮＡ聚合酶Ｉ置换合成ＣＤＮＡ第二链．加上ＥｃｏＲＩ／ＮｏｔＩ接头。最后将双链ＤＮＡ克隆子λｇｔｌｌ载体中。用Ｂｃｐｌ作探针，杂交筛选构建的ｃＤＮＡ文库。     

两种非放射性标记DNA探针检测菊花矮化类病毒的比较

以含菊花矮化类病毒（ＣＳＶ）全长序列的重组质粒ＰＵＣ为模板ＤＮＡ，加入通用引物，在聚合酶链式反庆系统中制备地高辛标记的ＣＳＶ ｃＤＮＡ探针和生物素标记的ＣＳＶ ｃＤＮＡ探针。用这两种探针检测感染菊花矮化类病毒的菊花样本均为阳性反应，而检测健康对照的结果为阴性。采用ＰＣＲ－微量板杂交法，地高辛标记的探针检测ＣＳＶ ｃＤＮＡ的吸光值明显高于生物素标记的探针检测的吸光值，采用斑点杂光法，地高辛标记的ｃＤ     

猪生殖和呼吸综合征中国分离株ORF5基因的克隆及序列分析

本研究利用对应于ＰＲＲＳＶＡＴＣＣＶＲ－２３３２株及ＬＶ株ＯＲＦ５基因保守序列的１对均为２５个碱基的引物１００５ＰＳ、１００６ＰＲ对ＰＲＲＳＶ中国分离株Ｂ１３进行ＲＴ－ＰＣＲ,扩增出了包括完整ＯＲＦ５基因的ＤＮＡ片段,片段长约７３０ｂｐ。将此片段定向克隆入ｐＵＣ１８载体的ＥｃｏＲＩ和ｓｔＩ位点之间,获得了Ｂ１３ＯＲＦ５基因与ｐＵＣ１８载体的重组质粒。通过ＥｃｏｒＩ／ＰｓｔＩ、ＥｃｏｒＩ／ＨｉｎｄⅢ     

TMV蚕豆株系CP基因及3′端非编码区序列分析与表达

根据烟草花叶病毒Ｕ１株系ＴＭＶ－Ｕ１序列，人工合成引物，通过ＰＣＲ扩增并克隆了烟草花叶病毒蚕豆株系（ＴＭＶ－Ｂ）的外壳蛋白（ＣＰ）基因和３′端非编码区．ＤＮＡ全序列测定结果表明，外壳蛋白基因全长４５９个碱基，编码１５１个氨基酸，３′端非编码区全长２２４个碱基．与ＴＭＶ－Ｕ１株系相比，ＴＭＶ－Ｂ仅在ＣＰ基因上有一个碱基缺失，并导致ＣＰ基因提前终止，使其编码的氨基酸少７个．将ＣＰ基因及３′端非编码区插入ｐＧＥＭＥＸ－１的Ｔ７基因１０中，转入Ｅ．ｃｏｌｉ后诱导表达，聚丙烯酰胺凝胶电泳分析呈现一特异的蛋白带．Ｗｅｓｔｅｒｎ免疫检测证明，该特异带与ＴＭＶ抗血清呈阳性反应．将ＣＰ基因正向插入植物表达载体ＰＢⅠ１２１中，置于花椰菜花叶病毒３５Ｓ启动子控制之下，获得了植物表达载体ｐＺＬ５     

微量板杂交法和斑点杂交法检测菊花矮化类病毒的比较

利用狄高辛（ＤＩＧ）标记制备菊花矮化类病毒（ＣＳＶ）特异性探针，由反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）进行ＣＳＶ ＲＮＡ的反转录和ｃＤＮＡ的扩增，然后比较２种核酸杂交方法－微量板杂交和斑点杂交检测ＣＳＶ的灵敏度。本研究结果表明，３０ｍｇ干燥样本抽提的ＣＳＶ ＲＮＡ被稀释４００倍，取４μＬ（约７５０ｐｇ样本抽提的ＲＮＡ）经ＲＴ－ＰＣＲ，其产物再用１０×ＳＳＣ稀释１００倍，采用微量板杂交仍可很容易得到